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Dr. Enrique vila Zamora Dra. Kristel Morales Espinoza Dr. Edgar Zrate Sez
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE FISIOLOGIA HUMANA OBTENCION DE MUESTRAS BIOLOGICAS PARA EXPERIMENTACION EN ANIMALES Y SERES HUMANOS. MANEJO DE ANIMALES DE EXPERIMENTACION.
Introduccin Definicin de Bioseguridad: Es el conjunto de normas preventivas para proteger la salud y brindar seguridad al personal que trabaja en salud frente a los diferentes riesgos producidos por agentes: biolgicos, fsicos, qumicos y mecnicos. Agentes de riesgo o causantes de dao: agentes biolgicos trasmitidos por ingesta, inhalacin, inoculacin, y por contacto directo a travs de piel y mucosas. Agentes fsicos y mecnicos: Temperaturas extremas, radiaciones ionizantes, contacto y conexiones elctricas, defectuosas, vidrios rotos. Agentes qumicos: corrosivos, txicos, carcinognicos, inflamables, explosivos. La Bioseguridad implica una accin de conjunto: Todos deben cumplir las normas de Bioseguridad: "El descuido de una persona es el riesgo de todos" Riesgo Biolgico: es la probabilidad de infectarse con un agente patgeno (agente patgeno se llama a toda aquella noxa que es capaz de producir una enfermedaden la actividad laboral. Exposicin: Es un contacto que implica riesgo con un patgeno capaz de trasmitirse por la va donde se est produciendo la exposicin. Propsito de la Bioseguridad: Promover la salud de los trabajadores de salud mediante la vigilancia de las actividades de cada rea de trabajo en salud para prevenir las exposiciones a fluidos con riesgo biolgico y vigilancia del cumplimiento de las normas de bioseguridad. Adems promover, sugerir y establecer polticas que apoyen la educacin continua de los trabajadores de salud. Debe tenerse un suministro oportuno y continuo de insumos necesarios para la proteccin. La disponibilidad de agua potable es primordial. Disponibilidad de lavamanos cerca del rea de atencin de pacientes Laboratorio de trabajo.
PRACTICAS DE SEGURIDAD
Todo el personal que trabaja en el laboratorio fisiolgico o ingresa a l debe seguir reglas de seguridad. Las normas de seguridad son obligatorias y son esenciales no solamente para la acreditacin acadmica, sino porque consisten en prcticas que otorgan seguridad y proteccin al personal, alumnos e investigadores que trabajan en los laboratorios bioqumicos, fisiolgicos, bacteriolgicos, biolgicos, qumicos, etc. Muy especialmente en el campo mdico donde trabajamos con muestras material biolgico que es considerado potencialmente patgeno patgeno. La mxima seguridad y proteccin es necesaria en estos casos PRACTICAS GENERALES Se prohbe fumar, comer y aplicarse cosmticos, para evitar la diseminacin de agentes infecciosos o productos qumicos txicos de las mallas hacia la boca. Con el fin de evitar el contacto con agentes infecciosos o diseminarlos, debe utilizarse alguna prenda protectora sobre la ropa, como el guardapolvo,
mandil, la bata de laboratorio. Estas prendas de proteccin externa no deben usarse fuera del laboratorio. Los zapatos han de ser de punta y taln cerrado. No es conveniente que las personas que trabajan en el laboratorio usen lentes de contacto debido al desprendimiento de vapores y a las salpicaduras que pueden producirse. Los lentes de contacto inhiben el lagrimeo y permiten que las sustancias permanezcan ms tiempo en la crnea. Se recomienda el uso de lentes de proteccin o protectores para la cara a las personas que usan lentes de contacto, en particular si hay alto riesgo de vapores, aerosoles o salpicaduras. La joyera de tipo colgante, el cabello largo y barba son riesgosos, ya que es posible que entren en contacto con muestras u otras superficies, o se enreden o queden atrapados en instrumentos con movimiento, como mquinas rotatorias o centrifugas. Se prohibe estrictamente pipetear con la boca todo tipo de muestra, reactivo, agua o cualquier otra sustancia biolgica debern usarse pipetas manuales automticas. DERRAMES . . Es necesario desarrollar y tener polticas escritas y procedimientos para instruir a los alumnos y a los empleados acerca de la manera de manejar derrames qumicos y biolgicos. Existen en el comercio estuches con insumos para ambos tipos de derrames.. Si no existen tales normas en la institucin el laboratorio debe desarrollarlas con el fin de asegurar el ambiente de trabajo. LAVADO DE MANOS El lavado de manos es una de las principales maneras de evitar la diseminacin de agentes infecciosos. Aunque se utilicen guantes, el lavado de manos es necesario. Por que es posible que stos tengan huecos microscpicos. Al tratar con pacientes, es necesario lavarse las manos tras atender a cada uno de ellos aunque se utilicen guantes. LIMPIEZA No debe permitirse que la basura, los desperdicios biolgicos, infecciosos. y el material de vidrio sucio se acumulen en grandes cantidades en el laboratorio. Los recipientes con muestras de desecho y agentes etiolgicos deben taparse cuando no se estn empleando. Es necesario limpiar con frecuencia las superficies de trabajo con algn desinfectante al comenzar y terminar cada turno. El personal de laboratorio fisiolgico es responsable de mantener el rea de trabajo limpia y sanitaria, aunque haya servicio de limpieza adicional por parte de la institucin. ETIQUETAS Y SEALES Todos los recipientes que contienen productos qumicos deben etiquetarse con claridad, indicando el nombre del producto y cualquier precaucin para su manejo. Las reas en que se almacenan productos inflamables, peligrosos o txicos y carcingenos, o en las cuales se utilizan deben estar marcadas claramente. Las reas en que se almacenan o analizan sangre o liquidos corporales deben estar marcadas claramente con el signo de riesgo biolgico. DESECHO DE DESPERDICIOS Existen normas de la OSHA con respecto al desecho de productos biolgicos. El desecho de materiales biolgicos, como desperdicios infecciosos, se examina y regula en la actualidad por leyes especficas del Ministerio de Salud Pblica. AGUJAS Y OBJETOS PUNTIAGUDOS. Las agujas y otros objetos puntiagudos constituyen un riesgo fsico de infeccin potencial para el personal de laboratorio fisiolgico. Todas las agujas desechables y dems objetos punzantes deben colocarse en un reclpl9nte resistente a la perforacin y a prueba de fugas, marcado con el smbolo de riesgo biolgico. Estos recipientes se descartan, siguiendo las polticas de la institucin, cuando estn llenos hasta la mitad o las tres cuartas partes. La mayora de las instituciones incineran los recipientes que contienen objetos punzantes. Inmediatamente despus de usada una aguja deber incinerarse y para ello existen en la actualidad equipos especiales incineradores de agujas llamados destructores de agujas.Nunca, deber reenfundarse volverse a colocar la cubierta de las agujas a menos que se utilice algn dispositivo como pinzas diseadas para este fin, para evitar la puncin cutnea accidental. Las agujas nunca deben cortarse, ya que esto puede provocar salpicaduras de sangre o de otros lquidos al medio.
SEGURIDAD BIOLOGICA
Proteccin Personal La dispersin epidmica del sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) ha revivido la preocupacin acerca de las enfermedades que se transmiten por la sangre entre las personas que trabajan en el laboratorio. Se sabe que las personas que laboran en los laboratorios mdicos en general, fisiolgicos,
bacterilogos,bilogos y otros relacionados con la salud en general, conforman un grupo de alto riesgo para infecciones por virus de hepatitis B relacionadas con el trabajo y virus de inmunodeficiencia humana (HIV). En 1987 el Centro de Enfermedades Transmisibles USA (CDC) y la OSHA publicaron recomendaciones para proteger a las personas que trabajan al cuidado de la salud y a otras de adquirir la infeccin por HIV y se actualizaron nuevamente en 1988. Entre las recomendaciones se aconseja que "se tomen precauciones congruentes al manejar sangre y lquidos corporales de todos los pacientes y las muestras que se obtengan". Esto se conoce como precauciones universales.Las recomendaciones incluyen el uso de equipo para proteccin personal, como guardapolvos, mandiles, batas, guantes descartables y protectores para los ojos al manipular sangre y lquidos corporales en el laboratorio. La revisin de los CDC en 1988 recomend usar equipo de proteccin personal para manejar todas las sustancias biolgicas y animales. Deben tratarse todas las secreciones y excreciones corporales como potencialmente infecciosas, ya que hay otras enfermedades adems de HBV y HIV que se transmiten a travs de diversos lquidos del organismo humano y de los animales. En 1991 la OSHA public una regulacin final la Occupational Exposure to Bloudborne Pathogens (Exposicin ocupacional a patgenos que se transmiten por la sangre). Esta regla indica que el patrn debe proporcionar equipo de proteccin personal que no permita que los materiales potencialmente infecciosos entren en contacto con la ropa. la piel, los ojos y la boca del trabajador en condiciones normales de uso. La regla tambin indica la manera correcta de disponer de objetos punzantes y otros desperdicios con riesgo biolgico y seala la necesidad de administrar la vacuna de HBV y el tratamiento tras alguna exposicin a todos los empleados que corran este riesgo. Adems de describir equipo de proteccin personal, dicha norma incluye instrucciones para el lavado de manos, transporte de muestras, uso de pipetas, forma de recoger derrames, desechos de desperdicios y descontaminacin del equipo. Derrames Es necesario que las personas que limpian algn derrame biolgico utilicen guantes descartables y bata de laboratorio. Se colocan toallas desechables sobre el derrame y se vaca desinfectante sobre ellas. Tras dejarlo reposar algunos minutos. se recoge la sustancia y el desinfectante con material absorbente (los cojinetes absorbentes son tiles para derrames grandes) A continuacin se coloca el material contaminado en un recipiente para riesgos biolgicos: bolsas plstico grueso color rojo en el Per y bolsa de color negro para basura domstica. Despus de absorber la mayor parte de material, el rea se limpia con un desinfect8nte de fuerza intermedia o alta, por ejemplo, dilucin de Leja 1:10. La solucin desinfectante se absorbe con material desechable. El rea se enjuaga con agua y se seca para evitar que quede resbalosa. Es conveniente preparar un conjunto de utensilios para limpiar derrames con riesgo biolgico que contenga todos los materiales necesarios para efectuar la limpieza de este tipo y tenerlo a la mano en el laboratorio en que se manejan dichas muestras. SEGURIDAD QUIMICA Hoja De Datos Sobre Seguridad De Materiales En Agosto de .1987.)a OSHA enmend la norma Federal Hazard Communication Standard 29CFR 1919: 1200 (Rigllt to Kriow/HCS Standard), hacindola extensiva a todas las industrias, incluyendo las instalaciones para el cuidado de la salud. Esta norma establece que los responsables de cada rea determinen si se utilizan productos qumicos peligrosos en el trabajo y proporcionen a los empleados hojas con datos de seguridad en el uso del material riesgoso y marquen adecuadamente los recipientes que contienen el producto, indicando el riesgo, y se mantendr una lista de productos qumicos peligrosos, es decir, un inventario de productos qumicos, y proporcionen al empleado informacin y entrenamiento, y desarrollen un programa de comunicacin de riesgos por escrito. Informacin que contiene la hoja de datos de seguridad para cada material grupo de sustancias relacionadas, de uso en Laboratorio fisiolgico y otros Laboratorios biolgicos. 1. Identificacin del producto qumico (nombre qumico, y sinnimo y/o nombre vulgar.)
2. Ingredientes peligrosos 3. Datos fsicos 4. Datos de incendios y explosiones 5. Informacin de riesgos para la salud 6. Datos de reactividad 7. Procedimientos para derrames, fugas y desecho 8. Informacin de proteccin personal. 9. Precauciones especiales y comentarios Manejo de Animales La mejor manera para aprender a manejar correctamente los animales de laboratorio es la instruccin prctica directa. Pueden enunciarse aqu algunos principios generales. El personal de laboratorio puede recibir de casi todos los animales (conejos. cobayas. ratones)., pequeos araazos cuando el animal trata de escapar; pero raras veces intenta ste lesionar al operador. En el caso de las ratas, las cosas cambian; pueden realizar muchos esfuerzos para escapar. y producir mordeduras peligrosas, Tambin los monos deben manejarse con cuidado. En cualquier caso, es indispensable que aun los pequeos araazos de animales se traten en forma adecuada; si el animal ha sido inyectado con material patolgico la naturaleza de dicho material puede obligar a tomar ciertas medidas para proteger al personal contra las consecuencias de la mordedura. Por lo tanto, debe reportarse de inmediato, y tratarse mdicamente cualquier lesin, por pequea que sea. Toma de Muestras de Sangre La muestra de sangre para las pruebas de laboratorio pueden tomarse en diferentes sitios: capilar o perifrica, venosa y ocasionalmente arterial. Esta muestra se utiliza para la valoracin de diversos parmetros del medio interno que puede llevarse a cabo en sangre completa o una fraccin de la misma. sea plasma o suero. Si la muestra sangunea no se recoge con una tcnica adecuada puede ocurrir que los exmenes proporcionen informacin inexacta o incorrecta bien que la muestra se rechace y sea necesario repetir la puncin. Deben tomarse precauciones en todos los casos por lo que la obtencin y manipulacin de las muestras se harn con guantes quirrgicos descartables.. Sangre Capilar o Perifrica La sangre que suele llamarse capilares, al menos parte arteriolar se obtienen por o general de: a). La yema del dedo; b). el borde del lbulo de la oreja; y c). el taln en los nios pequeos En cualquier de estos sitios el rea debe de estar tibia (ni fra ni congestionada) ya que de otra manera la composicin de la sangre varia por la xtasis o la dilucin. Sin embargo debe recordarse que aun ejecutando una buena toma, los valores de los parmetros difieren entre la sangre capilar y la venosa. Usar alcohol y lancetas descartables. TECNICA 1. Limpie la piel con una torunda de algodn con alcohol de 70 o con otro desinfectante adecuado y deje secar. 2. Haga una puncin profunda (2- 3 mm con una lanceta o aguja estril desechable. La puncin debe efectuarse de un golpe y rpidamente para que resulte casi indolora (sobre todo el borde del lbulo de la oreja). 3. La primera gota de sangre se elimina porque contiene desechos tisulares. La sangre no debe exprimirse o se obtendr una muestra diluida; peso s puede hacerse presin a distancia del sitio de la puncin. Tras concluir la toma de la muestra se entrega al paciente una torunda limpia que debe presionar sobre el sitio de lesin. SANGRE VENOSA Por lo general se utiliza una de las venas de las fosas antecubitales, pero con frecuencia tambin se puncionan las venas de las manos las muecas o cualquier vena visible de buen calibre (en los pacientes prematuros es posible punzar las venas del cuero cabelludo la yugular externa o la femoral) Las venas deben examinarse cuidadosamente; si son profundas y no se palpan con facilidad se descartan. Para
facilitar el examen se usa un torniquete de jebe. EQUIPO. La muestras se toman previa desinfeccin con alcohol y con jeringas desechables con aguja de calibre 19 20 x1 (cuanto ms bajo es el numero mas es el grosor de la aguja, las de menor grosor pueden hemolizar la muestra y las de mayor grosor se reservan para la obtencin de sangre para transfusiones). TECNICA 1. El paciente debe estar acostado o sentado cmodamente y con el brazo apoyado en una mesa o soporte. Algunas pacientes en especiales los jvenes pueden sufrir malestar o incluso desmayarse. Por tanto mantngase alerta ante seales como palidez o piel fra. 2. Coloque el torniquete con un medio lazo para poder retirarlo fcilmente. No efectu demasiada presin ya que puede detener la circulacin arterial. 3. Pida al paciente que abra y cierre el puo un par veces para obtener mayor distensin de las venas. Algunas veces las venas no se ven con claridad pero se palpan. 4. Una vez elegido el sitio de puncin se procede a limpiar con alcohol y se deje secar. Enseguida se fija la vena sosteniendo el brazo del paciente con la mano mientras se estiran y comprimen con el pulgar y los tejidos blandos situados justo debajo del escogido para punzar. La jeringa se sujeta entre el pulgar y los tres ltimos dedos de la otra mano y sus dorsos se apoyan con el brazo del paciente. El dedo ndice se coloca sobre el casquillo de la aguja y sirve como gua. El bisel de la aguja debe quedar hacia arriba. 5. Cuando la vena es prominente se punza en forma directa con la aguja colocada horizontal y dirigida en paralelo a la vena. Al perforar la pared se percibe una sensacin de crujido. Cuando el acceso a la vena no es tan perceptible, la puncin se efecta en dos tiempos: primero se punza la piel y luego la vena. Para que la sangre entre a la jeringa se hace una traccin ligera sobre el embolo evite realizar una traccin excesiva porque la vena puede contraerse e impedir el paso de la sangre hacia la jeringa. Algunas veces al puncionar se traspasa la vena; entonces debe retirarse ligeramente la aguja al verificar la entrada de la sangre. Esta operacin puede producir hematomas; si se advierte seales de extravasacin de sangre a los tejidos, retire la aguja de inmediato y aplique presin local. 6. Antes de retirar la aguja, quite el torniquete y pida al paciente que abra el puo. En cuanto se adquiera la destreza necesaria, esta ltima operacin se efecta cuando la sangre termina de entrar a la jeringa. El paciente debe mantener la presin con una torunda en el sitio de la puncin y el brazo flexionado durante unos minutos para evitar hematomas. 7. Tras la obtencin de la sangre, se retira la aguja de la jeringa con una pinza de metal y con un movimiento de torsin y con la ayuda de otra pinza se coloca el extremo del embolo sobre la pared interna del tubo. Nunca realizar el reenfundamiento de la aguja sin pinzas.La sangre se vaca suavemente para evitar que se forme espuma y produzca hemlisis. Si la determinacin que se va efectuar exige sangre completa o plasma la muestra se coloca con un tubo con anticoagulante y se invierte con suavidad varias veces para mezclar. Si en cambio se desea obtener suero, la sangre se coloca en tubo, de preferencia de 37 C para que el cogulo se forme ms rpido. La retraccin del cogulo puede acelerarse separando de la pared del tubo con un aplicador de madera. Es imperativo usar destructores de agujas en todos los casos. USO DE VACUTAINER En muchos laboratorios se utilizan actualmente los tubos Vacutainer para obtener las muestras de sangre venosa, en lugar de las jeringas. Los tubos estn sellados con un tapn de goma y extraen un volumen de sangre predeterminado. La aguja desechable se enrosca en el tubo de manera que el tapn de goma alcanc justo la lnea gua. La aguja ms corta se mete dentro del tapn de goma, pero no penetra y por lo tanto no rompe el vaci. Una vez que se tiene la certeza de que la aguja ha abordado la vena, se empuja el tubo hasta el fondo del sujetador lo que rompe el vaco y la sangre entra al tubo. Cuando el flujo cesa, el tubo se retira y si se desea puede sustituirse por el otro para obtener otra muestra .No debe usarse el Vacutainer para dosaje de gases arteriales.
SANGRE ARTERIAL Para la determinacin de gases se requiere puncin arterial. En esos casos la arteria se ubica localizado el latido por palpacin muy cuidadosa. La puncin es necesariamente ms profunda y se requiere mayor cautela para impedir hematomas. Debe practicarla el mdico. ANTICOAGULANTES Los cuatro anticoagulantes mas usados son una mezcla de oxalato amoniaco y potasio, citrato trisodico, Sequestrene (EDTA) y heparina. Los tres primeros impiden la coagulacin al sustraer el calcio del plasma sanguneo por precipitacin o fijacin en forma no ionizada, e inhibe la activacin de los factores de la coagulacin. El citrato trisodico se utiliza para impedir la coagulacin de la sangre destinada a transfusiones. El Sequestrene y la heparina pueden servir para el mismo fin, pero no la mezcla de oxalatos porque es toxica. La mezcla de oxalato de amonio y (6partes) y oxalato potasio (4partes) en la cantidad de 2 mg/ml de sangre no afecta el volumen globular medio y puede usarse para hemoglobina, hematocrito y recuentos globulares. En frotis de sangre su utilidad esta limitada a los primeros minutos por que se desarrollan con rapidez formas dentadas en los hemates, vacuolizacin en el citoplasma de los granulocitosy artefactos en los ncleos de linfocitos y monocitos y otras deformidades. Asimismo, la sangre tomada con esta mezcla de anticoagulantes no puede emplearse para determinados qumicas de nitrgeno ni potasio. El citrato trisdico en solucin acuosa al 3.8%, se mezcla a razn de 1/9 con sangre para investigaciones de coagulacin. El Sequestrene (EDTA) se emplea en una concentracin de 1 a 2 mg/ml de sangre. La sal di sdica o di potsica de Etilendiaminotetracetato es tal vez el anticoagulante que mas se emplea para el recuento de las clulas sanguneas. Hay que mezclarlo minuciosamente con la sangre. Para el estudio del hematocrito es equiparable al oxalato y para estudios morfolgicos lo supera, ya que impide la deformacin y artefactos incluso despus de un reposo prolongado. Se consiguen frotis aceptables aun cuando hayan pasado 2 o 3 hs y hasta 24hs si la sangre se refrigera. Tambin es posible realizar el recuento de plaquetas aun despus de unas pocas horas. La heparina, a razn de 0.1 a 0,2 mg/ml de sangre, no afecta el tamao corpuscular ni el hematocrito. Es el mejor anticoagulante para prevenir la hemlisis y para las pruebas de fragilidad osmtica. No resulta satisfactoria para recuentos de leucocitos o cuando han de prepararse frotis (o extensiones de sangre por que en este segundo caso produce un fondo azul en las preparaciones teidas con el colorante de Wright.
