Introdução, Quimiotaxonomia

Como citar: VALLADO, F.N.
Estudo fitoqumico de folhas e polpa de fruto de maytenus salicifolia (celastraceae) e anlise quimiotaxonmica em Maytenus sp. Departamento de Qumica, ICEx, Universidade Federal de Minas Gerais, 2011 (Tese, doutorado em qumica).
INTRODUO
Evoluo e adaptao das plantas com flores
Em uma carta endereada a Sir Joseph Dalton Hooker, um dos mais importantes botnicos do sculo XIX, Charles Darwin se referiu origem das angiospermas como um abominvel mistrio. A resoluo desse enigma ignbil de forma convincente, ou melhor, a determinao do grupo ancestral dos quais as angiospermas se originou um rduo ofcio que demanda um estudo criterioso a fim de evitar equvocos j cometidos. Essa informao ainda permanece obscura, e espera-se que esteja oculta em algum fssil ainda no descoberto (Savolainen, 2004; Soltis, 2008). Recentemente, escavaes paleontolgicas permitiram determinar que os primeiros fsseis deste grupo de plantas datam do cretceo inferior, h pelo menos 134 milhes de anos (Bell, 2000; Magalln, 2001). Entre estes vestgios iniciais e o acelerado processo de evoluo e diversificao, as angiospermas demandaram cerca de 10 milhes de anos que uma estreita faixa de tempo em comparao com outros grupos vegetais. Este processo de transformao, que afetou de forma direta ou indireta todo o reino vegetal, ocorreu entre o Aptiano e Cenomaniano (Figura 1, pg. 2) em uma escala global (Van de Peer, 2005). Estudos paleobotnicos focados neste perodo de tempo geolgico mostraram a presena de fsseis relacionados a muitos gneros modernos e vrios gneros extintos relacionados com as famlias de espcies atuais (Knobloch, 1991). As plantas agrupadas na diviso Magnoliophyta ou Anthophyta apresentam vulos e gros de plen encerrados em flores, endosperma, elementos de vaso no xilema, elementos de tubo crivado e clulas companheiras no floema. As flores so providas de um clice (spalas) e uma corola (ptalas), com funo de proteger os rgos reprodutivos e atrair animais polinizadores, o que foi sendo alcanado atravs da colorao, aroma e formas diferenciadas (Cronquist, 1988). Esta combinao de caractersticas deve ter proporcionado as condies necessrias para uma rpida diversificao e evoluo, especialmente em resposta seleo de insetos polinizadores e herbvoros (Van de Peer, 2005). As caractersticas que distinguem as angiospermas dos outros grupos vegetais como as brifitas, pteridfitas e gimnospermas, certamente propiciaram uma melhor adaptao ao meio durante milhes de anos (Cronquist, 1988). Entretanto, algumas adaptaes certamente facilitaram o espantoso processo adaptativo ocorrido durante o perodo Cretceo, permitindo a disseminao e o domnio de vrias partes do planeta. Uma dessas inovaes foi o 1
Como citar: VALLADO, F.N. Estudo fitoqumico de folhas e polpa de fruto de maytenus salicifolia (celastraceae) e anlise quimiotaxonmica em Maytenus sp. Departamento de Qumica, ICEx, Universidade Federal de Minas Gerais, 2011 (Tese, doutorado em qumica).
desenvolvimento de um sistema de defesa constitudo por compostos qumicos (molculas bioativas) produzidas em vias metablicas, at ento, inditas no reino vegetal, levando a uma fantstica diversidade de compostos qumicos conhecidos modernamente como compostos secundrios (Gottlieb, 1987; Wink, 2003).
Perodo geolgico
Oligoceno
Fases
Chatiano Rupeliano Priaboniano Bartoniano Lutetiano Ypresiano Thanetiano Selandiano Daniano Maastrichtiano Campaniano Santoniano Coniaciano Turoniano Cenomaniano Albiano Aptiano Barremiano Hauteriviano Valanginiano Berriasiano
Escala de tempo
23x10 anos
6
34x10 anos
Eoceno
56x10 anos
Paleoceno
65x10 anos
Superior
Cretcio
100x10 anos
6
Inferior
145x10 anos
Figura 1: Faixas de tempo geolgico, do Cretceo ao Oligoceno (Gradstein, 2009). Estudos quimiossistemticos sugerem que as primeiras plantas terrestres, muito similares s brifitas, produziam substncias originrias da via do cido cinmico (tais como flavonides) com a finalidade de absorver e diminuir os efeitos prejudiciais da radiao na regio do ultravioleta. Estes compostos agem como obstculo para esta faixa do espectro eletromagntico tanto em Bryophyta, quanto para os outros grupos de plantas terrestres (Gottlieb, 1987; Wink, 2003). A rota do cinamato viabilizou, tambm, a adaptao a outras presses ambientais. A lignina, polmero fundamental no processo de endurecimento da parede celulsica de plantas vasculares, resultado da ativao da carboxila do cido cinmico e seus derivados pelo ster tilico de cinamoil-CoA propiciando condensaes a flavonides e reaes de reduo. Os 2
lcoois cinamlicos resultantes da reduo podem se polimerizar oxidativamente em ligninas. A rota biossinttica de flavonides, por sua vez, pode resultar em catequinas e antocianidinas e a condensao dessas substncias leva a taninos condensados, que so constituintes importantes na defesa contra diversos agentes agressores, tais como, vrus, bactrias, fungos, insetos e herbvoros (Gottlieb, 1987; Wink, 2003). Ligninas e taninos condensados exerceram um papel importante na evoluo das gimnospermas. Estes compostos fazem parte do principal mecanismo de defesa deste grupo de plantas, que tornam o tecido vegetal, formado por carboidratos e protenas, mecnica e enzimaticamente indigervel. A presena de taninos condensados ocorre em mais de 70% dos gneros estudados no qual a lignificao do tecido atinge altos nveis. Outros constituintes, tais como terpenos e flavonides so encontrados com certa freqncia nas gimnospermas, desempenhando vrias funes importantes, tais como, proteo contra microrganismos e herbvoros. Apesar da diversidade de compostos, considerando a sua vasta distribuio geogrfica, o longo perodo de seu domnio sobre a flora terrestre, ainda muito pequeno o nmero de metablitos secundrios isolados de gimnospermas em comparao com as plantas com flores (Gottlieb, 1987; Gottlieb, 1995; Wink, 2003). Nas angiospermas, a adaptao qumica se tornou especializada. Substncias ativas (aleloqumicos) gradualmente ocuparam a funo outrora dos taninos condensados e das ligninas. Existem fortes indcios de que um processo de induo de mecanismos de resistncia por animais e vegetais, e a produo de um composto em detrimento de outro, dentro de uma mesma rota anablica ou atravs de uma nova rota, levou a uma espantosa diversidade de substncias produzidas pelas angiospermas. Assim, o efeito da associao de plantas florferas com outras plantas, fungos, insetos e animais vertebrados, permitiram a biossntese de produtos naturais que, possivelmente, teve um papel extraordinrio na consolidao do domnio terrestre pelas plantas com flores nos ltimos 100 milhes de anos (Gottlieb, 1987; Pichersky, 2000; Lerdau, 2003; Wink, 2003). A capacidade adaptativa dos organismos pertencentes ao Reino Plantae notria. Essa habilidade de amoldamento ao ambiente, que culminou com um alto nvel de complexidade, permitiu a colonizao do planeta por diversos grupos vegetais, dos quais se destaca o grupo das angiospermas (Raven, 2001; Barroso, 2002, Vallado, 2005).
