MTODOS DE ANLISIS DE ALCALOIDES

T
El t negro es el t ms difundido dentro de la cultura occidental correspondiente a esa bebida. Es el que conlleva un perodo de oxidacin ms elevado y, por supuesto, es el ms fuerte a nivel sabor dentro del espectro de ts que existen en el mundo. Obviamente, como siempre que se habla de t, est elaborado en base a la planta Camellia Sinensis, la nave madre de cualquier variedad de t que se precie de tal.

a) EXTRACCIN Y AISLAMIENTO DE LA CAFENA PROCEDIMIENTO Colocar en un beaker de 250 ml, 4 bolsas t en 100 ml de agua destilada llevada a ebullicin. Mantenga en ebullicin por unos minutos y luego permita que repose por 2 minutos a temperatura ambiente lejos del calentamiento, agite la solucin de vez en cuando. Retire las bolsas de t y deje enfriar a temperatura ambiente, luego hgalo en hielo. Utilice un embudo de separacin y extraiga la solucin resultante tres veces con diclorometano. Lavar los extractos orgnicos colectados con una solucin de hidrxido de sodio 6 M y por ltimo con agua destilada. Para purificar la cafena, se coloca el slido en un beaker de 100 ml cubierto con un vidrio de reloj y se calienta en una plancha de calentamiento, suavemente. La cafena sublima adherindose al vidrio de reloj y en la parte superior del beaker. Recoja el sublimado y mida su punto de fusin. Observaciones al aadir los primeros 10 ml de diclorometano, se agit y se sac los gases de CO2 producidos por la reaccin. Se observ una mezcla marrn y poco a poco se fue formando dos fases inmiscibles, una marrn en la parte superior y una amarillo claro en el fondo siendo sta la fase orgnica, es aqu donde se encuentra la cafena. Mientras se formaban las fases antes mencionadas se not una ciertas burbujitas en la interfase llamadas emulsiones (esto se explicar en la discusin de resultados). Al separar con el hidrxido de sodio tambin se observaron dos fases inmiscibles, una incolora en la parte inferior y una amarillo claro en la parte superior. Al realizar la purificacin de la cafena en la plancha de calentamiento la cafena se sublim adherindose en las paredes del beaker notndose un color blancuzco, posteriormente se le busc su punto de fusin, para esto se rasp las paredes para sacar la cafena.

anlisis de resultados Al realizar las extracciones con diclorometano (solvente para separar la cafena del te) se obtuvo dos fases la inferior es la fase orgnica, es en sta donde se encuentra la cafena, cabe destacar que la fase superior es la fase acuosa y que se utiliza este tipo de solvente porque es inmiscible con el agua , adems los distintos solutos se distribuyen entre las fases acuosa y orgnica, de acuerdo con sus solubilidades relativas. Por lo tanto las sales inorgnicas insolubles en los solventes orgnicos permanecern en la fase acuosa, mientras que los compuestos orgnicos que no forman puentes de hidrgeno, insolubles en agua, se encontrarn en la fase orgnica. En cuanto a las burbujitas observadas en la interfase, stas son emulsiones formadas durante el proceso de extraccin cuando se trata con soluciones alcalinas. Para romper estas se realiz una agitacin vigorosa con una varilla de vidrio a la capa emulsionada y tambin se aadi cloruro de sodio saturado para disminuir la solubilidad en agua de los solutos y del solvente orgnico, a esto se le denomina efecto salino. Tambin se realiz un lavado con hidrxido de sodio para eliminar cidos inorgnicos que pueden haber en el solvente orgnico, las sales formadas se lavaron con agua destilada. Al realizar la medicin del punto de fusin este fue de 240 C, ste difiere un poco del valor real (237 C), debido a posibles impurezas durante el proceso de extraccin que pudieron afectar la pureza de la cafena.

La cafena es uno de los alcaloides ms fcil de aislar y se encuentra en concentraciones bastantes grandes en materiales vegetales. Sin embargo, muchos alcaloides se encuentran en concentraciones muy bajas en plantas pocos comunes. El aislamiento de estos compuestos es un problema bastante engorroso, especialmente si el producto deseado est acompaado por otras sustancias de estructuras semejante. La cafena es soluble en agua caliente, pero es mucho ms soluble en cloroformo que en agua Aislamiento de la cafena Vamos a proceder por un procedimiento muy sencillo, a aislar la cafena, (alcaloide estimulante del sistema nervioso que se encuentra en el caf, t, etc). Su nombre qumico es 1,3,7 trimetilxantina. Aunque lo lgico sera partir del caf, vamos no obstante a realizarlo, a partir del t, por la sencilla razn de que, en aquel se encuentra combinado en forma de tanato de cafena, y en el t, se halla libre y por lo tanto la operacin resulta mas sencilla. Para ello se hierven durante 20 minutos en un matraz, 100 grs de hojas de t, con 250 ml de agua destilada. Al cabo de ste tiempo, filtramos por lana de vidrio (filtracin mas rpida, para