Las jaulas se construirn de modo que permitan la limpieza y desinfeccin mas completas y posean suficiente luz y ventilacin, deben construirse expresamente para fines experimentales fisiolgicos. Debe disponerse de compartimientos, y jaulas de aislamiento para los animales inoculados y debern estar solos, en jaulas aparte, para protegerlos de las molestias o herida que entre ellos pudieren infligirse. Los compartimientos de animales deben estar bien iluminados y ventilados .Se procurara conservar a una temperatura uniforme, da y noche. IDENTIFICACION DE LOS ANIMALES Es conveniente adoptar un sistema seguro para la identificacin de los animales .La practica de rotular las jaulas sirve para la distincin de los lotes numerosos de animales aun cuando para conseguir un registro completo conviene numera a cada animal y anotar los detalles relativos al sexo, descripcin, etc. Chapas. Para los conejos y cobayos pueden emplearse unas pequeas chapas de aluminio que se fijan a una oreja de animal por medio de una grapa o un hilo metlico que perfore estos rganos y atraviese tambin los orificios de las chapas. Para los animales de mayor tamao pueden adquirirse identificadores especiales ..Pueden obtenerse en las casas de artculos veterinarios. Descripcin. Cuando se use nicamente este mtodo de identificacin y haya que alojar juntos en una misma jaula varios animales, deben seleccionarse los que presenten seales o colores diferentes .Para facilitar el registro debe disponerse de sellos de goma con dibujos de ratn ,cobayo o conejo. Este mtodo se utiliza junto con el de la chapa metlica a fin de asegurar la identificacin si la chapa se perdiera. Asimismo, debe anotarse cuidadosamente cualquier deformidad o sea particular .El sexo debe registrarse en la descripcin (macho y hembra). Seales o marcas para identificacin de animales Los animales pequeos, como ratones y ratas, pueden marcarse en el cuerpo o en la cola pintndose la piel y el pelo con colorantes (soluciones alcohlicas saturadas de fucsina o cido picrico).Las jaulas habrn de rotularse.
Las manos del operador habrn de estar libres de cortes y escoriaciones, particulares en la proximidad de las uas, debiendo lavarse cuidadosamente con jabn y agua y luego sumergirlas en una solucin desinfectante antes y despus de haber manipulado productos infecciosos y antes de las comidas. Una vez terminado el experimento deber lavarse la superficie de las mesas con una solucin desinfectante; algunas veces es recomendable trabajar sobre una toalla humedecida en una de estas soluciones, como por ejemplo lisol o tricresol al 2 por 100. Las pipetas,tubos de ensayo y dems instrumentos empleados en la experimentacin fisiolgica tambin se desinfectarn con una solucin lisol o tricresol al 2 por 100, o se esterilizarn inmediatamente por ebullicin durante 20 minutos o autoclave que es lo ideal. Los recipientes, lminas portaobjetos u otro material contaminado con orina heces secreciones biolgicas de los animales, contaminados con productos biolgicos humanos, no se volvern a tocar por ningn concepto sino que se sometern a un proceso de desinfeccin inmediata, como hemos indicado lneas ms arriba Los calentadores y dems aparatos elctricos se comprobarn con frecuencia para verificar la exactitud de su funcionamiento, reparando sin prdida de tiempo sus averas a fin de evitar cortos circuitos incendios .El mechero de Bunsen no debe utilizarse nunca en la proximidad de materias inflamables .Siempre se verificara que la llave de mechero quede bien cerrada antes de retirarse del Laboratorio , igualmente se asegurar de cerrar la llave del baln contenedor del gas la llave general del gas del Laboratorio de ser el caso. El ter, el alcohol y similares deben mantenerse alejados de todo posible contacto elctrico. Es obligacin del servicio de mantenimiento realizar revisiones peridicas de mantenimiento preventivo.
Esta prctica sirve para determinar la resistencia de la membrana de los glbulos rojos a la hemlisis en presencia de diferentes concentraciones de soluciones salinas hipotnicas a temperatura ambiente y veremos en cual de ellas se presenta hemlisis inicial y total. Reacivos y Equipos Necesarios 1.-Solucin salina al 0.75 % 2.-Pipetas graduadas: 1 ml al 0.01 10 ml al 0.1 5 ml al 0.1 3.- Micropipetas de 0.1 ml 4.- Fiola de 100 ml 5.- Espectrofotmetro 6.- Muestra de sangre venosa desfibrinada hemates lavados. 7.- Agua destilada 8.- Tubos de vidrio 13x 100 mm sin reborde
Metodo 1.- Preparar soluciones seriadas, en tubos de prueba marcados del 1 al 11, segn la tabla adjunta, haciendo las diluciones con agua destilada segn lo indicado : Marcar 19 tubos de prueba y repartir as: Sol. Agua % NaCl Mezclar Tubos NaCl Destil de Por inN ml la sol resul 1% version tante ml 1 1.0 9 s 0.10 % 2 2.0 8 S 0.20 % 3 2.5 7.5 Si 0.25 % 4 3.0 7.0 Si 0.30 % 5 3.5 6.5 Si 0.35 % 6 3.75 6.25 Si 0.375 % 7 4.0 6.0 Si 0.40 % 8 4.25 5.75 Si 0.425 % 9 4.50 5.5 Si 0.45 % 10 4.75 5.25 Si 0.475 % 11 5.0 5.0 Si 0.50 % 12 5.5 4.5 Si 0.55 % 13 6.0 4.0 Si 0.60 % 14 6.5 3.5 Si 0.70 % 15 7.0 3.0 Si 0.70 % 16 7.5 2.5 Si 0.75 % 17 8.0 2.0 Si 0.80 % 18 8.5 1.5 Si 0.85 % 19 -----10.0 --0 %
El alumno calcular la Osmola ridad correspondiente a cada uno de los tubos :( expresar en unidades mOsm/Kg H20)
2.- Una vez hecha la distribucin anterior, mezclar bien, por inversin cada uno de los tubos.NO OLVIDAR ESTE PASO. 3.- Recin ahora, despus de haber mezclad, aadir 0.1 ml de sangre venosa desfibrinada cada uno de los tubos.
4.- Tapar los tubos y mezclar nuevamente por inversin suave. 5.- Dejar en reposo 10 minutos a temperatura ambiente y luego volver a mezclar por inversin suave. 6.- Centrifugar a 2000 rpm. Durante 10 minutos. Examinar por simple inspeccin visual en cual de los tubos se inicia la hemlisis (hemlisis leve), generalmente a partir del tubo N 8, de 0.425 % NaCl (lo que se manifiesta por el color ligeramente rojizo del lquido) y luego examinar en qu otro tubo la hemlisis es intensa (aproxim. en 0.36 % NaCl ). En el Tubo N 19 se producir hemlisis total y corresponde al 100% de Hemlisis.(Destruccin total de los hemates y no deja nada de sedimento). Valores Normales: Hemlisis inicial (leve) (empieza Hemlisis): 0.44 % + -- 0.02 Hemlisis Total (Hemlisis completa): 0.32 % + -- 0.02 CAUSAS DE AUMENTO DE LA FRAGILIDAD OSMTICAGLOBULAR: (Los hemates son ms frgiles que lo normal, tienen poca resistencia ante ligeras hipotonas, y se hemolizan muy fcilmente) -Anemia Hereditaria Esferoctica, en la Enfermedad Hemoltica del recin nacido por incompatibilidad ABO -Despus de alguna injuria trmica (quemaduras) -Anemias Hemolticas sintomticas en algunos casos de: Linfoma Maligno, Leucemias, Cncer, Cirrosis, etc. CAUSAS DE DISMINUCIN DE LA FRAGILIDAD OSMTICA (Los hemates son mas resistentes que lo normal a la hipotona): En la primera Infancia, tempranamente en la infancia. En algunas Anemias por deficiencia de Hierro Talasemia mayor ( anemia de Cooley, anemia del Mediterrneo ) Anemia Drepanocitica ( Hoz, Sickle cell anemia) Anemia Megaloblstica Nutricional Post Esplenectoma y algunas hepatopatas con ictericia FRAGILIDAD EN MEDIO ACIDO: - En la Hemoglobinuria paroxstica nocturna, que cursa con anemia hemoltica, usualmente la fragilidad globular realizada en sol. salina solamente, es NORMAL, PERO la fragilidad globular realizada en MEDIO CIDO( pH cido)SESTA AUMENTADA . La FRAGILIDADMECANICA est aumentada en la Ovalocitosis hereditaria ( Eliptocitosis), en los casos que evolucionan con anemia hemoltica. Referencias Bicliogrficas S., Mellor Leslie ,J. Inwood, Linch R. Medical Laboratory Technology.W.B.Saunders Co.Phila.USA. 1996. Clinical Diagnosis by Lab Methods. Todd. Stanford, W.B Saunders Co. Phila. USA. 2002 Hematology Physiologic Basis for Clinical Practice .Reich P.MD. Little Brown Co. BostonUSA.2004. Clinical Laboratory Diagnosis Levonson and Mac Fate.Lea Febiger. 1999. Wintrobe Clinical Hematology Lea Febiger. 1998. Diagntico Hematolgico .Laboratorio y Clnica. Ciscar y Farrera. Edit.Jims 1998.
tubo
Bao externo
2* 4 6* 8 10 12 14* 16*
NaCl 0.68% agua NaCl 1.36% NaCl 0.68% Dextrosa 3.87% agua Dextrosa 7.74% Dextrosa al 3.87%
Bao Saco linftico (inyectar 4 ml). Agua NaCl 0.68% NaCl 0.68% NaCl 1.36% Agua Dextrosa 3.87% Dextrosa 3.87% Dextrosa al 7.74%
(Inyectar 4ml) Peso del Glucosa Peso al final sapo al basal del inicio del (inicial) experimento experimento
Experimento N 3 Despus de 2 horas, se saca el sapo del beaker y se retira la ligadura de la cloaca .Se vaca comprimiendo el abdomen y se recolecta la orina. Se pesa nuevamente al sapo .La diferencia entre este peso y el obtenido inmediatamente antes de quitar la ligadura es igual al peso de la orina recolectada. La diferencia entre el peso despus de recolectar la orina del animal y el peso inicial antes de sumergido equivale al peso ganado o perdido durante el experimento. Se debe tomar en cuenta el peso despus de inyectar los 4ml.de solucin en los sacos dorsales .Se calcula el porcentaje de variacin de peso con respecto a la medida inicial y se registra la cantidad de orina formada durante el experimento. Experimento N 4: Anlisis de glucosa en orina del sapo. La glucosa se determinara en la orina del sapo mediante el mtodo de la glucocinta (Urine Strip Winer Lab).
Estimulacin muscular
Introduccin Los tejidos neural y muscular tienen la propiedad de excitabilidad y responden a estmulos, es decir variaciones del medio qumicas o fsicas, tales como alteraciones de la temperatura, deformacin mecnica, etc. En los fenmenos estmulo respuesta, la respuesta depende de las caractersticas del estimulo y de las condiciones del tejido estudiado. La descripcin correcta de la relacin entre estimulo y respuesta requiere el control de la duracin , intensidad y frecuencia del estimulo. Las relaciones estimulo-respuesta se desarrollan en funcin al tiempo y al espacio. Material Sapos grandes Tabla de fijacin para batracios Migrafo Alambre de cobre Estimulador elctrico Alambre de zinc Equipo de diseccin Quimgrafo Mtodo Experimento N1 Se anestesia al sapo por destruccin del cerebro y la mdula espinal. Con unas tijeras se hace un ojal en la piel de la regin anterior homloga al tronco. Se contina la incisin de la piel en cinturn. Una vez completado el cinturn, se desprende la piel de un tirn hacia abajo. En la regin dorsal se debe tener cuidado por la adherencia de la piel al urostilo. Se levanta el urostilo con la pinza de diseccin y se seccionan los elementos paravertebralmente y en direccin ceflica, fracturando el proceso del iliaco paralelo al urostilo que se articula con el proceso transverso de la novena vrtebra. Inmediatamente se observan dos formaciones blancas que se introducen por tres races ms arriba en la columna vertebral. Estas estructuras son los nervios citicos. Por debajo se observa la aorta dorsal con sus bifurcaciones. Con las tijeras se secciona transversalmente el urostilo, evitando traccionar o lesionar los dos nervios citicos. Se pasa un hilo por debajo de cada uno de los nervios citicos y se realiza una ligadura lo mas proximal posible a la columna vertebral. En este momento se observa una reaccin muscular. Se secciona el nervio proximalmente a la mdula, entre la columna vertebral y la ligadura. Con la ayuda del hilo se puede efectuar la diseccin del nervio citico, no siendo necesario manipularlo con ningn instrumento. Para poder liberar el nervio, es necesario cortar el msculo piriforme, despus se lo asla por diseccin roma entre el semimembranoso por dentro y el bceps por fuera. A todo lo largo del nervio se ir seccionando sus colaterales y se lo aislar hasta la rodilla, comprobando que exista conexin funcional entre el nervio y el msculo gastrocnemio. Una vez que el nervio ha sido aislado, se debe evitar que se seque humedecindolo constantemente en solucin fisiolgica. Experimento N 2: Experimento de Galvani Se fabrica un asa con alambre de cobre y alambre de zinc. Con el alambre de cobre se toca la piel del animal y con el zinc el nervio. Experimento N 3 Se toma la pata del animal y se pasa un hilo por debajo de la aponeurosis plantar, amarrndola fuertemente. La ligadura queda ubicada proximalmente y se realiza la diseccin de la aponeurosis, que en el sapo se contina hacia la pierna por el tendn de Aquiles que tiene un sesamoideo. Se libera el tendn de Aquiles por diseccin roma y se separa el gastronemio hasta llegar a su insercin superior. Con un golpe de tijera se secciona la tibia por debajo de la rodilla y el fmur un poco por encima de esta. Se libera el fragmento de fmur del exceso del tejido muscular y se le hace una fuerte ligadura. Con este mismo hilo se fija al migrafo. El hilo amarrado a la aponeurosis plantar se fija a la otra barra del migrafo.
Con cuidado se colocael electrodosobre el nervio y se procede a estimular la preparacin neuromuscular. Con el estimulador elctrico se realiza el estimulo de menor intensidad y se incrementa gradualmente. Humedecer constantemente la preparacin con un gotero. Experimento N 4: fenmeno de la escalera Se realizan descargas simples para buscar el umbral de estimulacin y despus se disminuye el voltaje para obtener el estimulo subliminal. Luego de repetir la estimulacin por un tiempo se observar que las contracciones son cada vez mayores hasta alcanzar un valor mximo. Experimento N 5: tetania Se realizan estimulaciones intensas y continuadas y se obtiene una serie de contracciones sucesivas antes de que el msculo alcance su relajacin completa. Se contina hasta obtener una contraccin permanente. Experimento N 6: Relacin longitud - tensin Se da una vuelta completa del quimgrafo para inscribir una lnea basal en reposo. A continuacin se estimula para que el msculo se contraiga sin vencer ninguna resistencia. Se obtiene un trazado en el quimgrafo. Se colocan 10 gramos de peso, con lo que la lnea basal del quimgrafo desciende. A continuacin se estimula al msculo y se obtiene un trazado. Se aumentan otros 10 gm de peso con lo que la lnea basal desciende an mas.Se vuelve a estimular el msculo y se obtiene un trazado. Repetir varias veces el procedimiento, incrementando sucesivamente el peso. Discusin
Placa mioneural
1. Introduccin La placa mioneural media la transmisin de la seal de la fibra nerviosa motora a la clula muscular. Salvo en el caso de las fibras musculares intrafusales, existe una sola placa terminal por cada fibra muscular. A medida que el axn del nervio se acerca a su fin emite varias ramas, cada una de las cuales inerva una fibra muscular. Ests ramas terminales son de poco dimetro y carecen de mielina, por lo que la velocidad de conduccin en ellas es baja. La placa mioneural es una discontinuidad entre la clulas nerviosa y la muscular donde la transmisin del impulso de despolarizacin queda a cargo de un mediador qumico, la acetilcolina. La terminal presinptica posee vesculas sinpticas, las cuales han sido sintetizadas en el soma neural, y presenta canales de membrana de sodio y calcio dependientes del voltaje. La generacin del potencial de accin da lugar a la apertura de los canales de calcio y se incrementa la concentracin citoslica de calcio. Este incremento promueve la fusin de las vesculas sinpticas con la membrana citoplasmtica del rafe sinptico, liberando acetilcolina. La acetilcolina acta sobre receptores nicotnico presentes en el miocito y produce despolarizacin de la membrana celular muscular. Este fenmeno es denominado potencial de la placa terminal. Este potencial de accin excita a las miofibrillas para que se contraigan. Para el control de la actividad muscular existe adems una va inhibitoria recurrente, es decir, un mecanismo de retroalimentacin negativa que mejora la resolucin espacial de la accin neural. Esta va inhibitoria provee un mecanismo para evitar la contraccin muscular persistente. El axn de la motoneurona A sale de la sustancia gris a nivel de la medula espinal, pero emite antes una rama colateral, la rama recurrente. Esta rama se desprende a partir del primer ndulo de Ranvier, permanece dentro de la materia gris ventral y pasa medialmente y dorsalmente. Est rama forma sinapsis con interneuronas que se encuentran en la regin ventromedial del asta anterior y son denominadas clulas de Renshaw. Sus axones se proyectan hacia las motoneuronas , tanto hacia aquella en la cual se origin la primera sinapsis desde el hasta dorsal, representada como la motoneurona A, y a sus vecinas, representadas como motoneuronas B, terminan en sinapsis inhibitorias. La transmisin de este sistema inhibitorio est a cargo de la glicina. Material Sapos grandes Migrafo Estimulador elctrico Equipo de diseccin Tabla de fijacin para batracios
Mtodo Experimento N 1 Se l anestesia a un sapo por destruccin del encfalo. Se diseca y se expone el nervio citico en la cara posterior de ambos muslos, evitando lesionar la arteria femoral que corre paralela al nervio. En una de las extremidades, se separa el nervio de la arteria y se procede a ligar alrededor del msculo y de la arteria, dejando libre al nervio. Se aplica estmulos de baja intensidad a los nervios citicos y se va incrementando su intensidad hasta obtener la contraccin muscular. Luego se estimula directamente al msculo gastrocnemio a travs de una incisin hecha en la piel.
Experimento N 2 Se administra 1 mL de succinilcolina en el saco linftico dorsal del sapo. Luego de unos minutos se procede a estimular con el carrete de induccin ambos citicos. Experimento N 3 Se administra 1 mL de vecuronio en el saco linftico dorsal del sapo. Luego de unos minutos procede a estimular con el carrete de induccin ambos citicos. Experimento N 4 Se administra 1 mL de solucin de atropina y neostigmina en el saco linftico dorsal del sapo. Luego de unos minutos se procede a estimular con el carrete de induccin ambos citicos. Discusin La succinilcolina es un bloqueador muscular despolarizante. Inicialmente simula el efecto de la acetilcolina, produciendo apertura de los canales inicos y despolarizacin persistente. Inicialmente puede producir excitacin, la que se manifiesta por fasciculaciones transitorias. Esta fase es seguida por el bloqueo de la transmisin neuromuscular y parlisis flcida. La estricnina acta a nivel de la medula espinal, bloqueando la sinapsis inhibitoria de las clulas de Renshaw sobre las motoneuronas , en las que ejerce el rol de antagonista competitivo selectivo que bloquea los efectos inhibitorios de la glicina. La estricnina produce aumento de los impulsos nerviosos sucesivos, creando contracciones similares a las tetnicas. Origina una contraccin muscular sostenida de extensores y flexores y espasmo muscular persistente.