Sistemas de classificao de angiospermas
A diversidade de espcies que compartilham a biosfera terrestre exuberante! Estimase que cerca de 14 milhes de diferentes tipos de organismos vivos compartilham a biosfera terrestre. Entretanto, estima-se que, at o momento foi nomeada e catalogada apenas uma frao deste, abrangendo cerca de 1,75 milho de organismos. Dentre os seres vivos existentes estima-se que haja mais de 420.000 espcies no reino Plantae, sendo que, deste total, aproximadamente 40% no foram descritas e nem catalogadas (Raven, 2001; GBO, 2002; Baillie, 2004; Vallado, 2005). Compreendendo cerca de 90% das espcies de plantas conhecidas, as angiospermas, ou plantas com flores, apresentam uma extraordinria riqueza taxonmica e ocupam os mais diversos habitats terrestres, com exceo das grandes cordilheiras (Himalaia e Andes), dos plos e regies circunvizinhas, e das regies abissais de mares e oceanos. Consideradas o maior grupo de organismos fotossintetizantes, as angiospermas variam de pequenas ervas a rvores de grande porte ou plantas adaptadas a viver sobre troncos de outras plantas, como as epfitas. Com cerca de 260.000 espcies, esta diviso tem dominado o planeta por mais de 90 milhes de anos (Raven, 2001; Barroso, 2002; GBO, 2002; Seberg, 2004; Baillie, 2004). A existncia dessa espantosa diversidade de espcies nas angiospermas tornou necessria uma sistematizao com base em critrios de fcil utilizao, agrupando os indivduos com maior similaridade morfolgica e anatmica em nveis hierrquicos, dependentes do grau de uniformidade das caractersticas analisadas. A hierarquizao e caracterizao dos diferentes grupos de vegetais levaram uma das atividades antigas e intrnsecas do ser humano e conhecida desde o sculo XVII como taxonomia, a se estabelecer como uma das mais importantes reas das cincias naturais (Keogh, 1995; Poser, 2001; Raven, 2001; Klinkenberg, 2008). O mais antigo sistema de classificao taxonmica foi proposto por Teofrasto de Ereso, considerado o pai da botnica. O brilhante discpulo de Aristteles classificou aproximadamente 500 plantas em um sistema rudimentar constitudo por trs grupos, rvores, arbustos e ervas, separando ou agrupando-os atravs das caractersticas foliares. Este sistema prevaleceu por quase 2000 anos at ser substitudo por preceitos mais elaborados em conseqncia da agregao de novas informaes e de modernos conceitos (Fralish, 2001; Raven, 2001; Singh, 2004). O ressurgimento da taxonomia ocorreu em meados do sculo XIV como uma conseqncia da renovao do interesse pelas plantas e extensa explorao tanto no velho 4
mundo quanto no continente recm descoberto. O nmero de plantas aumentou enormemente e a necessidade de formalizar uma classificao desse material, possibilitou a consolidao da botnica, outrora margem de outras reas (Fralish, 2001; Raven, 2001; Singh, 2004). A partir deste perodo, foram propostos conceitos inovadores que so utilizados at hoje. O moderno conceito de genus e vrios nomes de gneros validados pelas recentes regras de nomenclatura foram sugeridos por Joseph Pitton de Tournefort. Outro botnico, John Ray, props um sistema baseado em estruturas morfolgicas grosseiras, de fcil distino. As subdivises eram baseadas no tipo de fruto e caractersticas das folhas e flores. Esta abordagem, posteriormente, tornou-se as bases da moderna classificao taxonmica proposta por Linn e Jussieu (Fralish, 2001; Raven, 2001; Singh, 2004). Em uma de suas primeiras publicaes intitulada Hortus Uplandicus, Caroli a Linn ou Carolus Linnaeus, props um sistema de classificao de plantas denominado de Sistema Sexual. Mais tarde, em sua publicao mais notvel, Species Plantarum, sugeriu a atribuio de dois nomes, um binmio latino, para todas as plantas conhecidas. O sistema binomial referendado pelas atuais regras de nomenclatura botnica e muitos nomes atribudos por Linn so vlidos at hoje (Linn, 1766; Fralish, 2001; Raven, 2001; Barroso, 2002; Singh, 2004). As limitaes do sistema sexual impulsionaram a pesquisa de novas formas de classificao que culminaram com o desenvolvimento do sistema natural. Um destes sistemas foi publicado por Antoine Laurent de Jussieu que, dando continuidade aos trabalhos de seu tio Bernard, organizou as plantas levando em considerao um nmero maior de caractersticas morfolgicas, tais como o nmero de cotildones, a estrutura da semente e outra srie de caracteres vegetativos e reprodutivos. Seu sistema serviu, posteriormente, de base para o desenvolvimento de diversos sistemas modernos de classificao (Raven, 2001; Franlish, 2002; Stern, 2003; Singh, 2004). Em meados do sculo 19, a proposta de Charles Darwin e Alfred Wallace iniciou um novo perodo de investigao botnica e classificao taxonmica que revolucionou pensamento biolgico. Considerando a espcie como uma entidade dinmica, que se modifica no decorrer do tempo, o princpio filogentico, desde ento, tornou-se a base dos sistemas modernos de classificao, relacionando as plantas atuais com espcies extintas (Beaman, 1986; Raven, 2001; Franlish, 2002; Barroso, 2002; Singh, 2004). Em conseqncia do nmero limitado de dados fsseis de plantas, tornou-se quase improvvel a concepo de um sistema filogentico definitivo. Mesmo com vrias propostas de classificao utilizando-se informaes de diversas reas do conhecimento, tais como, 5
