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Mtodos de esterilizacin
4.1. Introduccin
En las fermentaciones industriales se requiere de un alto grado de limpieza y asepsia No existe un mtodo cuantitativo seguro y confiable para medir el nmero o la concentracin de contaminantes en el sistema
El medio El inculo y el proceso de inoculacin El suministro de aire La adicin de nutrientes, antiespumantes, etc. durante el proceso El fermentador en s
La tcnica de mayor aplicacin a nivel industrial es el tratamiento trmico que se puede llevar a cabo en procesos intermitentes y
continuos
Cintica de esterilizacin
La destruccin de microorganismos por vapor (calor hmedo) puede ser descrita como una reaccin qumica de primer orden: - dN = KN dq (1)
Donde: N q K
No. de m.o. viables presentes Tiempo del tratamiento de esterilizacin Constante de reaccin
Constantes de velocidad de reaccin (K) y tiempos de reduccin decimal de diferentes esporas bacterianas suspendidas en buffer a 121C
Especie Ka 121C (min-1) Da 121C (min)
3.8-2.6
0.77 2.9 1.8
0.6-0.9
3.0 0.8 1.3
Cintica de esterilizacin
Donde: Nq N0
No. de m.o. viables al tiempo q No. de m.o. Viables presentes al inicio del tratamiento de esterilizacin
Cintica de esterilizacin
Donde: Nq N0
No. de m.o. viables al tiempo q No. de m.o. viables presentes al inicio del tratamiento de esterilizacin
Nq/N0
ln (Nq/N0)
Cintica de esterilizacin
La esterilizacin total nunca puede alcanzarse Valores de Nq < 1 se deben considerar en trminos de la probabilidad de que un microorganismo sobreviva al tratamiento Las grficas representadas anteriormente slo se observan cuando se lleva a cabo la esterilizacin de un cultivo puro bajo condiciones ideales de esterilizacin
Cintica de esterilizacin
El valor de K no slo depende de las especies, sino tambin depende de la forma fisiolgica de la clula Ejemplo: las endoesporas del gnero Bacillus son ms resistentes que las clulas vegetativas Richards gener una serie de grficas ilustrando las desviaciones que en la prctica se presentan de la teora
Efecto del tiempo de tratamiento trmico sobre la sobrevivencia de una poblacin de endoesporas
a) La activacin de esporas es significativamente mayor que su destruccin durante los primeros estados del proceso
ln (Nq/N0)
Efecto del tiempo de tratamiento trmico sobre la sobrevivencia de una poblacin de endoesporas
b) La activacin de esporas es balanceada por su muerte durante los primeros estados del proceso
ln (Nq/N0)
Efecto del tiempo de tratamiento trmico sobre la sobrevivencia de una poblacin de endoesporas
c) La activacin de esporas es menor que su muerte durante los primeros estados del proceso
ln (Nq/N0)
ln (Nq)
ln (Nq)
Definido por Deinoerfer y Humprey (1959) como un criterio de diseo para la esterilizacin: V = ln N0 Nq (7)
De donde:
V = A q e-EA/RT
(8)
Este factor es una medida de la reduccin fraccional de organismos viables producido por un cierto rgimen de tiempo y temperatura
Efecto del tiempo de esterilizacin y de la temperatura sobre el factor DEL alcanzado en el proceso
ln q
69
23
4.6 2.3
Factores DEL
1/T
El mismo grado de esterilizacin se puede obtener a partir de un gran nmero de combinaciones de tiempo y temperatura De acuerdo a Deindoerfer y Humprey (1959), Richards (1968) y Banks (1979) un factor de riesgo de que un batch de mil est contaminado se utiliza frecuentemente en la industria de las fermentaciones
Se supone presentes
que los nicos contaminantes son esporas de Bacillus stearothermophilus, que es de los microorganismos ms termorresistentes, cuyas caractersticas son: Ea = 67.7 Kcal/mol A= 1 x 10 36.2 seg-1 Una serie de reacciones deteriorativas pueden presentarse en el medio durante su esterilizacin, resultando en una prdida de la calidad nutritiva
Efecto deteriorativo del incremento del tiempo de tratamiento sobre la productividad del proceso de fermentacin
% de la mxima productividad
Dos tipos de reacciones bsicas contribuyen a la prdida de calidad nutritiva durante la esterilizacin: i. Interacciones entre nutrientes constituyentes del medio, Ejem: reaccin de Maillard ii. Degradacin de componentes termolbiles como vitaminas y aminocidos Para evitar reacciones deteriorativas se recomiendan sistemas de esterilizacin continuos de alta temperatura y corto tiempo (HTST)
