Practica # 1

FISIOLOGIA DE LA MEMBRANA SEMIPERMEABLE FRAGILIDAD OSMTICA

Integrantes:
Pillaca Aza, Jairo Arturo Sinchi Perez, Gisella Villaverde Tarrillo, Ivn Villaverde Contreras, Flor Len Garca, Roxana Silva Salvador, Gianmarco Moran Marios, Cristian Illa Sandoval, Darcy Tovar Rodriguez, Carlos ChumpitazFelix, Miguel

(Profesor a cargo) 12 de Marzo de 2013

Hiptesis

El eritrocito al entrar en contacto con la solucin hipotnica va sufrir hemolisis. La cantidad de eritrocitos destruidos aumentara mientras ms hipotnica sea la solucin.

Objetivos especficos

Aprenderemos a reconocer el proceso de hemolisis en los eritrocitos.Registraremos el nivel de absorbancia de los tubos de ensayo. Observaremos 2 tipos de hemolisis: inicial y total. Observar la resistencia globular (fragilidad osmtica) frente a una solucin hipotnica. Plasmaremos los registros del nivel de absorbancia con el nmero de tubo correspondiente en un papel milimetrado para obtener, en el mejor de los casos, una curva perfecta.

Fundamento Los eritrocitos son clulas sin ncleo, bicncavos (esta forma facilita su funcin de intercambio) y son los encargados de transportar el oxgeno en la sangre. El eritrocito presenta, entre otros, a la Hemoglobina (Hb) encargada del transporte de oxgeno y de dar la tonalidad rojiza caracterstica de este tipo de clulas.

La clula presenta una membrana semipermeable la cual permite el paso de solventes y solutos de acuerdo a una gradiente (de menor concentracin a mayor concentracin); a su vez el eritrocito presenta una resistencia globular la cual es una propiedad de los eritrocitos de conservarse sin ningn cambio ante determinadas sustancias, las cuales tienden a destruirlos (hemolisis y crenacin).

Se usa una solucin hipotnica debido a que esta presenta una concentracin inica menor al citoplasma celular por lo cual la clula (eritrocito) tiende a absorber agua de la solucin, el paso de agua al interior de la clula esta mediado por unas protenas llamadas acuaporinas. Debido a que la clula ha absorbido agua esta se hinchara hasta el punto en el que estalla y se produce la Hemolisis, la HB es liberada por los poros de la membrana lo cual le dar una coloracin rojiza a la mezcla.

Mtodos El experimento se realiz como se describe en la leccin 2 delaGua de Practica de Fisiologa Humana (UPSJB - 2013). Se usaron 3 pipeta de distinta medida (1ml, 5ml y 10ml), agua destilada, cloruro de sodio, una jeringa, tubos de ensayo y una gradilla para colocar las muestras. Se extrajo sangre de un integrante del grupo y se mezclo con anticoagulante para su posterior uso.

Se agreg agua destilada y cloruro de sodio (NaCl) en 10 tubos de ensayo, luego se adicion 0.1ml de sangre ms anticoagulante en cada uno de los tubos de ensayo y se dejo reposar por 10 min para, posteriormente, llevarlo a la centrifuga a 2000 RPM en un lapso de 10 min. Pasados 5min, despus de sacar los tubos de la centrifuga, se llevaron al Espectrofotmetro para medir el nivel de absorbancia y ser registrados.

Luego se calcul el porcentaje de hemolisis en cada tubo con la frmula correspondiente, luego los datos obtenidos se plasmaron en un papel milimetrado para obtener la curva y determinar si los valores encontrados son normales o patolgicos.

Resultados Se observ que cuando la solucin es hipotnica el porcentaje de hemolisis en los eritrocitos hallado en los tubos de ensayo se ve aumentado; sucede lo contrario con una solucin hipertnica (Tabla 2). En cuanto a la absorbancia hallada de cada uno de los tubos (Tabla 1) se observ que sucede el mismo mecanismo que con las soluciones, determinando una relacin inversamente proporcional.

Tabla 1: Nivel de absorbancia medido en el espectrofotmetro.

Tubos N 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 Nivel de Absorbancia 0.282 0.332 0.114 0.001 0.003 0.004 0.004 0.005 0.006 0.333

Tabla 2: Comparacin del porcentaje de hemolisis y el porcentaje de NaCl.

Tubos N % NaCl de la sol. Resultante 0.10% 0.25% 0.35% 0.40% 0.45% 0.50% 0.60% 0.70% 0.80% 0%

1 3 5 7 9 11 13 15 17 19

Discusin Los resultados obtenidos nos indican que la hemolisis est sujeta a la concentracin de cloruro de sodio presente en la solucin. Al observar la curva obtenida con los resultados del experimento se puede apreciar una leve alteracin en la curva, la cual est entre los rangos normales. Cuando el eritrocito se encuentra en una solucin hipotnica necesita obtener un solvente para equilibrar el balance intracelular de lquido por lo cual se ve obligado a absorber agua del exterior, en este caso la solucin formada con agua destilada y cloruro de sodio (NaCl), por lo cual ocurrir la hinchazn y posterior destruccin del eritrocito (hemolisis).

Una de las causas de error que notamos al momento de ejecutar el experimento se debi a que los clculos de las medidas tuvieron una variacin leve a las indicadas en la gua prctica. Esto afecto en la obtencin de datos debido a que pudo alterar los datos que esperbamos observar.

Conclusiones Nuestra hiptesis fue correcta. Encontramos que la hemolisis en los eritrocitos se ve aumentada mientras ms hipotnica es la solucin empleada. El porcentaje de hemolisis fue el ms bajo cuando se utiliz una solucin al 4% NaCl/1mLH2O. La hemolisis se increment cuando se utiliz una solucin al 2,5% NaCl/1mLH2O, lo cual confirma la veracidad de la hiptesis.

Referencias Gerhard Thews, Ernest Mutschler, Peter Vaupel. Anatoma,fisiologa y patofisiologa del hombre. Edicin en espaol 1983. Pginas 127-129

Cecie, Starr, Ralph Taggart. Biologa: la unidad y diversidad de la vidaPgina 90-92 HernanVelz, Willian Rojas, Jaime Borrero y Jorge Restrepo. Hematologa. Edicin 2004. Pgina 91 Rodak F. B. Hematologa: Fundamentos y aplicaciones clnicas 2 ed. Argentina: 2005 http://cienciaexplicada.com/resistencia-globular.html http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003641.htm