bioqumica, fitoqumica, anatomia, morfologia, gentica, citologia e paleontologia, ainda no foi possvel conceber um sistema que persuadisse toda a comunidade cientfica. Assim, foram propostos vrios sistemas no decorrer do sculo XX destacando-se as classificaes de Cronquist, casal Dahlgren, Thorne e Takhtajan (Beaman, 1986; Singh, 2004). Os trabalhos de Arthur Cronquist um dos mais aceitos pela comunidade cientfica ocidental, e, talvez, o mais difundido. um sistema extremamente simples em sua organizao e muito didtico. Utiliza-se de caracteres anatmicos, presena ou ausncia de endosperma, composio qumica, morfologia dos rgos reprodutores, entre outras caractersticas para alocar os diversos grupos de angiospermas ou Magnoliophyta (Barroso, 2002). O incio e o fim da dcada de 80 foram marcados por duas publicaes do casal Rolf e Gertrud Dahlgren. Sua proposta era um sistema de classificao de angiospermas baseado, principalmente, na morfologia, embriologia, citologia e na distribuio de metablitos secundrios, por considerarem que no havia conhecimento do curso evolucionrio das angiospermas suficientes para se classificar corretamente esse grupo de plantas (Barroso, 2002). Na dcada subseqente, Thorne, em seu artigo intitulado The classification and geography of the flowering plants, alm de propor um sistema com maior detalhamento na classificao de subfamlias para famlia com grande nmero de espcies, contribuiu, tambm, com informaes valiosas quanto distribuio geogrfica deste grupo de plantas (Singh, 2004). A classificao para as angiospermas, nos fins do sculo XX, foi enriquecida pelas contribuies de Takhtajan que organizou os grupos baseado em caractersticas e aspectos vegetais aos moldes de Cronquist e Thorne, acrescentando uma complexidade dos nveis hierrquicos inferiores (Singh, 2004). Durante a dcada de 90, a reconstruo da rvore filogentica das angiospermas deu um enorme passo. O acumulo de dados relacionados com as anlises genticas, principalmente a seqncia gentica do locus da ribulose 1,6 bifosfato carboxilase (rbcL), forneceu informaes de suma importncia para a estruturao de um novo sistema de classificao taxonmica. A anlise cladstica desses dados permitiu, em muitas situaes, a resoluo de conflitos existentes em modernos sistemas de classificao fundamentados principalmente na anatomia e morfologia. Com base nestas anlises foi possvel organizar este extraordinrio grupo vegetal em 457 famlias, reunindo-as em seis grupos superiores:
monocotiledneas, eudicotiledneas, magnolideas, angiospermas basais, Chloranthaceae, Ceratophyllum (Magalln, 2001; APG II, 2003; Soltis, 2004; Soltis, 2008). Todas as propostas de sistemas para classificar esse e outros grupos de plantas so de grande valia, mas no h um consenso entre os botnicos com relao a um sistema de classificao nico e definitivo, devido grande diversidade biolgica que um mesmo grupo de plantas, por menor que seja, pode apresentar. A definio de um sistema unificado de classificao, para alocar as vrias formas de vida em suas reais posies hierrquicas na natureza, um desafio. A soluo desse desafio no envolve somente a responsabilidade de botnicos, mas tambm, de bioqumicos, com suas tcnicas de seqenciamento de material gentico (DNA e RNA) e de fitoqumicos, atravs de estudos da presena e distribuio de metablitos secundrios nos diversos grupos de plantas (Vallado, 2005).
Quimiotaxonomia clssica e moderna
Em uma carta ao editor publicada na Nature em 1946 intitulada Chemical Taxonomy, Harold Munro Fox relatou diferenas qumicas entre animais marinhos do Reino Unido e empregou estas caractersticas para classific-los. Em 1951, A. R. Trim se utilizou desta mesma expresso para relatar um estudo qumico comparativo realizado entre duas espcies de famlias distintas que, por coincidncia, tambm fra publicado na Nature. Estas foram as primeiras citaes do termo taxonomia qumica que, nos fins da dcada de 50, se aglutinaram para dar origem ao vocbulo chemotaxonomy ou quimiotaxonomia utilizado em dois artigos consecutivos de fitoqumica comparativa de autoria de Robert Hegnauer. No Brasil, a palavra quimiotaxonomia foi utilizada pioneiramente em um trabalho (tese) por Braga, Eyton e Gottlieb em 1967 (Fox, 1946; Trim, 1951; Hegnauer, 1956; Hegnauer, 1958; Braga, 1967). Mas a questo : que cincia a quimiotaxonomia? E qual o seu mbito? Apesar de no ser fcil delimitar e definir este rea de pesquisa de forma didtica, possvel dizer que, em sentido amplo (lato senso), a quimiotaxonomia :
Uma cincia na interface da qumica com a biologia, inserida no contexto da sistemtica vegetal que estuda a constituio/composio qumica ao nvel micro e macromolecular com a finalidade de confirmar, re-ordenar e/ou reclassificar os organismos vivos nos nveis hierrquicos definidos pelos mtodos tradicionais de classificao (Hegnauer, 1967; Brondz, 1986; Hristozov, 2007; Frisvald, 2008). 7
Com a possibilidade de se aplicar a todos os seis reinos, com diversos trabalhos publicados focados na anlise qumica de fungos, bactrias, algas, plantas e animais, a quimiotaxonomia pode ser dividida em macro e micromolecular. Considerado uma das principais ferramentas da sistemtica do sculo XXI, a subrea macromolecular assim nomeada em conseqncia das substncias objetos de estudo, na sua maioria macromolculas. Pode-se dizer que o estudo do genoma e do proteoma, ou melhor, das protenas, do RNA e DNA, trabalhos focados nesses biopolmeros vem permitindo aos taxonomistas proporem um novo sistema de classificao botnica baseado principalmente na anlise dos genes que codificam a ribulose 1,6 bifosfato carboxilase (rbcL) e a subunidade beta da ATP sintase (atpB) presentes no genoma plastidial. A outra subrea da quimiotaxonomia a micromolecular que de forma simplista pode ser considerada como o estudo do metaboloma que com o