Manual Farmacognosia

[MANUAL DE FARMACOGNOSIA] [julio
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UNIVERSIDAD SALVADOREA ALBERTO MASFERRER FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA MANUAL DE FARMACOGNOSIA
FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA
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MATERIAL QUE TRAER EL ALUMNO EN TODAS LAS PRCTICAS 2 toallas papel toalla encendedor o cerrillos detergente lavapachas tijeras cuchillo papel aluminio un rollo de tirro
Este material es por grupo de trabajo.
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PRCTICA No. 1 IDENTIFICACIN MACRO Y MICROSCPICA DE DROGAS VEGETALES Y CROMATOGRAFA DE CAPA FINA INTRODUCCIN Drogas de origen vegetal en estado fresco o seco, enteras, picadas o pulverizadas, se pueden identificar por medio de los siguientes mtodos que hacen uso de las caractersticas especficas de cada una de las plantas:
1. 2.
3.
4.
Pruebas organolpticas: se refieren a las caractersticas que se pueden percibir con los sentidos. Son color, olor y textura. Pruebas macroscpicas: Se observa el grado de trituracin de la planta, se determina la parte de la planta que se encuentra en la droga, se observa sus caractersticas morfolgicas y la presencia de adulteraciones o impurezas. Pruebas microscpicas: se observan las caractersticas especficas de la planta en cuanto a tipos de estomas y tricomas, presencia de cristales, y otras estructuras tpicas. La gran ventaja de estas pruebas es que microscpicamente se puede determinar la identidad o adulteracin de una droga en polvo, forma en la cual se encuentra frecuentemente en productos comerciales (cpsulas para uso interno). Pruebas qumicas sencillas indican la presencia de ciertas sustancias como muclago, aceites, almidn, etc. Pruebas cromatogrficas: por medio de la cromatografa se logra separar las sustancias por sus diferentes polaridades. La cromatografa de capa fina es un mtodo sencillo por medio del cual se puede comprobar la identidad de la planta y detectar impurezas o adulteraciones. Cada planta presenta una cantidad especfica de manchas de determinados colores y con diferentes distancias entre el punto de salida y el centro de la mancha.
MATERIALES Traer cada grupo: 3 hojas de cualquiera de las siguientes plantas: tomate, chile, lavaplatos, floripundia, higuerillo o hierba mora. 3 hojas de cualquiera de estas plantas: albahaca, menta, oregann o hierbabuena. 3 hojas de cualquiera de estas plantas: hierba de toro, mejorana, flor de muerto o girasol. 3 hojas de sen, carao o rbol de fuego. 3 hojas de lirio, grama o zacate. 3 hojas de magdalena (Tradescandia zebrina). 3 hojas de Juanislama
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Pequeas cantidades de : linaza, fenogreco; ans, rosa de jamaica, canela, eucalipto y una hoja de afeitar. Frasco de vidrio boca ancha de 400 mL, una penca de sbila y tres cpsulas comerciales de sbila. Material de laboratorio: microscopio compuesto estereoscopio lupa pipeta pasteur 2 porta y cubre objetos Beaker de 250 mL Beaker de 100 mL Probeta 25 mL OBJETIVOS Al terminar la practica el estudiante ser capaz de: Desarrollar habilidades para describir un espcimen vegetal, mediante observacin morfolgica de varios especimenes vegetales Identificar drogas vegetales mediante pruebas organolpticas Desarrollar habilidades en el uso de informaciones guas, de tejidos vegetales provenientes de drogas crudas, enteras o pulverizadas Identificar los tejidos que caracterizan a una especie determinada, mediante examen microscpico Identificar adulteraciones e impurezas presentes en una droga vegetal, mediante examen microscpico y macroscpico, en drogas enteras y pulverizadas. Desarrollar habilidades y destrezas en identificar una planta por medio de cromatografa de capa fina. DESARROLLO DE LA PRCTICA 1. Pruebas organolpticas
Probeta 100 mL Pipeta 5 mL perilla para pipeta Vidrio de relog 3 tubos capilares Agitador de vidrio
Determine las caractersticas organolpticas de hierbabuena, fenogreco y flor de jamaica. Seleccione 3 plantas ms. Describa y anote sus observaciones.
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2.
Pruebas macroscpicas
Observe 5 plantas de su seleccin y describa su morfologa, ayudndose de lupa y estereoscopio.
3.
Pruebas microscpicas
Acompae cada observacin de un dibujo detallado. 3.1. Estomas
Observe y clasifique los estomas en la hoja de una planta representante de cada una de estas familias: Asterceae (Compositae Pro-parte), Lamicea (LabiataePro-parte), Solanceae, Fabceae (Leguminosae- Pro-parte) y Myrtceae.
Paractico
diactico
anomoctico
anisoctico
3.2.
Tricomas
Observe y clasifique los tricomas de la hoja de oregann, hierbabuena, albahaca, lavaplatos o floripundia; chichicaste o pan caliente. Tricomas sin funcin especfica
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Tricomas glandulares
Tricomas urticantes
Clulas con cristales Observe un corte delgado superficial del spalo de la flor de jamaica y de hoja de zebrina.
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4.
Identificacin macro y microscpica mediante informaciones guas
Compare la planta seleccionada con las caractersticas mencionadas en la informacin gua que se anexa a esta prctica. Observe similitudes y diferencias, evale si su planta corresponde a la identidad botnica descrita en la informacin. HAGA ESQUEMAS 5. CROMATOGRAFA DE CAPA FINA Prepare la fase mvil (una para todos los grupos), se compone de 21 mL de agua, 26 mL de metanol y 150 mL de acetato de etilo. Coloque la fase mvil en la cmara de revelacin tapndola y dejndola en reposo por unos treinta minutos para que se homogenicen los gases al interior de la cmara. El extracto de la sbila se prepara de la siguiente manera: separe las orillas y un poco de la cscara de la penca de sbila. Licu con 20 mL. de metanol, luego pngala en un beaker en bao Maria, llevndola a ebullicin. Djela en ebullicin durante un minuto despus fltrela con gasa, si es necesario agregndole unos mL ms de metanol. Ahora utilice la misma cantidad de material vegetal, pero usando solamente el gel de sbila. Proceda de la misma forma hasta obtener el extracto metanlico. Extraiga el contenido de una cpsula comercial de sbila, diluya o disprselo en dos mL. de metanol y decante para utilizar la parte disuelta. En la placa de silicagel se marca con lpiz y regla la lnea de partida a un cm de la orilla inferior de la placa. A 10 cm de esta lnea marque tres puntos con una distancia aproximada de un centmetro entre ellos en la lnea de partida. Ahora coloque con un capilar una gota del extracto de la cscara en uno de los puntos marcados, otra del extracto del gel en otro punto y la tercera del extracto de cpsula. Seale con lpiz en la placa el punto que contiene cada extracto. Seque con aire a presin, luego coloque otra gota encima de cada uno de los puntos. Coloque la placa bien seca en la cmara de revelacin, cerrando, una vez montada la cmara de revelacin no se debe mover ni abrir. Cuando el frente de la fase mvil llega a la lnea marcada de meta, se retira la placa de la cmara y se deja secar. Luego obsrvela en luz UV de 366 nm, marque las manchas con lpiz y determine el Rf de las diferentes manchas anotando los colores. En la cmara de extraccin de gases aplique en la placa una solucin al 10% de hidrxido de potasio en metanol por medio de aspersin. Luego caliente cuidadosamente en un Hot plate a una T de 100 C durante cinco minutos y observe otra vez, comparando los cromatogramas obtenidos de los diferentes extractos.
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CUESTIONARIO 1.
2.
3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 9. 10. 11. 12.