Experimento N 3: experiencia de Turck Se emplea la preparacin de sapo espinal. Se la cuelga de un estativo y se espera que est en reposo. Se prepara varios beakers con concentraciones crecientes de CIDO SULFRICO desde 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 y 1%. Se sumerge la pata del animal en cada una de las distintas soluciones, empezando por la de menor concentracin; se espera y se registra el tiempo necesario para la respuesta. Una vez que se haya
producido la respuesta, se lava la pata del animal en suero fisiolgico antes de pasar a la solucin siguiente. Se observa y se registra las caractersticas y tipo de respuesta en cada caso. Experimento N 4: sumacin temporal Se sumerge la pata del animal en una solucin de cido sulfrico al 0.1% varias veces. Se observa el incremento progresivo de la respuesta. Experimento N 5: sumacin espacial Se sumerge en una solucin de cido sulfrico al 0.1% primero la punta del dedo, luego el dedo completo, la pata y la rodilla. Se observa la mayor intensidad de las respuestas. Experimento N 6 Se repite las experiencias anteriores empleando el carrete de Runckford y administrando estmulos elctricos de intensidad creciente. Experimento N 7 Se empapa un papel de filtro en cido actico puro y se lo coloca en el dorso del animal Se observa y se registra las caractersticas de la respuesta. Experimento N 8 Se hace una incisin en el abdomen y se expone con mucho cuidado una parte del intestino. Se estimula cuidadosamente con el carrete de induccin. Se observa y se registra las caractersticas de la respuesta. Al principio se observar una ligera contraccin de la musculatura abdominal que aumentar al incrementar la intensidad del estmulo hasta llegar a desarrollar una respuesta flexora amplia. Experimento N 9 Se introduce un estilete dentro del canal vertebral y se destruye la mdula. Despus se repite las mismas estimulaciones hechas previamente.-
Martillo de reflejos
Mtodo Experimento N 1: reflejo rotuliano Se sienta al sujeto en una posicin cmoda y cruza las piernas. La pierna superior debe estar relajada. Por palpacin, se localiza el tendn rotuliano y se da un golpe seco con el martillo de reflejos. La respuesta adecuada es la contraccin del cuadriceps, lo que produce extensin de la pierna. Experimento N 2: reflejo aquiliano El sujeto se pone de rodillas sobre una silla y deja colgar fuera los pies sin contraccin de los msculos de las pantorrillas. Se busca el tendn de Aquiles y se estimula. La respuesta apropiada es la contraccin de los msculos gemelos y del sleo, lo que produce extensin del pie. Experimento N 3: reflejo bicipital El sujeto flexiona su antebrazo sobre el brazo, mientras el examinador soporta el antebrazo. Se busca el tendn del bceps con el pulgar de la mano que sostiene el antebrazo, se deja el pulgar sobre el tendn y se da un golpe sobre el pulgar. la respuesta apropiada es la contraccin del bceps, lo que produce flexin del antebrazo.
Experimento N 4: reflejo tricipital El sujeto flexiona su antebrazo sobre el brazo, mientras el examinador soporta el antebrazo. Se palpa el tendn del trceps, inmediatamente por encima de su insercin en el codo, y se golpea el tendn con el martillo. La respuesta apropiada es la contraccin del trceps, lo que produce extensin del pie. Experimento N 5: reflejos radial y cubital Se golpea los tendones insertados sobre los extremos inferiores de ambos huesos, por encima de la mueca. El examinador sostiene el brazo del sujeto. La respuesta adecuada para el reflejo cubital es la pronacin de la mano y para el reflejo radial la flexin del antebrazo. Discusin
EVALUACIN DE LA PERCEPCIN SENSORIAL Y SENSACIONES NOCICEPTIVAS: EVALUACION DEL UMBRAL DEL DOLOR.
Introduccin La estimulacin de un receptor tctil de la piel es transmitida por la va del asta posterior (sensitiva) hasta la corteza somestsica. En esta la excitacin del receptor activa un determinado nmero de neuronas que constituye su campo cortical. Sin embargo, no todas las neuronas de este campo se estimulan en la misma magnitud, sino que las que corresponden al centro del campo descargan de forma mxima y las de la periferia en menor magnitud. Este contraste es el que permite localizar el punto exacto de estimulacin. Las capacidades tctiles se determinan en muchas ocasiones por la posibilidad de discriminar dos puntos de estimulacin sobre la piel. Las diferencias en las capacidades de discriminacin en las diferentes zonas del cuerpo se deben al nmero de receptores que exista en esa zona y a la representacin cortical que stos poseen. Los dedos estn profusamente poblados de receptores y el rea de corteza a que llega la informacin proveniente de ellos es amplia, de ah su mayor posibilidad de discriminacin. Otras zonas del cuerpo tienen menor densidad de receptores siendo ste uno de los factores que conlleva a que la informacin que llega al rea de la corteza sea reducida y, por lo tanto, sea menor su posibilidad de discriminacin. Cuando se estimulan dos puntos cercanos de la piel, cada uno excitar de forma mxima al centro de su campo cortical; pero como los campos se superponen parcialmente, la resultante ser una excitacin mayor, aunque se mantienen los mximos de excitacin separados. El ser humano puede percibir diferentes grados de calor y fro, que pasan del fro glacial, al fro, al fresco, a la temperatura indiferente, a lo tibio, caliente y quemante. Objetivos 1. Discriminar procesos y modalidades de percepcin sensorial en el ser humano de tal manera que pueda sistematizarlos. 2. Comprobar la distribucin anatmica de los receptores cutneos y la importancia fisiolgica de dicha distribucin. 3. Comprobar la influencia de las bajas temperaturas en la sensibilidad. 4. Comprender los mecanismos que explican dichas funciones, estas observaciones debern ser correlacionadas con sus conocimientos neuroanatmicos y neurofisiolgicos. EXPERIMENTO 1: IDENTIFICACIN DE CAMPO RECEPTIVO SENSORIAL Materiales Sello especial Hoja de papel Pelo de cerda (pelo de Von Frey) Sujeto experimental (alumno 1) Sujeto experimentador (alumno 2) Procedimiento 1. Por medio de un sello especial marcar un rea en la piel de un compaero: cara, dorso del cuello, antebrazo, dorso de la mano. 2. 3. Sellar en una hoja de papel un rea similar y proporcional Luego el sujeto experimental deber cerrar los ojos y se le aplica por medio de un instrumento sensibilizador llamado pelo de Von Frey, una ligera presin en cada uno de los cuadrantes del
rea delimitada por el sello. 4. El sujeto experimental deber reportar las modalidades de sensaciones que percibe en la piel de cada cuadrante (tacto, dolor, temperatura, otros). Marcar con notacin diferente, en un esquema, los puntos correspondientes. Anotar cuantos puntos diferentes hay para cada una de las sensaciones investigadas.
5. 6.
Resultados
EXPERIMENTO 2: DISCRIMINACIN DE DOS PUNTOS Materiales Comps de doble punto. Regla. Sujeto experimental (alumno 1). Sujeto experimentador (alumno 2). Procedimientos Para la realizacin de estos experimentos los estudiantes se dividirn por parejas, actuando cada uno como sujeto experimental y como experimentador. 1. Indique a su compaero que cierre los ojos y se concentre en las sensaciones que va a percibir. 2. Aplique los dos extremos del comps de forma tal que lleguen simultneamente al rea de piel estimulada. Se deber estimular las siguientes zonas: Yema de los dedos, antebrazo, cara y nuca. 3. En cada paso la separacin de las puntas del comps se aplicarn de forma tal que la diferencia entre ellas sea diferente y, alternante, mantenindose constante para cada zona corporal esto es 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 y 3 cm. 4. Durante la aplicacin de las agujas, pregunte al compaero cuantos puntos discrimina y anote su respuesta. 5. Analice el comportamiento de los receptores. Resultados
Area de la Piel Estimulada Yema de los dedos Antebrazo Cara Dorso del Cuello Dorso de mano
Distancia de separacin de las puntas del comps ( cm ) 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0
En el tlamo existen neuronas que vienen a denominarse de tercer orden (3) que provienen de los ncleos intramamilares del tlamo y que se proyectan enviando sus axones al frontal superior de la corteza cerebral. Igualmente existen neuronas de tercer orden en el ncleo ventro-basal y grupo posterior del tlamo que proyectan sus axones al parietal posterior en la corteza cerebral. Es aqu, donde ocurre la modulacin del dolor, y donde socioculturalmente puede variar la expresin del dolor EXPERIMENTO N 1: SENSACIONES TRMICAS Y UMBRAL DEL DOLOR Materiales: Hervidor elctrico con agua ,termmetro y gotero. Procedimiento 1. Introducir el termmetro en el hervidor elctrico y registrar la temperatura del agua. 2. Aumentar la temperatura del agua, conectando el hervidor en el suministro elctrico. 3. Cada minuto registrar la temperatura del agua y cargar el gotero y dejar caer unas dos o tres gotas en el dorso de la mano hasta que el sujeto de experimentacin perciba un cambio en la temperatura del agua en relacion a la temperatura inicial del primer minuto. 4. Continuar con el paso tres hasta el momento en que al dejar caer una gota en la palma de la mano sienta dolor. 5.- Construir una curva tiempo vs. Temperatura y determine el umbral del dolor. Resultados TIEMPO (MIN) TEMPERATURA C DOLOR
EXPERIMENTO N 2: ISQUEMIA LOCAL Y DOLOR Materiales Tensimetro. Cronmetro. Sujeto Experimental (alumno 1). Sujeto Experimentador (alumno 2). Procedimiento 1. El sujeto de experimentacin deber sentarse cmodamente, colocando el brazo sobre la mesa de modo que quede a nivel del corazn. 2. Coloque el manguito del esfigmomanmetro, completamente desinflado, alrededor del brazo de manera que su borde inferior quede 2-4 cm sobre el pliegue del codo. 3. Aumentar la presin del sistema, con la pera insufladora, hasta alcanzar una presin de 200 mm Hg. 4. Solicitar al sujeto de experimentacin que abra y cierre rtmicamente ambas manos. 5. Registrar el tiempo en que el sujeto empieza a reportar que siente dolor y el momento en que el dolor se torna insoportable. 6. Disminuir rpidamente la presin del sistema, abriendo la vlvula de la pera insufladora. 7. Monitorear el tiempo en que desaparece el dolor. 8. Realizar el experimento tanto en la mano derecha como en la mano izquierda. Resultados
TIEMPO (MIN)
TEMPERATURA (C)
ISQUEMA LOCAL Y DOLOR BRAZO Derecho Inicia el dolor Dolor insoportable Desaparece el dolor Izquierdo
PRUEBAS CEREBELOSAS
CEREBELO.- PRACTICA DE Fisiologa del CEREBELO 2013- I Marco Terico. Anatoma. Rol Fisiolgico. Evaluacin de la Fisiologa Cerebelosa. Sntomas y Signos de la alteracin Cerebelosa.
FUNCIN DEL CEREBELO la principal funcin del cerebelo es la coordinacin del movimiento, es decir, permitir que el movimiento se realice con facilidad y precisin. los ncleos profundos tienen una actividad continua en situacin basal, y tienen conexiones excitadoras con el origen de las vas motoras (corteza motora a travs del tlamo, ncleo rojo, ncleos vestibulares y formacin reticular, que son el origen respectivamente de las vas motoras corticoespinal, rubroespinal, vestibuloespinales y reticuloespinales). as, los ncleos del cerebelo mantienen una activacin tnica de las vas motoras que facilita la realizacin del movimiento. Las clulas de Purkinje inhiben a los ncleos profundos, con lo que pueden inhibir unos componentes del movimiento y otros no, y as DAR FORMA AL MOVIMIENTO. EL CEREBELO REGULA EL TONO MUSCULAR, modificando la actividad de las motoneuronas gamma, de manera QUE AUMENTA EL TONO PARA MANTENER LA POSTURA, O LO INHIBE PARA FACILITAR LA REALIZACIN DE LOS MOVIMIENTOS VOLUNTARIOS.
Tambin contribuye a la COORDINACIN DE LOS MOVIMIENTOS POLIARTICULARES. Las fibras paralelas recorren una larga distancia en la corteza del cerebelo, y en su recorrido pueden actuar sobre clulas de Purkinje correspondientes a VARIAS ARTICULACIONES, COORDINANDO SU ACTIVIDAD. EL CEREBELO PARTICIPA EN EL APRENDIZAJE DE LOS MOVIMIENTOS. MIENTRAS SE EST APRENDIENDO UN MOVIMIENTO NUEVO SE PRODUCEN FRECUENTES ESPIGAS complejas en las clulas de Purkinje. Esto produce depresin a largo plazo, por lo que una vez que el movimiento se ha aprendido disminuye la frecuencia de las espigas simples. Puesto que las clulas de Purkinje inhiben a los ncleos profundos, la disminucin de las espigas simples produce una mayor actividad de los ncleos profundos y de las vas motoras.
REGIONES FUNCIONALES DE CEREBELO El cerebelo se divide en tres regiones funcionales. La estructura microscpica es semejante en las tres, por lo que las diferencias entre ellas se deben a que tienen distintas conexiones aferentes y eferentes, y realizan el mismo tipo de procesamiento pero con distinta informacin. Vestibulocerebelo El vestbulocerebelo corresponde anatmicamente con el ndulo-flculo.
Colabora con los ncleos vestibulares en las funciones de mantenimiento del equilibrio y de ajuste del reflejo vestibuloocular. Las lesiones del vestibulocerebelo en un lado producen sntomas parecidos a las lesiones de los ncleos vestibulares en el lado cotralateral. La razn de esto es que, puesto que la corteza del vestibulocerebelo inhibe a los ncleos vestibulares ipsolaterales, la lesin del vestibulocerebelo produce hiperactividad vestibular ipsoateral, que equivale a una lesin de los ncleos vestibulares contralaterales.
Espinocerebelo. Incluye al vermis cerebeloso y la zona intermedia de los hemisferios cerebelosos. El vermis junto con el ncleo fastigio se asocia a los movimientos axiales (del tronco y raz de los miembros) y la zona intermedia de los hemisferios cerebelosos se asocia a los movimientos la parte distal de las extremidades. Por5 eso las lesiones del ,los hemisferios cerebelosos se asocian con alteraciones de los movimientos de las extremidades partes distales. Y las lesiones de la lnea media (VERMIS) producen inestabilidad en la marcha. Por eso debe ampliar la base de sustentacin. El espinocerebelo se encarga de controlar la ejecucin de los movimientos. Recibe informacin por las vas espinocerebelosas de cmo se estn realizando los movimientos, y si detecta que el movimiento comienza a apartarse del objetivo deseado, enva seales correctoras. El ncleo fastigio enva las seales correctoras al origen de las vas que controlan los
movimientos axiales, que son la vestibuloespinal y reticuloespinal, y el ncleo interpuesto enva seales correctoras al origen de las vas que controlan los movimientos distales, que son la va corticoespinal lateral y rubroespinal. El espinocerebelo coordina la actividad de msculos agonistas y antagonistas durante los movimientos. Regula la relajacin del antagonista durante realizacin del movimiento, y tambin la contraccin del antagonista al final del movimiento para frenarlo cuando llega al objetivo. Cuando se altera produce el temblor intencional( no puede ensartar la aguja con un hilo). Cuando se altera la parte lateral (hemisferio neocerebeloso se produce la ataxia, disimetra, disdiadococinesia (juego sucesivo de palma- dorso de las manos muy dificultoso) .
Cerebrocerebelo. Comprende la parte lateral de los hemisferios cerebelosos y el ncleo dentado. Participa en la preparacin del movimiento. Recibe informacin de la corteza, a travs de los ncleos del puente, sobre el movimiento que se desea realizar, elabora el plan motor (determina qu msculos hay que contraer, y en qu secuencia, para realizar ese movimiento) y enva ese plan motor a la corteza motora, a travs del tlamo, para que se ejecute.:Cuando se retrasa esta accin de descompone el movimiento en sus partes ( movimientos roboticos) El cerebrocerebelo es necesario para el aprendizaje de movimientos complejos (p. ej. aprender a tocar el piano). El cerebrocerebelo tambin interviene en funciones cognitivas no relacionadas directamente con el movimiento.
Para evaluar la FUNCIN CEREBELOSA se estudia la Taxia es decir se explora la Taxia durante la ejecucin de los movimientos ( Taxia dinmica) se evalan en la posicin de reposo( Taxia esttica). Evaluacin de la Taxia DINMICA: Se examina por medio de pruebas que consisten en establecer una meta u objetivo a los movimientos de la persona. Si estas pruebas se alteran se dice que existe ataxia dinmica, por ejemplo tenemos: La Prueba del taln rodilla para miembros inferiores: estando la persona echada tocar con el taln de un pi la rodilla del la otra pierna, lo debe hacer en forma precisa, exacta, enseguida se le pide que descienda el taln bordeando la tibia de la pierna opuesta y no debe zigzaguea hasta llegar al dedo gordo del otro pi. Si tiembla, duda zigzaguea el taln , es anormal. Para Miembros superiores: Prueba de Indice-Nariz de ndice- oreja . Con los dedos de la mano contrados se le pide que con el ndice extendido se toque la punta de la nariz y luego el lbulo de la oreja con los ojos abiertos y luego cerrados. Debe hacerlo en forma precisa sin oscilaciones irregulares o bruscas y sin exceder la distancia. Tambin ndice del mismo paciente o con el del examinador. Para el Tronco: Se invita a la persona a efectuar cambios de postura: incorporarse, sentarse o caminar: En caso de ataxia dinmica se producirn movimientos oscilantes del tronco. Evaluacin ce la TAXIA ESTATICA: Signo de ROMBERG: La investigaremos con un voluntario de pi, con los pies juntos y las palmas de las manos adosadas al cuerpo(en actitud de firme). Se observar si la persona mantiene la postura erecta o si, por el contrario aparecen oscilaciones y la persona busca apoyo para no caerse. Luego le pediremos que cierre los ojos: si la persona oscila mucho y tiende a caer decimos que es ROMBERG POSITIVO (anormal). Debemos permanecer cerca de la persona examinada o para sostenerlo en caso de cada. A veces esta maniobra no es suficiente para detectar el signo de Romberg y y entonces se buscar lo que se denomina ROMBERG Sensibilizado que consiste en poner de pi a la persona con un pi delante del otro , o sobre un solo pi ; o bien haciendo un cuatro ( el paciente levanta un pi hasta la altura de la rodilla, con los ojos cerrados. Si existe Romberg positivo aparecern oscilaciones y tendencia a la cada. Significado Fisiolgico: Este signo revela un trastorno del sistema propioceptivo, un dficit en las vas de conduccin aferentes de la sensibilidad profunda o laberntica corregido por la visin. Por ello se pone de manifiesto cuando se le pide cerrar los ojos. El mismo significado fisiolgico tienen las alteraciones de la taxia dinmica cuando se le pide al paciente que cierre los ojos. Revelan tambin alteracin de los cordones posteriores de la mdula, sistema laberntico y degeneraciones espinocerebelosas. El signo de Romberg positivo pone de manifiesto la presencia de ataxia esttica. Evaluar Disimetra
Evaluar Disdiadococinesia Evaluar Temblor intencional LESIONES DEL CEREBELO Los sntomas de las lesiones cerebelosas se pueden comprender fcilmente si se conocen las funciones del cerebelo: Ataxia. Significa falta de coordinacin de los movimientos
Dismetra. Consiste en que el movimiento pasa de largo del objetivo, porque los msculos antagonistas no se activan a tiempo para frenarlo Temblor intencional. el temblor cerebeloso o intencional se acenta con los movimientos voluntarios. Se produce porque se contraen a la vez los msculos agonistas y antagonistas al realizar el movimiento Disdiadococinesia. Dificultad para los movimientos alternantes y repetitivos, como golpear rtmicamente con el dorso y la palma de la mano. Se debe a la falta de coordinacin en la activacin alternante de agonistas y antagonistas. Disartria. Dificultad en el habla, por falta de coordinacin en los msculos de la articulacin de las palabras. Hipotona. Por alteracin en la regulacin del tono muscular.
Descomposicin de los movimientos. Cuando un movimiento implica a varias articulaciones de un miembro, primero se mueve una articulacin y luego otra. Alteracin del equilibrio y nistagmus si la lesin afecta al vestibulocerebelo
FISIOLOGIA DEL VIII PAR CRANEAL VESTIBULO COCLEAR En esta practica evaluaremos solamente la funcin de la rama coclear del VIII Par craneal (mediante test Weber, Rinne y Schwabach) y evaluar hipoacusia solamente, pues la rama vestibular ser evaluada de modo diferencial conjuntamente con el estudio del cerebelo en su oportunidad. Exploracin de la rama coclear del Nervio acstico VIII par;nervio vestbulo coclear) El nervio coclear conduce los estmulos auditivos inducidos por las vibraciones sonoras ,recogidas por el receptor: rgano de Corti ,de los estmulos auditivos. No nos olvidemos que el nervio vestibular conduce los estmulos especficos del sentido del equilibrio que traduce las sensaciones de posicin o movimientos del cuerpo en relacin al espacio. Para la evaluacin fisiolgica de la percepcin del sonido evaluaremos la transmisin area y la transmisin sea. La hipoacusia POR ALTERACIN EN LA TRANSMISION CONDUCCION AREA (HIPOACUSIA DE CONDUCCIN) : en AFECCIONES DEL OIDO EXTERNO O MEDIO acumulo de cerumen o perforacin timpnica. Y LAS AFECCIONES DE HIPOACUSIA POR ALTERACIONES EN LA CONDUCCIN SEA EN LOS TRANSTORNOR DEL NERVIO AUDITIVO)RAMA COCLEAR DEL LABERINTO(Hipoacusia sensorial, nerviosa o de Percepcin . Evaluacin fisiolgica de la audicin. El estudio de la transmisin sea se efecta por medio de tres pruebas CLSICAS QUE SON Weber, Rinne y Schwabach. El objeto de ellas es comprobar si la eventual hipoacusia se debe: a que existe una prdida de la conduccin area(hipoacusia de conduccin si se trata de una perturbacin de la transmisin sea como ocurre en la afecciones del laberinto , nervio vias auditivas nerviosas(hipoacusia sensorial nerviosa de percepcin). Las pruebas de audicin constituyen lo que se llama: Acumetra Puede ser Fnica o Instrumental.