desenvolvimento das tcnicas analticas vem ganhando espao nos ltimos 60 anos, tanto em pesquisas de base nas universidades e centros de pesquisas (taxonomia e sistemtica) quanto no setor industrial, principalmente na anlise qumica de fitoterpicos (Beaman, 1986; APG II, 2003; Singh, 2004; Reynolds, 2007). Entretanto, a histria da taxonomia qumica e sua utilizao na diferenciao de plantas no se tratam de uma rea de estudo com pouco mais de meio sculo de idade, uma cincia antigussima e est intimamente relacionada com a prpria histria da humanidade. Principiando uma rudimentar quimiotaxonomia aplicada, os ancestrais do homem moderno j organizavam as plantas de acordo com o uso, nutricional ou medicinal, propriedades que esto relacionadas constituio qumica da espcie ou gnero em questo. Porm, o despertar desta rea dentro das diretrizes cientficas modernas somente ocorreu centenas de anos depois com os delineamentos de Nehemia Grew (1673), James Petiver (1699) e William Withering (1785) (Naik, 1985). No incio do sculo XIX, a composio qumica de espcies vegetais j intrigava e despertava um maior interesse dos pesquisadores, dentre os quais se destaca o botnico suio Augustin Pyramus De Candolle. Em sua obra intitulada Essai surles proprits mdicales des Plantes, compares avec leus formes exterrieures et leur classification naturalle, de 1816, DeCandolle relatou suas observaes relativas composio qumica de plantas e a influncia do solo como descrito explicitamente neste trecho: Cst um phromene continuellement prsent a notre examen, que de voir diverse plantes nes dans um sol parfaitementsemblable, produire ds matieres trs-differentes, tandes que ds vegetaux analoguer, nes dasns ls sols differents, y forment des produits semblables (Gibbs, 1963). 8
Assim, DeCandolle concluiu que plantas diferentes nascidas em solos anlogos continham substncias diferentes e que plantas idnticas em solos diferentes apresentavam produtos idnticos. Apesar de uma concluso simplista, foi o primeiro a considerar caractersticas qumicas como um parmetro taxonmico. No final do mesmo sculo, vrios pesquisadores seguiram a direo iniciada por DeCandolle, e deram sua contribuio para o desenvolvimento de uma rea de pesquisa ainda annima, destacando-se o farmacutico Johan Fredrik Eijkman (Eykman) que relatou a ocorrncia de alcalides em certas famlias de plantas, a mdica Helen Ceclia De Silver Abbott Michael atravs de trabalhos relacionados evoluo, qumica e taxonomia vegetal, o botnico Maurice Greshoff que apresentou estudos comparando caractersticas taxonmicas e qumicas de espcies vegetais e o botnico James Birtley McNair, por meio de vrios trabalhos aplicando a qumica comparativa taxonomia, especialmente atravs do artigo intitulado A study of some characteristics of vegetable oils de 1930, onde descreveu as caractersticas de aproximadamente 318 substncias divididas em leos, gorduras e graxas (McNair, 1930; Gibbs, 1963; Naik, 1985). A necessidade de classificar corretamente os diversos grupos de plantas levou os taxonomistas a utilizarem parmetros qumicos para a classificao das espcies. As caractersticas qumicas como a presena ou ausncia de pigmentos e a ocorrncia de cristais de natureza orgnica e inorgnica foram e ainda so usados como critrio na identificao de vrias famlias, visto que algumas plantas as apresentam e, em outras espcies, essas substncias, so completamente ausentes (Gibbs, 1963). A presena de cristais, como de oxalato de clcio em forma de agulhas conhecidas como rfides, foi citada pela primeira vez como caracterstica taxonmica por Robert Brown num trabalho publicado em 1833. Outros trabalhos, relacionando a presena desse composto de formas diversas em grupos de plantas e sua importncia taxonmica, foram publicados no incio do sculo XX (Gibbs, 1963) e mais recentemente por William Louis Stern e Walter S. Judd (1999), Christina J. Prychid; Paula J. Rudall (1999) e Scott Zona (2004). Substncias de reserva, como o amido, podem ser identificadas na clula vegetal por reaes de colorao e servirem como parmetro de classificao e identificao de grupos vegetais, pois apresentam gros de diversas formas que variam de um grupo para outro. Os gros de amido foram estudados inicialmente por Fritzsche em 1834. Em seu trabalho, este autor descreve gros de diversas espcies. Outros pesquisadores utilizaram esta caracterstica para classificar grupos de plantas, mas foi Reichert que, em 1913, publicou um trabalho relatando um estudo detalhado sobre o amido e a relao entre as caractersticas de material de reserva e a classificao taxonmica. Estes estudos revelaram que os diversos tipos de 9
gros de amido presentes nos diferentes grupos de plantas podem ser de grande valia para se classificar corretamente uma determinada espcie (Gibbs, 1963). A presena ou ausncia de incluses slidas e substncias de reserva se mostraram de grande importncia para a classificao taxonmica, tornando-se uma caracterstica ainda utilizada para tal finalidade. Atualmente, no entanto, com o aperfeioamento e desenvolvimento de tcnicas analticas, houve um maior interesse no intuito de utilizar a distribuio de compostos qumicos, em particular, de metablitos secundrios como uma caracterstica auxiliar para a adequada classificao das espcies de plantas (Vallado, 2005). Em meados do sculo XX, os botnicos consideravam os compostos originados do metabolismo secundrio de plantas superiores como resduo de produtos do metabolismo primrio, e que a grande diversidade e complexidade estrutural apresentada era nada mais que uma brincadeira