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En particular la digestin qumica, se realiza por la accin de enzimas digestivas (son protenas) que catalizan la reaccin de hidrlisis: Estas enzimas son especficas de: Sustrato (ej: amilasa hidroliza el almidn, pero no la celulosa) T : existe una T ptima a la que las enzimas actan adecuadamente. Si se aumenta esta T un poco puede aumentar la velocidad de la reaccin. Sin embargo: o Valores muy altos: desnaturalizan la enzima: no se produce hidrlisis, es irreversible. o Valores muy bajos (congelacin): inhiben las enzimas, aunque si las descongelamos vuelven a recuperar su actividad pH: existe un rango fisiolgico al cual las enzimas actan fuera de l se inactivan.
adicin de agua a los nutrientes para dividirlos en molculas mas pequeas R- R + H2O enzimas digestivas ROH- + RH+
Especficas de
sustrato T pH
La mayora de las molculas alimenticias se pueden incluir en: Hidratos de Carbono, protenas y Lpidos.
Hidratos de Carbono
Monosacridos
Estmago, ID, ribete en cepillo, enterocito Estmago, ID, ribete en cepillo, enterocito aas Protenas Boca, estmago, ID
Lpidos
TG
AG y monoglicridos
Objetivo de la prctica:
Examinar con diferentes pruebas laboratoriales los efectos de las enzimas digestivas sobre: Hidratos de Carbono (Amilasa salival) Protenas (Pepsina) Lpidos (Lipasa, sales biliares)
Armario de anlisis
Unidad de incubacin
Almidn Maltosa (disacrido) Polmeros pequeos (3-9 glucosas)
Lavador de tubos
Tus objetivos en este experimento son: probar los efectos de la amilasa sobre el almidn, determinar el pH ptimo al cual acta y observar los efectos de la T sobre la actividad enzimtica.
Almidn IKI
- Amilasa
Para determinar si existe actividad amilasa (y por lo tanto digestin qumica), utilizaremos pruebas colorimtricas cualitativas: Reactivo de IKI: es de color amarillo, pero en presencia de almidn vira a azul. Reactivo de Benedict: es de color azul pero vira de color en presencia de azcares reductores como la glucosa o la maltosa. En funcin de la cantidad de stos azcares el Benedict se tornar de verde (+) a rojo (+++). Para que oxide a los azcares, la solucin (supuesto producto de la reaccin) se debe hervir.
La amilasa salival sera desactivada casi por completo en el estmago. Sugiere una razn del porqu, basada en lo que has aprendido en esta actividad?
Resultados de la Actividad 1: Tubo n 1 2 Almidn sustancias Almidn + + agua agua desionizada desionizada tampn tampn pH 7.0 pH 7.0 Condiciones 37C 37C de incubacin Prueba del reactivo IKI Prueba del reactivo de Benedict
3 Almidn + amilasa
4 Almidn + amilasa
Para ello utilizaremos las mismas pruebas colorimtricas que en la actividad anterior (Reactivo de IKI y Bnedict). Qu tubos mostraron un resultado positivo para el reactivo de IKI?
Qu puedes concluir sobre la digestin de la celulosa a juzgar por los resultados de los tubos n 4, 5 y 7?
Resultados de la Actividad 2: Tubo n 1 2 Amilasa sustancias Amilasa + + Almidn Almidn tampn pH 7.0 Condiciones Congelado de y luego incubacin incubado a 37C Prueba del reactivo IKI Prueba del reactivo de Benedict tampn pH 7.0 37C
5 Amilasa + Celulosa
6 Peptidasa + Almidn
proteinas
pptidos
En esta actividad investigars los efectos de la pepsina sobre BAPNA una protena sinttica. Para determinar si existe actividad pepsina (y por lo tanto digestin qumica), utilizaremos como indicador pruebas colorimtricas:
pepsina
protenas (BAPNA)
pptidos
BAPNA
Benzoil L-arginina 4-nitroanilida
La protena BAPNA est en una solucin incolora y transparente. Si la protena BAPNA es digerida por la pepsina la solucin vira a amarillo. Para cuantificar la cantidad de protena BAPNA digerida utilizaremos un espectofotmetro, que es un instrumento que mide la cantidad de luz absorbida (llamada densidad ptica) por una solucin. As mediremos la intensidad del color amarillo, proporcional a la cantidad de protena BAPNA digerida (o lo que es lo mismo, de pptido formado). Cuanto mayor es la densidad ptica , mas BAPNA habr sido digerido por la pepsina.
5 Pepsina + BAPNA
6 Pepsina + BAPNA
tampn pH 2.0 Condiciones de incubacin Densidad ptica Hervido y luego incubado a 37C
Lipasa pancretica
3) 4) Formacin de micelas Absorcin
ESTMAGO
DUODENO
YEYUNO
LIPASA
ILEON
Sales biliares
TRIGLICRIDO 2
Glbulo de grasa
Emulsin
1
Micelas
3
Difusin
4
Absorcin de A.B
5
En esta actividad ensayars los efectos de la lipasa y de la bilis sobre la digestin de un lpido: el aceite vegetal. La digestin del aceite vegetal por la lipasa triglicrido lipasa monoclicrido + 2AG liberar cidos grasos (AG), que disminuirn el pH de la solucin. Para determinar si existe actividad lipasa (y por Actividad enzimtica disminuye el pH (AG) lo tanto digestin qumica), utilizaremos un medidor de pH: as te ayudar a detectar la presencia de AG (y, por lo tanto, evidencia de la digestin) Medidor de pH comparando el pH del supuesto producto de la reaccin con cidos grasos, con su pH original (pH del sustrato, triglicridos).
Cmo lo sabes?
Resultados de la Actividad 4: Tubo n 1 2 Lipasa+ sustancias Lipasa+ Aceite Aceite vegetal + vegetal + Sales Sales biliares biliares tampn pH 7.0 Tampn pH 7.0
37C
37C