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2010-2011
Introduction
Les titrages complexomtriques sont des mthodes titrimtriques bases sur la formation de complexes. Ces complexes sont constitus d'un ion central et de particules (charges ou neutres) appeles ligands ou coordinats. Les Ligands, couramment utiliss pour effectuer le dosage des cations, doivent possder au moins un pair dlectrons non liants disponible pour former la liaison avec lion central. Le nombre de liaisons quun cation peut former avec des donneurs dlectrons est son nombre de coordination. La stabilit des complexes dpend de plusieurs facteurs, notamment : la nature du mtal central et du ligand et de la composition du milieu (pH, solvant, ions trangers, etc.). Les acides amino-carboxyliques sont des excellents agents complexant; le plus utilis d'entre eux est l'acide thylne diamine et l'EDTA. Cette mthode est base essentiellement sur les proprits de lacide thylne-diamine-ttra actique, sel disodique et de ces complexes mtalliques. On le note H2Y.
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A. Introduction aux dosages complexometriques
I. Action du complexon iii sur les ions et
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OU N
II.
Duret totale: Cest la concentration en ions calcium et en ion magnsium dune eau. Duret calcique : Cest la concentration en ion Ca2+ dune eau. Duret magnsienne: c'est la concentration en ion Mg2+ d'une eau. Duret permanente : Cest la concentration en ion Ca2+ et en ion Mg2+ dune eau aprs bullition prolonge et filtration. Duret temporaire : Cest la concentration en ions magnsium et calcium enlev par filtration.
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III.
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1. But
La dtermination de la duret dune eau par complexomtrie est une technique permettant davoir une ide sur la potabilit dune eau .Cette manipulation permet de connatre la teneur en ion calcium Ca2+ et magnsium Mg2+ dune eau ; en effet elle permet de voir si leau mousse bien pour des utilisations industrielles ou mnagres. 3
2. PRINCIPE
Il sagit dun dosage direct de la solution de sel disodique de lEDTA par Ca 2+ en prsence du ractif de PATTON et REEDER selon la raction suivante : H2Y2-+Ca2+ H2Y2--+Ca.Ind Rouge CaY2-+2H+ CaY2-+2H++Ind2- (en fin de dosage) (H2Ind bleu)
Produits :
Solutions environ 0.01 du sel disodique de lEDTA Une solution calcique talon environ 0,01 molaire prpare partir de CaCO3 chimiquement pur Eau analyser et eau distille
Ayoub HATEB 2eme Anne
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Solution de la soude environ 2 mol/l
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Ractif de Patton et Reeder, si possible en dilution solide dans NaCl 1% en masse Tampon ammoniacal pH=10 Noir riochrome T en pastilles ou en solution dans lalcool 95 GL (0,8g dans 200ml) Solution du complexe magnsien de lEDTA environ 10g/l Carbonate de calcium pur pour analyse. 4
IV.
Manipulation
Une solution d'environ 0,01 molaire du sel disodique de l'EDTA. Une solution calcique talon 0,01 molaire prpare partir de CaCO3 chimiquement pur. De la soude environ 2 mol.l-1. De l'acide chloridrique dilu au demi. L'indicateur de Patton et Reeder en dilution solide, raison de 1 g de ractif intimement mlang 100 g de chlorure de sodium, chimiquement pur et finement pulvris.
2.
1. Principe Il sagit dun dosage direct de la solution de sel disodique de lEDTA par Ca2+ en prsence du ractif de PUTTON et de REEDER selon la raction :
2. Mode opratoire a. Prparation de la solution calcique talon On prpare 1000ml de solution 0,0100mol/L ; on part de auquel on peut accorder le plus de confiance. Dterminer la masse de peser (masse molaire=100,09g.
)?
Faire passer cette masse avec le minimum deau dans une fiole jauge de 1000ml. Ajouter au goutte goute jusqu fin deffervescence et dissolution totale du carbonate de calcium (utiliser un minimum dacide chlorhydrique). Ajuster au trait de jauge leau distille. Ayoub HATEB 2eme Anne
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DOSAGE :
50 ml deau analyser
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2,5ml de tampon pH=10 une pince de lindicateur color NET 1 ml de complexons magnsien
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0 1 2 3 4 5 6 7 Duret totale
On ajoute 10 solution de sel disodique de l'EDTA goutte goutte ds que la couleur de la solution la commence11 virer du rouge au bleu. La couleur ne doit plus changer par addition d'une goutte supplmentaire de solution titrante,
12 13
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4. Dtermination de la duret calcique
Prparation de la solution
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50 ml deau analyser 10ml de NaOH 2M Une pince de Patton et Reeder 1 ml de complexons magnsien 7
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 A lquilibre on a une coloration bleue et 10 11 On a: 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Ayoub HATEB 2eme Anne 22 23 Do DCa=30,8F AN: Duret calcique
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5. Dtermination de la duret magnsienne
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AN : Do
33-30,8
Dans un bcher de 600ml, on met 250 ml deau analyser Mettre bouillir cette eau 20 30 min de faon rduire le volume initial d'environ 1/3 Refroidir la temprature ordinaire Filtrer sur l matriel sec Laisser goutter le bcher sur le filtre sans le rincer ni rincer le filtre Transvaser quantitativement le filtrat dans une fiole jauge de 250 ml Ajuster au trait de jaug l'eau distille
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b. Dosage
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On prpare sur une prise d'essai de 100 ml du filtrat ainsi obtenu Y ajouter 5 ml de tampon pH=10,02g (ou 2 ml) d'indicateur Net ou 1 ml de Mg Y2- 10 g/l Prcision du dosage:2,8 %
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B. Dosage des chlorures par argentimtrie
I. Methode de charpentier volhar
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1. But :
Dterminer la concentration en Cl.