AUDIOMETRIA INSTRUMENTAL: Se realiza mediante los DIAPASONES, que son instrumentos metlicos vibrantes de acero o de magnesio cuyas ramas son de forma de U alargada y con un mango corto que sirve para cogerlos. Las frecuencias del juego completo de diapasones van desde 64 Hertz hasta los 4000 Hertz. Con ellos se puede hacer el diagnstico cualitativo de las hipoacusias y decir si se trata de una hipoacusia conductiva o de transmisin, una hipoacusia neurosensorial o de una mixta, lo cual se averigua mediante las siguientes pruebas:
Algodn Jeringas descartables Suero fisiolgico Electrocardigrafo con juego de agujas de metal Atenolol Solucin de Ringer para batracios
FISIOLOGA CARDIOVASCULAR
Corazn in situ: Propiedades del Corazn 1.- Fundamento El miocardio tiene propiedades tales como: automatismo, excitabilidad, conductibilidad y contractilidad que le permite al corazn trabajar como bomba, de una manera adecuada a las necesidades del organismo. Tiene inervacin autnoma y sistema de conduccin elctrica organizada. La actividad elctrica que genera puede ser captada por electrodos colocados en la superficie corporal y graficarse en ondas por medio del Electrocardigrafo. Existe una correlacin entre la actividad elctrica y el ciclo cardiaco. 2.-Objetivos a. Reconocer la anatoma del corazn y vasos b. Reconocer las fases del ciclo cardiaco-caractersticas del msculo cardiaco c. Detectar la actividad elctrica del corazn (Electrocardiograma) d. Relacionar la actividad elctrica y el ciclo cardiaco e. Demostrar los efectos de estmulos fsicos y qumicos (adrenrgicos y colinrgicos) sobre el corazn f. Conocer el efecto vagal 3.-Materiales - Animal para experimentar- sapo - Electrocardigrafo - Quimgrafo - Migrafo para cardiografa por suspensin - Carrete de estimulacin elctrica - Equipo de diseccin y 2 pares de guantes) - Sol. CIK 1% - Propranolol 1/1000
- Tablilla de fijacin - Tubos de ensayo (03) - Agua caliente (40), fra (80) - Sol. Ringer. - Adrenalina 1/2000 - Acetilcolina 1/5000 - Sol. C12Ca 1% - Atenolol 1/1000
4.-Experimentos 4.1 N 1: Exposicin del corazn-anatoma- ciclo cardiaco Anestesiar al sapo por destruccin del cerebro y mdula espinal Colocar al sapo en la tablilla en decbito dorsal-fijarlo con alfileres Cortar la piel del trax (tijera) y ampliar el corte desde el piso de la boca hasta la porcin media del abdomen Humedecer permanentemente las vsceras y tejidos con Sol. Ringer Reconocer la punta del esternn y cortar por su lado izquierdo Con tijera cortar el esternn en su lnea media Exponer al corazn e identificar el pericardio, cortarlo y observar las partes del corazn y vasosreconocer las fases del ciclo cardiaco Colocar el Electrocardigrafo y tomar un basal; relacionarlo con el ciclo cardiaco 4.2 N 2. Experimento de Gaskel- Estmulo fsico (temperatura) al corazn Colocar la tablilla con el sapo en forma vertical, (la cabeza hacia abajo); identificar la pared posterior del corazn. Observar los latidos por minutos (Seno Venoso, Aurculas y Ventrculo) Con tubo de ensayo (agua fra) tocar el Seno venoso y observar los latidos
Esperar que regrese al basal y proceder de igual manera con el tubo de ensayo con agua caliente; observar latidos Interpretar los eventos que acontecen 4.3 N 3. Cardiografa directa por suspensin- Efecto Vagal y Farmacolgico Fase A: Disecar el nervio vago derecho: Cortar piel y subcutneo hasta llegar al ngulo externo del maxilar Identificar y cortar y transversalmente al msculo cutneo pectoral derecho Colocar el brazo derecho a 45 con respecto al eje del cuerpo Observar debajo de la mandbula a dos nervios :glosofarngeo(lateral) y el hipogloso (medial), individualizarlos y seguir sus recorridos hasta la lnea media , en donde cambian de direccin y se dirigen al piso de la boca Entre los dos nervios, reconocer la arteria cartida primitiva (en el ngulo externo de la mandbula). Desplazarla hacia arriba e identificar por debajo al nervio vago derecho. Pasar por debajo del nervio vago un hilo mojado con sol. Ringer Fase B: Proceder a los siguientes experimentos: 4.3.A: Cardiografa directa- Efectos del vago en el corazn Colocar el clamp del Cardigrafo en al punta del ventrculo ; Aproximar el Quimgrafo a la palanca y obtener un trazado Determinar el ritmo, frecuencia y amplitud del trazado ; relacionarlo con el ciclo cardiaco Dibujar un grfico, sealando sus caractersticas Desconectar Electrocardigrafo.Estimular al nervio vago ( usar los electrodos del carrete de induccin ), observar los cambios en el latido (Durante/estimulacin desconectar / Electrocardigrafo) Estimular con una aguja a las aurculas y al ventrculo y reconocer la contraccin prematura morfologa y la pausa compensadora. 4.3.B Efecto de la Acetilcolina y Adrenalina Instilar una gota de acetilcolina 1/5000; observar efectos. Lavar c/Sol. Ringer Instilar una gota de adrenalina 1/2000; observar efectos. Lavar Instilar 1 gota de sol CIK 1%; observar efectos. Lavar Instilar 1 gota de sol C12Ca 1%; observar efectos. Lavar 4.3.C Ligadura de Stannius- Conduccin elctrica automatismo En el surco en el Seno venoso y las aurculas colocar un hilo humedecido con sol. Ringer y ligar. Observar efectos en el ECG. Analizar Una segunda ligadura entre las aurculas y el ventrculo ; ligar y observar ECG Observar la frecuencia de contraccin de aurcula y el ventrculo (Bloqueo aurculo- ventricular) 5. Graficar, analizar e interpretar los experimentos realizados
3. 4.
- Sol. Ringer (Sol A) - Sol. Ringer con C1Ca (1 gr/lt)(Sol.B) - Sol. Ringer con CIK (0.3 g/lt)(Sol.C) - Sol. Ringer con C1Mg (1g/lt)(Sol.D) - Quimgrafo - equipo de diseccin
4.1. Experimento N 1: Preparacin Anestesiar al sapo por destruccin del cerebro y mdula espinal Fijar al animal a la tablilla, con alfileres Exponer al corazn a travs de una incisin media toraco abdominal Cortar el pericardio, insertar el anzuelo, con un hilo, a la punta del corazn Levantar el corazn para exponer la vena cava y canularla Conectarla a un sistema de perfusin graduando la altura de los frascos Se conecta los frascos de perfusin a travs de tubos en Y a una va comn que seinserta en la vena cava Cada una de los frascos posee una llave para abrir o cerrar el flujo Frasco A: Sol. Ringer Frasco B: Sol Ringer con CLCa Frasco C: Sol.Ringer con CIK Frasco D: Sol. Ringer con CIMg Evitar que quede aire en el sistema de perfusin llenar un lado del sistema con sol. Ringer Se inicia la perfusin hasta que el corazn se contraiga
4.2. Experimento 2: Exponer al corazn al Cloruro de Calcio Prefundir al corazn con la sol. B. Registrar la actividad cardiaca y las caractersticas de las contracciones 4.3. Experimento 3: Exponer al corazn al Cloruro de Magnesio Prefundir al corazn con la sol. D. Registrar la actividad cardiaca y las caractersticas de las contracciones 4.4. Experimento 4: Exponer al corazn al cloruro de Potasio Prefundir al corazn con la sol. C. Registrar la actividad cardiaca y las caractersticas de las contracciones 5. Graficar y analizar los efectos de los iones Potasio, Calcio y Magnesio
2. Material Sujetos de prueba varones y mujeres, Electrocardigrafo, leptosmicos y pcnicos 3. Mtodo 3.1. Experimento N. 1 Colocar al sujeto en decbito dorsal y aplicar los electrodos de acuerdo a la convencin internacional. Estandarizar el aparato aplicando 1 mV , debiendo defleccionar la aguja inscriptora 10mm amplitud; la velocidad de registro del aparato deber ser 25 mm/seg. Realizar 6 trazados de derivaciones de miembros y 6 trazados de de derivaciones precordiales. Informar de acuerdo al siguiente protocolo:
Nombre: Edad: Peso: Informe electrocardiogrfico: Ritmo: Intervalo PR: Complejo QRS: Eje QRS Morfologa de P Morfologa de QRS: Morfologa de T: Conclusiones: Comentario: 4. Discusin
2. 3. -
Interpretar los resultados Experimento 4: Efectos del fri sobre la presin arterial Sumergir la mano en agua fra (5 C) por 30 a 60 segundos, hasta cubrir la mueca Determinar la PA La prueba se considera positiva si la PAS sube ms de 20mmHg y la PAD ms de 15 mmHg. Bibliografa
Mc Graw Hill: Practicas de Fisiologa. Interamericana William Ganong. Fisiologa Mdica Arthur Guyton y may John. Tratado de Fisiologa Mdica
La medicin de los volmenes pulmonares se realiza por medio de la Espirometra. Este procedimiento permite determinar todos lo volmenes pulmonares, exceptoel volumen residual, cuya medicin serealiza por mtodosindirectos. Emplearemos el Espirmetro Pneumotacmetro Fleich Datospir 120 En esta prctica el alumno adquirir competencia para entender: 1. 2. Cantidad de Aire inspirado y expirado normalmente: Volumen Tidal Volmenes pulmonares: V. espiratorio forzado(VEF); V. Inspiratorio Forzado(VIF) ; Volumen residual (VR) 3. Capacidades Pulmonares (relacin de dos ms volmenes): Capacidad Vital (CV); Capacidad funcional residual (CFR); Capacidad pulmonar Total (CPT) 4. Espacio Muerto (EM): relacin con el VT 5. Espacio Muerto fisiolgico (EMF): ejemplos 6. Volumen alveolar (VA) - Relacin entre VA, EM y VT 7. Ventilacin: (volumen de aire por minuto): tipos 8. Ventilacin alveolar: FR x VA 9. Ventilacin Pulmonar: FR x VT 10. Volumen Espiratorio Forzado al primer segundo (VEF1) (80% de la CV) 11. Diferencias procesos Obstructivos de Restrictivos pulmonares. 2. Equipo
Pinza Nasal Dispositivo bucal descartable para espirar e inspirar EQUIPO ESPIRMETRO NEUMOTACMETRO FLEICH DATOSPIR 3. Mtodo
3.1. Obtencin del Espirograma Sentar al sujeto de prueba, colocarle la pinza nasal y la pieza bucal unida al neumotacmetro. Constatar que no haya fugas de aire por la boca, borde de los labios, ni nariz. Permitir que el sujeto de prueba respire un momento con la pieza bucal, para que se acostumbre a ella. Unavez que la frecuencia respiratoria seha vuelto constantey la profundidad de la respiracin uniforme, conectar al espirmetropara obtener un trazado Usualmente se consigue en unos minutos). Acontinuacin solicitar al sujeto que realice las siguientes maniobras segn instrucciones del profesolr de Practicas.: a) Al final de una inspiracin normal (FIN) realizar una espiracin mxima y luego respirar normalmente. . b) Al final de una espiracin normal (FEN) realizar una inspiracin mxima y luego respirar normalmente. c) Al final de una inspiracin normal (FIN) realizar una espiracin mxima seguida de una inspiracin mxima, luego respirar normalmente. Mediciones de la capacidad ventilatoria. CAPACIDAD VITAL FORZADA (CVF) Es la mxima espiracin forzada y rpida realizada despus de una inspiracin profunda.
VOLUMEN ESPIRATORIO FORZADO DEL PRIMER SEGUNDO (VEF 1) Es elvolumen de aire espirado durante el primer segundo de la espiracin deuna CVF. Los valores normales son: 83% para el primer segundo, 94% para el segundo segundo y 97% para el tercer segundo. FLUJO ESPIRATORIO FORZADO DE 25% AL 75% (FEF 25-75%) Es la medicin del flujo espiratorio considerando el 50% del medio de la CVF. De esta medicin se obtiene el flujo espiratoria mximo medio, cuyo valor normal para un sujeto joven es de 150L/minuto. MXIMA VENTILACIN VOLUNTARIA (MVV) o mxima capacidad ventilatoria o mxima capacidad respiratoria Es el mximo volumen de aire que pueden movilizar voluntariamente los pulmones en un minuto. Velocidad del flujo medio respiratorio mximo (MMEFR) o velocidad del flujo espiratorio forzado (FEF 25-75%) Es la relacin del medio de la CVF y el TEM. Es el test ms sensible parael diagnstico de la enfermedad obstructiva. Se discutirn los trazados obtenidos con los respectivos profesores de Prcticas en cada mesa.
Cada tomo de hierro puede fijar una molcula de monxido de carbono, compuesto producido por la combustin incompleta del carbono (braseros, estufas, gas de alumbrado, motores a explosin). El monxido de carbono se combina ms fcilmente con la hemoglobina, unas 200 a 300 veces, que el oxigeno. El peligro de la intoxicacin con monxido de carbono radicaen el hecho de que la carboxihemoglobina no tranporta oxigeno.Si un 30% del total de la hemoglobina circulante esta ocupada con monxido de carbono aparecen las cefaleas y vmitos; si loesta un 50 %, la vida peligra; si lo est un 60-70 %,se produce la muerte por asfixia. 3) El hierro de la hemoglobina sufre constantemente procesos de oxidacin, formndose la metahemoglobina. Ocurre en un 3% del total de la hemoglobina por da. La conversin de una fraccin de hemoglobina en metahemoglobina tiene un efecto similar al de lacarboxihemoglobina, es decir, pierde la capacidad de transportar oxigeno. En condiciones normales "in vivo" la metahemoglobina es reducida a hemoglobina por accin de ladiaforasa del eritrocito, enzima que permite acoplar la NADH2generada por la gliceraldehido-fosfato-deshidrogenasaen la reaccin de Embden-Meyerhoff Entre los factores que ocasionan una acumulacin excesiva de metahemoglobina se encuentra: a) Lametahemoglobinemia hereditaria, por disminucin de la actividad de la diaforasa o bien por sntesis de hemoglobinas anormales, y b) La metahemog!obinemia adquirida., que ocurre como resultado de lai ingesta de frmacos oxidantes (nitritos, nitratos, derivados de la anilina) y desaparece cuando se suspende la administracin de las drogas. 4) La hemoglobina se combina con el dixido de carbono, producindose la carboxihemoglobina. Esta combinacin se efecta con la globina de la molcula, mediante la formacin de compuestos carbamnicos, reaccin que aumenta considerablemente cuando desciende la saturacin con oxgeno. 5) La combinacin de la deoxihemoglobina (Hb) con el oxgeno da lugar a la formacin de oxihemoglobina(HbO2). Esta combinacin es reversible yla proporcin de desoxihemoglobina que se transforma en oxihemoglobina al ponerla en contacto con el oxigeno depende de la presin parcial de oxigeno (PO2) del medio que rodea a la molcula. Cuando toda la hemoglobina est como oxihemoglobina, se dice que el contenido de oxigeno de la hemoglobina ha alcanzado la "capacidad de oxigeno" del compuesto, pero cuando el contenido de oxigeno de la sangre es menor que la capacidad de oxigeno, el contenido de oxgeno se expresa en trminos de porcentaje de saturacin (SO2). La saturacin arterial de oxgeno (SaO2), es la cantidad de oxgeno unida a las molculas de hemoglobina en relacin a la cantidad total de molculas presente en la sangre arterial. Contenido/ capacidad x 100 La medicin de la saturacin arterial de oxgeno requera de mtodos invasivos, puncin vascular arterial, que hacan difcil su utilizacin en estudios dinmicos yen estudios poblacionales. Esta limitacin se ha superado en laactualidad gracias al advenimiento de mtodos no invasivos, como la oxirnetra de pulso. La oximetra permite medir la cantidad de hemoglobina que es capaz de unirse reversiblemente al oxgeno [hemoglobina funcional uoxihemoglobina (HbO2)], en relacin a la totalidad de hemoglobina presente en sangre (oxihemoglobina, deoxihemoglobina, carboxihemoglobina ymetahemoglobina). En la mayora de circunstancias clnicas la carboxihemoglobina y la metahemoglobina, forrnas disfuncionales de la hemoglobina, constituyen tan slo una fraccin insignificante de la hemoglobina total. De tal forma que la medicin de la saturacin arterial de oxgeno puede ser representada por la siguiente frmula:
---------------------------- x 100
[HbO2]+ [ Hb ]
La oximetra de pulso mide la fraccin de luz transmitida a travs de los tejidos. La oxihemogobina absorbe msluz cerca del infra-rojo (vg. 900 nm); mientras que la deoxihemoglobina absorbe ms luz roja (vg. 660 nm). Por lo tanto, la absorcin de luz por la oxihemoglobina y la deaxihemoglobina es diferente en estas dos longuitudes de ondas. Los oxmetros de pulso (figura 1) basicamente estn constituidos por dos diodosque emiten luz en forma intermitente, y una clula fotosensitiva, capaz de medir por separado y en forma secuencial la luz transmitida a travs de la piel, en el orden de mil veces por segundo. Primero se ilumina el diodo que emite luz roja y luego el diodo que emite luz cerca del infra-rojo y la luz transmitida por los tejidos, en ambas longitudes de onda, son cuantificadas y cornparadas por la clula fotosensitiva para determinar el porcentaje de la saturacin arterial de oxgeno. Lasaturacin arterial de oxgeno normalmente vara entre 95a 100% en sujetos de nivel del mar y entre 84 a 92% en sujetos adultos, nativos-residentes en las grandes alturas. En recin nacidos vara entre 85 a 90%. Valores que se modifican con el ejercicio fsico y la altitud de residencia. Experimento N 1: MEDIDA DE LA SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO Materiales: - Oxmetro de pulso - Sensores de Oxgeno (Fig. 2) - Algodn - Alcohol Procedimiento: 1. Encender el oxmetro de pulso. 2. Limpiar y secar el dedo ndice, con algodn y alcohol. 3. Colocar el sensor de oxgeno en el dedo ndice. 4. Leer y registrar la saturacin arterial de oxgeno y la frecuencia cardiaca, tres veces. Resultados: Saturacin (%) 1ra. Medicin 2da. Medicin 3ra. Medicin Promedio 5. Determinar si la saturacin arterial de oxgeno vara en los diferentes dedos de la mano derecha e izquierda Saturacin (%) Fr. Cardiaca Derecha Dedo Pulgar Dedo ndice Dedo Cardinal Izquierda Derecha Izquierda Fr. Cardiaca
Dedo Anular Dedo Meique 6. Determinar si la postura modifica la saturacin arterial de oxgeno. Saturacin (%) Fr. Cardiaca
Posicin Decbito Posicin Sentado Posicin de Pie Experimento N 2: EFECTO DEL EJERCICIO FISICO SOBRE LA SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO Materiales: - Oxmetro de pulso - Sensor de oxgeno - Algodn - Alcohol - Sujeto experimental (alumno 1) - Sujeto experimentador (alumno 2) Procedimiento: 1. Con el sujeto experimental cmodamente sentado, monitorizar registrar la saturacin arterial de oxgeno y la frecuencia cardiaca, hasta lograr valores constantes con un + 5% de variacin (Medicin Pre-Ejercicio). 2. Desconectar el oxmetro y solicitar al sujeto experimental que abra y cierre rtmicamente ambas manos durante 10 minutos. 3. Al final del ejercicio motorizar la saturacin arterial de oxgeno y la frecuencia cardiaca (Medicin Post-Ejercicio) 4. Cada dos minutos monitorizar la saturacin arterial y la frecuencia cardiaca hasta obtener valores similares a las condiciones basales (Pre-Ejercicio) (1ra.-10ma. Medicin). Resultados: Tiempo (min.) Pre-Ejercicio Post-Ejercicio 1ra. Medicin 2da. Medicin 3ra. Medicin 4ta. Medicin 5ta. Medicin 6ta. Medicin 7ma. Medicin 8va. Medicin saturacin (%) Fr. Cardiaca
9na. Medicin 10ma. Medicin Experimento N 3: ISQUEMIA Y SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO Materiales: - Tensimetro - Cronmetro. - Oxmetro de pulso. - Sensor de oxgeno. Procedimiento: 1. El sujeto experimental deber sentarse cmodamente, colocando los brazos sobre la mesa de modo que quede a nivel del corazn, medir la saturacin arterial de oxigeno en el dedo ndice de ambas manos (1ra. Medicin). 2. Coloque el manguito del tensimetro, completamente desinflado, alrededor del brazo derecho, de manera que su borde inferior quede de 2-4 cm. sobre el pliegue del codo. 3. Aumentar la presin del sistema, con la pera insuflora, hasta alcanzar una presin de 200 mmHg. 4. Solicitar al sujeto experimental que abra y cierre rtmicamente la mano derecha hasta que el sujeto empiece a reportar dolor e inmediatamente medir la saturacin arterial en el dedo ndice de la mano derecha y luego en el dedo ndice de la mano izquierda (2da. Medicin). 5. Solicitar al sujeto experimental que siga abriendo y cerrando rtmicamente la mano derecha hasta el momento en que el dolor sea insoportable y medir nuevamente la saturacin arterial en ambas manos (3ra. Medicin). 6. Disminuir rpidamente la presin del sistema abriendo la vlvula de la pera isuflora y retirar el tensimetro. 7. Medir y registrar la saturacin arterial y la frecuencia cardiaca, cada dos minutos durante 10 min. hasta obtener valores similares al de las condiciones basales. (4ta.-6ta. Medicin). Resultados: Saturacin (%) Frecuencia Cardiaca ndice Derecho 1ra. Medicin 2da. Medicin 3ra. Medicin 4ta. Medicin 5ta. Medicin 6ta. Medicin ndice Izquierdo ndice Derecho ndice Izquierdo
SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO INFORME DE PRACTICA Nombre:............................................................................................................................Fecha:....../....../...... ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ANTECEDENTES PERSONALES: ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Nombre:..................................................................................Sexo:.................. Edad:..............aos Peso:............Kg Talla:.............. mts Peso Ideal:...............Kg Lugar de Nacimiento:............................................................... T. Resd. Lima:....................... Actividad Fsica: 1) Sedentaria: .......... 2) Ocasional: .......... 3) Frecuente: .......... ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------EJERCICIO FSICO Y SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO: Saturacin (%) Pre-Ejercicio Post-Ejercicio Tiempo (min.) de Recuperacin ISQUEMIA LOCAL Y SATURACIN ARTERIAL DE OXIGENO: Saturacin (%) BRAZO DERECHO: Basal Iniciar Dolor Dolor Soportable Tiempo (min.) de Recuperacin BRAZO IZQUIERDO: Basal Iniciar Dolor Dolor Soportable Tiempo (min.) de Recuperacin
Fr. Cardiaca
Fr. Cardiaca
FISIOLOGIA DE LA SANGRE
HEMATOCRITO
Es la relacin porcentual entre la cantidad de glbulos rojos y el plasma sanguneo en relacin a la sangre total. Esta determinacin es muy til para del diagnstico diferencial de anemias porque ayuda a determinar su intensidad y tipo.
