You are on page 1of 5

Tincin diferencial Las tinciones diferenciales son aquellas tinciones que se usan para diferenciar de manera mas explicita

los microorganismos. Estas tinciones utilizan los colorantes diferenciales, que se componen de ms de una sustancia tintrea. En algunas tcnicas de coloracin, las tinciones diferenciales ms importantes que se emplean en bacteriologa son las de Gram y la tincin cido-resistente. Ambas tinciones se utilizan para obtener informacin acerca de la composicin de las capas de la pared celular de las clulas bacterianas.

Tincin de Ziehl Neelsen Tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, para la identificacin de microorganismos patgenos. Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes, Franz Ziehl (1859 a 1926), un bacterilogo y Friedrich Neelsen (1854 to 1894), un patlogo. Sinnimos: tincin de Ziehl-Neelsen.

Mycobacterium tuberculosis visualizacin usando la tincin de Ziehl-Neelsen.

La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica, para la identificacin de microorganismos patgenos, por ejemplo M. tuberculosis. Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes, Franz Ziehl, un bacterilogo y Friedrich Neelsen, un patlogo. [editar] Fundamento Las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cidos grasos (cidos miclicos) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloracn con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistentes. Las micobacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parsitos coccdeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca una nueva solidificacin de lo cidos grasos de modo que el colorante ya no puede salir de las bacterias. Por otro lado, el calentamiento aumenta la energa cintica de las molculas del colorante lo cual tambin facilita su

ent l teri teri e resisten l decoloraci n son de color rojo y la que no se ven de color azul ya que se utiliza azul de metileno como tinci n de contraste.
[edi T i

Esta t cnica puede realizarse tanto en muestras histol icas como citol icas.
[edi V i e hi l gi

Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina.Los reactivos necesarios para su realizaci n son los si uientes: 1. cido peri dico 58% 1. carbol fucsina de Ziehl (fucsina fenicada). Preparar mezclando en el orden dado: 1. 0,5 g fucsina bsica 2. 50 cc agua destilada 3. 5 cc etanol absoluto 1. 1. 28,5 g cristales de fenol derretidos 2. hematoxilina 3. alcohol cido 1%: 1. alcohol de 35 2. cido clorhdrico El procedimiento es el siguiente: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. desparafinar e hidratar los cortes cido peri dico 5%, 10 min lavar con agua destilada fucsina fenicada, 15 min decolorar en alcohol cido al 50% lavar con agua destilada hematoxilina, 10 min azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio deshidratar, aclarar y montar preparaciones

[editar] Resultados BAAR: rojo. Ncleos: azul semiamarillo.

[edi

V i

e cl ica o "en caliente"

sta y la siguiente variantes son para preparaciones citol gic as. 1. Hacer un frotis de la muestra. 1. La fijaci n al calor asegurar de que el frotis quede adherido al portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del portaobjetos durante la tinci n. 2. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de tinci n con los extendidos hacia arriba. Nunca tia ms de 12 portaobjetos a la vez. 2. Dejar el frotis sobre el puente de tinci n. 3. Aplicar fucsina-fenicada. 1. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5 minutos. Mantenga el calor durante este perodo. 4. Calentar con un mechero hasta la emisi n de vapores (3 -5 minutos). 1. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y tia la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o se seque el colorante. 2. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua corriente fra hasta que toda la tinci n libre quede lavada. Lave suavemente de manera que el extendido no se barra del portaobjetos. Retire el exceso de agua. 5. Decolorar con alcohol-cido. 1. Cubra cada portaobjetos con la soluci n dec olorante, tal como alcohol cido y mant ngalo sobre el portaobjetos durante 7 minutos. Si no se decolora suficientemente, el contenido del esputo que no son bacilos TBC puede permanecer teido. Enjuague con agua una vez ms los portaobjetos y quite el exce so de agua. Si los portaobjetos an estn rosa, aplique una cantidad adicional de la soluci n decolorante de 1 a 3 minutos. 6. Aplicar azul de metileno (1 minuto). 1. Aplique la soluci n de contraste, azul de metileno, durante 1 minuto. 7. Enjuagar con agua 1. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire. 8. Ahora coloquele una pequeita gota de aceite de inmersi n y haga la observaci n al microscopio con 100 x 100
[editar] o en "fro"

1. Hacer un frotis. 2. Dejarlo en el puente de tinci n.

3. Aplicar fucsina-fenicada (soluci n con fenol y mayor concentraci n de fucsina). 4. Dejar en vasos coplin durante 20 minutos. 5. Decolorar con alcohol acido. 6. Lavar con agua del grifo. 7. Contrastar con azul de metileno
[editar] Otros tipos de tinci n
y y y y

Tinci n de Gram tinci n cido - alcohol resistente tinci n de esporas tinci n negativa

Fundamentos de diferenciaci n de Gram positivo y Gram negativo Los fundamentos de la t cnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas La pared celular de las bacterias Gram pos itivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, adems de dos clases de cidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membr ana plasmtica, se encuentra el cido lipoteicoico, y ms en la superficie, el cido teicoico que est anclado solamente en el peptidoglucano (tambi n conocido como murena) Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (de composici n distinta a la interna) por medio d e lipoprotenas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoprotenas. La membrana exterior est hecha de protena, fosfo lpido y lipopolisacrido. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha mayor proporci n que las Gram negativas. La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloraci n, se debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgnicos,

como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona . La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdi ndose la coloracin azul -violcea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este acta deshidratando los poros cerr ndolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul violcea. Bacterias Escherichia coli vistas al microscopio tras ser teidas con la tincin de Gram

DIFErencia entre gharm y ziel neelseen

Son 2 t cnicas diferentes para detectar distintos microorganismos, la tincin de gram es para clasificar segn la presencia o no de membrana externa; mientras que la Ziehl-Neelsen son para un tipo especial de bacterias las cuales son denominadas Acido-Alcohol resistente (como por ejemplo Mycobacterium Tuberculosis), en uno de los pasos de la tincin de gram se tiene que decolorar con una solucin de acido y alcohol, mientras que en estas bacterias (acido -alcohol resistente) esta decoloracin no sirve, lo cual deja sin poder hacer una buena tincin de gram. Espero te sirva, saludos