da natureza. Hoje, a justificativa mais aceita para a existncia destes compostos que a produo est intimamente relacionada com a adaptao das espcies ao meio ambiente (Wink, 2003). Como uma regra, esses metablitos secundrios esto distribudos em um dado txon e uma pequena quantidade de compostos pode ser encontrada em maior concentrao em meio a uma srie de constituintes existentes em menor concentrao. Alm disso, o padro dessa distribuio em uma espcie vegetal muito complexo e varivel nos diferentes rgos da planta, nos estgios de desenvolvimento e entre indivduos e populaes (Wink, 2003). Esses produtos do metabolismo secundrio apresentam vrias caractersticas como estrutura qumica diversa, funo metablica no definida em certos casos, ocorrncia limitada dentro dos grupos vegetais que mostra correlao com outras caractersticas como morfologia e fisiologia vegetal (Cronquist, 1980). Nesse contexto, a quimiotaxonomia baseada na distribuio de compostos secundrios e apoiada por estudos fitoqumicos, provocou um considervel impacto na evoluo dos sistemas de classificao existentes. A prospeco fitoqumica em vrias famlias de plantas, em particular, da subclasse Magnoliopsida tem fornecido subsdios para estudo da relao entre a evoluo qumica e a distribuio de compostos secundrios em diversos grupos de vegetais superiores. Como exemplos, citam-se o padro sistemtico de distribuio de alguns metablitos nas classes Rosidae e Asteridae; uma grande evidncia coevolucionria nas dicotiledneas, que se reflete principalmente na distribuio de taninos e o constante isolamento de substncias de extratos de folhas, caules e razes em espcies da famlia Celastraceae como a -amirina, quinonametdeos e dulcitol, sendo, portanto, constituintes caractersticos deste grupo de plantas (Dharmassree, 1982). 10
Analisando o perfil de distribuio de metablitos secundrios nas dicotiledneas, observa-se que, algumas vezes, quase todos os membros de um grupo de plantas partilham um mesmo padro qumico; isso justificaria o uso de marcadores qumicos em taxonomia como a budlena A, uma lactona sesquiterpnica derivada do caurano, e alcalides pirrolizidnicos para a famlia Asteraceae (Costa, 1999; Trigo, 1999), cumarinas como a xantiletina, o limonide perforatina e alcalides 4-quinolonas, para a famlia Rutaceae (Lima, 1999). So relatados, tambm, na literatura os triterpenos friedelina e -friedelinol como marcadores qumicos de espcies do gnero Maytenus, em especial de M. ilicifolia (Alberton, 2002). Por outro lado, vrios compostos secundrios podem ocorrer em famlias no relacionadas, devido evoluo convergente na qual, genes codificadores de uma determinada via biossinttica ocorrem, independentemente, em vrios ramos da rvore evolutiva das angiospermas. A utilizao de dados obtidos da prospeco fitoqumica em classificao taxonmica enfrenta outros problemas. Um deles que, apesar do aumento das pesquisas, o nmero de espcies de plantas investigadas quimicamente muito pequeno, levando insuficincia de dados disponveis. H, tambm, a tendncia (talvez viciosa) de se buscar determinados compostos em taxa que tm a maior chance de serem encontrados, deixando de investigar a ocorrncia desses produtos em outras famlias nas quais teriam grande relevncia em taxonomia. O fenmeno chamado de convergncia qumica pode ocorrer, muitas vezes, em plantas no relacionadas que produzem as mesmas substncias mostrando que tais produtos no devem ser usados como marcadores qumicos. Variaes entre uma mesma espcie podem ocorrer em funo das condies edficas, climticas, estgio de crescimento e interaes com outros organismos, causando alteraes metablicas e, conseqentemente, qumicas. Os custos nos processos de fracionamento e identificao, bem como as dificuldades no isolamento de substncias presentes em pequenas concentraes tornam esse procedimento, s vezes, invivel. Mesmo com limitaes, o conhecimento da composio qumica se mostra de grande valor para a reestruturao dos sistemas de classificao taxonmica (Falkenberg, 2001). Recentemente, tcnicas de anlise utilizadas para o isolamento e caracterizao de metablitos secundrios passaram a ser empregadas diretamente na identificao de espcies. A impresso digital resultante da anlise do extrato bruto ou de fraes de mtodos analticos, tais como cromatografia gasosa ou lquida, espectrometria de massas, ressonncia magntica nuclear e outros, esto sendo utilizadas como mtodos auxiliares anatomia e morfologia aplicada classificao taxonmica de diversos grupos de seres vivos.
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As anlises cromatogrficas (Rogers, 2000; Hillig, 2004; Chen, 2006; Shao, 2007; Dixit, 2008), espectroscpicas (Schrader, 1999; Zodrow, 2003) e espectromtricas (Smedsgaard, 1996) de extratos e rgos vegetais se revelaram mtodos rpidos e eficientes na identificao e classificao de espcies. A utilizao de perfil cromatogrfico (fingerprint) em controle de qualidade de medicamentos fitoterpicos foi recentemente referendada por diversos orgos oficiais, tais como, Organizao Mundial de Saude (OMS), Food and Drug Administration (FDA), European Medicines Agency (EMEA), Bundesinstituts fr Arzneimittel und Medizinprodukte (BfArM), British Herbal Medicine Association (BHMA) e a Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria (ANVISA). Apesar de serem necessrias pesquisas mais profundas com intuito de validar os mtodos propostos e provar sua eficcia, no h duvidas sobre as contribuies neste campo de estudo to vasto e complexo que a sistemtica vegetal (WHO, 2000; Brasil, 2004; Cheng, 2006; Dixit, 2008).