Existen 2 mtodos: Macro y Micromtodo para determinar el Hematocrito. Procedimiento: Macromtodo de Wintrobe. Usando la pipeta Pasteur llenar con sangre el tubo de Wintrobe hasta la marca 100. Evitar formacin de burbujas. Centrifugar el tubo (contrapesado), a 3000 rpm. durante 30 minutos. Lectura en la escala ascendente en el lmite del paquete globular, excluyendo los glbulos blancos y plaquetas. Expresar el Hematocrito en valor porcentual. Valores Normales: Hematocrito Valores Referenciales % Recin Nacidos 60 Infantes Varones Adultos Mujeres Adultos 35 a 44 41 a 52 38 a 46
-----------------------------Procedimiento: Mtodo MICROHEMATOCRITO. Llenar el tubo capilar con la muestra de sangre. Sellar el extremo inferior con plastilina. Centrifugar a 12,000 rpm en la centrfuga para microhematocrito, durante 10 min. Lectura en la tabla Adhoc para este efecto. Expresar el valor porcentual. ------------------------------
HEMOGLOBINA
Es una molcula de estructura cuaternaria, tetramrica proteica, es el pigmento rojo portador del Oxgeno de los hemates. Est formada por un ncleo Hem y una protena llamada Globina. MEDICION DE LA HEMOGLOBINA:
Procedimiento Obtener 3 ml sangre venosa con anticoagulante. Medir 0.02 ml sangre con la pipeta de Sahl (0.02 ml). Limpiar la parte externa de la punta de la pipeta para eliminar la sangre adherida al exterior de la pipeta. Vaciar en contenido de la pipeta en un tubo conteniendo 5.0 ml de la Sol. de HCl 0.1 N Mezclar, por inversin, suavemente, sin agitar. Reposo 10 min. Lectura en el Espectrofotmetro, en Long. Onda de 540 nm. Colocar el espectrofotmetro en 0.00 Abs. ; leer luego la muestra problema. Anotar la lectura de Absorbancia. CALCULOS: Absorbancia del Problema X Factor de Calibracin = gm Hb % Valores Referenciales: Hemoglobina Valores Referenciales gm% Recien Nacidos 17 a 25 Infantes 10 a 15 Hombre Adulto l4a17 Mujer Adulto 12 a 16 Hombre de Altura 16.4 a 18.8
HEMOGLOBINA MEDIA GLOBULAR Hemoglobina media globular = Hb x 10 = Micro microgramos GR Valores Normales: 27 a 32 Micro microgramos
CONCENTRACIN DE HEMOGLOBINA GLOBULAR MEDIA C Hb Glob Media = Hb gr% Hto Valores Normales: 32 a 36% Referencias Bibliogrficas: Clinical Hematology Wintrobe ",. Lea Febiger. Phila USA 9 Edition. 1993 Medical Laboratory Technology. Lynch.Raphael Saunders USA 1989. Manual of Clinical Hematology. Joseph Mazza. Little Brown 1998. X 100
2.- Traumatismo de la sangre 3.- Contacto de la sangre con las clulas endoteliales daadas con colgeno y otros elementos titulares en el exterior del vaso sanguneo. En todos los casos LO PRIMERO QUE SE FORMA ES EL"ACTIVADOR DE LA PROTROMBINA"que transforma la Protrombina en Trombina e inicia los pasos posteriores de la Coagulacin (Va final comn). Se considera que el "Activador de la Protrombina" se forma por las dos Vas, aunque en realidad las dos vas interactan constantemente: LA VA EXTRNSECA:Comienza con el traumatismo de la pared vascular y de los tejidos subyacentes(lesin tisular) o un tejido extravascular sufre un traumatismo y entra en contacto con la sangre circulante. La clula endotelial vascular daada libera un Factor Tisular llamado Tromboplastina Tisular III, fosfolpidos y un complejo lipoproteico y se desata as la va Extrnseca.As pues, el tejido lesionado ha liberado esta serie de sustancias o complejo de factores (FACTOR TISULAR O TROMBOPLASTINAIIITISULAR) quetrabaja como una verdadera enzima activando al Factor VII ----VIIa.y ste en presencia del Ca++ activan al Factor X ---- Xa, ste a su vezactiva al V ----- Va el cual genera el COMPLEJO ACTIVADOR DE LAPROTROMBINA. (Observar las retroalimentaciones enzimticas en elcuadro de la cascada). Luego Fribringeno ---- Fribrina cogulo. VA INTRNSECA: Comienza con el traumatismo de la propia sangre o con la exposicin de la sangre al propio tejido colgeno expuesto por el traumatismo del vaso sanguneo lesionado, hay contacto de la sangre con epitelios distintos del vascular normal: Se Activa el Factor XII ---XIIa y se liberan fosfolpidos plaquetarios que contiene el Factor Plaquetario 3. Luego se activa el XI --- XIa en presencia de Ciningeno. Se activa luego el IX..IXa, y el IXa junto con el VIII..VIIIa activan al X ----- Xa. El Xa junto con el V y factores tisulares generan el COMPLEJO ACTIVADOR DE LA PROTROMBINA. Y sigue luego la va final comn de conversin de la Protrombina en Trombina y Fibringeno en Fibrina y el cogulo es consolidado por el factor XIII. Nota: El Calcio acelera todas las reacciones de la coagulacin excepto en los primeros pasos de la va intrnseca. Por lo tanto en AUSENCIA de iones de calcio la sangre no se coagular por ningunade las dos vas.
tiempo de aparicin de la primera gota y, luego con el papel de filtro ir secando cada gota, cada 30 segundos sin tocar la piel, hasta que deje de sangrar. Anotar el tiempo transcurrido. Valores Referenciales: 1 a 3 MIN
Procedimiento para TP: Usar tubos de 13x 100 mm: Pre incubar el plasma: en un tubo de ensayo,marcado (Px) colocar 1 ml del plasma en BM 37 C, por 3 min. (El saldo del plasma refrigerarlo).(No pre incubar mas de 10 min.) Pre incubar el Soluplastin: en otros dos tubos de ensayo colocar 0.2 ml de Soluplastin en cada uno y colocar en BM a 37C por 3 min.(No pre incubar mas de 10 min.). Pipetear 100 lambdas del plasma Pre incubado y aadir rpidamente al tubo conteniendo los 0.2 ml de Soluplastin, disparando simultneamente el cronmetro. Soluplastin pre incubado 37C ( incluye calcio) ml 0,2
Plasma pre incubado 37Cml Simultneamente, de inmediato iniciar cronmetro Mezclar y esperar cogulo y de inmediato frenar cronmetro Anotar tiempo en segundos.
Mantener el tubo dentro del Bao Mara cerca de una fuente de luz. Previo al tiempo estimado de coagulacin sacar el tubo del bao e inclinar suavemente por una o dos veces por segundo y detener el cronmetro en el momento exacto de la aparicin del cogulo, que se manifestara por la aparicin de muy discretos hilos de fibrina, en ese instante precisamente para el cronmetro. Repetir por triplicado esta prueba. Calcular el valor promedio en segundos. Valores Referenciales: 11- 12 sgs. + - 2 segs del control Normal El control Normal estar entre 10 a 13 segundos +- 0.5 2DS. Con estos valores en segundos a travs de una curva de calibracin podemos expresarlos en porcentaje de actividad protrombinica en relacin a los valores normales: examinemos el siguiente cuadro que muestra los valores porcentuales: Tiempo Protrombina en segundos 11 -12.5 13.5 15 17 19.5 22 24 36 37 40 55 65 Actividad Protrombnica Valores porcentuales Respecto de lo Normal 100 % 60 50 40 30 25 20 10 5 % %
El tiempo de Protrombina se encuentra alargado por defectos de Factor I (Fibringeno), Factor H (Protrombina), Factor V (Proacelerina F.Lbil), Factor VII (Factor Estable Proconvertina), y Factor X (Factor Stuart-Prower). El TP se encuentra prolongado en pacientes con dieta deficitaria en Vit K,infantes prematuros,infantes recin nacidos de madres que estn con deficits de Vit K (es la enfermedad hemorrgica del recin nacido). En la mala absorcin de las grasas, ictericia obstructiva, diarrea crnica, etc. El TP est prolongado tambin en el dao heptico severo (envenenamientos, hepatitis, cirrosis). Por Drogas (tipo coumarnico de la terapia anticoagulante) Presencia de anticoagulantes circulantes, hipofibrinogenemia adquirida o hereditaria. En resumen, debo decirles que el Tiempo de Protrombina es primariamente usado con TRES fines: 1.- Para la evaluacin de los desrdenes de la Coagulacin:para investigar la anormalidad de los factores involucrados en la vaExtrnseca V, VII, X, Protrombina y Fibringeno. Y debe ser usada junto con el tiempo de Tromboplastina Parcial Activada.
2.- Para controlar la terapia anticoagulante oral a largo plazo con coumadinas y derivados indanedionas. 3.- Evaluacin de la funcin heptica: el test del Tiempo de Protrombina es uno de los mas tiles para evaluar la capacidad del hgado en la sntesis de los factores del complejo Protrombnico: II, VII, yX .
DETERMINACIN DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADO. (TTPA APTT PTT). El TTPA es un mtodo de investigacin de la VA INTRNSECAde forma global XII, XI, IX, X, VIII, V, II y I.En esta prueba APPT se usa un activador especfico de la Va Intrnseca (del Factor XII) y es un Fosfolpido CEFALINA activado con caoln slice micronizado. El test de TTPA consiste en la recalcificacin del plasma en presencia de un exceso de cefalina fosfolpido, (que es un sustituto de las plaquetas y factor plaquetario) preparado a partir de cerebro de conejo y de un activador Kaoln tamponado. Esta prueba usa este activador especfico de la va intrnseca que es el Factor plaquetario -3 sustituido por la cefalina fosfolpido de cerebro de conejo y que tiene adems un activador kaoln en finsimas partculas slice micronizado(activador para el Factor XII)de la va intrnseca solamente y un tampon de piperazida estanolsulfnico. Adems este reactivo tiene una especial reactividad con la presencia de heparina lo cual lo hace especial para el monitoreo de la teraputica con heparina. Emplearemos en esta practica el mtodo de la casa WIENER LAB. Que usa cefalina fosfolpido y que se llama reactivo APTTEST METODO DE CASA WIENER LAB. PTT APT TEST A. REACTIVOS: Cloruro de calcio, listo para usar (0.0125 mol/l y ClNa 0.1 mol/l) B. Reactivo de APTT: al vial del liofilizado, aadir el volumen de agua indicado en el rasco que es 2.5 cc de agua destilada, tapar y mezclar suave por inversin, queda as listo el homogenizado. C. Obtencipn de la muestra de sangre: A 4.5 cc de sangre venosa aadirle 0.5 cc del anticoagulante oxlato de sodio. Centrifugar para separar el plasma. D. Distribuir los reactivos en la lsiguiente forma utilizando tubos de vidrios de 12 x 75 mm de dimetro o 13 x 100 ml: TUBO 1 Plasma desconocido PLASMA CONTROL NORMAL O ESTANDAR REACTIVO DE APTT (HOMOGENIZADO) 100 ul (LAMBDAS) 100 ul (LAMBDAS) 100 ul (LAMBDAS) TUBO 2
100 ul (LAMBDAS)
Mezclar e incubar por 3 minutos cada uno de los tubos a 37C. Al tubo N 1 aadirle solucin de cloruro de calcio pre incubado a 37 C . 100 ul. Inmediatamente disparar el cronometro, agitar suavemente y mantenerlo en el bao mara por 25 segundos solamente y luego retirarlo para observar la formacin del coagulo, que se manifestara por la
aparicin de filamentos de fibrina inmediatamente detener el cronmetro, este es el tiempo de Tromboplastina Parcial, valores normales de 33 a 48 segundos. Al tubo N2 que es el control normal le aadiremos luego Cloruro de calcio 100 ul y procederemos exactamente igual que el caso anterior y servir como control normal, cuyos valores normales van desde 33 a 48 segundos.
Tambin podemos emplear los reactivos de cefalina con caoln de la casa francesa que vemos a continuacin. Equipos, reactivos y materiales.-(idem que TP).Procedimiento para APTT: Emplearemos CK Prest activado (Cefalina con Kaolin)(APTT)(Diagnostica Stago-Francia). Reactivo N 1: Cefalina Reactivo N 2: Kaoln tamponado : Agitar el contenido del frasco N2 y transferido completamente dentro del frasco N1.Dejar que repose 30 min. para embeber el gel. Y despus de la imbibicin, agitar suave y circunferencialmente para homogenizar la mixtura. Solucin de Cloruro de calcio (C12Ca): 0.025 M Cl2 Ca anh ..1.38 gm Agua destil ..500 ml Pipetas automticas de 100 lambdas En un tubo ensayo 13x100mm que est previamente en el BMa 37 C colocar: Plasma paciente 0.1 ml Plasma paciente duplicado Plasma pacientetriplicado Control Normal React 1 Cefalina Bien Reconstituido y resuspendido Mezclar y pre incubar 37C Exacto Simultneamente: Aadir Cl2Ca 0.025M precalentado e INICIAR CRONOMETRO Mezclar y esperar cogulo. Parar cronmetro inmediatamente que aparezca el cogulo Anotar tiempo en segundos EXACTO 0.1 0.1 0.1 ml ml ml
3 minutos 0.1 ml
Los valores referenciales varan de 30 a 45 segundos y deben reportarse en relacin a un control normal Cuando el Tiempo Tromboplastina Parcial est prolongado, pero el Tiempo de Protrombina es Normal nos indica un a alteracin de alguno de los factores de la va intrnseca de tipo congnito: VIII, IX(Hemofilias), XI, XII.Si todos estos factores estn normales, puede haber una deficiencia de HMWK kiningeno (Factor Fritgerald).Tambin se encuentra alargado el APPT en deficiencias adquiridas condiciones anormales como: Enfermedades hepticas, Coagulopata por consumo, anticoagulantes circulantes, en la terapia anticoagulante oral, oen la heparizacin. en el tratamiento con inhibidores de la trombina como hirudina, argatroban., etc
Va Intrnseca
XII Pre K HMWK
Va Extrnseca
FACTOR TISULAR
Tiempo Tromboplastina Parcial Activada Celafina y kaoln (activador del XII) APPT
VII XI
IX
VIII
VA FINAL COMUN X V PF -3
Trombina Fibrina
Referencias Bibliogrficas:
Clinical Hematology Wintrobe. EJ. Lea Feboger. Phila. London. 1998
Technical HematologySimmons. Lippincott. 1999. Laboratory Methods by J. B. Henry. Saunders Co. 1999. The Principles and Practice of Blodd Grouping Addine G Mosby Co 1993 Fisiologa Mdica W Ganong El Manual Moderno 2002 An Introduction to Inmunohematology N Bryant W B Saunders Co. Pfila. London 1997
GruposSanguneos y Factor RH
Introduccin: En 1900, Landsteiner descubri que el suero de algunas personas aglutinaba los glbulos rojos de otras y que ste fenmeno podra ser usado para clasificar a las personas en diferentes fenotipos de grupos sanguneos. Se reconocen 4 fenotipos cimunes: O, A, B, y AB. Tambin se han identificado antgenos de los subgrupos del tipo A y B. Cada tipo de glbulo rojo transporta un Antgeno determinado, especfico, que le es caracterstico. El plasma de las personas tiene Aglutininas Naturales Anticuerpos diferentes al de su propio grupo, as por ejemplo las personas del Grupo A tienen aglutininas Anti B. El plasma de las personas del Grupo B tiene Aglutininas (Anticuerpos naturales) Anti A. El plasma de las personas del Grupo O tiene un ttulo bajo de Aglutininas Anti A y Anti B. (Es muy importante saber que algunas personas del Grupo O pueden tener un ttulo elevado de aglutinininas Anti A y Anti B y ser donantes peligrosos). Es absolutamente necesario y obligatorio hacer siempre una prueba compatibilidad mayor y menor entre el Donante y el Receptor antes de realizar una transfusin de sangre cualquier sea el tipo de sangre y/o Rh. El fenotipo ABO de una persona es determinado mediante reacciones de aglutinacin de los hemates con antisueros monoclonales Anti A, Anti B, Anti AB y antisueros de los Subgrupos correspondientes. Determinacin del Grupo Sanguneo: Este procedimiento se basa en la aglutinacin de los glbulos rojos (que transportan un Antgeno especfico), que se produce cuando est en presencia de su correspondiente anticuerpo especfico. Los reactivos usados para la tipificacin de los grupos del Sistema ABO contienen anticuerpos monoclonales IgM. Estos reactivos producirn aglutinacin directa de los glbulos rojos que transporten el antgeno especfico correspondiente. La determinacin del grupo sanguneo puede hacerse por el mtodo del tubo de ensayo por el mtodo en lmina portaobjeto. MTODO EN LMINA PORTAOBJETO: Materiales y Reactivos: Suero monoclonal Anti A Suero monoclonal Anti B Suero monoclonal Anti AB Lmina excavada o lmina portaobjetos Lancetas descartables Muestra de sangre Algodn y desinfectante Procedimiento para Determinar el Grupo Sanguneo 1.- Dividir una lamina portaobjetos en 3 secciones: izquierda, central y derecha con lpiz de cera marcador. La muestra de sangre puede obtenerse de la yema del dedo o por venipuntura. Colocar una gota suero Anti A en el lado izquierdo y una gota del suero Anti B en el centro y una gota del suero Anti AB en la derecha de una lmina de vidrio plana. Colocar una gota de sangre al lado de cada una de las gotas del antisuero correspondiente sin tocar los reactivos !!, para evitar contaminacin cruzada, y luego mezclar bien usando aplicadores o baguetas distintas.
2.- Hacer girar el porta objetos con la mano y observar si existe aglutinacin macroscpica. La aglutinacin se producir en unos pocos segundos. La lectura deber hacerse antes de que se seque la mezcla. El tiempo mximo habitual es de tres minutos.
INTERPRETACION DE LAS PRUEBAS CON ERITROCITOS EN LA DETERMINACION DEL GRUPO SANGUNEO Suero Anti Suero Anti Suero Anti Grupo Sanguineo -A -B - AB O A B AB + + + + + + +
+ : Indica aglutinacin macroscpica - : Indica que no hay aglutinacin -----------------------------FACTOR RHO (D) Aparte de los Antgenos del sistema ABO, existe otro que es el sistema de Antigenos del Rh que son de gran importancia fisiolgica y clnica. El Factor Rh (Aglutingeno o Antgeno) llamado as por que fue estudiado por primera vez en los monos del gnero Rhesius, es en realidad, un sistema compuesto por mucho Antgenos: Ver Tabla Fisher-Race Dce DCe DcE Dce dCe dcE dCE DCE Wiener Rho Rh1 Rh2 rh (hr) rh rh Rhy Rhz
El factor D, es con mucho, el ms antignico y el trmino Rh Positivo, como generalmente se usa, significa que el individuo tiene Aglutingeno D. El individuo Rh Negativo no tiene antgeno D y solo forma la aglutinina Anti D cuando se le inyectan clulas D positivas. El suero que se emplea rutinariamente para tipificar el Rh es un suero Anti D. El 85% de los caucsicos son Rh Positivos y el 15% restante Rh Negativos. Las personas Rh negativas (D Negativas) que reciben una transfusin de sangre Rh Positiva (an muchos aos antes) forman Anticuerpos Anti Rh y tienen ttulos Anti D apreciables y dan reacciones transfusionales graves cuando reciben una transfusin de sangre Rh (D) Positiva. Igualmente sucede cuando una madre Rh (D) Negativa concibe un hijo D positivo, porque pequeas cantidades de sangre del feto se filtran a la circulacin materna en el momento del parto y desarrollan ttulos elevados de aglutininas Anti Rh durante el post parto. Durante el embarazo siguiente las aglutininas desarrolladas contra el antgeno RH cruzan la placenta y llegan al feto que ha heredado el antgeno Rh
positivo del padre y se produce la reaccin Antgeno-anticuerpo que produce hemlisis y la Enfermedad Hemoltica del Recin Nacido (Eristroblastosis Fetal).
