TECNOLOGICO DE ESTUDIOS SUPERIORES DE ECATEPEC MATERIA: BIOQUIMICA I ALUMNAS: SEPULVEDA VALENCIA ALMA PROFESORA: YASMIN SORIA CHICO GRUPO:

3301

TURNO: MATUTINO

PRACTICA # 2 AISLAMIENTO DE LIPIDOS

OBJETIVOS: *Mediante el empleo de la tcnica de cromatografa de adsorcin en columnas de silica de gel, purificar los productos obtenidos de un extracto de lpidos de nuez moscada u otra semilla oleaginosa. HIPOTESIS: El presente trabajo crece de hiptesis. INTRODUCCION: Los lpidos son un conjunto de molculas orgnicas, la mayora biomolculas, compuestas principalmente por carbono e hidrgeno y en menor medida oxgeno, aunque tambin pueden contener fsforo, azufre y nitrgeno, que tienen como caracterstica principal el ser hidrofbicas o insolubles en agua y s en disolventes orgnicos como la bencina, el alcohol, el benceno y el cloroformo. En el uso coloquial, a los lpidos se les llama incorrectamente grasas, aunque las grasas son slo un tipo de lpidos procedentes de animales. Los lpidos cumplen funciones diversas en los organismos vivientes, entre ellas la de reserva energtica (triglicridos), la estructural (fosfolpidos de las bicapas) y la reguladora (esteroides). Una caracterstica bsica de los lpidos, y de la que derivan sus principales propiedades biolgicas es la hidrofobicidad. La baja solubilidad de los lipdos se debe a que su estructura qumica es fundamentalmente hidrocarbonada (aliftica, alicclica o aromtica), con gran cantidad de enlaces C-H y C-C (Figura de la izquierda). La naturaleza de estos enlaces es 100% covalente y su momento dipolar es mnimo. El agua, al ser una molcula muy polar, con gran facilidad para formar puentes de hidrgeno, no es capaz de interaccionar con estas molculas. En presencia de molculas lipdicas, el agua adopta en torno a ellas una estructura muy ordenada que maximiza las interacciones entre las propias molculas de agua, forzando a la molcula hidrofbica al interior de una estructura en forma de jaula, que tambin reduce la movilidad del lpido. Todo ello supone una configuracin de baja entropa, que resulta energticamente desfavorable. Esta disminucin de entropa es mnima si las molculas lipdicas se agregan entre s, e interaccionan mediante fuerzas de corto alcance, como las fuerzas de Van deDenominamos lpidos a un conjunto muy heterogneo de biomolculas cuya caracterstica distintiva aunque no exclusiva ni general es la insolubilidad en agua, siendo por el contrario, solubles en disolventes orgnicos (benceno, cloroformo, ter, hexano, etc.). Estn constituidas bsicamente por tres elementos: carbono (C), hidrgeno (H) y oxgeno (O); en menor grado aparecen tambin en ellos nitrgeno (N), fsforo (P) y azufre (S).

EXPERIMENTO: MATERIAL N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 MATERIAL N 1 2 3 4 N 1 2 3 4 5 6 EQUIPO N 1 DE MATERIAL Vasos de precipitado Propipeta Probeta de 250 o 500 ml Parrilla Papel filtro Matraz erlenmeyer de 125 ml Varilla de vidrio Vasos de precipitado de 100 ml Embudo de vidrio Probeta de 50 o 100 ml Vaso de precipitado de 50 ml Pipetas Pasteur con bulbo Soporte universal Pinzas para columna Pipeta graduada de 5 ml Gradilla Tubo capilar Tubos de vidrio 13 o 15 x 100 mm Tubos con tapa de rosca (PROPORCIONADO POR MATERIAL Nuez moscada en polvo Tela adhesiva Secadora de cabello Lpiz LABORATORIO CANTIDAD 6 2 1 4 2 1 1 4 1 1 1 4 1 1 1 1 1 7 4 LOS ALUMNOS) CANTIDAD 1 1 1 1

REACTIVOS CARACTERISTICAS CANTIDAD Acetona Hexano ter dietlico Yodo sublimado Alcohol isoproplico Gel silica (100 a 200 mesh) DE CARACTERISTICAS Cmaras de cromatografa LABORATORIO CANTIDAD 2

2 METODOLOGIA:

Balanza

A.AISLAMIENTO DE LIPIDOS* Pesar 2 g de nuez moscada molida y ponerla en un matraz erlenmeyer de 125 ml.