Metabolismo secundrio, fatores ambientais e adaptao gnica
Acredita-se que existam mais de 200.000 compostos secundrios produzidos pelo reino vegetal. So chamados assim por no participarem diretamente do processo bsico de crescimento e desenvolvimento das espcies que os produzem. Esses compostos representam um incrvel potencial a ser explorado com a finalidade de gerar novos agentes farmacologicamente ativos (Benderoth, 2006). A hiptese clssica, que procura explicar esta enorme diversidade metablica, sugere que um processo recproco de interao de plantas com agentes polinizadores e inimigos naturais culminou com uma seleo mtua (Benderoth, 2006). A capacidade de biossntese desses compostos se moldou atravs do processo de evoluo ocorrido em diferentes linhagens de plantas em funo das necessidades impostas pelos vrios habitats. Alm da utilidade como defesa contra patgenos e herbvoros ou para impedir o crescimento de outras plantas, substncias odorferas foram produzidas para atrair insetos, aves e mamferos polinizadores e assim aumentar as taxas de fertilizao. Compostos qumicos presentes em frutos impedem a deteriorao e agem como sinal (colorao e aroma) sugerindo recompensa em caso de seu uso como alimento, indicando a presena de aminocidos, vitaminas e acares, auxiliando na disperso de sementes ou podem, tambm, ter a funo de prover resistncia contra a alta salinidade do solo, seca prolongada e desidratao (Pichersky, 2000). Portanto, diversos estmulos, oriundos do ambiente circunvizinho, constitudos pelos fatores biticos, supracitados, e os abiticos, levaram produo de inmeros compostos 12
secundrios. As variveis ambientais que afetam de forma profunda a anatomia e o metabolismo vegetal compreendem, principalmente, temperatura, disponibilidade de gua, luminosidade, composio e constituio do solo, altitude e poluentes (Evans, 1996; Blatt, 1998; Lima, 2003). A interao entre vegetais superiores e o meio ambiente interferiu na produo de determinados compostos em prejuzo de outros devido influncia direta na via metablica a nvel transcricional, no sistema de ativao/desativao da expresso gnica (Operon) ou em nvel ps-transcricional, em alguma etapa posterior, como por exemplo, na traduo e modificaes ps-traducionais (Lehninger, 2002). A natureza, entretanto, em sua caminhada evolutiva adotou mecanismos mais radicais de adaptao que alteraram e aperfeioaram vrias rotas de produo de compostos secundrios e suas respectivas enzimas, modificando diretamente o contedo gentico atravs do aumento ou diminuio do nmero de cromossomos (aneuploidia ou poliploidia) ou por pequenas mutaes em regies especficas do DNA cromossomal (Evans, 1996). A aneuploidia conceituada como sendo uma alterao do caritipo (conjunto de caractersticas dos cromossomos formados durante a metfase) atravs da perda ou ganho de um ou alguns cromossomos. Esse processo de modificao do nmero n de cromossomos de uma determinada espcie teve e ainda tem um papel importante no processo de adaptao, devido ao surgimento ou intensificao de determinadas caractersticas importantes sobrevivncia em conseqncia deste evento gnico. Outro fenmeno, que desempenhou um papel at mais importante na evoluo das plantas superiores que o citado anteriormente, a poliploidia. , provavelmente, a alterao citogentica mais importante na especiao e evoluo vegetal. Estima-se que 80% das espcies com flores se originaram por este processo. Este dispositivo celular restaura a fertilidade de hbridos regularizando o pareamento meitico e apresentam tambm um efeito tamponante maior em relao capacidade de adaptao, pois por possurem mais cpias genmicas dos que os diplides, podem acumular mais variabilidades encobertas. Ambos os processos de modificao no nmero de cromossomos interferem na produo de compostos secundrios, diminuindo, aumentando ou inibindo a sntese destes metablitos (Forni-Martins, 2000; Schifino-Wittmann, 2004; SchifinoWittmann, 2005). A interveno mais drstica ocorreu no processo de mutao, atravs do qual ocorreu no somente atenuao, intensificao e inibio de rotas metablicas, como tambm a formao de novas vias biossintticas pela alterao do stio ativo de enzimas e, consequentemente, de seu substrato e o respectivo produto da via. Esta hiptese a explicao mais plausvel para a diversificao das vias biossitticas de diversos compostos, 13
tais como os triterpenos. Conseqentemente, a partir de um nico substrato, o 2,3-oxidoesqualeno, possvel sintetizar diferentes compostos como o cicloartenol e a -amirina (Figura 2). As mutaes podem variar da substituio de uma base por outra, at a adio ou deleo de um ou mais pares de bases, mas sempre alterando, nestes casos, a caracterstica mais importante da enzima: sua especificidade cataltica (Pichersky, 2000). Evidncias da origem de um novo gene que codifica uma enzima, em conseqncia do processo de mutao, so raras. A obteno desses indcios conseguida atravs da anlise de um determinado gene e seu produto (protena) numa espcie e em plantas relacionadas, bem como, da comparao dos dados obtidos com dados relacionados descritos em outros trabalhos ou banco de dados genticos e de protenas (Pichersky, 2000).
cicloartenol sintase
O HO
2,3-oxido-esqualeno
cicloartenol
-amirina sintase
O HO
2,3-oxido-esqualeno
amirina
Figura 2: Ciclizao do 2,3-oxido-esqualeno em cicloartenol e -amirina. O nmero de etapas indicado pelas setas. Muitas das vias biossintticas atuais podem ter se originado de mutaes localizadas na regio do stio ativo de uma enzima ancestral. Essa possibilidade pode esclarecer a enorme similaridade das triterpeno sintases (Figura 3, pg. 15), que sugere uma diversificao atravs de mutaes. A -amirina sintase (bAS), enzima responsvel pela catlise da reao do 2,3-oxido-esqualeno em -amirina, apresenta uma enorme similaridade com a cicloartenol sintase (CAS) que catalisa a converso do 2,3-oxido-esqualeno em cicloartenol, precursor de esterides em plantas. A bAS apresenta cerca de 60% de similaridade em relao seqncia
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de aminocidos com a CAS, o que corresponde a quase 460 de um total de aproximadamente 760 aminocidos (Ebizuca, 1998; Ebizuca, 1999; Ebizuca, 2000; Qi, 2004; Abe, 2007).
Figura 3: Alinhamento de parte da seqncia de aminocidos da -amirina sintase e da cicloartenol sintase isolados de Panax ginseng. As seqncias idnticas so mostradas em negrito e cada letra refere-se a um aminocido de acordo com a nomenclatura internacional (IUPAC, 1984; Ebizuca, 1998). Todos os fenmenos relacionados a alterao e a criao de rotas de formao de compostos do metabolismo secundrio podem conduzir gnese das chamadas raas qumicas ou, at mesmo, de novas espcies. Estas raas ou novas espcies esto habilitadas sobreviverem em determinadas condies nos quais seus antecessores apresentaram dificuldades ao se adaptarem. Portanto, o ambiente, alm de causar modificaes gnicas de forma direta ou indireta, promove, tambm, a presso necessria para que o mais capacitado sobreviva e passe adiante suas caractersticas, seu cdigo gentico, caminhando para obter o mximo de adaptao possvel em um determinado habitat (Evans, 1996).