Explique la importancia de las pruebas efectuadas en el trabajo con plantas medicinales. Detecto partes extraas como tierra, insectos o partes de ellas y partes de otras plantas, en las pruebas macroscpicas? Cul es la funcin biolgica de los estomas? En qu estructura se basa la clasificacin de los estomas? Tomando en cuenta los tipos de estomas, podra distinguir las hojas de floripundia y chile? Cules son las caractersticas de las Lamiceae en cuanto a sus tricomas? Qu clase de sustancia es depositada en los tricomas glandulares? Cmo acta el tricoma urticante en la piel? Qu clases de cristales se pueden encontrar en clulas vegetales? cual es la funcin de los tricomas en las plantas? si le pidieran identificar una sustancia que proviene de la penca de la sbila Qu sustancia de referencia utilizara? cul es la razn de no mover o abrir la cmara de revelacin? mencione otros tipos de cromatografa.
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PRACTICA No. 2 CONTROLES DE CALIDAD DE PLANTAS MEDICINALES (Prueba de hinchamiento, anlisis de productos terminados, prdida de peso al secado, humedad relativa) INTRODUCCIN Los controles de calidad ms comunes que se aplican en las plantas medicinales son los siguientes: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Prueba de identidad y deteccin de adulteraciones por medio de microscopa y cromatografa de capa fina; Control microbiolgico (contaminacin con hongos o bacterias); Contenido de agua/humedad de la planta; Peso de residuo despus de incineracin; Pruebas especficas qumicas; Otras pruebas especficas (ndice de hinchamiento, ndice de espuma, etc.); Mtodos cuantitativos para determinar la cantidad de principio activo.
En la prctica se efectuarn algunos de estos controles. MATERIALES Material que traer cada grupo: 8 cpsulas de menta, sen, o juanislama; una fruta deshidratada; 5 g de menta; 15 g de fenogreco o de linaza, un producto terminado. Equipo de laboratorio: -
3 crisoles 2 cpsulas de porcelana 2 portaobjetos 2 cubreobjetos 2 vidrios de reloj (pequeos) 1 desecador 1 agitador de vidrio 2 probetas de 25 Ml
Esptula Agitador de vidrio 1 pinza para crisoles Microscopio ptico Microscopio estereoscpico
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OBJETIVOS Al terminar la prctica el estudiante ser capaz de: evaluar la calidad de una droga vegetal seca, entera o pulverizada, mediante pruebas de humedad, hinchamiento y humedad relativa. Evaluar la calidad de un producto proveniente de extractos vegetales, mediante el contenido expuesto en vieta, tipo de frasco utilizado, pruebas realizadas de acuerdo a las formas farmacuticas y solventes utilizados.
DESARROLLO DE LA PRCTICA 1. Prdida de peso por secado
sta es una prueba muy comn para determinar el contenido de agua en drogas secas. En esta prctica utilizaremos cpsulas comerciales que contienen planta molida (juanislama, sen o menta). Se vacan las cpsulas y se pesa 1.000 g de polvo en la balanza analtica en un crisol. Se anota el peso exacto (por ejemplo 1.004 g 0.992 g). As se preparan 2 muestras y se colocan en una estufa. Se mantiene a una temperatura a 105C durante 1 hora. Despus se colocan en un desecador y se dejan enfriar durante 2 a 3 horas, y pesar no menor de 5 mg. Luego pese las 2 muestras en la balanza analtica, y calcule el porcentaje de agua en el polvo que se ha evaporado. 2. Determinacin de la humedad relativa
Por medio de la balanza para determinacin de la humedad relativa se puede medir directamente. Se coloca una muestra de aproximadamente 1 g de fruta deshidratada en el plato de la balanza a 60C por 15 minutos, de esta forma se determina la humedad relativa. 3. ndice de hinchamiento
El hinchamiento de una droga en agua es correlativo a la cantidad de muclago que contiene. El ndice de hinchamiento es un valor especfico para cada planta que slo permite comparaciones del contenido de muclago en plantas de la
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misma especie pero no de especies diferentes. Se obtiene midiendo el volumen de 1 g de planta despus de estar por 4 horas en agua. En esta prctica comparar el hinchamiento de una planta en estado entero y molido. Se usa etanol para humedecer la droga y asegurar una mejor penetracin del agua que enseguida se agrega. El agua forma una clase de gel con el muclago y provoca un aumento de volumen de la droga. Despus de 3 horas (por razones de limitaciones de tiempo en el laboratorio) se mide este volumen en mL. 15 g de fenogreco o de linaza se divide por mitad. Una mitad se tritura en la licuadora (reunir la droga de todos los grupos para que haga ms volumen en la licuadora) y despus se coloca 1 g en una probeta de 25 mL. En otra probeta se coloca 1 g de la misma droga en estado entero. Se agrega 1 mL de etanol 90 y se llena la probeta con agua hasta los 25 mL. tape las probetas con papel de aluminio y agite al instante. Vuelva a agitar cada 10 minutos durante 1 hora. Despus deje en reposo. Despus de 2 horas de reposo se observa el volumen de droga en cada una de las probetas. Este volumen es el ndice de hinchamiento. De acuerdo a la Farmacopea Alemana la linaza tiene que tener un ndice de hinchamiento de por lo menos 4 (en estado entero) y de por lo menos 4.5 (pulverizada). El fenogreco debe tener un ndice de hinchamiento de por lo menos 6 (semilla pulverizada). 4 Anlisis de un producto terminado (con el que est trabajando su grupo) Haciendo uso de los productos terminados que ha trado, efectu un anlisis de la informacin contenida en la vieta, el tipo de extracto, el frasco, efectu pruebas organolpticas al producto, d recomendaciones acerca del solvente utilizado y el principio activo extrado, si la forma farmacutica es la adecuada para la recomendacin expuesta en vieta. CUESTIONARIO 1. Cul es la razn de determinar la humedad en una planta deshidratada? 2. Cul es el lmite de humedad relativa que debe tener una planta deshidratada? 3. Explique la diferencia entre humedad relativa y absoluta. 4. Cul es la composicin qumica de los muclagos? 5. Qu propiedades medicinales tienen los muclagos? 6. Que controles realizara en una bodega de almacenamiento de plantas medicinales? 7. Que opinin le merecen las cpsulas examinadas en la practica? 8. Cuales son las contraindicaciones de la linaza? 9. Que opina de la comercializacin de la linaza molida? 10. Que opinin le merecen los productos terminados examinados en la