Agregar 20 ml de una mezcla de hexano isopropanol (3:2) y calentar el matraz en una parrilla a baja temperatura (campana de extraccin).

Filtrar rpidamente la mezcla a travs de un papel filtro, empleando un embudo de vidrio. Recoger el filtrado en un vaso de precipitado de 50 ml.

Eliminar los solventes por calentamiento en parrilla a baja temperatura (campana de extraccin), para obtener un solido blancuzco o un aceite amarillento. No permita que ebulla.

B. RECRISTALIZACION DE LIPIDOS**

Disolver el residuo con 2 ml de acetona y calentar a bao mara (campana).

Dejar que enfri la solucin en acetona hasta alcanzar la temperatura ambiente y colocarla en hielo.

Filtrar la solucin a travs de un papel filtro empleando un embudo.

Lavar el producto solido con 1 ml de acetona fra.

Dejar evaporar la acetona (campana) hasta obtener un slido o un liquido aceitoso y est listo cuando deje de oler a acetona.

C. PURIFICACION DE LIPIDOS POR CROMATOGRAFIA EN COLUMNA***

Pesar 1 g de gel de silica en un vaso de precipitado de 100 ml y agregarle 10 ml de hexano. Agitar suavemente con una pipeta Pasteur hasta desaparecer los grumos.

Cerrar la columna vaca y agregar con pipeta Pasteur 3 ml de hexano, aadir lentamente la mezcla de gel silica/hexano hasta llenar la columna.

Abrir la columna y dejar que sedimente el gel de silica en la misma. No dejar que se seque en ningn momento. Agregar hexano y cerrar la columna cuando esta llegue a la parte superior del gel silica.

Disolver la muestra en 1 ml de hexano y con mucho cuidado depositarla sobre la parte superior de la silica gel.

Abrir la columna hasta que la muestra entre a la silica y agregar 1 ml de hexano para lavar.

Colectar una fraccin de 1 ml en un tubo de vidrio.

Cambiar el solvente de elusin por una solucin de hexano/ ter dietilico (9:1) y colectar 4v fracciones de 1 ml cada una. Asegurarse de numerar las fracciones.

Nuevamente cambiar el solvente de elucin por una solucin de hexano/ter dietilico (8:2) y colectar 2 fracciones de 1 ml c/u).

En una tira de papel filtro de 10x2 cm, marcar con lpiz 7 puntos numerndolos del 1 al 7, y con capilar depositar 10 gotas de cada una de las 7 muestras en sus respectivos puntos. Dejar secar entre cada una de las aplicaciones y lavar el capilar entre la aplicacin de una muestra y la siguiente.

Dejar secar la tira al aire y colocarla en una cmara cerrada de vidrio por 15 min, o hasta que algunas manchas tomen un color amarillo o caf-rojizo. La cmara debe contener yodo.

Tiempo aproximado de realizacin: 1 hora Tiempo aproximado de realizacin: media hora Tiempo aproximado de realizacin: 1.5 horas

DIBUJOS NIAS AQU DEJEN ESTA HOJA EN BLANCO PARA HACER LOS DIBUJOS

ANALISIS DE RESULTADOS:

CONCLUSIONES:

CUESTIONARIO:

BIBLIOGARFIA: N 1 2 3 4 AUTOR/AO Becker, W, M. 2000 Boyer, R, F. 1993 Devlin. T, M. 1993 TITULO The world of the cell. Modern experimental biochemestry Textbook of biochemestry EDITORIAL/EDICION The Benjamin Cummings. E.U.A The Benjamin Cummings. California John Wlley & sons. E.U.A

Lenhinger, A, L. 1995

Principios de bioquimica

Omega ediciones, Barcelona 2 edicion.