15
Estudo fitoqumico: desenvolvimento e implicaes
Citaes a respeito da utilizao de plantas medicinais foram encontradas em diversos documentos antigos de vrias culturas, tais como: sumrios, chineses e egpcios. Posteriormente, na Grcia antiga, vrios estudiosos tambm contriburam para a consolidao do estudo de plantas. Hipcrates, considerado como pai da medicina moderna, caracterizou-se por adotar a natureza como guia na escolha dos remdios (Natura medicatrix) e Teofrasto, discpulo de Aristteles, que escreveu vrios livros sobre a histria das plantas, dissertou sobre as aplicaes da Papaver somniferum (Bolzani, 2002; David, 2004). A era moderna e a qumica de produtos naturais iniciou-se no sculo XVIII com o isolamento dos primeiros compostos de origem vegetal: a morfina (1803), a quinina (1819) e a atropina (1831) (Nascimento, 2006). No Brasil, a comitiva da gr-duquesa austraca Maria Leopoldina Josefa Carolina de Habsburgo (primeira Imperatriz do Brasil) contribuiu decisivamente para o desenvolvimento cientfico nacional. O mdico e botnico Carl Friederich Von Martius e o zologo Johann Baptist Spix, membros da comitiva real, iniciaram uma expedio cientfica de quatro anos que resultou no primeiro estudo sistemtico da flora e da fauna brasileira (Bolzani, 2002). Martius ainda teve influncia direta na concepo da fitoqumica no Brasil. Martius sugeriu a um jovem farmacutico alemo, Theodoro Peckolt, que viesse ao Brasil para estudar a flora. Atracando no porto brasileiro em 1847, T. Peckolt se tornou o pai da fitoqumica brasileira e constituiu uma famlia de cientistas notveis dedicados profundamente ao estudo qumico de plantas brasileiras. O incio dos estudos de Qumica de Produtos Naturais numa instituio pblica brasileira foi em 1874, considerado o ano do nascimento da fitoqumica no pas (Santos, 1998; Santos, 2005). Em mais de 130 anos de histria da qumica de produtos naturais no pas, os estudos com plantas medicinais ainda no receberam das agncias financiadoras a ateno que o tema merece (Bolzani, 2002). O mercado mundial para venda de produtos derivados de plantas movimentou, em 1997, U$ 22,6 bilhes. Cerca da metade destas vendas vem de substncias puras e a outra metade de fitoterpicos. Estima-se que este mercado caminha numa taxa de crescimento mdio anual de 6,3%, alcanando mais de 30,0 bilhes de dlares em 2004. Terpenos, incluindo taxides e esterides, esto em torno de U$ 15,0 bilhes em vendas mundiais (David, 2004). Mesmo com esse mercado em plena expanso, as plantas medicinais endmicas no Brasil ainda so pouco conhecidas, constituindo-se num vasto e rentvel campo
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de pesquisa e desenvolvimento para cientistas estrangeiros que do mais importncia para tais estudos (Bolzani, 2002). Neste contexto, o estudo qumico de plantas vem se tornando cada vez mais essencial em diversas reas de pesquisa e desenvolvimento de medicamentos. O estudo fitoqumico, dentre outras funes, possibilita a validao de plantas medicinais consagradas pela medicina popular e contribui para a determinao de alvos biolgicos de importncia farmacolgica. Estudos fitoqumicos contribuem para o esclarecimento de rotas biossintticas de diversos constituintes, com a finalidade de aperfeioar a produo de metablitos secundrios de interesse industrial e aprimorar as tcnicas de controle de qualidade de fitoterpicos. Tambm fornecem novos compostos com atividade biolgica ou prottipos para novos frmacos (Yunes, 2001; Bolzani, 2002). Constata-se que, o estudo qumico de plantas, tantos os clssicos quanto os aplicados, tm seu espao dentro do universo da gnese de novas tecnologias na rea medicinal, seja de base ou de ponta, no deixa de ser uma etapa de menor importncia. Portanto, com a necessidade do estudo fitoqumico exigido pela legislao brasileira no mbito dos fitoterpicos e fitofrmacos, essa rea de pesquisa tornou-se mais valorizada e vista como uma geradora de conhecimento aplicvel e indispensvel para diversos setores da indstria e ramos da cincia (Yunes, 2001; Brasil, 2004).
A famlia Celastraceae e o gnero Maytenus
Evoluo das celastrceas
O perodo Cretceo foi marcado pelo domnio de um novo grupo de plantas dotadas de uma estrutura inovadora, a flor, e de outras caractersticas que permitiram superar as diversas modificaes de um planeta em desenvolvimento (Gingerich, 1990; Magalln, 2001; Van de Peer, 2005). Havia uma riqueza de espcies habitando os mais diversos ambientes e muitas das famlias atuais mostram similaridades com gneros existentes no Cretceo, tais com, as famlias Clethraceae, Hamamelidaceae e Celastraceae que apresentam caractersticas do gnero extinto Discoclethra (Knobloch, 1991). Entretanto, o final deste perodo foi marcado por um acontecimento cataclsmico, ocorrido h 65 milhes de anos, que devastou mais de 70% de todas as espcies que habitavam o planeta (McLoughlin, 2006). Os sobreviventes imediatos catstrofe ainda tiveram que se adaptar a um ambiente extremamente hostil e a outras alteraes que ocorreriam na Terra nos perodos subseqentes (Gingerich, 1990). 17
A era Cenozica, ento, iniciou-se com um mundo devastado e o primeiro perodo desta era, o Paleoceno, foi marcado pelo isolamento de continentes, formao e estruturao dos mares e oceanos e por uma mudana qumica da atmosfera que determinaram uma profunda alterao do gradiente de temperatura do equador aos plos (Gingerich, 1990). Num contexto de grandes mudanas, concebido um novo espcime com flor designada hoje de Wuyunanthus hexapetalus, dando incio histria de adaptao e evoluo de uma das mais de 450 famlias de angiospermas descritas atualmente: a famlia Celastraceae. Os fsseis desta nova espcie, elo entre as atuais e as pr-celastrceas, foram encontrados em solo datado de 60 milhes de anos, no condado de Jianyin, provncia de Heilongjiang, a noroeste da China (Li, 2001). Pode-se sugerir, portanto, com essa descoberta que as celastrceas surgiram definitivamente na fronteira entre o perodo Cretceo superior e o Paleoceno, fase sombria para vida na Terra (McLoughlin, 2006). Certamente isso implicou na sobrevivncia das espcies com maior capacidade adaptativa, indivduos que tinham melhores condies de alterarem rapidamente seus genes, metabolismo e anatomia, ou seja, melhor plasticidade fenotpica e genotpica, mostrando que esse grupo de plantas desenvolveu uma grande capacidade adaptativa. Os gneros atuais das Celastrceas provavelmente apareceram alguns milhes de anos depois, no perodo Eoceno, onde h indcios da existncia de espcies similares s conhecidas hoje. Neste perodo foram encontrados fsseis de vrias espcies em diversas partes do mundo, tais como, Goupioxylon stutzeri (Colmbia) e Celastrinoxylon ramunculiformis (GrBretanha), que apresentaram caractersticas similares aos modernos gneros Goupia, Maytenus e Catha. Portanto, o atual grupo das Celastrceas e, conseqentemente, gneros recentes, como Maytenus, iniciaram sua gnese h mais ou menos 40 milhes de anos, se adaptando e espalhando por vrios ecossistemas tropicais existentes no globo terrestre (Poole, 1999).
