La tcnica de la criofractura fue desarrollada de manera temprana en la dcada de 1950 por el cientfico Russell Steere, sin embargo no fue

hasta 1960, cuando Daniel Branton comienza investigar mediante criofractura y a exhibir las imgenes obtenidas, demostrando que posean la claridad necesaria para convencer al mundo cientfico de su utilidad en la investigacin. Esta tcnica lleg a su auge como fuente de investigacin celular en las dcadas del 70 y 80, al proporcionar avances en la comprensin de la organizacin estructural de membranas y organelos imposibles de identificar mediante el uso de otras tcnicas existentes.

La criofractura es una tcnica utilizada en microscopia electrnica, consistente en la congelacin de muestras biolgicas con nitrgeno lquido (-195,8C), seguido de un corte o fractura y el sombreado metlico o recubrimiento con carbono de la superficie de la muestra. Luego procediendo a la eliminacin del tejido biolgico subyacente al sombreado y la observacin de esta rplica de la muestra mediante el uso de un microscopio electrnico.

Existen 4 pasos esenciales para la realizacin de una replica por criofractura: 1. Congelacin rpida de la muestra: Esto se logra sumergiendo rpidamente la muestra (previamente tratada con un crioprotector como el glicerol para evitar la formacin de cristales de hielo en el interior de la muestra) en nitrgeno lquido, a una temperatura cercana a los -195,8 C.

2. Fractura de la Muestra Se lleva a cabo en condiciones de vaco, bajo una cuchilla de diamante o romperla en una dispositivo de bisagra. Tambin existe la variante simple de la tcnica, en que la facturacin se efecta en una atmsfera de nitrgeno liquido, a una presin de 3 ATM con el uso de una cuchilla de afeitar.

 3.

Fijacin de platino - carbono Se procede a evaporar una fina capa de carbono - platino sobre la muestra. As, las caractersticas topogrficas de la superficie congelada se convierten en variaciones en el espesor de la capa de platino depositada sobre la muestra.

4. Limpieza de la rplica Posteriormente a la fijacin, la muestra se lleva a presin atmosfrica y se le deja calentar a temperatura ambiente. El material biolgico restante en la replica es eliminado mediante el empleo de una solucin de cido crmico, hipoclorito de sodio u otros agentes limpiadores.

A la izquierda se muestra una imagen parcial de una clula vista por criofractura, en la imagen vemos la membrana (m), el citoplasma (c) y el ncleo (n). A la derecha se muestra una ampliacin de la membrana plasmtica, esta imagen sugiere que las protenas de membrana -que se observan como granos- se hayan integradas en una superficie constituida por fosfolpidos.

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