DETERMINACIN DEL FACTOR Rh. Materiales y Reactivos: Reactivo Antisuero Monoclonado Anti - Rho (Anti D) Lmina portaobjeto Varillas de vidrio aplicadores Lancetas descartables Desinfectante y Algodn Lpiz de cera marcador. Procedimiento: En una lmina portaobjetos se colocan 2 gotas de la sangre problema. Al costado de las gotas de sangre colocar una gota del Reactivo Suero Anti Rh. Mezclar bien. Observar inmediatamente para ver si existe o no aglutinacin. INTERPRETACIN: Sangre total paciente + Suero Anti- Rh (D) AGLUTINACIN NO AGLUTINACIN
RESULTADO
Esta Prueba DIRECTAMENTE demuestra la sensibilizacin de los eritrocitos que se ha producido in vivo. Materiales y Reactivos: Centrfuga Clnica y Microscopio Binocular Suero Antiglobulnico de Coombs (Gamma IgG) (Monoclonal) Hemates del paciente (Nio) Solucin Salina 0.85 % Tubos de prueba de vidrio 13 x l00 mm y 12 x 75 mm; algodn, desinfectante de piel (Alcohol iodado), ligadura venosa, aguja y jeringas descartables. Varillas de vidrio mondadientes de plstico, pipetas Pasteur. Procedimiento: Lavado previo de los glbulos rojos: 1.- Medir aproximadamente 0.4 ml de sangre y colocar en el fondo de un tubo de prueba de 13 x 100 mm, aadir luego 6 ml de solucin salina 0.85 %.Mezclar suavemente por inversin. 2.-Centrifugar a 3400 rpm. Por 30 segundos hasta que las clulas se empaqueten al fondo del tubo. 3.-Decantar la solucin salina completamente, limpiando la boca del tubo con papel servilleta. 4.- Repetir el lavado dos veces mas, aadiendo una pequea cantidad de solucin salina al comienzo y mezclar para suspender bien los eritrocitos; y luego aadir una mayor cantidad de solucin salina lavando hacia abajo la pared interna del tubo de prueba. Despus del tercer lavado el sobrenadante debe estar completamente limpio de sangre, absolutamente lmpido y transparente. 5.-Ahora, calcular (aproximadamente) el volumen de los glbulos rojos lavados, anotar este volumen, y aadir una cantidad de solucin salina como para hacer una suspensin de glbulos al2% 6.- En otro tubo de prueba colocar 2 gotas de esta suspensin al 2 %y aadir 1 gota de 1 suero de Coombs. 7.- Centrifugar a 5000 rpm. durante 15 segundos. 8.- Muy suavemente, con gran cuidado, percuta con un dedo el fondo del tubo, lo suficiente para dislocar el fondo celular y observar la aglutinacin tanto macroscpica como microscpicamente con objetivo en seco a 40 X. Resultado: La presencia de aglutinacinindica una Prueba de Coombs Directa POSITIVA, demostrando que los eritrocitos estn sensibilizados. Ausencia de Aglutinacin: Test de Coombs Directo: NEGATIVO. Interpretacin: Esta Prueba Coombs Directa es POSITIVA en los casos de: Eritroblastosis Fetal ,Anemias Hemolticas Autoinmunes y sirve tambin para el diagnstico de reacciones transfusionales debido a Incompatibilidad sangunea. TEST DE COOMBS INDIRECTO Detecta los anticuerpos presentes en el suero del paciente(madre) y para ello deben sensibilizarse primero in vitro algunos glbulos rojos de otra persona de grupo conocido (Tipo O por ejemplo) y luego de haber sensibilizado los glbulos rojos escogidos se les aplica el Coombs Directo. Para sensibilizar a los para glbulos rojos seleccionados (conocidos) se debe primero incubar el suero del paciente (madre) con los eritrocitos seleccionados (grupo O por ejemplo) para que las clulas se sensibilicen (es decir, se recubran con el anticuerpo srico) si es que est presente, y, despus averiguar si estn sensibilizadas aplicndoles el test de Coombs Directo, tal como hemos descrito lneas arriba.. TEST DE COMPATIBILIDAD CRUZADA MUESTRAS Y REACTIVOS Suero del Paciente Receptor TUBO A 2 gotas TUBO B 2 gotas
Hemates del Dador Suspensin al 2 % En salina Albmina Bovina 22% Centrifugar (serofuga a 1000 rpm) 1 minuto
2 gotas
2 gotas 2 gotas s
---------s
EXAMINAR ambos tubos por aglutinacin hemlisis. Luego INCUBAR ambos tubos A y B, en BM a 37 C por 15 minutos CENTRIFUGAR por 1 minuto a 1000 RPM. Lectura del tubo B por aglutinacin hemlisis. Luego CONTINUAR con el tubo "A": Tres lavados en sol salina 0.9 % Aadir suero de Coombs 2 gotas Centrifugar a 1000 rpm durante 1 min Lectura por aglutinacin hemlisis Interpretacin de Anticuerpos: TUBO "A":detecta incompatibilidad hacia: Sistema ABO , MN, P, Lewis TUBO "B":detecta incompatibilidad: Antic. Rh,Duffy, Kidd, Cellano y Antic.calientes.
FILOGENIA DE LA INMUNIDAD NO ESPECFICA.En los animales ms primitivos, como en los unicelulares, el mecanismo de resistencia es la fagocitosis la cual es esencialmente una funcin nutritiva: y en las formas evolutivas ms elevadas involucra tambin un mecanismo defensivo. A medida que evolucionan a formas ms complejas aprenden a reconocer los cuerpos extraos. En los invertebrados superiores se desarrollan un sistema vascular en el cual la fagocitosis se desarrolla adems por medio de clulas circulantes y en el ser humano por fin hay cinco clulas circulantes (leucocitos), tres de los cuales son fagocitarias o fagocticas (monolitos, polinucleares y eosinfilos). Entonces filogenticamente los elementos no especficos ms importantes, fagocitosis y respuesta inmunitaria vienen desde la forma ms primitiva de vida. Con la evolucin, estos mecanismos persistieron y fueron suplementados e implementados por la adicin de nuevos componentes tales como la
inmunidad especfica y los sistemas de amplificacin de esta inmunidad, por ejemplo el complemento, coagulacin, etc. Entonces, pues, en resumen, estos mecanismos antiguos no fueron reemplazados por la evolucin de las especies sino que ms bien continuaron y fueron reforzados adicionalmente con nuevas respuestas (amplificadoras). FILOGENIA DE LA INMUNIDAD ESPECFICA.La primera evidencia de la inmunidad especfica apareci en los vertebrados primitivos que presentan un sistema linfoide diseminado (elasmobrnquios) que generan inmunoglobulinas M. posteriormente en los anfibios apareci la inmunoglobulina G, en los conejos aparece la Ig A y en el hombre se aaden la Ig D y E. Con la evolucin filogentico tambin aprendieron a desarrollar sustancias y sistemas de amplificacin y reforzamiento de la eficienciade la resistencia como el sistema complemento. Invertebrados Amebas Fagocitosis Vertebrados En lampreas, ciclstomos, peces de rio, etc. Ig M
Anfibios Ig M Ig G
Mamferos Ig M Ig G IG A
ONTOGENIA DE LA RESPUESTA INMUNE EN EL HOMBRE.La maduracin del sistema inmune en el hombre comienza durante el segundo a tercer mes de la gestacin a partir de las clulas madres pluripotenciales o hemocitoblastos en la mdula sea se generan dos lneas celulares: Hematopoytica y linfopoytica, segn el siguiente esquema
Ig G
Monomrica
Ig A (secretora)
Ig M Ig D
Ig E
Proteccin Mucosas secreciones externas lgrimas, secrecin intestinal, bronquial Fijacin del complemento Reconocimiento de antgeno por las clulas B. Liberacin de histamina por los basfilos (alrgias) y de reaginas (prot inespecficas: sfilis, pian)
J, CS
70 -400
Mu Delta
40 -260 3
Monomrica
psilon
0.05
El rol fisiolgico de la inmunidad tumoral o respuesta bursal en la defensa del husped es la sntesis de anticuerpos (cuadro anterior) ayudando a prevenir la infeccin y esto lo hace por medio de varios mecanismos: opsonizacin, antitoxicidad, activacin del complemento, neutralizacin de los antgenos, unindose al antgeno ( bacterias o virus) lo neutralizan impidiendo su accin ganndole la entrada a la clula husped.
OBJETIVO DE LA PRCTICA.
En la presente prctica tiene por objeto determinar la respuesta bursal en personas normales y en pacientes con inmunodeficiencia por desnutricin, a travs de la determinacin cuantitativa de Ig A, Ig M, Ig G empleando anticuerpos especficos que formen inmunocomplejos insolubles, turbios, y su medicin espectrofotomtrica. MATRIALES Y REACTIVOS. Solucin salina fisiolgica 9/1000ml Solucin anticoagulante: heparina sdica, frasco por 5 ml, 500 U.I./ml (LIQUEMINE). Jering descartabla por 5 ml y aguja de 20x1. Antisueros: anti Ig A, anti Ig M, anti Ig G. Buffers Ig A, IgM, Ig G. Solucin patrn de protenas de concentracin conocida. Suero sanguneo o plasma heparinizado normal Suero sanguneo o plasma heparinizado de paciente desnutrido. 1 sapo grande para puncin intracardiaca Equipo de diseccin completo y estilete para obtener animal espinal.. Espectrofotmetro y microcubetas. Micropipetas automticas de 0 200 y de 0 a mil microlitos o lambdas. Tubos de prueba 10x75 mm Cronmetro PROCEDIMIENTO.-
Se repartir el trabajo en 5 mesas diferentes del siguiente modo: Mesa 1: determinara en un suero normal la Ig A Mesa 2: determinar en un suero normal la IgM Mesa 3. determinar en un suero normal la Ig G Mesa 4: determinar en la sangre de un sapo la Ig A (puncin intracardiaca con anticoagulante). Mesa 5: determinar en el suero de un paciente desnutrido la Ig G.
Distribuir las muestras y reactivos segn los siguientes protocolos para cada inmunoglobulina. Nota: las muestras problemas para el dosaje de cada inmunoglobulina debern ser diludas al 1/10 antes de empezar a trabajar: Suero problema: ----------------------------- -------------- 0.1 ml Solucin salina fisiolgica: (9 por mil) ------------------ 0.9. ml
DOSAJE DE Ig A
Suero diludo 1/10 : 50 ul Buffer IgA 900 ul Homogenizar y leer la absorbancia en 340 nm (DO1) llevando el aparato a 0 con agua destilada y luego agregar: Antisuero anti Ig A 80 ul Mezclar e incubar a temperatura ambiente Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2), llevando el aparato a 0 con agua destilada.
Leer la absorbancia nuevamente a 340 nm (DO2), llevando el aparato a 0 con agua destilada.
FUNCIN GLOMERULAR
DEPURACIN DE CREATININA ENDOGENA.
Es una medida muy aproximada de la funcin glomerular. La filtracin glomerular es un proceso mecnico que se produce como resultado de un juego de presiones: 1. La presin hidrosttica dentro del glomrulo es + 60 mmHg (70% de la presin artica) 2. Se oponen a la filtracin: a. La presin onctica proteica 32 mmHg b. La Presin Inters. caps. Bowman 18 mm Hg - 50 mm Hg Presin Neta de Filtracin +10 mmHg El rin trata, dentro de ciertos lmites, de mantener una presin de filtracin eficiente mediante mecanismos de aumento del tono de la arteriola eferente. En 24 horas se filtran 180 litros de lquido por los glomrulos pero se excretan solamente 1 a 1.5 litros de orina en 24 horas, lo que quiere decir que los tubulis reabsorben 178.5 a 179 litros en 24 horas. No solamente hay reabsorcin de agua a nivel tubular sino tambin de muchas otras sustancias del filtrado glomerular y que son tiles al organismo como glucosa, aminocidos, sodio, potasio, cloro, etc. El filtrado glomerular tiene todos los constituyentes y en la misma proporcin que en el plasma sanguneo exceptuando las protenas. La densidad del filtrado glomerular es 1010 y su pH es 7.40. Si este filtrado glomerular no fuese sometido a la accin tubular el organismo perdera grandes cantidades de agua, sales, elementos tiles como glucosa, aminocidos, etc. Junto con los productos finales del metabolismo de las protenas como la urea, creatinina, cido rico, y otros. Concepto de Clearance: El concepto de CLEARANCE fue introducido por Van Slyke, la palabra clearance significa depuracin o limpieza y se entiende por Clearance o Depuracin renal de una sustancia al nmero de centmetros cbicos de plasma que son liberados de dicha sustancia en la unidad de tiempo (minuto), por el rin. Si una sustancia es nicamente filtrada por el glomrulo, y no reabsorbida, ni secretada por el tbuli, su depuracin medir el nmero de ml que los glomrulos filtran en un minuto. Es el caso de la Inulina, el manitol, thiosulfato, etc., que solo se filtran por el glomrulo, pero no se reabsorben ni secretan por los tbulis renales. La depuracin de una sustancia se obtiene dividiendo la cantidad de dicha sustancia excretada en la orina en la unidad de tiempo entre la cantidad que existe de dicha sustancia en unml de plasma. Llamemos V el Vol. Minuto de orina; (Vol. recolectado/tiempo de recoleccin en minutos (cc/min.)) U a la concertacin de una sustancia x en orina mg/ml y P a la concentracin de la sustancia x en 1 ml de plasma mg/ml SI MULTIPLICAMOS U x V , NOS DARA LA CANTIDAD DE SUSTANCIA X EXCRETADA EN 1 min. y LA FORMULA DE LA DEPURACIN SER: C=UxV P
Generalmente se recolecta orina durante 12 o 24 horas. Se escoge la CREATININA para medir la filtracin glomerular porque el manejo renal de este metabolito es muy parecido al de la Inulina y Manitol, por eso su Depuracin es una medida muy aproximada de la filtracin glomerular, y se usa como ndice de funcin glomerular. EJEMPLO UN SUJETO TIENE 55 Kg. DE PESO Y MIDE 1.65 m, EL DOSAJE DE CREATININA EN LA SANGRE ES 0.9 mg/dl EN SUERO. Es decir 0.009 mg/ml entonces P = 0.009 mg/ml El volumen urinario fue de 1500 cc en 24 horas: 1500/1440 1.04 ml/min., es decir V = 1.04 ml/min. La concentracin de creatinina en la orina fue de 100 mg %, es decir 1.5 mg/ml. La depuracin ser: C = 1.0x1.04 = 115 ml/min. 0.009 Quiere decir que 115 cc de plasma a su paso por el glomrulo han sido liberados de toda su creatinina en 1 minuto. PARA NUESTRO PACIENTE DE PESO: 55 Kg. Y TALLA: 1.65 m. le corresponde una ASC. de 1.60 m2 de acuerdo al Nomograma segn la frmula de Du Bois. Depuracin corregida = depuracin sin corregir x 1.73 / ASC = ml/min./1.73 m2 de ASC ASC 115 mlmin 1.60 m2 X 1.73 m2 X= 115 x 1.73 = 124 ml/min./1.73 m2 ASC (DEPURACIN CORREGIDA) 1.60
Recolectar muestra de orina de 12 24 horas para dosaje de creatinina urinaria. Si se recolecta en frasco estril, la muestra guardada en refrigeracin puede durar 4 das. Medir exacto el volumen y tiempo de recoleccin. Anotar El mismo da de la recoleccin de orina obtener la muestra de sangre para el dosaje de Creatinina srica. 1.- Primer paso.- DESPROTEINIZACION de la muestra de suero: En un tubo prueba 13 x 100 mm 12 x 75: Medir 0.7 ml de suero y aadir 3.5 ml Reactivo N 1 (cido pcrico) Mezclar por inversin y reposo 10 minutos. Centrifugar a 3000 RPM x 5 min. Separar el sobrenadante del suero con la pipeta Pasteur y trasladarlo a otro tubo y marcarlo: Sobrenadante suero (SS). 2.- Disponer los tubos de prueba 13 x 100 mm segn la siguiente tabla y marcarlos segn lo indicado: Tubos Blanco Standard Sobrenad del Orina Dilucin Suero (SS) 1/50 Sobrenadante Suero SS ml 3 Sol St. : 2 mg/dl ml 0.5 Orina Dil 1/100 ml 0.5 Agua Destil. Ml 1.0 0.5 0.5 React N 1 (Ac.Pcrico 41.4 mMol/l) ml 2 2 2 React N 2 (Buffer Glicina alcalino pH 12.4) ml 0.5 0.5 0.5 0.5 Mezclar por inversin. Reposar 15 min. a Temp. Ambiente. 3.- Lecturas: Colocar el Espectrofotmetro en 510 mm de Long. Onda, y colocando el espectofotometro en 100% de T osea 0% de Absorbancia. Leer la Absorbancia de cada uno de los tubos anotando las absorbancias de: Blank, estndar, sobrenadante del suero (SS) y de la orina diluida. 4.Clculos.
a.- Creatinina Srica (Crs): mg/dl Crs = Conc StX Abs suero = 2 X Abs suero Abs Blank = mg/dl Abs St Abs blank Abs St Abs Blank b.- Creatinina en Orina (CrO): mg/dl Exactamente igual al anterior, sustituyendo las absorbancias del suero por las de la orina y se multiplica ademas por 100 (factor de dilucin de la orina). c.- Calcular la Depuracin Creatinina Endgena (Corregida por el ASC): Segn: Depuracin = U x V P X 1.73 m2 ASC m2
Nota: No se olvide de usar siempre las mismas unidades de medida para los clculos Por ejemplo: U = CrO en mg/ml V = Vol. Min ml/min P = Crs mg/ml Valores Referenciales Depuracin de Creatinina endgena:
Hombres: De 97 hasta 137 ml / min. / 1.73 m2 ASC Promedio 120 ml / min. / 1.73 m2 ASC (+/- 25) Mujeres: De 88 hasta 128 ml / min. / 1.73 m2 ASC Promedio 85 ml / min. / 1.73 m2 ASC Creatinina Srica Adultos Varones: 0.8 a 1.2 mg / dl Creatinina en Orina: 1.0 a 1.6 gm en 24 hs (15 a 25 mg/Kg. peso Corporal/24 hs) Depuracin de Creatinina Aumentada: Gestacin, Ejercicio fsico. Depuracin de Creatinina Disminuida: Insuficiencia renal glomerular Insuficiencia Cardiaca. Edad avanzada: Disminuye aprox. 1 ml / min. / ao despus de los 40 aos. Medicamentos nefrotxicos Mala recoleccin urinaria
CH2O: Es depuracin de agua libre de solutos que se elimina por la orina por minuto. Es igual al Volumen minuto menos la Dep Osmolar: CH2O = V Cosm La depuracin de agua libre es ese ncleo de agua en la orina en exceso de su depuracin osmolar. Durante la diuresis de agua caracterizada por la excrecin de gran volumen de orina diluida debido a la gran ingesta de agua, la diuresis se debe a la inhibicin de la hormona antidiurtica de la neurohipfisis. Durante la diuresis de agua pura, de cualquier duracin magnitud, la orina consiste de una mezcla de agua osmoticamente obligada que se excreta disolviendo los solutos que es igual a la depuracin osmolar, mas un vol. de agua osmticamente libre, es agua libre de solutos, literalmente es agua qumicamente pura, representada por CH2O. El flujo urinario total en este caso es la suma de estos dos trminos: V = Cosm + CH2O, de donde tenemos que: CH2O = V Cosm
Tc H2O: Durante la concentracin urinaria (Antidiuresis) la orina se concentra por encima de la Osmolaridad Plasmtica por sustraccin dependiendo de la de agua libre de solutos del filtrado glomerular, es agua que el organismo se reinfunde. En este caso el Vol. min. es menor que la dep. Osmolar. TcH2O = Cosm V representa el volumen de agua reabsorbido a nivel tubular, esto concentra la orina tubular.
