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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIHUAHUA FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

Practica 6 Perfil de lpidos completo

Laboratorio de qumica clnica Q. B. P. Beatriz Portillo Arroyo

Michelle A. Quezada Piceno 235891

3 de octubre de 2012

RESUMEN Se determino que el paciente 1 cursa con alguna patologa en el metabolismo de lpidos, ya que el valor de triglicridos fue muy elevado del rango normal. INTRODUCCION Por medio de un anlisis denominado "perfil lipdico", el mdico de su hijo podr ver los diferentes tipos de grasas presentes en la sangre. Si bien muchos padres no piensan en el nivel de colesterol de sus hijos, los niveles elevados contribuyen a las afecciones cardacas y los accidentes cerebrovasculares. Los mdicos miran atentamente los perfiles lipdicos en los nios porque ha quedado demostrado que las afecciones cardacas se desarrollan en la niez. El perfil lipdico mide lo siguiente:

El colesterol total, que es la suma de los diferentes tipos de colesterol. Las lipoprotenas de alta densidad (HDL) colesterol, que suelen recibir el nombre de colesterol "bueno". Las lipoprotenas pueden considerarse el sistema de transporte de la sangre de su hijo. Las lipoprotenas de alta densidad transportan colesterol al hgado para su eliminacin. Las lipoprotenas de baja densidad (LDL) colesterol, generalmente conocidas como colesterol "malo". Las lipoprotenas LDL que se acumulan en el torrente sanguneo pueden tapar los vasos sanguneos e incrementar el riesgo de afecciones cardacas. Los triglicridos, que almacenan energa hasta que el organismo la necesita. Si el cuerpo acumula demasiados triglicridos, los vasos sanguneos se pueden tapar y provocar problemas de salud. Por qu se realiza

El perfil lipdico permite verificar los niveles de lpidos en la sangre, que pueden indicar el riesgo de una persona de padecer enfermedades cardacas o arterosclerosis (el endurecimiento, estrechamiento o bloqueo de las arterias). Algunos expertos consideran que el colesterol elevado en nios es un gran problema de salud pblica que en muchos casos pasa desapercibido. Por lo tanto, es importante estar atento a los niveles de colesterol de su hijo, en especial si alguno de los padres sufre de colesterol elevado. Preparacin El nivel de lpidos puede verse afectado por la grasa presente en la dieta. Su hijo debe evitar las comidas con grasas la tarde anterior a realizarse el anlisis. A menos que el mdico indique lo contrario, su hijo no debe comer ni beber ninguna bebida que no sea agua despus de la medianoche anterior al anlisis. Si no se cumple este requisito, los resultados del anlisis pueden verse afectados. Su hijo tambin debe evitar hacer ejercicio fsico entre las 12 y 14 horas anteriores al anlisis. Si su hijo est tomando algn medicamento, consulte a su mdico para saber si debe interrumpirlo hasta despus de realizada la prueba. OBJETIVO

Que el alumno conozca sobre los requisitos de toma de muestra para la cuantificacin de lpidos, as como los mtodos existentes para la determinacin de colesterol total, C-HDL, CLDL y triglicridos. As mismo aprender sobre los mtodos para la cuantificacin de lipoprotenas y apoprotenas. MATERIALES Y METODOS -Centrifuga -Tubos de ensaye -Bata de seguridad -Guantes -Tubo vacutainer rojo -Sistema vacutainer para puncin venosa -Ligadura -Torundas -Micropipetas -Puntas para pipeta

-Reactivo de trabajo -Reactivo enzimtico -STD (200mg/dl) de trigliceridos -STD (200mg/dl) de colesterol -STD (100mg/dl) de glucosa -Reactivo precipitante -Reactivo de colesterol total -Control normal -Control patolgico -Humalyzer 2000 -Incubadora

Glucosa 1. Tomar muestra de paciente en ayuno en tubo rojo. 2. Realizar las siguientes preparaciones. Muestr Estndar CN CP Blanco a Suero 10 L ----Estndar -10 L ---CN --10L --CP ---- 10L -Reactivo 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL enzimtico 3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37C 4. Leer absorbancia de estndar, CN, CP y muestra contra blanco a 500 nm. Triglicridos 1. Tomar muestra de paciente en ayuno de seis horas, en tubo rojo, colocar en centrifuga para obtener suero. 2. Realizar las siguientes preparaciones. Muestr Estndar CN CP Blanco a Suero 10L ----Estndar -10 L ---CN --10 L --CP ---10L -Reactivo 1mL 1 mL 1 mL 1 mL 1mL Total 3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37C 4. Leer absorbancia de estndar, CN, CP y muestra contra blanco a 505nm.

