Instituto Tecnolgico de Villahermosa

Tema:

Produccin del glutation

Materia:

Microbiologa industrial
Equipo #6:

De la Paz Carballo Edson Alejandro Merz Prez Ivanna Michelle Mora Ocampo Irma Yuliana Peregrino lvarez Jonatan Martnez Herrera Elvia lvarez Hernndez Vernica
Catedrtico:

IBQ. Martha Concepcin Rodrguez Cepeda

AMINOCIDOS Molculas orgnicas . Unidades qumicas del cuerpo que forman las protenas.

Estructura general
Carbono central alfa

Cadena lateral

Aplicaciones industriales

Alimentos 66%

Aditivos de piensos 30%

Medicina y cosmtica 4%

FABRICACIN COMERCIAL DE AMINOCIDOS

Extraccin a partir de hidrolizados de protena.

Sntesis qumica

Produccin microbiolgica
Fermentacin directa Conversin de productos intermediarios baratos Uso de enzimas o clulas inmovilizadas

ANTIOXIDANTES
Medicina Conservante de alimentos y cosmticos Previene degradacin del caucho y gasolina

Molcula capaz de retardar o prevenir la oxidacin de otras molculas

oxidacin

Trasnf. De electrones
De una sustancia a un agente oxidante

Radicales libres

Reacciones en cadena

Dao a las clulas

Antioxidante Glutation Vitamina C Vitamina E Catalasa Peroxidasas

GLUTATION (GSH)

Tripptido
cido glutmico

Cistena

Glicina

-glutamilcisteinilglicina

Es uno de los antioxidantes celulares ms importantes

Su funcionalidad se debe a su grupo tiol. Es un producto intracelular.

BIOSNTESIS DEL GLUTATIN

La enzima GSH1 est regulada por la concentracin de GSH, por un efecto de retrohinibicin o inhibicin por producto final

FUNCIONES DEL GSH EN EL ORGANISMO

Cofactor de diversas enzimas Protege el ADN y protenas Interviene en la comunicacin intramolecular Transporte de metales Detoxificacin frente a compuestos electrolticos o metales pesados Reservorio de cistena para la clula.

USOS TERAPEUTICOS Y NUTRICIONALES

Bajos niveles de glutation se asocian con enfermedades como:

OTRAS APLICACIONES
Aditivo en la industria cosmtica. Fabricacin de cremas faciales y cosmticos. Suplemento en productos para la alimentacin infantil. Conservante para alimentos. Suplementos en dieta para mejorar el sistema inmunolgico.

Cataratas Alzheimer Parkinson Esclerosis mltiple Cncer Derrames cerebrales Enfermedades del corazn Problemas digestivos Hepatitis Previene la anemia

PRIMEROS ESTUDIOS
Bacterias
No afectadas por deficiencia de GSH

Clulas eucariotas
Afectadas por deficiencia de GSH
Saccharomyces cerevisiae

PRODUCCIN BIOTECNOLGICA DE GLUTATION

Descubierto en un extracto de levadura S. cerevisiae por ReyPailhade

Baja velocidad de crecimiento Defectos mitocondriales

Extraccin a partir de tejidos animales y de plantas

Limitada cantidad de material Baja cantidad intracelular Producto muy caro Biosntesis qumica

Mezcla racmica (aminocidos L y D)

Va fermentativa

SNTESIS ENZIMTICA

Bioconversin

Clulas y extractos de S. cerevisiae

E. Coli Candida krusei Corynebacterium glutamicum

Elementos esenciales
La utilizacin de un solo organismo para llevar a cabo de forma simultnea, tanto la biosntesis de GSH como la regeneracin de ATP, no permiti buenos resultados.

S. Cerevisiae es la mas utilizada por su facilidad de manipulacin y bajo coste operacional

Enzimas: GSH1 y GSH2 Aminocidos precursores ATP Mg 2+ Control de pH (7.5)

Concentraciones de GSH de hasta 9 g/l

Coste de produccin aumenta por el uso de aminocidos y ATP

PRODUCCIN POR FERMENTACIN Objetivo

Conseguir elevada concentracin de GSH

Aumento del contenido intracelular

Aumento de biomasa

Contenido intracelular de GSH en cepas salvajes de S. cerevisiae 0.1-1% del peso seco

Mutagnesis

Optimizacin y control

Al evitar la retrohinibicin de GSH1 por glutatin (3-5% del peso seco celular)

Tcnicas de ADN recombinante

Lote alimentado
Cuidar la velocidad especfica de crecimiento

Adicionar aminocidos precursores

Mejora de produccin de GSH un 40% en cepas de S. cerevisiae

Obtencin de GLUTATION a partir de Saccharomyces cerevisiae

Anlisis de la concentracin de Glutation

VA FERMENTATIVA

Preparacin de muestras

Centrifugacin

Lisis

Fermentacin
Optimizacin Cultivo y aislamiento de cepas

Seleccin

Preparacin de muestras

Ricos en almidones o azucares

Adecuados para fermentaciones

Fermentacin

Mx 48 hras

Produccin de levaduras

Saccharomyces cerevisiae

Cultivo y aislamiento de cepas

Placas petri

Estra cruzada

Seleccin

Cepas resistentes

Capaces de crecer en presencia de altas concentraciones de agentes oxidantes

Optimizacin

Estrs

pH Temp Nutrientes

Respuesta que induce a los sistemas de defensa antioxidantes

Etc.

Aumenta la concentracin del tripptido

Lisis

Rompimiento de clulas

Agitacin fuerte, 1 min

Centrifugacin

10,000 rpm 2min

Anlisis de la concentracin de Glutation

colorimetra

Cromgeno 5,5'-ditiobis(2-nitrobenzoico)

Interpolacin de resultados con recta patrn

cuantifica

Absorbancia de 415 nm

NUEVAS ESTRATEGIAS Principales problemas

Retrohinibicin del GSH sobre GSH1 Presencia de -GT que degrada al GSH sintetizado intracelularmente