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practica?. PRACTICA No. 3 DESHIDRATACIN Y EXTRACCIN DE DROGAS CRUDAS INTRODUCCIN La deshidratacin de plantas se efecta para poder guardarlas durante un perodo ms largo que la planta fresca. Se elimina la mayor cantidad posible de agua para suprimir la descomposicin de los principios activos por fermentacin y el crecimiento de microorganismos. La extraccin de drogas crudas en estado fresco o seco comprende aquellas operaciones que tienen por objeto la separacin de los principios solubles de la planta, para lo cual se tratan estos con un disolvente. El disolvente se seleccionar de acuerdo a la polaridad de las sustancias (principios activos) que se desee obtener en el extracto. Los diferentes mtodos de extraccin empleados en farmacia son infusin, decoccin, maceracin y digestin. Se distinguen mtodos continuos y discontinuos. MATERIALES Traer cada grupo: 1 naranja; 1 bolsita de t; 10 g de cualquiera de las siguientes plantas: ans, manzanilla, eucalipto o chichipince; 10 g de cualquiera de las siguientes plantas: valeriana, zarzaparrilla, quina o encino; 10 g de linaza o fenogreco; 1 leo de taray; 10 g de romero. 5 g de quina, 5 g de llantn, 5 g de salvia santa, 5 g de manzanilla; 15 g de semillas de blsamo; 40 g de pimienta negra molida de marca. 100 mL de aceite de maz, girasol, canola u oliva; 1 frasco de vidrio de boca ancha con capacidad de 125 mL; 3 hojas de peridico; 1 frasco de vidrio de boca ancha con capacidad de 250 mL; 1 tablita de madera. 2 frascos de vidrio boca ancha de 125 mL, cuchillo. Material de laboratorio por grupo: 1 mechero licuadora 1 trpode con malla de asbesto balanza granataria 2 estativos 3 pinzas de extensin 4 mangueras de hule
-
2 hot plate 3 beakers de 250 mL 1 beaker de 400 mL 1 beaker de 100 mL 2 vidrios de reloj 1 agitador de vidrio 1 embudo mediano
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1 mortero con pistilo 1 baln 500 mL 1 tapones de hule Aparato Soxhlet
1 probeta de 100 mL 1 refrigerante vertical 2 cpsulas de porcelana
OBJETIVOS Al terminar la prctica el estudiante ser capaz de: Determinar el grado de deshidratacin de una droga cruda; mediante pruebas de deshidratacin Identificar la relacin existente entre el tipo de solvente y el principio activo que se va a extraer de la droga vegetal; mediante la elaboracin de diferentes extractos vegetales Identificar los diferentes extractos vegetales elaborados tomando en cuenta la va de administracin; mediante practica de elaboracin de extractos vegetales Aislamiento de un principio activo; mediante la extraccin Soxhlet Identificacin de las propiedades, como solvente, del agua y el alcohol; mediante la elaboracin de extractos hidroalcoholicos, alcoholicos y acuosos. Identificacin de las propiedades medicinales de las especies en estudio; mediante revisin de literatura DESARROLLO DE LA PRACTICA 1. Deshidratacin Se pela una naranja y se pesa la cscara. Luego se somete a un proceso de deshidratacin a temperatura ambiente, en un lugar ventilado, hasta que est completamente seca. Se guarda en un lugar seco para pesarla nuevamente en la siguiente prctica. Calcule el porcentaje de prdida de peso. 2. Extraccin 2.1. Infusin
Se lleva a ebullicin 150 mL de agua. Coloque en el agua una bolsita de t, se tapa con un vidrio de reloj y se deja en reposo durante 5 minutos. El mismo procedimiento se efecta con 1 cucharadita de manzanilla, chichipince o eucalipto (lavar las plantas antes de usarlas!). En caso del ans, se tritura el fruto
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primero y se utiliza la misma cantidad. Despus del reposo se filtra con gasa y algodn.
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Decoccin
Lleve a ebullicin 250 mL de agua, luego agregue 10 g de valeriana, zarzaparrilla, quina o encino (planta lavada!), se tapa con vidrio de reloj y se mantiene en ebullicin durante 10 minutos. Despus se filtra con gasa y algodn.
2.3
Maceracin en agua fra
2.3.1. coloque 5 g de linaza, fenogreco o chan (planta lavada) en un beaker y agrege 150 mL de agua. Se deja en reposo durante 2 horas y observe el resultado. 2.3.2. Triture 5 g de linaza, fenogreco o chan. Despus se proceda como en 2.3.1. Observe las diferencias entre los dos mtodos. 2.3.3. separe secciones de un leo de taray , lvelas y coloquelas en un beaker. agrege 200 mL de agua y se deje reposar durante 2 horas. Observe el color, desde arriba y viendo por el beaker a contra luz.
2.4.
Maceracin fra en aceite
Triture 10 g de romero seco (no lavar), se coloca en un frasco de vidrio con capacidad de 125 mL y se le agrega 100 mL de aceite. Tape bien y agite durante 5 minutos. Cubra el frasco con hoja de peridico, pegndole tirro de tal forma que se proteja el extracto de la luz. Dejar en reposo durante 7 das, agitndolo todos los das, luego filtr con gasa y algodn. 2.5. Maceracin fra en alcohol diluido
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Pese 5 g de cada una de las siguientes plantas: manzanilla, llantn, quina y salvia santa. Despus de lavarlas, se colocan en un frasco de vidrio con capacidad de 250 mL y agregue 200 mL de etanol al 45%. tape bien y agite durante 5 minutos. Cubra el frasco con hoja de peridico, pegndolo de tal forma que se proteja el extracto de la luz. Dejarlo en reposo durante 7 das, agitndolo todos los das. En la siguiente practica de laboratorio filtre con gasa y algodn. 2.6. Digestin
Se utiliza la semilla de blsamo, extraiga la semilla del fruto cortndolo ( el fruto ) y posteriormente extraiga la semilla hasta completar 10 g tritrela en mortero. Posteriormente, se coloca en un baln de 500 mL, agregndole 100 mL de etanol al 60%. Refulge cuidadosamente durante 30 minutos. Despus se filtra.
2.7.
Extraccin Soxhlet y aislamiento de principio activo
Coloque 40 g de pimienta negra molida en un sobre de papel filtro de una altura de aproximadamente 12 cm; ste se coloca en el extractor del aparato Soxhlet. En un baln de 500 mL agreg 300 mL de etanol 90 extrayendo por dos horas, en hot plate. Colocar el extracto obtenido en tres cpsulas de porcelana y evaporare cuidadosamente sobre un hot plate a temperatura mediana en la cmara de extraccin de gases, hasta lograr una sustancia viscosa de color caf oscuro. Esta sustancia se disuelve en 20 mL de solucin etanlica de KOH al 10%, repartiendo la cantidad de la solucin entre las tres cpsulas. Se unen las diferentes soluciones y se filtran con papel filtro. El filtrado se tapa y se pone en refrigeracin. Se observa despus de 1 hora y despus de 1 semana al microscopio.
CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. Para que drogas se usa el mtodo de infusin y para cules el de decoccin? Qu clase de principios activos poseen las drogas usadas en 2.3.1. y 2.3.2.? Cules son las cualidades del alcohol diluido como disolvente? Cules son las ventajas del mtodo Soxhlet?
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5. 6. 7. 8. 9.
Cules de los mtodos aplicados son continuos y cules son discontinuos? Qu uso tiene el aceite preparado en 2.4.? Explique las indicaciones, la forma de usar y la dosis del extracto preparado en 2.5. Cules son las propiedades de cada una de las plantas? Cul es el nombre comn del extracto de la semilla de blsamo; Para qu se usa? Cmo se llama el principio activo aislado de la pimienta?
PRCTICA NO. 4 ACEITES ESENCIALES INTRODUCCIN Los aceites esenciales son mezclas de sustancias voltiles de una consistencia parecida a la de los aceites grasos ("aceites") y con un olor fuerte ("esencia"). Estas mezclas son muy poco solubles en agua. Se obtienen de materia prima vegetal, sobre todo de plantas de las familias Pinceae, Lamiceae (Labiatae Proparte), Asterceae, Rutceae, Apiceae (Umbelferae Pro-parte), Verbenceae, etc.