12 11 10 9 8
HIPER TCH20 = Cosm - V1 HIPO Cosm > V1
ISO
Cosm
7 6 5 4 3 2 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
CH2O = V1 Cosm
HIPO V1 > Cosm
Procedimiento Para esta prctica se seleccion a una persona a quien el da anterior se le hizo un dosaje de Osmolaridad Plasmtica y luego al da siguiente se le someti a una prueba de hidropenia, es decir dieta seca, supresin total de lquidos pero con una dieta normal en protenas, hasta conseguir en lo posible una disminucin del 3% del peso corporal. A las 6 de la tarde miccion (vejiga vaca), y se descart esta orina y se anot la hora exacta. Luego empez a recolectar toda la orina emitida, en un mismo frasco hasta las 6 am del da siguiente. Dos horas mas tarde, 8 am, se obtuvo una segunda muestra de orina en recipiente a parte. En este momento se obtuvo una muestra para determinar Osmolaridad Plasmtica. Aqu termina el test de Concentracin. Inmediatamente se inici la Prueba de Dilucin, para ello se le dio a beber 20 ml de agua x cada Kg. de peso corporal, con el objeto de probar su capacidad para diluir la orina. Se recolectaron las muestras emitidas, cada una en frascos separados, cada 20 30 minutos, segn el protocolo del cuadro adjunto, numerndose todas las muestras emitidas durante casi tres horas. Al intermedio y al final de las recolecciones se obtuvieron muestras de sangre para determinar las Osmolaridades plasmticas, en el osmmetro. Para la prctica, a partir de estas muestras calcularemos las Osmolaridades Urinarias a partir de las densidades y con los datos obtenidos de Volmenes urinarios, tiempos de recoleccin, Uosm, y Posm se determinarn, para cada muestra, los valores de U/P, Cosm, TcH2O, y CH2O.
V1
Prueba De
12 Hs 2 Hs De Inmedia to se hizo:
CONCEN TRACIN Supres lquidos 720 840 1a 2a Inges ta de 20 ml agua/ Kg Peso 432 60 Y se Conti Nu Reco leccion 298 -----------
Prueba De
DILU CION
30 25 20 22 20 18 15
3a 4a 5a 6a 7a 8a 9a
295 -------------------
------
294
290
A continuacin graficar en papel milimetrado: Volumen Urinario (ordenada) vs Densidades(abscisa) Cosm((Ordenada) vs Vol. minuto (Abscisa), y determinar TcH20 y C H2O Interpretar los resultados de cada prueba.
REGULACION RENAL DEL EQUILBRIO ACIDO I BASICO Acidificacin y/o alcalinizaci6n urinaria.
Introduccin: Bases Fisiolgicas: Existen tres grandes procesos de regulaci6n del pH en los lquidos del organismo: el mecanismo de intercambio i6nico (entre las clulas y los lquidos), el mecanismo respiratorio yel mecanismo renal. Los riones son los reguladores mas eficientes del equilibrio cido bsico, en vista de que realizan la EXCRECION de los llamados cidos fijos propiamente dichos, los HIDROGENIONES H+; mientras los H+ se excretan,circulan en la sangre en equilibrio con los aniones correspondientes como el HC03- , con lo cual impiden cambios importantes en el pH. La cantidad de Hidrogeniones producidos en el curso del metabolismo es de hasta 100 mEq. diarios ( 4.1 mEq/hora), dependiendo de la dieta. El Rin se encarga de excretarlos, al mismo tiempo que recobra el HC03- .La orina de un sujeto sano, con una dieta normal mixta, es cida y su pH habitual es de 6.0; el filtrado glomerular tiene un pH de 7.40. Esta disminucin en el pH urinario, se debe a que estn siendo eliminados los Hidrogeniones por el rin. La magnitud de esta eliminacin es variable de acuerdo con las exigencias fisiolgicas del momento y se refleja en el pH de la orina que puede variar de 4,0 hasta 8.0, segn las necesidades del organismo. Cmo se logra excretar una orina cida ? Se logra por la adicin de H+ secretados por las clulas de los tbulis renales hacia la luz tubular lo cual permite la modificacin de algunos cidos que estn disociados en el plasma, pero que se convierten en formas no disociadas, al aumentar la acidez del medio. Por ejemplo las relaciones entre el Na2HPO4 y el NaH2PO4 es de 4 a 1 en el plasma y en el filtrado glomerular donde el pH es 7.40. Si se baja el pH por la adicin de H+ esta relacin disminuye hasta 4/100 (predominancia del Fosfato cido), y el pH urinario baja a 5.4. Si la relacin bajase hasta 1/99 (mayor predominancia an del fosfato cido) el pH llegar hasta 4.8. El resultado neto de la produccin de una orina cida es la ganancia de un Na+ y SE RECUPERA EL HCO3- La eliminacin del H+ a cambio de un Na+ permite as retener el HC03- y tener reserva de HC03para situaciones de emergencia. Puede as entonces el rin eliminar constantemente H+ sin vaciar el Na+ extracelular ni perder su bicarbonato en condiciones normales. En el caso opuesto cuando hay alcalinidad aumentada se produce en el rin el fenmeno inverso: Disminuye la excrecin tubular de H+, se reabsorbe menos bicarbonato, se excretar fosfato en la forma Na2HPO4 y se pierden 2 Na+ y el efecto neto ser la perdida de 2 Na+ (base), disminucin del HC03- del plasma y los cidos orgnicos sern eliminados a un pH ms alto en equilibrio con ms Na+ que se pierden. En resumen, pueden Ustedes pues darse cuenta que las diferentes funciones del mecanismo renal responden a requerimientos especficos: en el caso de la acidosis, hay un incremento de la excrecin de cidos y una conservacin de base; en la alcalosis, hay un incremento de la excrecin de base y conservacin de cidos y el pH de la orina cambiar correspondientemente y puede variar como les acabo de sealar en muestras de orina random desde pH 4.5 hasta 8.2. Esta capacidad de excretar cantidades variables de cido es de una gran importancia fisiolgica porque convierte al rin en el mecanismo de defensa final contra cualquier cambia del pH corporal o de la composicin anin-catin.
En la produccin de orina cida: Resultado neto:Ganancia de un sodio a cambio de excrecin de de un H+. Se recupera el NaHCO3. Eliminacin constante de H+ sin vaciar el Na+ del LEC.EI otro mecanismo para regular del pH que opera en el rin es la EXCRECION DEL H+ EN LA FORMA DE ION AMONIO NH4+ O AMONIOGNESIS, a partir del NH3 de la glutamina o los aminocidos. El NH3 por lo general no se encuentra en el filtrado glomerular y por lotanto proviene de las clulas del tbuli renal. Sin embargo su excrecin no es rpida sino tarda y solo empieza a funcionar despus de un lapso prolongado de acidosis .. En la figura podemos ver como se conserva el sodio por medio de la excrecin del NH4+. El Na+ ingresa a favor de la salida de un H+, el cual con el NH3 proveniente de la desaminacin de aminocidos ode la glutamina, se excreta como NH4+. AMONIOGNESIS:
El NH3 liberado por la Glutaminasa sirve para neutralizar las sustancias cidas: NH3 + H+ NH4 Se conserva sodio por medio de la excrecin de NH4, el sodio ingresa en favor de la salida de H+ EI NH3 neutraliza el H+ formando NH4; y el H+ con el NH3 se excretan como NH4. (ClNH4) TEST DE SOBRE CARGA CIDA CON CLORURO DE AMONIO (Durante tres das) Un da antes de la prueba se recolecta orina de 24hs para acidez de titulacin Basal. Luego se le prescribe una dosis de 0.1 gm de Cloruro de amonio por Kg de peso corporal, durante tres das consecutivos y se va recolectando la orina de 24 horas cada da, durante tres das. En cada una de las muestras de orina se medir el volumen y el pH, Acidez de titulacin fosftica y acidez amoniacal. Se determinar el pH sanguneo basal y al final del test. Fundamentode la prueba de sobrecarga cida de Cloruro de amonio para medir la capacidad de acidificacin del tbuli urinario: El Cloruro de amonio ingerido extrae H+ de la clula. El Hgado depura el amonio que llega por la circulacin portal y se produce la siguiente reaccin que libera H+:
PRUEBA DE ACIDIFICACIN URINARIA MODIFICADA. (Durante de 6 horas). Despus de un desayuno normal se recogen 2 muestras de orina con una diferencia de una hora, luego se le administra al paciente cloruro amnico a la dosis de 0.1 gm / Kg. Peso corporal por la va oral. Se dar en cpsulas de gelatina de 0.50 gm. De preferencia con tostadas y mermelada, recogiendo la orina durante las 6 horas siguientes. Se extraen muestras de sangre antes y tres horas despus de la administracin del Cloruro amnico. Con la carga administrada el pH urinario deber descender por debajo de 5.4 En nuestra prctica solamente haremos una prueba de corta duracin (2 horas) del siguiente modo: Equipos, Materiales y Reactivos pH Meter para determinacin de pH sanguneo Potencimetro para determinar pH en soluciones. Cinta para determinacin universal de pH 06 Cilindros graduados de vidrio o plstico de 500 ml 08 beakers de 50 ml 02 Pipetas de 5 ml graduadas al 0.1 02 Pipetas de 1 ml graduadas al 1/100 03 Buretas para titulacin qumica 03 Ehrlemeyers de 500 ml con agua destilada Fenolsulfotalena indicador (PSP) sol alcohlica 1 % o Rojo fenol. Sol. NaOH 0.1 Normal titulada, Formol 40 % 50ml.
Procedimiento Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por miccin espontnea (con deseos de orinar) y ser la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH sanguneo al inicio de esta prueba. Administraremos luego 400 ml de una solucin de Cloruro de amonio al 0.5% en 15 minutos. Iniciar la recoleccin de orina cada 20 min., por miccin espontnea, en muestras separadas durante dos horas. Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas. Determinaremos el pH sanguneo basal y al final del test. Titularemos la acidez Fosftica y Amoniacal urinaria con sol. valorada NaOH 0.1 Normal y retitulacin de la acidez amoniacal previo tratamiento con formol taponado: Colocar en beakers : 5 ml orina + 1 gota Roja fenol. Titular con NaOH 0.1N hasta rosado. Anotar gasto. Corresponde a la acidez del Fosfato cido. Cada ml NaOH gastado 0.1 mEq H+ Luego aadir 0.5 ml formol para extraer los H+ del Amonio y titular de nuevo la acidez amoniacal. Hacer la sumatoria de acidez fosftica + amoniacal, acidez total y luego calcular la (H+) urinaria en mMol / litro. Calcular la Depuracin de Hidrogeniones. Emplearemos una persona normal como CONTROL a la cual le haremos la misma prueba anterior sustituyendo el cloruro de amonio por una dosis de 25 ml de agua hervida y fra por kilo de peso corporal as: Colocar a una persona de prueba en reposo. Evacuar la vejiga por miccin espontnea (con deseos de orinar) y ser la muestra basal. (identificarla). Determinar el pH sanguneo al inicio de esta prueba. Administraremos luego 25 ml de agua x Kg peso corporal en 15 minutos. Iniciar la recoleccin de orina cada 20 min., por miccin espontnea, en muestras separadas durante 2 horas. Medir el Volumen y pH en cada una de las muestras de orina emitidas. Determinaremos el pH sanguneo basal y al final del test. Titularemos la acidez Fosftica y Amoniacal urinaria exactamente igual como el caso anterior con sol. valorada NaOH 0.1 Normal y retitulacin de la acidez amoniacal previo tratamiento con formol taponado, todos los clculos tambin se harn exactamente iguales al caso anterior. CLCULOS: En la prctica anterior ya hemos aprendido como se calcula la Depuracin de una sustancia, entonces si hemos recolectado un volumen de orina en un plazo de tiempo determinado podemos calcular el Volumen minuto y si conocemos las concentraciones de H+ urinarias y pH, y adems se conocemos el pH sanguneo estamos en condiciones de poder calcular las respectivas depuraciones y evaluar la Depuracin del in Hidrgeno. CONCLUSIONES: En la condicin Basal encontraremos que: Dep H+ > Vol min En la Acidosis como la concentracin de H+ urinaria es mucho mayor que la sangunea tendremos: Dep H+ ser > Vol. min. en la Alcalosis ser la inversa: Vol. min. > Dep H+ Para estos clculos recordar que: D=UxV/P y pH (H+) = -log (H+) = antilog pH -pH = 10
(H+)
Por mtodos especiales se detectan cantidades menores y se llama microalbuminuria. Para detectar presencia de albmina se emplea el mtodo del cido Sulfosaliclico al 3% as: Filtrar la orina a travs de papel de filtro. Colocar 1 ml de orina filtrada en un tubo de ensayo Aadir 1 ml de cido sulfosaliclico. Reposar 5 minutos. Si no se produce enturbiamiento no hay albmina: Negativo Si aparece enturbiamiento indica presencia albmina. El grado de turbiedad est en relacin con la cantidad e albmina presente. Hacer un control negativo sustituyendo el cido sulfosaliclico con 1 ml de agua destilada y proceder exactamente igual. Comparar grados de turbidez. Entre los mtodos rutinarios cualitativos, el ms simple: test de calor y acidificacin: Filtrar la orina a travs de papel de filtro. En tubo de ensayo hervir 3 ml orina filtrada, en mechero alcohol o Bunsen Bao Mara hirviente. Un precipitado blanco floculante al hervir indica: a) Protena fosfatos. b) Para diferenciar: Fosfatos: si al aadir cido actico 5% desaparece la turbidez: Fosfatos (Los fosfatos son solubles en medio cido). Si hay efervescencia: carbonatos presentes. Protenas: si al aadir cido actico 5% la turbidez aumenta. INVESTIGACIN DE GLUCOSA Reaccin de Benedict Cualitativa: Por reduccin del cobre el solucin alcalina y calor. Colocar 3 ml de Benedict Cualitativo en tubo de ensayo. Aadir 0.3 ml orina Hervir por 3 minutos en BM hirviente. Enfriar por reposo de 5 min. Positivo: Precipitado rojo ladrillo al fondo del tubo Negativo: Permanece azul o color verdoso sin precipitado. Dan resultado positivo: Glucosa, lactosa, levulosa, pentosas. TEST PARA CIDOS BILIARES Los cidos biliares reducen la tensin superficial de los lquidos que las contienen: Colocar 3 ml de orina en un tubo 18 x 150 ml. Espolvorese sobre la superficie peque cantidad de azufre pulverizado finamente (flor de azufre). Si el azufre cae al fondo enseguida, la orina tiene cidos biliares en cantidad mayor de 0.01 % ms. El cloroformo, alcohol, trementina, timol dan resultados falsos. INVESTIGACIN DE CUERPO CETNICOS En tubo ensayo colocar 3 ml orina, aadir 3 gotas cido actico. Mezclar. Aadir 1 ml de agua oxigenada. Luego, aadir unos 500 mg de nitroprusiato en polvo y agitar suave para disolver. Colocar en zona 1 ml de hidrxido de amonio. Anillo verde en la interfase: positivo a cuerpos cetnicos.
Referencias Bibliogrficas: Libro: Fisiologa Renal, Autores Manuel y Carlos Ramrez Velasco Editorial Escomel. Arequipa. Per. 1a Ed. 1988. Libro: Fisiologa Medica Guyton 1996 PhysiologyandKidneyDiseases, Brow, LondiniunEdCo.2002. First Ed.
Agua destil. ml. Bao Mara 37 C x 5'(Preincubacin,no aadir saliva todava Despus de los 5 minutos,recin aadir: Sol. amilasa salival ( diluda 1/20) Bao Mara 37C x 20'
0,6 si
0,6 si
0,6 si
Luego se determinarn los substratos remanentes y los productos de degradacin intermedia del almidn en cada digerido:1.2.3 y 4, por separado, empleando soluciones de Lugol y Benedict cualitativo.
A. DETERMINACION DEL SUSTRATO TUBOS N 5 DIGERIDO DEL TUBO 1:ml DIGERIDO DEL TUBO 2:ml DIGERIDO DEL TUBO 3:ml DIGERIDO DEL TUBO 4:ml HCl 0.05 N : mI Sol. De Lugol: mI 0.5 5 0.5 -
6 0.5 5 0.5
7 0.5 5 0.5
8 0.5 5 0.5
Mezclar, reposar 15': Observar los resultados B. DETERMINACION DEL PRODUCTO TUBOS N DIGERIDO DEL TUBO l:ml DIGERIDO DEL TUBO 2:ml DIGERIDO DEL TUBO 3:ml DIGERIDO DEL TUBO 4:ml SOLUCION DE BENEDICT: mI SOLUCION DE GLUCOSA 1 %: ml Bao hirviente: 100 X 5' Enfriar en agua helada y observar los resultados. Conclusiones: Influencia del pH salival y gstrico en la digestin del almidn. Influencia del Cloro sobre la actividad de la amilasa salival. Verificar la ubicacin de los puntos de hidrlisis del almidn por accin de la alfa amilasa salival 9 0.5 2 10 0.5 2 11 0.5 2 12 0.5 2 13 2 0.5
FUNCIN DE LAS CLULAS PARIETALES DEL ESTMAGO. ACIDEZ GSTRICA TOTAL ESTIMULADA Y DBITO ACIDO/HORA.
El Gastroenterlogo A. W. Kay describi un mtodo con el objeto de lograr una estimulacin mxima de las clulas apritales del estmago. En el contexto de la fisiologa gstrica, se considera condicin basal aquella en la cual el paciente est en completo ayuno despus de haber dormido unas 6 horas tranquilamente, sin estar expuesto a ningn estmulo visual, ni olfativo, ni auditivo. Bajo control fluoroscpico debe insertarse una sonda naso-gstrica de modo que la punta de la sonda se encuentre en la parte ms baja del cuerpo del estmago. En seguida el paciente se coloca en decbito lateral izquierdo y escupe toda saliva que tenga durante toda la prueba. En estas condiciones la sonda se conecta a una bomba de succin continua elctrica y el contenido del estmago es aspirado continuamente a presin negativa de 30 a 50 mmHg, se aspira primero todo el contenido gstrico de la noche anterior y se descarta. Se recolecta luego J.G. durante los primeros 30 minutos y se mide el volumen y se conserva esta primera muestra para trabajarla, es la muestra llamada BASAL. El flujo Gstrico debe ser chequeado a menudo lo mismo que la succin. Luego debe inyectarse un antihistamnico como Clorotrimetn 20 mg Intramuscular (para disminuir en lo posible los efectos colaterales de una fuerte dosis de Histamina que recibir luego). Se usa como estimulante de la clula parietal. Fosfato de Histamina a una dosis de 0.04 mg x Kg. de peso, va subcutnea, mejor Pentagastrina: 6 microgramos x Kg. peso. Se contina recolectando las muestras de jugo gstrico durante los lapsos de tiempo de 15 min. cada uno y que son los siguientes: 0 a 15 min.; 15 a 30 min.; 30 a 45 min. y 45 a 60 min. Se medir la acidez de titulacin e cada una de las muestras empleando NaOH 0.1 Normal, hasta la neutralizacin, empleando indicador de Fenoltalena solucin alcohlica al 1%. Procedimiento Identificacin de las Muestras Descripcin de los tiempos
II 0 a 15 min.
III 15 a 30 min.
IV 30 a 45 min.
V 45 a 60 min.
Tiempos de recoleccin Anotar los volmenes Recolectados cada vez (ml) De cada una de las muestras anteriores medir: Jugo Gstrico (ml) Agregar: Agua Destilada (ml) Indic. Fenoltalena (gotas) Agitar suavemente Anotar la cantidad gastada de NaOH 0.1 N en la titulacin Resultados segn Clculos (expresados en mEq/litro)
15 min.
15 min.
15 min.
15 min.
10 ml 10 ml II s
10 ml 10 ml II s
10 ml 10 ml II s
10 ml 10 ml II s
10 ml 10 ml II s
Luego se titularn cada una de las muestras obtenidas por separado, empleando Solucin de NaOH 0.1 Normal, gota a gota, agitando suavemente despus de la adicin de cada gota de NaOH, hasta la aparicin de un color rosado muy tenue y persistente, color que indica la completa neutralizacin del cido del Jugo Gstrico. CALCULOS: Ejemplo: Se gast 2.40 ml en la titulacin de una de las muestras Cada 1 ml de NaOH 0.1 N que se gaste en la titulacin indica 0.1 mEq. H+ 2.40 ml de NaOH 0.1 N gastados indicarn ------------ X mEq. H+ 2.4 x 0.1 = 0.24 mEq.H+ 1 0.24.10 ml de Jugo Gstrico usado x .............................1000 0.24 x 1000 = 24 mEq.H+ / lt de Jugo Gstrico 10 En este caso hemos calculado la concentracin cida expresada en mEq.H+/cada litro de jugo gstrico, estas son unidades de expresin qumica en rigor. Pero en fisiologa expresamos la acidez en dbito acido Es decir la cantidad de acidez generada en un tiempo determinado, por ejemplo cada 24 horas. En el ejemplo anterior encontramos 0.24 mEqH+ en el volumen de 10 ml de jugo gstrico usado, si en los primeros 15 minutos se obtuvieron 30 cc de jugo gstrico tendremos: En 10 ml jugo gstrico = 024 mEqH+ En los 30 ml obtenidos en los primeros 15 minutos tendremos: X X= 30 x 024 / 10 = 072 mEqH+ en 15 minutos.
