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CENTRO UNIVERSITRIO DO PAR CESUPA CENTRO DE CIENCIAS BIOLGICAS E DA SADE CCBS CURSO DE BACHARELADO EM FARMCIA

ANLISE MICROBIOLGICA DE SOLUO INJETVEL DE VITAMINA C

JOHNNY FRANA LEONAN ALVES JOO BATISTA OLVEIRA KERMERSON FRANCISCO ADALBERTO MACHADO RENATA DIAS

BELM-PAR 2012

1. Objetivo:

O teste de endotoxina bacteriana usado para detectar ou quantificar endotoxinas de bactrias gram negativas presentes em amostras para qual o teste preconizado. Utiliza-se o extrato aquoso dos amebcitos circulantes do Limulus polyphemus ou do Tachypleus tridentatus preparado e caracterizado como reagente LAL.

2. Mtodo:

Mtodo de coagulao em gel baseado na formao de cogulo ou gel (mtodo semi-quantitativo). No mtodo de coagulao em gel, a determinao do ponto final da reao feita a partir de diluies da substncia sob teste em comparao direta com diluies paralelas da endotoxina padro. As quantidades de endotoxinas so expressas em unidades de endotoxina (UE) definidas.

3. Determinao da Concentrao de Endotoxina por Acido Ascrbico Injetvel: a. Apresentao da amostra: 100 mg/Ml b. Material: - Tubos de ensaio; - Pipetas automtica; - Agitador automtico; - Bico de bussen; - Banho maria;

c. Procedimento analtico:

Primeiramente preparou-se o pool ,ou seja, Transferiu-se o volume da soluo injetvel de cido ascrbico para erlenmeyer (10 ampolas), em seguida preparou-se diluies 1:2; 1:4; 1:8; 1:16; 1:100. Na diluio 1:2 transferiu-se 250 L do pool para um tubo de ensaio, na qual so acrescentados mais 250 L de gua pirognica, conseguinte essa soluo e agitada por 1 minuto, conseguinte preparou-se a diluio 1:4 na qual retirada 250 L dessa diluio 1:2 e acrescenta mais 250 L de gua pirognica e assim repeti-se o

procedimento respectivamente at a diluio 1:16 respectivamente. J as

diluio 1:100 necessrio transferir 10 L do pool e acrescentar 0.99 ml de gua pirognica e por fim agitar por 1 minuto. Logo depois de preparar as diluies misturou-se um volume de LAL com igual volume das solues acima, amostra, padres, e controle negativo do teste em tubos, em duplicatas. Incubaram-se os tubos por 1 hora a 37 C 1 C, evitando vibraes. Aps este perodo retirou-se os tubos um a um e verificando se houve formao do gel, sendo que se verificou que no houve formao de gel logo considerando um resultado negativo.

Resultados:

Determinao da Mxima Diluio Valida (MDV):. A MDV a mxima diluio vlida permitida de um produto, na qual o limite de endotoxina pode ser determinado. Para produtos que no tm uma concentrao limite de endotoxina oficial publicada (USP ou FDA), a equao de MDV considera a Mnima Concentrao Vlida (MCV). A MCV a menor concentrao da amostra que pode ser analisada E ainda possuir a sensibilidade adequada.

M: a dose humana mxima por kg no perodo de uma hora. K: 5,0 UE kg -1 para drogas parenterais. : sensibilidade declarada do Reagente LAL utilizado (0,06 UE mL-1).

CMV =

= 1.2

DMV =

= 87

d. Concentrao de Endotoxina = 2 . 0,125 CE = 2 . 0,125 CE = 0,25 UE/mL Laudo: > 0,12 UE/mL