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Mtodos de obtencin son: enfleurage (enfloracin), destilacin con agua y vapor (destilacin directa), destilacin por arrastre de vapor (destilacin indirecta), exprimicin y extraccin con solventes. Se usa la planta fresca o seca. Los compuestos qumicos presentes en los aceites esenciales pueden ser mono, sesqui y diterpenos, as como fenilpropanos. MATERIALES Material que traer el grupo: 50 g de dos de las siguientes plantas: organo, zacate de limn, eucalipto, pimienta gorda o canela. Equipo de laboratorio: 1 baln de 500 mL de fondo plano Embudos de separacin Embudo tallo corto Beaker 250 mL 3 beaker 40 mL 1 refrigerante 1 probeta de 100 Ml Varilla de vidrio en L 2 tapones de hule 2 tubos de ensayo Pinza para tubos Agitador de vidrio Capsula de porcelana Pipetas Pasteur 3 tubos capilares 1 erlenmeyer de 50 mL 2 erlenmeyer de 50 mL OBJETIVOS -
2 pipetas graduadas de 1 mL Vidrio de reloj 1 mechero 1 trpode con malla de asbesto 2 soportes 3 pinzas de sostn y extensin 2 mangueras de hule 1 perilla para pipetas 1 balanza granataria Licuadora Mechero Microscopio ptico 2 Soportes 2 pinzas de extensin y sostn 2 mangueras de hule Hot plate Lmpara de luz UV
Al concluir la practica el estudiante ser capaz de: Identificar las cualidades fsico-qumicas de los aceites esenciales; por experiencia practica y revisin bibliografica. Identificar las familias de plantas medicinales que se caracterizan por poseer aceites esenciales; mediante revisin de literatura Determinar la presencia de aceites esenciales en una planta cualquiera; mediante pruebas preliminares
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Montar un aparato de destilacin de aceites esenciales; mediante trabajo practico Cuantificar la cantidad de aceites esenciales en una droga cualquiera; mediante trabajo practico Identificar la importancia de los aceites esenciales en farmacia; mediante revisin de literatura. Identificar mentol y timol presente en droga cruda y producto terminado mediante cromatografa de capa fina. DESARROLLO 1. Pruebas preliminares
La presencia de aceites esenciales en una droga se determina de la siguiente manera: al triturar un rgano vegetal, que se presume contiene aceite esencial, se percibe un fuerte olor producto de la liberacin de este. s colocamos 2-3 g de la materia vegetal en un tubo de ensayo, agregamos agua y al llevar a ebullicin, debe percibirse un aumento del olor y observarse la formacin de gotas aceitosas encima del agua. 2. Destilacin por arrastre de vapor
Coloque 25 g de la droga en un baln y agregue agua hasta llegar a un volumen de un poco ms de la mitad del baln. Instale el equipo de destilacin de acuerdo al esquema. Lleve a ebullicin y mantenga el proceso de destilacin durante 1.5 horas. Para acelerar el calentamiento, envuelva el baln con papel aluminio. Despus de la destilacin se unen los destilados de todos los grupos en un embudo de separacin y se deja en reposo hasta que se d una separacin clara
3.
Determinacin del contenido de aceites esenciales
Esta prueba se realiza en un aparato graduado de destilacin. Las farmacopeas exigen de las plantas aromticas un contenido mnimo de aceite esencial, definido para cada planta. Para uniformizar el mtodo de destilacin, las farmacopeas contienen informacin detallada acerca del aparato que recomiendan. El aparato que se usar en el laboratorio, es el recomendado por la Farmacopea Alemana (DAB 9).
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Para aumentar el volumen del aceite esencial y facilitar la determinacin del volumen en la escala, se le agrega una pequea cantidad de xilol debido a sus propiedades de solubilidad en aceite esencial. 20 g de eucalipto recin pulverizado se coloca en un baln del aparato de destilacin y se adiciona 200 mL de agua. Despus instalar el aparato de destilacin. Agregar agua en el cilindro de entrada hasta que se llene el tubo transversal. Pipetear 0.5 mL de xilol en la entrada con tapn. Encienda el hot plate. Se lleva el agua a ebullicin y se destila durante 2 horas a una velocidad de 2 a 3 mL por minuto. Luego se apaga el hot plate. Despus de no menos de 10 minutos de haber terminado la destilacin se lee el volumen de la mezcla xilenoaceite esencial y se le resta el volumen del xilol para obtener el contenido de aceite esencial en relacin a la cantidad de planta utilizada.
4 Cromatografa de capa fina para identificar Mentol Prepare la fase mvil (una para todos los grupos), se compone de 190 mL de tolueno y 10 mL de acetato de etilo. tape la cmara. Prepare el extracto de Mentha de la siguiente manera: micronice las hojas de menta en la licuadora, luego coloque la planta molida en un tubo de ensayo, llenndolo en una tercera parte. Agregue 5 mL diclorometano y agite el tubo durante 3 minutos. Filtre el extracto y evapore el solvente a baja temperatura, 40C (cpsula de porcelana, hot plate, cmara de extraccin de gases), hasta sequedad. Disuelva el residuo en tres gotas de tolueno, proceda de la misma manera con el contenido de tres cpsulas de menta. En la placa de silicagel se marca con lpiz y regla la lnea de partida a un centmetro de la orilla inferior de la placa, a 15 cm de esta lnea marque otra lnea que ser la meta. Marque dos lneas de dos centmetros cada una y coloque con pipeta los dos extractos en las lneas marcadas de acuerdo a las indicaciones que le dar el instructor. Coloque la solucin de referencia que contienen mentol y timol, seale en la placa con lpiz la mancha que lleva el extracto. Seque con aire a presin, introduzca la placa en la cmara de revelacin (una vez colocada la placa se cierra y ya no se mueve, ni se abre). Cuando el frente de la fase mvil llega a la lnea de meta se retira la placa de la cmara y se deja secar. Luego obsrvela en luz UV de 256 nm, marque las manchas con lpiz, determine el Rf de las diferentes manchas y anote los colores. En la cmara de extraccin de gases aplique por medio de aspersin, a la placa, una solucin al 1% de vainillina en cido sulfrico 96%. Luego caliente cuidadosamente en un hot plate a baja temperatura hasta que
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aparezcan manchas de color morado. Anote su observaciones y determine el Rf. Compare los cromatogramas obtenidos de los diferentes extractos.
CUESTIONARIO 1. 2.
3.
4. 5. 6. 7. 8. 9.
Describa un equipo industrial de destilacin. Explique el mtodo de enfleurage. En cules plantas se utiliza el mtodo de enfleurage? Qu cantidad de aceite esencial suelen contener las plantas aromticas? Cual es la funcin de los aceites esenciales en las plantas y en el ser humano? Que caractersticas fsicas y qumicas de los aceites esenciales pudo observar en la practica? Cul es el contenido porcentual de aceite esencial presente en la planta? por qu utilizo cristales de timol y mentol en esta practica? El timol y el mentol son los nicos componentes del aceite esencial de Mentha?
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PRCTICA NO. 5 GLICSIDOS SAPONNICOS INTRODUCCIN Los glicsidos saponnicos se disuelven en agua y disminuyen la tensin superficial de sta. Por lo tanto al sacudir sus soluciones, se forma una espuma. Otra caracterstica tpica es su efecto hemoltico: las saponinas provocan que la hemoglobina salga de los eritrocitos. La parte aglicnica puede tener estructura triterpnica o esteroidal. Saponinas triterpnicas se encuentran en las familias Cariofilceae, Sapindceae, Fabceae (Caesalpiniceae, Mimosceae, Leguminosae), etc. Saponinas esteroidales contienen representantes de las familias Liliceae, Amariliceae, Dioscorecea y Agavceae. MATERIALES Material que traer el grupo: Una de las siguientes drogas: fruto de conacaste, de carao, de pacn, corteza de copinol, hojas de maguey, tallo de barbasco, rizoma de zarzaparrilla; Tallo de izote. Cpsulas o raz de ginseng, un limn, regla.