Caractersticas botnicas da famlia Celastraceae
A atual famlia celastrcea, constituda por mais de 90 gneros e 1300 espcies, um grupo muito diversificado constitudo por trepadeiras lenhosas, arbustos e rvores, encontradas em todas as regies tropicais e temperadas do planeta (Figura 4, pg. 19), com exceo das regies desrticas do Oriente Mdio e do continente Africano e as reas glidas da Sibria (Simmons, 2001a; Simmons, 2001b; Stevens, 2001).
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Os membros da famlia Celastraceae apresentam folhas simples, alternas ou opostas; coricea ou membranosa; pecioladas; com lmina inteira; estipuladas inconspcuas ou sem estpulas, e sem meristema basal persistente. Em geral os membros deste grupo de plantas apresentam folhas resinosas com epiderme mucilaginosa, lmina com cavidades secretoras; mesfilos com idioblasto esclerenquimatoso e ductos menores sem floema. Geralmente o caule apresenta cavidades secretoras, com crtex contendo clulas cristrquicas e ndulos unicelulares.
Figura 4: Distribuio geogrfica da famlia Celastraceae (Stevens, 2006).
Algumas espcies no apresentam floema interno; xilemas com ou sem traquedos, fibras traquedicas e fibras libriformes. Os vasos das paredes terminais em geral so simples ou escalariformes, apresentando madeira contendo parnquima apotraqueal ou paratraqueal. As flores so dispostas em cimeiras ou fascculos, geralmente pequenas e regulares, em geral pentmeras e radialmente simtricas. O disco hipoginoso normalmente encontrado em posio intraestaminal e anular. A placentao axilar e apresenta perianto com clice e corola distintos. O ovrio desde sbero a parcialmente nfero (mais ou menos mergulhado no receptculo), com 2 a 5 carpelos e outros tantos lculos, cada lculo com um s vulo. Os frutos so carnudos, capsulares, capsulares indeiscentes, bagas, aquenides ou smaras e as sementes so comumente endosprmicas. Quando presente nos frutos, o endosperma contm quantidade considervel de leos fixos e em geral as sementes so aladas ou foliceas e contm um embrio bem diferenciado, clorofiloso e estreito e apresentam dois cotildones; largos, foliceos, com germinao fanerocotilar ou criptocotilar (Cronquist, 1988; Joly, 1998). 19
Caractersticas gerais de Maytenus salicifolia Reissek
Maytenus sp. Molina um dos maiores gneros da famlia Celastraceae, compreendendo 200 espcies de distribuio tropical. comumente encontrada no continente sul-americano, sendo que o maior nmero de espcies est localizado no Brasil (CarvalhoOkano, 2005). A cultura popular utiliza-se de algumas espcies deste grupo de plantas com finalidades teraputicas. Uma destas espcies a Maytenus salicifolia, conhecida popularmente como cafezinho (Figura 5, pg. 21), cujas folhas so utilizadas, sob a forma de decocto, para alvio de pruridos e alergias (Grandi, 1989). uma espcie arbrea, polimrfica, encontrada em diversos habitats no estado de Minas Gerais e pode alcanar cerca de 20 metros de altura. Caracterizam-se por ramos novos achatados, folhas membranceas com pice acuminado, margem dentado-serrada, nervuras primrias salientes em ambas as superfcies e suas inflorescncias plurirramosas, multifloras (Carvalho-Okano, 1992). Apresenta uma grande plasticidade fenotpica em relao anatomia foliar, modificando a estrutura e composio celular da folha em resposta ao ambiente onde os indivduos esto inseridos. A espessura foliar, nmero de clulas epidrmicas (clulas/mm2), espessura da lmina foliar, espessura da cutcula, clulas do mesfilo, nmero de esclereides na nervura central e a presena de cristais estilides so variveis nesta espcie, e, portanto, dependente do habitat onde so encontradas (Vallado, 2005). A via metablica priorizada por esta espcie, e vrios outros membros da famlia celastraceae, a via dos terpenos. A composio qumica caracteriza-se, principalmente, pela presena do esteride 3-sitosterol e de triterpenos pentacclicos, tais como, friedelina, friedelinol, -amirina, -amirina e lupeol (Figura 6, pg. 21). Foram relatados, ainda, compostos como o dulcitol, hidrocarbonetos de cadeia longa e steres graxos da populao coletada em Ouro Branco, MG (Vallado, 2005; Miranda, 2006; Miranda, 2007).
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Figura 5: Foto da lateral da copa (A) e da infrutescncia (B) de um exemplar de porte arbreo da espcie M. salicifolia localizada na Estao Ecolgica da UFMG (Miranda, 2007).
30
30
30
12
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1
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2
10
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12 18
22
3
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HO
HO
26 25 21 22 20 23 24 27 29 18 28
30
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30 29 20
4
12
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5
17
12 17
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H H
6
8 3 27
8 3 27
HO
24 23
HO
24 23
HO
Figura 6: Compostos isolados de M. salicifolia (Celastraceae). Friedelina (1), -friedelinol (2), -amirina (3), -amirina (4), lupeol (5) e -sitosterol (6) (Vallado, 2005; Miranda, 2006).
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Introdução, Quimiotaxonomia

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Como citar: VALLADO, F.N.

Evoluo e adaptao das plantas com flores

Sistemas de classificao de angiospermas

Quimiotaxonomia clssica e moderna

Metabolismo secundrio, fatores ambientais e adaptao gnica

Estudo fitoqumico: desenvolvimento e implicaes

A famlia Celastraceae e o gnero Maytenus

Evoluo das celastrceas

Caractersticas botnicas da famlia Celastraceae

Figura 4: Distribuio geogrfica da famlia Celastraceae (Stevens, 2006).

Caractersticas gerais de Maytenus salicifolia Reissek

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