eliminar posos). Al filtrado le aadimos gota a gota, (hasta que no forme, con una gota mas, precipitado) solucin de subacetato de plomo, a continuacin agregamos tambin gota a gota, solucin de amoniaco hasta reaccin alcalina (usar papel de pH) y volvemos a filtrar. Con estas operaciones, habremos eliminado otras sustancias distintas de la cafena, pero como quedarn indicios de plomo procedente del subacetato, lo precipitaremos haciendo pasar a su travs una corriente de sulfhdrico (sulfuro de hierro + cido, y el sulfuro de hierro lo prepararemos calentando limaduras de hierro con azufre). Volvemos a filtrar y el filtrado lo recogemos en una cpsula que ponemos a evaporar en bao de agua (bao Mara). Cuando la disolucin est muy concentrada, lo dejamos enfriar y dado que la cafena es poco soluble en agua fra, se depositar muy pura en forma de abundantes cristales. Si desesemos purificarla, bastara con colocarla en tubo de ensayo y calentarla suavemente, sublimara y condensara en las paredes fras del mismo. La cafena debida a su carcter bsico, se combina fcilmente con los cidos ( incluso dbiles) dando sales solubles. b) ENSAYOS DE RECONOCIMIENTO DE LA CAFENA DEL T Prueba de la fusin alcalina (identificacin de nitrgeno) NOTA: todo este procedimiento se lleva a cabo en la campana de ventilacin. En un tubo de ensayo se coloca un pequea porcin de Na y con la ayuda de un mechero de bunsen se procede a calentar, hasta que este al rojo vivo,Una vez fundido el Na se le agrega una pequea cantidad de cafena, la que se obtuvo de la sublimacin, y se calienta hasta que se carbonice. Se deja enfriar un poco y con una pipeta volumtrica de 5 ml se le aade 3 ml Alcohol Etlico, esto provocara que haya burbujas, entonces se dejara de aadir el alcohol etlico hasta que deje de provocar burbujas. Una vez realizado el paso anterior se agrega 5 ml de agua destilada y se vuelve a poner a calentar hasta que empiece a ebullir (hay que tener cuidado de que no se evapore mucho la muestra) Se filtra la solucin caliente y se recolecta en otro tubo de ensaye previamente limpio. Prueba con sulfato ferroso Se pesa 0.1 gr de sulfato ferroso (FeSO4) y colocarlo en tubo de precipitados y se le agrega 1 ml del filtrado, una vez realizado esta mezcla se coloca al fuego directo durante 1 o 2 minutos, se quita de fuego Con la ayuda de un pipeta de 1 ml se comienza a acidificar con unas cuantas gotas de H2SO4, cuando suceda esta reaccin se tornar este liquido de un color semejante al azul de Prusia, esto significa que haba nitrgeno presente en nuestra

Prueba de la murexida En un tubo de ensaye se coloca una pequea cantidad de cafena muestra y 1 ml de ac. Ntrico, y se pone a calentar en un mechero de bunsen hasta que est mezcla se seque en el tubo, esto tendr como consecuencia que el tubo quede de color amarillo mostaza. Despus de este procedimiento se pone el tubo a enfriar a temperatura ambiente. Posteriormente se le agregan unas gotas de NH3OH, esto propiciara un color rojo prpura, el cual nos indicara que esta presente el grupo purina de la cafena.

Para pequeas cantidades de cafena(mtodos de identificacin) Se pesa .01 g de ac. Saliclico y .01 g de cafena obtenida experimentalmente y se colocan en un matraz Erlenmeyer de 25 ml y se le adicionan 2 ml de tolueno, posteriormente se le coloca una tapa de aluminio y se pone en la parrilla de calentamiento, se tiene que procurar que nuestra compuesto se evapore. Inmediatamente se pone a calentar en un matraz Erlenmeyer de 25 ml con hexano hasta punto de ebullicin. Cuando se hayan realizado estos procedimientos con la ayuda de un gotero se le agregan 20 gotas de hexano caliente a nuestro compuesto que pusimos a calentar, posteriormente se dejan enfriar a temperatura ambiente hasta que formen cristales y se coloca este matraz en un bao de hielo durante aproximadamente 30 minutos.posteriormente se filtra a vaci y se recuperan los cristales obtenidos. Cromatografa capa fina Se realiza una cromatografa en capa fina, para determinar si nuestro compuesto esta puro, o aun sigue impuro, en este caso 2 derivado de la cafena y nuestra cafena extrada experimentalmente. Se procede a preparar una cromatoplaca con slice gel en un portaobjetos rectangular Preparacin de cmara de elusin En un frasco con tapadera se coloca un rectngulo de papel filtro, de tal modo que permita observar que es lo que sucede dentro de ella. se etiqueta el frasco con el nombre del eluyente y cuantos mililitros contiene Dentro de la campana de ventilacin con la ayuda de una pipeta volumtrica se procede a agregar de 4 a 5 ml de eluyente dentro del frasco con el papel filtro, en este caso fue acetato de etilo (5ml) y se hace otra pero esta vez con etanol se disuelve en un vaso una pequea cantidad de cristales del 2 derivado de nuestra cafena, y en otro vaso se disuelva la cafena estndar.

con la ayuda de un capilar se adicionan en al cromatoplaca una muestra de cada solucin de cristales.

c) Caracterizacin espectral de la cafena del te

En la siguiente figura se representaron grficamente las absorbancias obtenidas con las soluciones patrn frente a sus correspondientes longitudes de onda (nm).

Espectro de las muestras patrn En la siguiente figura se representaron grficamente las absorbancias obtenidas con las soluciones patrn frente a sus correspondientes concentraciones (ppm).

Curva de calibrado obtenida con espectrofotmetro UV-Vis Se interpol la absorbancia correspondiente a una muestra de cafena de caf en la curva estndar y se obtuvo la concentracin de la muestra (ver recorrido de las flechas rojas).

Interpolacin de una muestra de caf en la curva de calibrado Bibliografa de Consulta Adams, Don, and Arlene Goldbard. Creative community: the art of cultural development. New York, NY: Rockefeller Foundation, Creativity & Culture Division, 2001. Alfredo Ara Roldn. 100 plantas medicinales escogidas. Madrid, Editorial EDAF S. A., 1997. Alberto Ibarz Ribas. Operaciones unitarias en la ingeniera de alimentos. Madrid, Editorial MundiPrensa Libros, 2005. http://te.innatia.com/c-te-negro-propiedades/a-caracteristicas-te-negro.html