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Equipo de laboratorio: -
10 tubos de ensayo y gradilla 2 beakers de 250 mL, 1 beaker de 100 mL 1 beaker de 50 mL 3 cpsulas de porcelana 1 agitador de vidrio 1 probeta de 25 mL 1 probeta de 100 mL 1 probeta de 10 mL 2 tapones de hule horadados 1 vidrio de reloj 1 embudo mediano 1 embudo de separacin de 250 mL 2 pipetas graduadas de 10 mL
Pipetas Pasteur 1 baln de 500 mL de fondo plano 1 refrigerante vertical licuadora 2 hot plate balanza granataria 1 perilla para pipetas 1 mechero, trpode con malla de asbesto 4 mangueras 1 soporte 4 pinzas de soporte y extensin 1 anillo pequeo de metal
OBJETIVOS Al terminar la prctica el estudiante ser capaz de: Realizar pruebas preliminares para identificar la posible presencia de glicosidos saponinicos; mediante trabajo practico Determinar el ndice de espuma en una droga vegetal que contiene glicosidos saponinicos; mediante trabajo practico Realizar pruebas qumicas para clasificar saponinas esteroidales de las triterpnicas; mediante trabajo practico Realizar la prueba de adulteracin de ginseng; mediante trabajo practico Relacionar el tipo de saponina presente en la planta con la clase taxonmica del vegetal, mediante lo expuesto en clase Determinar el uso de los glicosidos saponicos en farmacia; mediante la revisin de literatura Determinar las familias de plantas que se caracterizan por poseer glicosidos saponinicos; mediante revisin de literatura Determinar las caractersticas de toxicidad de los glicosidos saponinicos; de acuerdo a la revisin de literatura DESARROLLO DE LA PRCTICA 1. Prueba preliminar de espuma
Coloque 1 g de droga pulverizada en un tubo de ensayo seco, adele 5 mL de agua destilada, agite por 30 segundos. Deje reposar, si la espuma es mayor de 3
FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA 22
2,011]
mm arriba de la superficie del lquido y persiste ms de 15 minutos, se presume la presencia de saponinas.
2.
Determinacin del ndice de espuma
El ndice de espuma es un valor correlativo a la cantidad de saponinas en la droga. Se determina a partir de soluciones acuosas de diferentes concentraciones de droga. Pulverizar 1 g de droga, llevarla a ebullicin con 100 mL de agua destilada durante 30 minutos, filtrar y despus de enfriarla completar con agua hasta un volumen de 100 mL. De esta solucin se mide 1, 2, 3, ...10 mL y se transfiere a diferentes tubos de ensayo bien lavados. En cada tubo se lleva a un volumen de 10 mL con agua destilada, se agita durante 1 minuto y se deja reposar. Despus de 15 minutos medir la altura de la espuma. Si ella es inferior a 1 cm en todos los tubos, el ndice es inferior a 100. Si es igual o mayor de 1 cm en uno o varios tubos, el ndice de espuma se determina a base de la concentracin del tubo de mayor dilucin. Si la altura de la espuma es superior a 1 cm en todos los tubos, el ndice es superior a 1000 y es necesario diluir la solucin patrn para hacer una nueva determinacin.
Clculo:
volumen en el tubo (mL) x altura de espuma (cm) Concentracin de droga en el tubo (g)
Ejemplo:
La espuma lleg a una altura de 1 cm en el tubo que contiene 4 mL de solucin patrn al 1%. La concentracin de droga es de 0.04 g. (10 mL x 1 cm) (0.04g) = 250
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2,011]
3.
Pruebas qumicas
Preparacin del extracto concentrado Coloque 10 g de conacaste, pacn, aguacate, carao, copinol, maguey, barbasco o zarzaparrilla (droga molida) en un baln de 500 mL, agregue 100 mL de etanol al 80%, instale el refrigerante y lleve a ebullicin sobre un hot plate. Refluje durante 30 minutos, luego filtre el extracto obtenido en caliente y concentre el filtrado en tres cpsulas de porcelana sobre el hot plate hasta tener un volumen de 20 mL. Proceda de la misma forma con 5 g de izote. Con cada uno de los concentrados efectu la siguiente prueba: 3.1. Prueba de Liebermann-Burchard
Esta es una prueba de identificacin de saponinas esteroidales. Tome 10 mL de extracto concentrado, agrguele 5 mL de cido sulfrico diluido. Hierva cuidadosamente durante 10 minutos, enfre y colquelo en un embudo de separacin. Adicione 20 mL de cloroformo y agite. Deje reposar, luego separe el extracto clorofrmico amarillento y concntrelo en un beaker de 50 mL hasta 2 mL (hot plate, cmara extractora de gases). Aada al concentrado 1 gota de cido sulfrico concentrado y 1 mL de anhdrido actico, observe el color. 4. Prueba de adulteracin del ginseng
Por medio de esta prueba sencilla se puede distinguir el ginseng oficinal (Panax ginseng) de otras especies de Panax (por ejemplo Panax quinquefolium). Esta prueba es especfica para Panax ginseng , las otras especies de Panax no dan positiva al reaccionar con el cido sulfrico concentrado. Agregue 0.5 g de droga pulverizada (o el contenido de una cpsula comercial) mezcle en un vidrio de reloj con 1 mL de cido sulfrico concentrado. Despus de 1 a 2 minutos aparece una coloracin caf rojizo que despus de 15 a 20 minutos cambia a color fucsia. CUESTIONARIO
1.
2. 3.
Que caractersticas, en la estructura qumica, son las responsables por el efecto tenso activo de un compuesto? Cmo se forma la espuma? Explique el efecto hemoltico.
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4. 5. 6.
Explique la reaccin que se da en la prueba de Liebermann-Burchard. Investigue sobre el uso de plantas con saponinas en la pesca. Cual es el mecanismo por el cual las saponinas matan a los peces
PRCTICA No.6 GLICSIDOS ANTRAQUINNICOS INTRODUCCIN Las antraquinonas, antracenos o antranoides son compuestos que en las plantas se encuentran como glicsidos, y cuyo efecto es laxante. El aglicn tiene una estructura tricclica que puede presentar diferentes grados de oxidacin. Las antraquinonas se encuentran en las familias Aspholadaceae (sbila), Caesalpiniceae (sen, caafstula, carao), Rhamnceae (cscara sagrada), y otras. MATERIALES Materiales que traer el grupo: Cualquiera de las siguientes drogas: 25 g de sen o de cscara sagrada, 3 frutos de caafstula, 20 gramos de hojas secas de cualquiera de estas plantas: flor barbona, barajo, campanilla de rbol, cuchillo.