Esto se llama debito acido. Y es el dbito acido de los primeros 15 minutos, asi continuaremos en la misma forma calculando el dbito acido para los 30, 45 y 60 minutos. La sumatoria de estos 4 valores ser por consiguiente el dbito acido/ hora o gasto acido de la clula parietal. Valores Referenciales Residuo Gstrico Despus de 12 hs de ayuno: 20 a 100 ml (generalmente menos de 50 ml) pH: 1.5 a 3.5 Acidez sin Estmulo: 1 a 4 mEq H+ / litro Acidez post estmulo (Kay) Pentagastrina: 10 a 120 mEqH+ / litro Dbito cido Basal/hora: Normal Hombres: 1 a 10.5 mEq/hora Mujeres: 1 a 5.6 mEq/hora Dbito cido Mximo/hora: Normal Hombres: 12 a 60 mEq/hora Mujeres: 8 a 40 mEq/hora
MOTILIDAD INTESTINAL
1. Introduccin El esfago, el estmago y los intestinos tienen inervacin parasimptica predominante. La acetilcolinaes el neurotransmisor de este sistema y acta como un agonista de la motilidad intestinal. 2. Material Equipo para rganos aislados Conejo Quimgrafo Equipo de diseccin Solucin de Ringer para mamiferos Suero fisiolgico Baomara a 40 C Baln de oxgeno
3. Mtodo 3.1. Experimento No. 1 Se sacrifica al animal y se realiza una laparotoma para resecar una segmento de intestino delgado de unos 20 centmetros. Se marca el extremo proximal. Se lava la pieza operatorio con suero fisiolgico, se le sumerge en un bao de solucin de Ringer a 40 C y se fija a la palanca inscriptora de1 quimgrafo. Se mantiene oxigenado e! medio por burbujeo constante. Se realiza el registro de la actividad intestinal basa1. . 3.2. Experimento No. 2 Se aade unas gotas de acetilcolina en el baornara yse obtiene un nuevo registro en el quimgrafo. 3.3. Experimento No. 3 Se aade unas gotas de pilocarpina en el baomara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo. 3.4. Experimento No. 4 Se aade unas gotas de adrenalina en el baomara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo. 3.5. Experimento No. 5 Se aade unas gotas de pilocarpina en el baomara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo. 3.6. Experimento No. 6 Se aade unas gotas de atropina en el baomara y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo. 3.7. Experimento No. 7 Se suspende la oxigenacin y se obtiene un nuevo registro en el quimgrafo. 3.8. Experimento No. 8 Se introduce un pedazo de algodn embebido en aceite en el extremo proximal intestinal y se observa su progresin. 4. Discusin
MOTILIDAD GASTRO-INTESTINAL
Objetivo El objeto de esta prctica es estudiar los movimientos peristlticos rtmicos del aparato gastrointestinal y el control que el Sistema Nervioso Autonmico tanto Simptico como Parasimptico ejercen sobre la motilidad gstrica e intestinal; adems demostraremos la influencia de los neurotransmisores acetilcolina y adrenalina sobre las funciones de contraccin y relajacin de la musculatura lisa gastrointestinal. Introduccin La actividad motora del estmago est gobernada fundamentalmente por dos tipos de inervacin redes de fibras nerviosas: una intrnseca a la va gastrointestinal y otra extrnseca. a.-La inervacin intrnseca del estmago comprende dos plexos interconectados el plexo Mientrico de Auerbach y el plexo submucoso de Meissner dentro de la pared estomacal, como lo hacen a travs de toda la va intestinal. Estos plexos son directamente responsables de la peristalsis y otras contracciones. Como este sistema es continuo entre el estmago y el duodeno, la peristalsis del antro influencia la peristalsis del bulbo duodenal. b.- La inervacin extrnseca es autonmica dual y proviene del Sistema Nervioso Autnomo: la Simptica de actividad noradrenrgica inhibidora, va plexo celaco; y la Parasimptica de actividad colinrgica excitatoria, va del Nervio Vago. La inervacin simptica inhibe la motilidad lisa, pero contrae los esfnteres; y la parasimptica estimula la contraccin de la fibra m. lisa pero relaja los esfnteres. Estos dos sistemas juntos modifican la actividad motora coordinada que se origina independientemente en el sistema intrnseco. Existe adems un marcapaso controlador en la curvatura mayor del cuerpo del estmago dentro de la capa muscular longitudinal. Este marcapaso es responsable del ritmo y frecuencia de las contracciones gstricas y genera una onda excitatoria que tiene un ritmo elctrico basal (REB)de una frecuencia de 3/min. y una velocidad de 1 cm./seg. cuando pasa por el cuerpo del estmago, y aumenta hasta 3-4 cm./seg. cuando pasa por el antro. El sistema nervioso entrico se conecta con el SNC mediante fibras simpticas y parasimpticas, pero es capaz de funcionar de manera autnoma sin estas conexiones. El plexo mientrico inerva las capas de msculo liso circular y longitudinal y tiene a su cargo principalmente el control motor; en cambio el plexo submucoso inerva el epitelio glandular, las clulas intestinales endocrinas y los vasos sanguneos de la submucosa y adems est involucrado sobre todo en el control de la secrecin intestinal. Los neurotransmisores en el sistema nervioso entrico incluyen la acetilcolina, noradrenalina, serotonina, Gaba, ATP, Oxido ntrico, CO y numerosos pptidos, CCK, endotelina 2, SustanciaP, Neuropptido Y, VIP, etc. El PERISTALTISMO es una respuesta refleja que se inicia cuando la pared del intestino se elonga por el contenido en el lumen y se presenta en todas las partes de la va gastrointestinal desde el esfago hasta el recto. Esta elongacin inicia una onda de contraccin circular detrs del estmulo y una de relajacin en el frente de ste. Esta onda de contraccin se mueve en direccin oral-caudal para impulsar hacia adelante los contenidos del lumen a una velocidad variable entre 2 a 25 cm. /seg. Aunque la actividad peristltica puede aumentarse o disminuirse mediante la actividad autnoma del intestino, su presencia es independiente de la inervacin extrnseca. El estiramiento local libera serotonina que activa las neuronas sensitivas que a su vez activan el plexo mientrico. Las neuronas colinrgicas que pasan en direccin retrgrada en este plexo mientrico activan a las neuronas liberadoras de la sustancia P, as como de acetilcolina y dan lugar a la contraccin del msculo liso. Al mismo tiempo, las neuronas que pasan en direccin antergrada activan a las neuronas secretoras de NO, VIP, Y ATP para producir la relajacin que precede al estmulo. El REB del msculo liso gastrointestinal trabaja a un potencial de membrana entre -65 y - 45 mV. Este REB se inicia en las clulas intersticiales de Cajal, que son clulas mesenquimatosas estrelladas similares al msculo liso y actan como marcapasos, estas clulas de Cajal envan mltiples prolongaciones hacia el msculo liso intestinal. .El REB por s solo rara vez produce contraccin muscular, pero los potenciales de espiga sobrepuestos a la mayor parte de las porciones despolarizadas de la ondas del REB incrementan la tensin (contraccin) muscular. Las despolarizaciones se deben al ingreso del Calcio y las
repolarizaciones a la salida del K. Muchos polipptidos y neurotransmisores afectan esta onda de ritmo elctrico basal por ejemplo la acetilcolina incrementa la cantidad de espigas y la tensin (contraccin de la F m lisa) en tanto que la adrenalina disminuye la cantidad de espigas y la tensin. En el estmago la frecuencia del REB es de 4/min., en el duodeno 12/min., colon, 9/min., ciego 16/min. Por lo tanto el rol fisiolgico del REB es coordinar la actividad peristltica y otras actividades motoras gastrointestinales. Las contracciones se producen solamente durante la parte despolarizante de las ondas. Si hacemos una vagotoma el peristaltismo estomacal de hace irregular a veces catico. La motilidad gastrointestinal y la secrecin es regulada tambin por polipptidos biolgicamente activos que son segregados por las clulas nerviosas y las clulas glandulares de la mucosa, algunas son paracrinas y otras endocrinas y se les llama hormonas gastrointestinales, aunque sus efectos fisiolgicos son discretos, sin embargo sus alteraciones pueden producir enfermedades del trnsito intestinal (ejemplo algunas diarreas motoras). Se agrupan en familias, y entre algunas ellas tenemos: Familia de la Gastrina: Gastrina y CCK ( CCK-PZ: Colecistoquinina-pancreocimina) Familia de la Secretinas: GIP, Secretina, VIP, enterogastrona. Otros grupos: Motilina, Sustancia P, Serotonina.
Materiales, equipos, animales de experimentacin y reactivos.-Para cada mesa de trabajos prcticos: Reactivos: Materiales:
01 sapo vivo Tabla de corcho para soporte y fijacin anfibio Alfileres para sujecin extremidades 01 par guantes descantables Equipo de diseccin quirrgico Estilete para seccin medular y tijera, algodn 04 jeringas descartables de 3 ml 01 Aguja descartable de 18 G x 1 01 Aguja descart. doblada en 90 3 hilos blancos de 15 cm. largo N 50 para las ligaduras Cnula de vidrio 2mm dim. ad-hoc
Solucin de Ringer para anfibio fresca a 30 C Col. Azul de metileno Sol. Acetilcolina 1% Sol. Adrenalina 1% Sol. Atropina 1% Prostigmine (Neostigmina): 0.5 mg / 1ml ampolla parasimpticomimtrico.
Procedimiento l.- El alumno realizar la preparacin de sapo espinal segn lo aprendido para producir el shock espinal en el sapo (Ver prctica de reflejos en animal espinal) y realizar la hemostasia con algodn por compresin. 2.- Diseccin: Sujetar luego el animal en posicin decbito dorsal en la tabla de fijacin con los alfileres y realizar un corte en toda la lnea medio abdominal y seguir disecando por planos hasta llegar al peritoneo. 3.-Abrir la cavidad abdominal en la misma forma y localizar el estmago cardias, estmago, ploro e intestinos. Observar de inmediato y muy cuidadosamente los movimientos peristlticos espontneos del estmago e intestinos. Anote estas observaciones basales . Si estuviesen ausentes estimularlos mecnicamente. 4.- Con un algodn mojado en Ringer-Batracio a 30 mantener en todo momento la preparacin bien hmeda con instilaciones abundantes de la sol. Ringer. 5.- Aplicar sobre el estmago e intestino (en cada uno) 6 gotas de cada una de las siguientes soluciones en el orden: a, b, c, d, e siguiente: a.- Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer b.- Adrenalina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer c.- Fisostigmina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer d.- Atropina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer e.- Al final, nuevamente Acetilcolina: observar visualmente la respuesta, anotar y lavar con Ringer. Graduar las observaciones visuales de relajacin o contraccin con cruces, comparando con los movimientos peristlticos espontneos del inicio del experimento. Conclusiones y Comentario
consumo de oxgeno.
Las hormonas tiroideas incrementan el metabolismo basal, el consumo de oxgeno por los tejidos y la produccin de calor por el organismo. Estas hormonas activan los procesos oxidativos celulares. En humanos, extirpacin de la glndula tiroidea disminuye el consumo de oxgeno a cifras inferiores, del 30 a 50% de lo normal. En los hipertiroideos aumenta el consumo de oxgeno. EI aumento odisminucin del metabolismo basal a partir de la determinacin del consumo de oxgeno se emple como un mtodo diagnstico del hipertiroidismo y del hipotiroidismo. En los sujetos hipertiroideos con sintomatologa definida el metabolismo basal est incrementado en 40 a 60% y puede superar ms del 100%. Al aumentar el metabolismo disminuyen las reservas de carbohidratos y se emplea grasas para cubrir las necesidades metablicas. Este produce prdida de peso y aumento de la temperatura corporal. Debido a que los mecanismos de disipacin de calor estn sobrecargados, los sujetos hipertiroideos toleran muy mal los ambientes clidos. Las hormonas tiroideas aumentan la frecuencia cardiaca y la presin arterial sistlica. EI sujeto hipotiroideo presenta sntomas opuestos: metabolismo bajo, temperatura inferior a la normal, depsito de grasa y reacciones lentas. En la presente prctica se comparar los metabolismos de ratones hipotiroideos e hipertiroideos con ratones eutiroideos ( normales). Diez a quince das antes del experimento se toma ratones machos adultos jvenes, de la misma edad y similar peso. Se los coloca en jaulas separadas, que se rotulan eutiroideo, hipertiroideo e hipotiroideo. Los ratones sern pesados todos los das. EI ratn hipertiroideo recibe diariamente 15 ug. D levotiroxina. EI ratnhipotiroideo recibe diariamente 1.25 g de metimazol. Material Ratones Jaulas Jaulas cmaras metab1icas Cal sodada Metimazol Levotiroxina Termmetro Plastilina
Mtodo Experimento N 1
Se coloca en tres jaulas metab1icas a un ratn eutiroideo, uno hipertiroideo y uno hipotiroideo. Las jaulas o cmaras metab1icas deben contener cal sodada. Se recomienda que los animales reciban luz, ya que esta permite que se mantengan quietos, pues los ratones son muy susceptibles a los ruidos a los movimientos bruscos. Se coloca un termmetro dentro de cada jaula metablica. Se espera cinco minutos para que se equilibre la temperatura dentro de la jaula y se registra. Se humedece el interior de la pipeta colocada en la tapa de la jaula metab61ica con agua jabonosa.
Se coloca una pelcula de espuma de jabn al final de la pipeta y se observara como, a que medida que el animal va consumiendo el oxgeno, la pelcula de jabn va moviendo a lo largo de la pipeta. EI CO2 producido ser absorbido por la cal sodada. Con un cronmetro se determina el tiempo requerido para consumir 1 cm3 de oxigeno y se convierte los segundos en fraccin centesimal. A continuacin se calcula en consumo de oxgeno por minuto del animal y se convierte litros por hora. Este volumen calculado se encuentra en condiciones ATPS y debe ser convertido en condiciones STPD de acuerdo a la siguiente frmula:
o Vo STPD = {[Vol ATPS x (Pb - PH2O / Ts)] / 760} x [273 / (273 + Ts)] Donde: Vol = L/h Pb= presin baromtrica. PH2O= presin de vapor de agua Ts= temperatura del aparto EI valor cal6rico del oxigeno varia segn el cociente respiratorio. Con una dieta promedio el cociente respiratorio es 0.8 y el equivalente cal6ricodel Oxgeno es 4.8 Kcal/l, por 1o que el nmero de caloras por hora ser: Cal/h = 4.8 cal/l x L/h Dado que el nmero de caloras es proporcional al peso y a la superficie corporal, entonces: S=K x W2/3 o S = K x logW X 2/3 Donde: S = superficie corporal K =constante de von Muralt
Equivalentes calricos a diferentes Cocientes respiratorios (R) R no proteico 0.70 0.75 0.80 0.85 0.90 1.00
xml O2
2)
Consumo de O2, enml/h , en condiciones ATPS El ratn consume 1,5 ml de oxgeno en 1 min El ratn consumir x ml de oxgeno en 60 min Consumo de O2 en 1 hora = x ml O2
/h
90 ml de O2 / h en
condiciones ATPS Consumo de O2 en ml/h en condiciones STPD a) 90 ml/h = 0,09 L/h b) Encontrar el factor de conversin: Si la presin baromtrica fue de 754 mm de Hg y la temperatura fue de 37C encontramos en la tabla que el factor de conversin es 0,867. c) Multiplicando el consumo de O2 en ml/h por el factor de conversin tendremos: (0,09 L/h) (0,867)= 0,078 L de O2/h como consumo en condiciones STPD. 4) Cuntas Kcal se habrn producido cuando el ratn en su metabolismo consumi 0,078 L/ de oxgeno, en condiciones STPD? a) Sabemos que en una dieta mixta el equivalente calrico del O 2 es de 4,825 Kcal/L de oxgeno. b) Entonces podemos calcular las Kcal/h producidas por nuestro ratn, razonando as: 1L de 02 .equivale a 4,835 Kcal 0,078 L de O2 equivale ax Kcal O sea: 3)
x Kcal
c)
0,367 kcal / h
Pero para poder comparar un indivduo con otro debemos referir este resultado al rea de superficie corporal (ASC).
i) ASC =
11,4( peso 2 / 3 )
105 cm 2 10.000
iv)
5)
Cuntas Kcal por m2/h produce nuestro ratn? Si el animalito produce 0,376 kcal Entonces producir x Kcal X Kcal/m2/h= por por 0,01 m 2 1,00 m 2
ATPS: Ambient Temperature Pressure saturated (con vapor de agua) STPD: standard temperatura and pressure dry El consume de Oxgeno y CO2 producido son estandarizados a la temperatura standard (0C) a la presin baromtrica a nivel del mar (760 mm de Hg) y a condicin de gas seco. Profesor Enrique Avila Zamora Lima 13 de noviembre del 2010
Fig N 2
FIG N 2
Figura N3
El Corion Placentario secreta a partir del TERCER mes la PROGESTERONA, hCG , Relaxina, Somatotrofina o Lactgeno placentario humano (HPL)
Fig.
TOLERANCIA A LA GLUCOSA
Introduccin La glicemia en condiciones basales, vara entre 70 y 110 mg/dl, ( 0 3.8 a 5.6 mmol/L. )En la diabetes mellitus se presenta elevacin de la glicemia en ayunas En la prctica vamos a estudiar la respuesta del organismo a una carga de glucosa es el llamado test de Tolerancia a la glucosa..
Material Sujeto de prueba en ayunas. Glucosa 75 gr. Anhidra disuelta en 300 ml de agua ms zumo de tres limones. Glucmetro "Glucotrend" con las cintas reactivas. Balanza. Tallmetro. Tubos de prueba. Pipetas. 1 fiola de 100 ml. Matraz de 1000 ml. Reactivos para anlisis de glucosa en orina: Sulfato de cobre (puro cristalizado) 17.3 g Citrato de sodio o potasio (cristalizado) 173.0 g Carbonato de sodio (cristalizado) 200.0 g Agua destilada, c.s.p. 1000.0 ml
Peso previo: Colocar el chip del glucmetro. Encender y ver el nmero de cinta reactiva que reconoce para su uso. Colocar la tira reactiva en el glucmetro para su reconocimiento. Mtodo Experimento N 1 Pesar y tallar al alumno en estado de ayuno de 12 horas. Hacer una determinacin de glicemia en ayunas y despus administrar una solucin de 75 gr de glucosa. Obtener muestras de sangre cada 30 minutos por 2 horas y determinar la glicemia. Simultnea buscar presencia de glucosa en orina.Construir el grfico correspondiente. EXPERIMENTO N2: Test de Benedict EI test de Benedict puede detectar concentraciones tan pequeas como 0.15 a 0.2 por ciento de glucosa. La solucin de Benedict no es reducida por el cido rico, la creatinina, c1oroformo aldehdos.
luz del tbuli proximal al interior de la clula tubular y desde sta a la sangre y disminuye la reabsorcin tubular de glucosa., es decir, intoxica al tbul renal produciendo glucosuria renal, (que es una afeccin tubular en la cual aparece glucosa en la orina con niveles normales de glucosa en la sangre). Sabemos que los estudios con micropuncin han demostrado que la glucosa es reabsorbida completamente en el tubo proximal y su depuracin es cero. La administracin del txico floricina produce aclaramiento de la glucosa y esta tasa de aclaramiento de la glucosa va aumentando hasta igualar a la inulina, esto demuestra que la floricina disminuye la reabsorcin tubular de glucosa y puede llegar a producir un bloqueo completo de la reabsorcin tubular de la glucosa y as se explica presencia de glucosuria renal por floricina. En la Diabetes Mellitus el orgen de la glucosuria es diferente siendo el mecanismo primario la hiperglicemia y cuando la glucosa en el plasma va incrementando hasta llegar a un nivel en que las clulas tubulares proximales alcanzan su mxima capacidad de reabsorcin de la glucosa; y es cuando la carga de glucosa filtrada por los glomrulos rebasa la capacidad mxima de reabsorcin de los tbulis que aparece glucosa en la orina. El valor medio de la TmG es de 375 mg/min/1.73 m2 para los hombres y 303 mg/min/1.73 m2 para las mujeres. En la Diabetes Mellitus existe un nivel elevado previo de glucosa en la sangre antes de que aparezca glucosuria. Materiales y Reactivos y Animales de experimentacin. 3 Animales de experimentacin: ratas de 200 a 300 gr. De peso, bien hidratadas en ayunas. 3 Jaulas metablicas. 3 Jeringas de insulina 3 Jeringa con aguja de 5 ml. Alloxan en solucin 4% (4000 mg en 100 ml de suero fisiolgico). 1 glucmetro con cintas reactivas. Insulina cristalina Phlorizin ( Floricina ) en solucin al 4% en solucin salina. 1 tijera. 2 tubos de prueba. Reactivos de Benedict Procedimiento Identificar tres ratas A, B, y C . Determinar la glicemia basal en las tres ratas previamente pesadas (la muestra de sangre se obtiene de la cola a travs de un corte en el extremo). Administrar va intraperitoneal: - A la rata A (control) se administra va intraperitoneal 1.5 ml de Suero fisiolgico. - A la rata B: se administra va intraperitoneal Alloxanen solucin al 4% a la dosis de 200 mg. par kilogramo de peso corporal. - A la rata C: se administra va intraperitoneal Phorizin en solucin al 4% a la dosis de 200 mg. por kilogramo de peso corporal. En la rata B hacer control cada 5 minutos hasta que se haga diabtica, y luego cada 20 minutos. A la rata diabtica administrar Insulina intraperitoneal a la dosis de 1 U! por cada 100 gramos de peso. Discusin