DWI WINARNI

Departemen Biologi Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga Surabaya

A. Definisi
visualisasi bagian jaringan atau sel melalui deteksi interaksi antibodi-antigen spesifik, dimana antibodi dilabel dengan label atau marker Beragam mulai wujud sel atau irisan beku hingga sel atau jaringan dalam blok parafin atau resin

- Pewarna fluorensens
- koloid logam - hapten - marker radioaktif - enzim

dalam immunostaining, antibodi digunakan untuk membentuk link antigen yang ada pada sel atau jaringan secara spesifik pada pewarna (reaksi yang menghasilkan warna) sehingga keberadaan antigen tersebut teramati di bawah mikroskop

immunohistochemistry
antigen dalam jaringan

immunocytochemistry
Antigen dalam kultur sel

Cryostat section paraffin section resin section

Memerlukan fiksasi

Tanpa fiksasi

History of immunohistochemistry
1942 1959 1965 1966 1967 Coons, Creech, Jones, Berliner Singer Developed indirect immunofluorescence method

1970
1971 1974

Developed electron-dense molecular conjugate (ferritin) Sternberger Developed electron-opaque heavy metal technique (uranium) Graham & Developed enzyme tagging method (horseradish Karnovsky peroxidase Nakane & Pierce Developed enzyme-labelled antibody technique (immunoperoxidase) Sternberger Developed unlabelled antibody method (PAP method) Faulk & Taylor Heitzman & Richards Developed another electron-opaque heavy metal technique (colloidal gold) Developed another unlabelled antibody method (ABC technique)

Prinsip imunohistokimia

Reaksi antigen-antibodi untuk lokalisasi antigen Labeling dengan agen pewarna/fluoresens atau electron-opaque substance (ultrastructural tags) untuk memvisualisasi reaksi Ag-Ab

B. TAHAP-TAHAP DALAM IMUNOHISTOKIMIA

B.1. ANTIGEN RETRIEVAL Antigen retrieval/unmasking dengan melakukan pretreatment spesimen Meningkatkan reaktivitas antigen dalam jaringan

Mutlak dilakukan untuk jaringan yang difiksasi formalin karena fiksatif mengadakan cross link inter dan intramolekular dengan protein struktural tertentu yang dapat mengakibatkan masking antigen
Pretreatment : digesti menggunakan enzim proteolitik, pemanasan, iradiasi microwave, autoclaving atau pressure cooking

B.1. ANTIGEN RETRIEVAL

B.1. 1. Digesti menggunakan enzim proteolitik

Pronase 0,05% w/v Proteinase-K trypsin 0,05% w/v pepsin 0,05% !!!!!!!! Tidak semua antigen memerlukan digesti proteolitik karena enzim proteolitik dapat menghilangkan reaktivitas antigen tertentu, menimbulkan antigenic sites palsu , atau mengubah sifat serta merusak antigen

B.2. IMMUNOLABELING

Visualized antigen-antibody reaction by adding SUBSTRATE & CHROMOGENS

Sampel : pankreas rat (fiksatif formalin/PFA) Antigen retrieval : Blocking : BSA 2%, 2 jam 25oC Primary antibody : mouse-anti rat insulin Secondary Ab : goat-anti-mouse HRP conjugation Chromogen : DAB

.substance P merupakan primary afferent derived neuropeptide .jumlah reseptor dan kadar substance P meningkat pada kondisi pain persistent (ex: inflamasi kronis)

CGRP (Calcitonin gene related peptide ) is one of the most abundant peptides produced in both peripheral and central neurons. It is the most potent peptide vasodilator and can function in the transmission of pain. In the trigeminal vascular system the cell bodies on the trigeminal ganglion are the main source of CGRP. CGRP is thought to play a role in cardiovascular homeostasis andnociception.

APOPTOTIC CELLS DETECTION