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1 embudo mediano 1 embudo tallo corto 1 vidrio de reloj 2 baln de fondo plano de 500 mL, Baln volumtrico 100 mL Baln volumtrico 10 mL probeta de 25 mL probeta de 50 mL probeta de 100 mL 1 matraz volumtrico de 100.0 mL
1 matraz volumtrico de 10.0 mL 1 pipeta de Pasteur 1 pipeta graduada de 1 mL, 1 pipeta graduada de 5 mL 1 agitador de vidrio 3 cpsulas de porcelana 1 pipeta volumtrica de 10.0 mL 1 pipeta volumtrica de 20.0 mL 1 perilla para pipetas 2 hot plate Esptula 1 mechero, 1 trpode, malla, 1 bao Mara, 2 soportes 1 aro metlico pequeo 4 mangueras de hule 4 pinzas de extensin y de soporte
1 ampolla de separacin 1 beaker de 40 mL, 2 beakers de 250 mL 2 refrigerantes 1 balanza granataria balanzas analticas 1 espectrofotmetro de luz UVVIS 1 licuadora OBJETIVOS -
Al terminar la prctica el estudiante ser capaz de: Identificacin de la presencia de glicosidos antraquinonicos por medio de pruebas qumicas Cuantificar la presencia de sensido B en hojas de Cassia senna (sen) mediante pruebas cuantitativas Identificar las familias taxonmicas que se caracterizan por la presencia de glicosidos antraquinonicos, mediante revisin de literatura Identificar los procesos de toxicidad provocados por los glicosidos antraquinonicos, mediante revisin de literatura
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DESARROLLO DE LA PRCTICA Esta prctica consiste de dos pruebas qumicas de identificacin de antraquinonas (Borntrger), y un anlisis cuantitativo del sensido B en hojas de sen. 1. 1.1. Pruebas qumicas Reaccin de Borntrger
Preparacin del extracto concentrado En los diferentes grupos de trabajo, preparen el extracto con diferentes plantas (flor barbona, barajo, caa fistola o campailla de rbol). Luego intercambien muestra para que cada grupo pueda realizar la prueba con varias drogas y comparar los resultados. Pesar 20 g de droga pulverizada/licuada y reflujarla en un baln de 500 mL con 300 mL de etanol 80% durante 1 hora. Luego concentrar el extracto (hot plate, cpsulas de porcelana) hasta 15 mL aproximadamente. Evapore 5 mL del extracto concentrado en bao Mara. Disuelva el residuo en 30 mL de agua destilada y filtre. En una ampolla de separacin pequea agite el filtrado con 10 mL de benceno. Deje que la mezcla se separe. Luego transfiera la capa bencnica a un beaker de 20 mL y adale 5 mL de amonaco. Observe cambios de color. 2. Anlisis cuantitativo de sensido B en hojas de sen
Pese 0.250 g de hoja pulverizada de sen en la balanza analtica (anote el peso exacto). Transfiera este polvo a un baln de 100 mL y agrguele 30 mL de agua. Refluje en bao Mara durante 15 minutos exactos (tomando el tiempo a partir de la ebullicin). Filtre el extracto, recbalo en una probeta de 50 mL, lave el filtro con agua hasta llegar a un volumen de 30 mL en la probeta. 20.0 mL (2x10.0 mL con pipeta volumtrica) del extracto se pone en una ampolla de separacin pequea y se le agrega 0.1 mL de cido clorhdrico al 7%. Se agita y se extrae/separa 3 veces con 15 mL de cloroformo cada vez. Despus de la separacin descarte la fase clorofrmica. A la fase acuosa en la ampolla de separacin agrguele 0.10 g de bicarbonato de sodio, agite durante 3 minutos y filtre. Mezcle 10.0 mL (pipeta volumtrica) del filtrado en un baln de 100 mL con 20 mL de solucin de cloruro de Fe-III al 10.5%. Caliente durante 20 min en bao Mara con reflujo, el baln debe estar bien metido en el agua de tal forma que la superficie del agua est encima de la superficie de la solucin en el interior del baln.
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Luego agregue 1 mL de cido clorhdrico concentrado y caliente suavemente (bao Mara) con reflujo durante 20 min, agitndolo seguido hasta que est disuelto el precipitado. Deje enfriar y despus extraiga 3 veces en una ampolla de separacin con 25 mL de ter etlico cada vez (cuidado con la presin de la fase gaseosa dentro de la ampolla). La primera vez lave el baln con el ter para sacar cuantitativamente su contenido. Los 3 extractos etricos se unen y se lavan 2 veces con 15 mL de agua cada vez. Los extractos etricos se transfieren a un matraz volumtrico de 100.0 mL y se lleva a volumen con ter etlico. 10.0 mL de esta solucin (pipeta volumtrica o matraz volumtrico) se evapora cuidadosamente hasta la sequa (hot plate, cpsulas de porcelana, cmara de extraccin de gases). El residuo se disuelve en 10.0 mL (pipeta volumtrica.) de una solucin al 0.5% de acetato de magnesio en metanol. En un espectrofotmetro UV-VIS medir la absorcin de la solucin a 515 nm. Lquido de compensacin (referencia) es metanol. Para calcular el porcentaje de sensido B en la droga, se usa la siguiente frmula: Absorcin x 1.25 %= peso de droga [g]
Esquema de marcha para el anlisis cuantitativo
0.2500.250sen g de g + 30 mL de agua
Reflujar (15 min), enfriar, filtrar Residuo (descartar) Filtrado + HCl 7% extraer con cloroformo, separar, 3 veces Fase acuosa fase clorofrmica (descartar)
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+ bicarbonato de sodio filtrar Residuo (descartar) Filtrado + cloruro de hierro reflujar 20 min + HCl concentrado reflujar 20 min extraer/separar con eter etlico (3 veces) Fase etrica Lavar con agua 2 veces Fase acuosa (descartar) Solucin de prueba para espectrografa CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. En la reaccin de Borntrger: que compuestos quedan en la fase acuosa y cules en la bencnica? Qu factores de error podran haber influido en un posible resultado inexacto en el anlisis cuantitativo del senosido b? Explique cada paso de la marcha qumicamente. Cules son las funciones de cada uno de los reactivos subrayados? Que tipo de prueba es la lectura del senosido b? Que es el senosido b ? Explique los efectos fisiolgicos de las antraquinonas Por que no se recomiendan las antraquinonas como medicamento habitual? disolver con acetato de Mg Fase etrica llevar a 100.0 mL con eter evaporar 10.0 mL de solucin Fase acuosa (descartar)
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PRCTICA No. 7 FLAVONOIDES Y TANINOS INTRODUCCIN Flavonoides El trmino flavonoides se deriva de la palabra latina "flavus" = amarillo, y se refiere a la coloracin de la mayora de estos compuestos. Flavonoides se encuentran en casi todas las plantas, por ejemplo para darles color a sus flores. Plantas cuyo efecto medicinal se debe nica o principalmente a estos compuestos, presentan un contenido del 0.5 al 3% (ctricos: 5 - 25%). Su estructura qumica consiste de 3 anillos, los diferentes flavonoides se distinguen en su grado de oxidacin, su sustitucin y caractersticas estructurales. Los flavonoides se encuentran en forma glicosdica o libre.
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Plantas ricas en flavonoides se encuentran en las familias Fabceae, Rutceae, Asterceae y otras. Ejemplo de plantas con alto contenido de flavonoides son, los ctricos, ruda, passiflora, manzanilla, sauco, tilo y cola de caballo. Taninos Los taninos son sustancias fenlicas que reaccionan con las proteinas de la piel y que, en mayores concentraciones, pueden convertir la piel en cuero. En menores concentraciones poseen propiedades medicinales. Se encuentran sobre todo en corteza, races, hojas y frutos inmaduros de las plantas. Plantas ricas en taninos son guayabo, nance, mangollano, etc. A partir de su estructura qumica y sus propiedades se dividen en taninos hidrolizables, taninos condensados y seudotaninos. MATERIALES Material que traer cada grupo: 100 g de una o varias de las siguientes plantas: flores de San Andrs, San Jos, crisantemo, narciso, girasol o jamaica; u hoja y tallo de ruda o de perejil. Adems una pequea cantidad de flores de colores diferentes. 50 g de cualquiera de las siguientes plantas: corteza de nance, mangollano, guayabo, mangle o encino.
