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Tipos de PCR PCR anidada En esta variante de PCR, el producto de una amplificacin es utilizado como molde para realizar

una segunda amplificacin con iniciadores que se ubican dentro de la primera secuencia amplificada. Este tipo de PCR es altamente especfica. PCR in situ Es una PCR que se realiza en preparaciones fijadas sobre un portaobjeto. Consiste en una reaccin de PCR en secciones histolgicas o clulas, donde los productos generados pueden visualizarse en el sitio de amplificacin. Se realiza para ello una primera amplificacin del ADN blanco y luego deteccin mediante hibridacin in situ convencional con sondas de ADN/ARN. De esta manera puede detectarse cantidades pequesimas del material gentico. PCR multiplex Es una PCR en la cual se amplifica ms de una secuencia en una misma reaccin. Emplea dos o ms pares de iniciadores en un nico tubo de reaccin con el fin de amplificar simultneamente mltiples segmentos de ADN. Consiste en combinar en una nica reaccin todos los pares de iniciadores de los sistemas que queremos amplificar simultneamente, junto con el resto de los reactivos de la reaccin en cantidades suficientes. La ventaja de esta PCR es que se obtiene la informacin de varios loci en una sola reaccin, utilizando menor cantidad de molde para el anlisis y menor cantidad de reactivos. Se puede generar rpidamente la construccin de una base de datos. PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR) Este tipo de PCR utiliza como molde inicial el ARN y se requiere de una transcriptasa inversa, para realizar la conversin del ARN a un tipo de ADN llamado ADNc (ADN complementario). PCR tiempo real Es una reaccin de PRC cuya principal caracterstica es que permite cuantificar la cantidad de ADN o ARN presente en la muestra original. Se puede dividir en: a) Tcnica basada en fluorocromos no especficos. b)Tcnica basada en sondas especficas. En las tcnicas basadas en fluorocromos no especficos, el ADN se une al fluorocromo (por lo general SYBR Green) produciendo fluorescencia que es medida por un termociclador apto para PCR en tiempo real. Permite cuantificar slo una secuencia por reaccin, pero tiene la ventaja de utilizar iniciadores normales para su realizacin. Es mucho ms econmica que la PCR que utiliza sondas especficas. Las tcnicas basadas en sondas especficas utilizan una sonda unida a dos fluorocromos que hibrida en la zona intermedia entre el iniciador directo (forward) y el inverso (reverse). Cuando la sonda esta intacta, presentan una transferencia energtica de fluorescencia por resonancia (FRET). Dicha fluorescencia no se produce cuando las onda esta daada y los dos fluorocromos

estn distantes, producto de la actividad 5 a 3`exonucleasa de la ADN polimerasa. Esto permite monitorizar el cambio de patrn de fluorescencia y deducir el nivel de amplificacin del gen. Random Primer PCR Esta variante de la tcnica es muy sensible y especifica, es muy til en el estudio y diagnstico de organismos de una misma especie con variaciones genticas especificas. Su aplicacin permite la amplificacin de molculas de ADN y genomas que varan entre400 pares de bases hasta 40 Mega bases. La tcnica utiliza primes que consisten en un pool de secuencias de los extremos 3 del ADN y una regin 5 constante para la deteccin del primer incorporado. Bibliografa http://www2.ine.gob.mx/publicaciones/libros/530/cap17.pdf http://antoniorondonlugo.com/blog/wp-content/uploads/2010/05/85-Reaccinen-cadena-de-la-polimerasa.pdf

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