Existen diferentes tipos de equipo utilizado para la esterilizacin del medio de cultivo, dependiendo del mtodo empleado para el calentamiento
1. Inyeccin de vapor
VVVV
2. Calentamiento elctrico
VVVV
T = T0 1 +
at 1 + gt Hiperblico
2
3 4
T = T0 (1 + at) Lineal
T = TH (1 + be-at) Exponencial T = TCo (1 + be-at) Exponencial
Terminologa
A Cp Cp h M q S T0 TH TCo U rea de transferencia de calor (m2) calor especfico del medio (Kcal/Kg C) calor especfico del refrigerante (Kcal/Kg C) contenido entlpico del vapor (Kcal/Kg) masa inicial del medio velocidad de transferencia de calor (Kcal/seg) flujo msico de vapor (Kg/seg, Kg/min, Kg/hr) temperatura inicial del medio (K) temperatura de la fuente de calor (K) temperatura inicial del refrigerante (K) coeficiente global de transferencia (Kcal/m2 hr C)
Kdt = a e-E/RT dt
0
total
calent
reten +
enfr
t1
Kdt = a e-Ea/RT dt
0
t2
Kdt = a e-Ea/RT dt
0
= ln N2 = N
t3
Kdt = a e-Ea/RT dt
0
t1
D D D
t2
t3
Donde:
t = t 1 + t2 + t 3
N N0
N1
N2
nivel de esterilidad (No. de m.o. despus de la esterilizacin) nivel de contaminacin (No. de m.o. antes de la esterilizacin) No. de m.o. contaminantes despus del perodo de calentamiento, t1 No. de m.o. contaminantes despus del perodo de retencin, t2
Menos utilizados en la industria que los intermitentes Equipo ms utilizado para la esterilizacin continua del medio de fermentacin:
Fuente: Stanbury, Whitaker y Hall (2000) Principles of Fermentation Technology. Butterworth-Heinemann,Gran Bretaa.
Fuente: Stanbury, Whitaker y Hall (2000) Principles of Fermentation Technology. Butterworth-Heinemann,Gran Bretaa.
Mantenimiento superior de la calidad del medio Fcil escalamiento Fcil control automtico Reduccin del tiempo de esterilizacin Reduccin de corrosin en el fermentador
Control manual simple Fcil de aplicarse a un medio que contenga una alta proporcin de material slido
En los procesos de fermentacin se necesita aire estril, por lo que es comn el uso de un sistema de filtracin y uno de esterilizacin El tamao de los microorganismos vara desde unas milimicras hasta cientos de micras Los microorganismos ms pequeos suelen ser absorbidos en el polvo del aire, lo que facilita su eliminacin durante la filtracin
Durante el proceso de esterilizacin del aire se eliminan las partculas de tamao entre 0.5 y 1.0 micra Para poder disear un sistema de esterilizacin es necesario conocer el tamao de las partculas y el nmero de microorganismos presentes en el aire, as como la cantidad de otras partculas. En Inglaterra se han reportado valores promedio de 3 a 9 x 103 partculas/m3 y en Japn 12 x 103 El proceso de esterilizacin del aire ms utilizado es el de FILTRACIN
Tipos de filtros
Tipos de filtros
Escala pequea:
Filtros millipore, de asbesto o porcelana Filtros fibrosos de lana de vidrio o materiales similares
Escala mayor:
h- = N N0 x 100 (%)
N0
(10)
c) Difusin
d) Sedimentacin e) Atraccin electromagntica
Lneas de corriente de aire producidas por el flujo alrededor de una fibra cilndrica
Df
b = Df + 2Dp
Donde: b Df Dp ancho especfico de la corriente (m, cm) dimetro de la fibra (m, cm) dimetro de la partcula (m, cm)
(12)
Donde: Vc ma rp C
velocidad superficial crtica del aire viscosidad del aire densidad de la partcula factor de correlacin basado en la Ley de Stokes
Intercepcin (h2)
Donde:
(16)
Difusin (h3)
La difusividad de las partculas finas, D, puede expresarse como una funcin de Dp y considerando como Do el dimetro efectivo de desplazamiento de la partcula por difusin se tiene: h3 = 1 [2(K)lnK K + 1/K] 2(2-lnRe) (17)
Difusin (h3)
Donde:
(18)
1/3
(19)
(20)
K T
Relacin entre la eficiencia total (h) y las eficiencias de una sola fibra (h0)
h0 = h1 + h2 + h3
(21)
ha = p (1 a) Df ln 1 4aL 1-h h0 h
-
(22)
Eficiencia de coleccin de una sola fibra cuya fraccin volumtrica es a Eficiencia total de recoleccin de un filtro
Relacin entre la eficiencia total (h) y las eficiencias de una sola fibra (h0)
Para:
(25)
Donde:
N0 N Nmero de microorganismos que entran al filtro Nmero de microorganismos que salen del filtro Longitud del filtro Constante de filtracin
L K
(26)
(27)