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3 cpsulas de porcelana 1 pipeta pasteur 2 beakers de 100 mL 1 beaker de 400 mL 1 agitador de vidrio 10 tubos de ensayo gradilla para tubos de ensayo 1 vidrio de reloj 1 ampolla de separacin de 250 mL 2 pipetas de 5 mL baln para pipeta 1 probeta de 25 mL 1 probeta de 100 mL Pipeta Pasteur perilla para pipeta 1 embudo mediano
2 refrigerante vertical 4 mangueras de hule 2 baln de fondo plano de 500 mL 2 hot plate 1 mechero trpode malla bao Mara 2 soporte 1 aro metlico 4 pinza de sostn y extensin 1 balanza granataria Licuadora 2 tapones de hule horadados
OBJETIVOS Al terminar la practica el estudiante ser capaz de: Realizar pruebas preliminares para determinar la presencia de glicosidos flavonolicos, mediante trabajo practico Identificar flavonoides de acuerdo al grado de polaridad, mediante la prueba de Shinoda Identificar la presencia de taninos; mediante pruebas qumicas Identificar los beneficios teraputicos que presentan flavonoides y taninos, y la presencia de estos compuestos en medicamentos; mediante revisin de literatura
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DESARROLLO DE LA PRCTICA A. 1. FLAVONOIDES Prueba preliminar
Se comprueba la presencia de flavonoides en flores por medio del cambio de su color cuando se exponen los ptalos a vapores de amonaco. Exponer los ptalos de flores de diferentes colores a 5 mL de amonaco concentrado en una cpsula de porcelana. Observe y anote el cambio de color. Flavonas y/o flavonoles viran de blanco a amarillo, chalconas y auronas de amarillo a rojo, y antocianinas de rojo intenso a azul o violeta. 2. Reaccin de Shinoda
Preparacin del extracto concentrado Reflujar 100 g de flores (San Andrs, San Jos, narciso, crisantemo, jamaica o girasol) o tallos y hojas de perejil con 300 mL de etanol 80% durante una hora. Filtrar el extracto obtenido y concentrar hasta un volumen de 15 mL (cpsulas de porcelana, hot plate). Agregar 60 mL de agua a 100C, filtrar en caliente (para separar la clorofila: los flavonoides son solubles en agua caliente, mientras la clorofila es insoluble). Extraer el filtrado en una ampolla de separacin de la siguiente manera: 1. extraccin/separacin con 40 mL de ter de petrleo 2. extraccin/separacin con 40 mL de cloroformo 3. extraccin/separacin con 40 mL de acetato de etilo. Cada uno de los extractos orgnicos se concentra (hot plate, cmara de extraccin de gases) hasta 5 mL y se realiza la prueba de Shinoda: Los 5 mL del extracto concentrado se coloca en un tubo de ensayo marcado con el nombre del extracto, se agrega 1 mL de metanol, unas granallas de Mg metlico y unas gotas de HCl concentrado. Deje en reposo de 2 a 20 min. Qu observa?, Que extractos muestran coloracin, cules son esos colores? Color amarillo-anaranjado significa presencia de flavones, rojo chalconas y azul antocianidinas. Flavones y flavonoles pueden dar colores verdes o azules.
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B.
TANINOS
Preparacin del extracto concentrado Reflujar 50 g de droga pulverizada (corteza de nance, mangollano o guayabo, u hojas de guayabo) durante 1.5 horas con 200 mL de etanol 45. Filtrar y concentrar el filtrado hasta un volumen de 15 mL. Realizar las siguientes pruebas: 1. 2. 3. 4. 5. A 2 mL de solucin agregar 3 gotas de solucin de tricloruro de hierro. A 2 mL de solucin agregar 2 mL de solucin de subacetato de plomo. A 2 mL de solucin agregar 1 mL de bicromato de potasio. A 2 mL de solucin agregar 2 mL de solucin de gelatina. A 2 mL de solucin agregar 3 gotas de agua de bromo.
CUESTIONARIO 1. 2. Mencione diferentes propiedades medicinales de los flavonoides. En la extraccin de flavonoides: Qu clase de flavonoides se encuentra en el ter de petrleo, en el acetato de etilo? A qu se debe estructuralmente la solubilidad de los flavonoides? 3. Porqu se observan burbujas en la prueba de Shinoda? 4. Cul es la diferencia entre el efecto curtidor y el efecto astringente de los taninos? Explique la reaccin con las protenas. 5. Porqu se utilizan soluciones de taninos como antdoto en caso de envenenamiento por alcaloides? Explique los resultados obtenidos en las pruebas para determinar la presencia de taninos. PRCTICA No. 8 ALCALOIDES INTRODUCCIN Los alcaloides constituyen un grupo heterogneo de bases vegetales que en su estructura contienen nitrgeno, sobre todo en forma heterocclica. Estas sustancias ejercen efectos farmacolgicos (teraputicos y txicos) caractersticos sobre el organismo humano y animal, sobre todo sobre el sistema nervioso central. Familias caracterizadas por la presencia de alcaloides son: Berberidceae, Menispermceae, Papaverceae, Rubiceae, Loganiceae, Solanceae, etc.
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Los alcaloides se pueden clasificar por familias de plantas o por tipos de estructura bsica. Dependiendo de su estructura, se pueden identificar con pruebas generales y especficas. MATERIALES Material que traer el grupo: 30 g de cualquiera de las siguientes plantas secas: quina, caf, belladona, floripundia, amatillo, cardo santo o tabaco. 3-5 hojas secas de estramonio o floripundia, o extracto de belladona. 2 g de quina. Equipo de laboratorio: -
esptula aro metlico soporte 1 embudo mediano 1 embudo pequeo 3 pipetas pasteur 1 baln de fondo plano de 500 mL 1 ampolla de separacin de 125 mL 1 probeta de 25 mL 1 probeta de 100 mL 1 pipeta graduada de 1 mL 1 pipeta graduada de 5 mL Perilla para pipeta 1 baln para pipetas 1 beaker de 100 mL cmara de revelacin para cromatografa soporte
1 refrigerante vertical 4 mangueras 3 cpsulas de porcelana 1 agitador de vidrio 5 tubos de ensayo gradilla para tubos de ensayo pinza para tubos balanza granataria 2 hot plate 1 mechero 1 trpode Malla bao Mara licuadora lmpara UV de 366 nm 1 tapn de hule 2 pinzas para extensin y soporte Beaker 250 mL Vidrio de relog
OBJETIVOS Al terminar la practica el estudiante ser capaz de: Identificar alcaloides por medio de pruebas generales Identificar la presencia de alcaloides tropnicos; mediante la prueba de vitali Identificar la presencia de quinolina en corteza de quina; por medio de la prueba de Grade.
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Identificar los efectos secundarios provocados por el abuso de los alcaloides; mediante la revisin de literatura Identificar los usos teraputicos de los alcaloides y la incorporacin de estos en medicamentos; mediante revisin de literatura
DESARROLLO DE LA PRCTICA 1. Pruebas generales (preliminares)
Preparacin del extracto concentrado: Reflujar 10 g de la droga seca pulverizada con etanol 80% (cantidad suficiente para cubrir la droga), luego filtrar. Concentrar (hot plate, cpsulas de porcelana) hasta un volumen de 5 a 10 mL. Agregar HCl 10% hasta un pH de 1 2 (controlar con papel pH), luego realizar las siguientes pruebas: 1. 2. 3. A 1 mL de la solucin agregar 3 gotas de reactivo de Mayer. A 1 mL de la solucin agregar 3 gotas de reactivo de Wagner. A 1 mL de la solucin agregar 3 gotas de reactivo de Dragendorff.
Observe el color de la solucin y/o precipitado.
2.