Colesterol 1. Tomar muestra de paciente en ayuno de seis horas, en tubo rojo, colocar en centrifuga para obtener suero. 2. Realizar las siguientes preparaciones. Muestr a 10L ----

Estndar

CN

CP

Blanco

Suero ----Estndar 10 L ---CN -10 L --CP --10L -Reactivo 1mL 1 mL 1 mL 1 mL 1mL Total 3. Mezclar e incubar 5 minutos a 37C 4. Leer absorbancia de estndar, CN, CP y muestra contra blanco a 500nm. Colesterol HDL 1. Tomar muestra de paciente en ayuno de seis horas, en tubo rojo, colocar en centrifuga para obtener suero. 2. Se toman 250l del suero de la muestra y se mezclan con 25l del reactivo precipitante, se mezcla con agitacin 3. Se incuba a temperatura ambiente por 10min 4. Se centrifuga 20min a 4000rpm. 5. Se toman 10l del sobrenadante y se aaden 1000l del reactivo de colesterol total. En otro tubo se colocan 1000l del reactivo de colesterol total, ser el blanco. 6. Se mezclan y se incuban 5min a 37C. 7. Se lee la absorbancia de la muestra contra el blanco a 505nm. RESULTADOS Paciente 1 Triglicridos Glucosa Colesterol HDL 395.4mg/dl -----134.9mg/dl 0mg/dl Paciente 2 112.8mg/dl 75.9mg/dl 177.6mg/dl -----Valor de referencia <150mg/dl 75-100mg/dl <200mg/dl 35-55mg/dl

CONCLUSION Para el paciente 1 se obtuvieron 395.4mg/dl en triglicridos, muy elevado de lo normal, esto puede ser hipertrigliceridemia familiar, que es un trastorno gentico que se da en familias y causa triglicridos altos. Los niveles de colesterol de personas con este desorden estn usualmente en el rango normal. Pero all probablemente habr una historia familiar temprana de enfermedad cardiaca. Usualmente, la hipertrigliceridemia domstica no es descubierta hasta la pubertad o la edad adulta joven. Y, frecuentemente, la obesidad, las hiperglucemias y los altos grados de insulina son tambin encontrados en el momento. La determinacin de un perfil lipdico tiene gran importancia clnica ya que se puede emplear como un diagnostico primario de ciertas enfermedades, as como tambin en el seguimiento de algunas enfermedades como: diabetes mellitas, necrosis, obstruccin biliar y varias anormalidades metablicas que resultan de disturbios endocrinos. BIBLIOGRAFIA Amato M, S y Granados P, F. Manual de Laboratorio. Ctedra de Bioqumica. Universidad Nacional, 1994 Pesce AJ., Kaplan LA.: "Qumica Clnica. Mtodos". Editorial Mdica Panamericana. 1990. Anderson Sc., Cockayne S: "Qumica Clnica". Ed. Interamericana. 1995.

APENDICE Determinacin de triglicridos 1- el glicerol y los cidos grasos se forman en una primera etapa por la accin de la lipasa sobre los triglicridos. 2- El glicerol de fosforila por la adenosin-5-trifosfato(ATP) para producir glicerol-3-fosfato(G-3P) y adenosin 5-difosfato(ATP) para producir glicerol- 3-fosfato (G-3-P) y adenosin 5- difosfato (ADP) en una reaccin catalizada por el glicerol- cinasa. 3- La G-3-P por la glicerol fosfato oxidasaproduciendo (DPA) y perxido de hidrogeno. 4- Los perxidos reaccionan con 4-aminoantipirina y 4-clorofenol bajo la influencia cataltica de la peroxidasa para formar quinoneimina. Determinacin de colesterol total La determinacin de Colesterol Total est basada en el procedimiento enzimtico descrito por Allain, donde el colesterol--estearasa (CE) hidroliza los steres de colsterol a colesterol libre y cidos grasoso. En presencia de oxigeno, el colesterol libre es oxidado por la colesterol oxidasa (CO) a cholest-4-en-3-one y perxido de hidrogeno. Cuando el fenol est oxidativamente acoplado con 4-aminoantipirina en la presencia de peroxidasa (HPO), y perxido de hidrogeno se produce un cromoforo de quinoneimina. La intensidad de color producido es proporcional a la concentracin de colesterol y se mide colorimtricamente a 500nm .

Determinacin de HDL-COLESTEROL La separacin del HDL-colesterol, est basada en la selectividad de los iones fosfotungstico y magnesio para precipitar todas las Lipoprotenas con excepcin del HDL-colesterol. . Despus de la centrifugacin, el HDL-colesterol contenido en el lquido sobrenadante, se determina con el mismo mtodo que se determin el colesterol total. Determinacin de glucosa El mtodo utilizado en este reactivo se basa en la reaccin indicadora de perxido de hidrgeno que une 4-aminoantipirina a un compuesto fenlico. Glucosa oxidasa 1. Glucosa + O2 + H2O > cido glucnico + H2O2 Peroxidasa 2. H2O2 + HBA + 4-AAP > Tinte de quinonimina + H2O 1. La glucosa se oxida por accin de la glucosa oxidasa para dar cido glucnico y perxido de hidrgeno. 2. El perxido de hidrgeno reacciona en presencia de peroxidasa con HBA y con 4aminoantipiridina (4-AAP) para dar lugar a un tinte de quinonimina rojo. La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de glucosa y se puede medir fotomtricamente entre 460 y 560 nm. RPBI -Bote rojo -Aguja -Suero de muestra (refrigeracin) -Bolsa roja -Guantes -Torunda -Tubo rojo