2. Principe
Il sagit dun dosage en retour c'est--dire que les ions chlorures contenus dans la solution titre sont mis en prsence dun excs dAgNO3 et seront titr par une solution de thiosulfate de potassium ou dammonium de concentration 10 connue en prsence dun indicateur color : lalun de fer et dammonium.
3. Mode opratoire
3.1 Minralisation
E=10 ml de lait XCl=? 10 ml de AgNO3 (TAg= 0,1 M , E1=10ml) 10 ml de HNO3 concentr 5 ml de KMnO4 solution satur
Dans un Erlenmayer on ajoute dans la solution 20ml deau robinet on aura donc une solution claire. On la bouille pendant 15mn feux doux ensuite on ajoute 3ml dindicateur color + 30ml deau distille.
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3.2
On laisse refroidir la solution prcdente. on ajoute 50ml deau distille l'aide d'une prouvette et 3 ml d'indicateur color.
11
Dans un erlenmeyer de 250ml, on introduit TA=0,1 mol/l de solution de nitrate dargent. 50ml deau distille. 10ml dacide nitrique concentr 2 ml de solution( alun de fer et d'ammonium).
Ensuite on titre rapidement par SCN puis on note le volume V2 correspondant au volume vers avant datteindre lquivalence.
KSCN ( CSCN,V2 =18 )
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4. Resultats
A lquivalence exprimer XCl en fonction de V1 ; V2 ; E1, E2 ,TAg, E. A lquivalence on a :
12
AN : XCl =
=0,058
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C. Dosage des protines dun blanc duf par clorimtrie par la mthode du Biuret Introduction
Au cours des diffrentes manipulations faites durant notre sance de travaux pratiques le dosage des protines par colorimtrie par la mthode du Duret t l'un des objectifs de cette sance, le prsent rapport nous donne une ide gnrale sur les diffrentes dmarches ainsi que les rsultats obtenus. 13
I- But
Le but de ce dosage est la dtermination de la concentration en protines totale dans un blanc d'uf.
II- Principe
Tout compos possdant au minimum deux liaisons peptidiques va dvelopper en milieu alcalin et en prsence d'ion Ca2+ une coloration bleu violet caractristique dont la teinte est fonction du nombre de liaison peptidique. En milieu alcalin, les composs contenants au moins deux groupements -CONH- ou -CONH2 voisins forment avec les ions Cu2+ un complexe bleu violet (coloration du biuret H2N-CO-NH-CO-NH2). Cette coloration est ainsi caractristique des peptides et des protides qui possdent la liaison peptidique CONH-. La vitesse de dveloppement de la coloration, sa teinte, et son intensit dpendent de : lalcanit et du [Cu2+]. On utilise le ractif de Gornall (sulfate de cuivre II + tartrate double de sodium et de potassium + soude) pour solubiliser les protines, mme dnatur. la temprature la nature de la protine. Le maximum dabsorption se situe vers 530-540nm et varie avec le nombre de Liaisons peptidiques. Lintensit de coloration est proportionnelle ce nombre. On utilise un srum contenant un mlange de protine, comme talon un srum de commerce connu.
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IIIMode opratoire
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1. Etalonnage du spectrophotomtre
1.1. Dilutions
A partir dun srum talon 50g / l, on procde une prparation de 5ml des dilutions suivantes, laide deau physiologique (NaCl 0,9%) : 1/10 ; 1/20 ; 1/40 ; 1/80 14
1ml
Eau 9ml
5ml
5ml
5ml
5ml Rejeter
5ml srum talon 1/10 1ml 1/20 1ml 1/40 1ml 1/80 1ml
Tubes
N0 4ml de RG
N1 4ml de RG
N2 4ml de RG
N3 4ml de RG
N4 4ml de RG
On ajoute dans les diffrents tubes 4ml de ractif de Gornall ; on mlange puis on attend 20mn, temprature ambiante, lobscurit. La coloration est stable plusieurs heures aprs.
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La gamme dtalonnage sera prsente dans un tableau rcapitulatif des diffrentes donnes. La coloration est stable plusieurs heures aprs. La gamme dtalonnage sera prsente selon un tableau en prcisant la quantit de protines en mg par tube.
1.2. Lecture au spectrophotomtre
15
On prend un tube eau, on met 0,5 ml du blanc d'uf et 9,5 ml d'eau physiologique, on homognise, on prend ensuite un autre tube et on met 1 ml du premier tube, aprs on ajoute 4 ml de Gornall et on incube pendant 20 min et on lit au spectrophotomtre.
1.
Questions Donner le tableau de composition des tubes. Tracer la courbe dtalonnage A=f (g proteines.dm-3) Dterminer la protinmie du srum analys exprime en g/l
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3. Rsultat
3.1. Courbe d'talonnage
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m = C x V x dilution
Ainsi pour les diffrents tubes nous avons : 16
Gamme d'talonnage : tableau rcapitulatif N TUBE Eau distille SE au 1/10 SE au 1/20 SE au 1/40 SE au 1/80 Blanc d'uf Ractif de Gornall Masse des protines par tube en mg Absorbance 0 1 1 1 1 1 1 4 0 4 5 4 2,5 4 1,25 4 0,625 1 4 3,2 2 3 4 PT
0,382
0,262
0,181
0,017
0,248
Tableau rcapitulative des donnes absorbance et masses de protines Tube Masse de protines/tube Absorbance 0 0 0 1 5 0,382 2 2,5 0,262 3 1,25 0,181 4 0,625 0,017 PT
3,2
0,248
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on trace la courbe des absorbances en fonction des masses de protines par tube. mx est trouv par projection de Ax sur l'axe des abscisses. mx = 3,2 mg/ml Cp= mx*20 Cp= (3.2*20) g/l
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Courbe d'talonnage