Prueba de Vitali
Esta reaccin comprueba la presencia de alcaloides tropnicos, compuestos que se encuentran en muchas solanceas. 1 g de droga pulverizada (hoja de estramonio o de floripundia) o 2 mL de un extracto concentrado de belladona se agita durante 2 minutos con 10 mL de cido sulfrico 0.1N, luego se filtra. Agregue al filtrado 1 mL de amonaco al 26% y 5 mL de agua. Agite cuidadosamente en una ampolla de separacin con 15 mL de cloroformo, evitando emulsificacin. Seque la fase clorofrmica sobre sulfato de sodio y filtre con algodn. Evapore el cloroformo en una cpsula de porcelana
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(cmara de extraccin de gases, hot plate). Mezcle el residuo con 0.5 mL de cido ntrico concentrado y evapore hasta sequedad en bao Mara. Agregue 10 mL de acetona al residuo y luego, gota por gota, una solucin de KOH al 3% en etanol. Observe la coloracin. 3. 3.1. Pruebas de identidad de quina Prueba de Grahe
En un tubo de ensayo caliente cuidadosamente 0.5 g de quina pulverizada. En la pared del tubo aparecen gotitas rojas. Despus de enfriar, se disuelven estas gotitas en 10 mL de etanol 70%. La solucin muestra fluorescencia celeste en luz ultravioleta de 366 nm. 3.2. Se agita 0.1 g de quina pulverizada durante 1 min con una mezcla de 2.5 mL de cido sulfrico 20% y 2.5 mL de agua. Luego filtrar. A 1 mL del filtrado agregar 0.2 mL de reactivo de Mayer, hay precipitacin. El resto del filtrado se diluye en 10 mL de agua y se observa en luz UV de 366 nm. La solucin muestra fluorescencia celeste, que desaparece al agregar HCl concentrado. CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. Porqu se acidifica el extracto que se utiliza para las pruebas generales de alcaloides? Que compuestos de la droga que Usted utiliz se comprueban con la reaccin de Vitali? Que compuesto, de la quina, es el responsable por la fluorescencia? Que hara usted en caso de intoxicacin por alcaloides? Cite ejemplos de medicamentos que tengan como principio activo alcaloides
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PRCTICA No. 6 A GLICSIDOS CARDIOTNICOS INTRODUCCIN Los glicsidos cardiotnicos ejercen un efecto fortificante sobre el corazn debilitado. El rango de la dosis teraputica es estrecho y por su efecto txico en dosis mayores de la teraputica, las plantas con cardiotnicos se han usado como venenos de flecha. Los diferentes glicsidos cardiotnicos no se distinguen en su forma de actuar pero s en la fuerza de su efecto y en el tiempo de eliminacin. Como droga medicinal se usa sobre todo el digital en forma de medicamentos estandarizados. Entre las familias que contienen plantas con glicsidos cardiotnicos se encuentran: Scrophulariceas (digital), Apocynceas (narciso), Liliceas (escila, convalaria) y Asclepiadceas (seorita). MATERIALES Material que traer el grupo:
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100 g de hojas secas de narciso o de seorita. Equipo de laboratorio: 1 Refrigerante vertical, 2 mangueras de hule 1 baln de 500 mL de fondo plano 1 embudo mediano 4 tubos de ensayo, gradilla para tubos, pinza para tubos de ensayo 1 beaker de 600 mL, 1 beaker de 100 mL, 1 beaker de 250 mL 1 ampolla de separacin de 500 mL 1 probeta de 100 mL, 1 probeta de 25 mL 3 cpsulas de porcelana 1 agitador de vidrio, 3 pipetas pasteur 1 pipeta de 10 mL, baln para pipetas 1 mechero, 1 trpode,1 bao Mara 1 hot plate 1 licuadora 1 soporte, 2 pinzas de extensin y sostn, 1 aro grande de metal 75 mL de acetato de plomo al 10 % 80 mL de acetato de etilo gasa, algodn, papel filtro 1 mL de nitroprusiato de sodio al 0.5% 1 mL de NaOH 2N 1 mL de piridina 2 mL de reactivo de Keller (cido actico glacial con trozos de cloruro de Fe-III) 2 mL de reactivo de Kiliani (cido sulfrico con trozos de sulfato ferroso) 3 mL de etanol al 50% 300 mL de etanol 90 2 mL de solucin al 2% de cido dinitrobenzico en etanol al 96% 1 mL de solucin 1N de NaOH en agua 1 mL de cloroformo 1 mL de anhdrido actico 1 mL de cido sulfrico concentrado
DESARROLLO DE LA PRCTICA Todas las pruebas son reacciones qumicas con el fin de identificar los glicsidos cardiotnicos, sea por su aglicn o por su parte glicosdica. Se prepara primero el extracto concentrado que se utilizar para las pruebas. Preparacin del extracto concentrado
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Reflujar durante una hora 75 g de hojas secas y pulverizadas de narciso o seorita con 300 mL de etanol 90 en un baln de 500 mL, luego filtrar con gasa. En un beaker de 600 mL, agregar al filtrado 75 mL de acetato de plomo al 10% y agitar. Dejar en reposo durante 15 min, luego filtrar. Colocar el filtrado en una ampolla de separacin y extraer/separar 2 veces con 40 mL de acetato de etilo cada vez. Reunir ambas porciones de actato de etilo y concentrarlos hasta unos 10 mL en cpsulas de porcelana sobre hot plate. Este extracto se utilizar para las pruebas. PRCTICA N 6 B GLICOSIDOS CARDIOTONICOS 1. Prueba de Legal
Lleve 2 mL del extracto concentrado a sequedad (bao Mara), agregar 3 gotas de piridina (cmara de extraccin de gases!), 2 gotas de solucin de nitroprusiato de sodio al 0.5%, 3 gotas de NaOH 2N, succesivamente. Observe la coloracin. 2. Prueba de Keller-Kiliani
Colocar 2 mL del extracto concentrado en un tubo de ensayo y llevar a sequedad en bao Mara. Disolver el residuo en 2 mL de reactivo de Keller (cido actico glacial con trozos de cloruro de Fe-III), luego aadir cuidadosamente gotas de reactivo de Kiliani (cido sulfrico con trozos de sulfato ferroso). Observe el color en la capa del cido actico y en la interfase. 3. Prueba de Kedde
Evaporar 5 mL del extracto concentrado a sequedad (cpsula de porcelana, hot plate a temperatura baja). Disolver la sustancia en 2 mL de solucin al 2% de cido dinitrobenzico y agregar 1 mL de solucin 1 N de NaOH en agua. Observe el color. 4. Prueba de Liebermann-Burchard
A 2 mL del extracto concentrado llevar a sequedad (bao Mara), luego agregar 1 mL de cloroformo y agitar suavemente. Aadir 1 mL de anhdrido actico y 3 gotas de cido sulfrico concentrado. Mezcle y observe el color despus de 1 min y despus de 30 min. CUESTIONARIO
FACULTAD DE QUMICA Y FARMACIA 40
2,011]
1. 2. 3. 4.
5.
6.
Cul estructura se identifica con cada una de las pruebas? Anote el mecanismo de las reacciones qumicas hasta donde se han podido descubrir. Porqu se puede identificar con la prueba de Liebermann-Burchard a los cardiotnicos como a las saponinas? Porque casi no se utilizan plantas con glicsidos cardiotnicos en la medicina tradicional? Investigue cuales medicamentos comerciales contienen digital. Qu funcin tiene el acetato de plomo en la preparacin del extracto?
Coenzima A (CoA)
cido pantotnico Tioetanolamina cido esterico cido olico 9 -cido linolco 9,12
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2,011]
A nivel de laboratorio
Sin agitacin Con movimiento externo Con agitador
Nivel industrial
Disolvente con partculas de drogas Agitador elctrico Filtro-prensa
Mtodos de extraccin de drogas Maceracin Percolacin

Diluyente Papel filtro Droga Filtro de cermica Algodn
Extraccin de contracorriente
Entrada de droga Droga Diluyente
Extractor con agitacin ultrarrpida

Entrada de diluyente
Entrada de diluyente con planta
Salida de extracto por medio de fugas Rotor en forma de propulsor
Activacin de glucosa
Glucosa-1-fosfato Uridina-trifosfato Uridina-difosfato-glucosa (UDP-glucosa) pirofosfato
Monosacridos
D - Glucosa D - Fructosa y - D Fructopiranosa D - Galactosa y - D Fructofuranosa Maltosa Lactosa Sacarosa D - Manosa D - Xilosa L - Arabinosa L - Rhamnosa
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2,011]
Disacridos BIOSNTESIS DE LOS CIDOS GRASOS Coenzima A - Activadora de molculas en la biosntesis de cidos grasos Biosntesis de cidos grasos insaturados
Activacin de grupos: Acetil Malonil Acil
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Manual Farmacognosia

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