GOBIERNO REGIONAL CUSCO

PER-INSTITUTO DE MANEJO DE AGUA Y MEDIO AMBIENTE - IMA

PROYECTO DE GESTION AMBIENTAL DE LA CUENCA DEL BAJO URUBAMBA

PROPUESTA DE FUNCIONAMIENTO DE UN LABORAORIO DE ANALISIS DE AGUAS Y RECURSOS BIOLOGICOS EN LA ZONA DEL BAJO URUBAMBA.

Blga. Patricia Salas Recharte

Cusco Diciembre 2007

INDICE Introduccin Objetivos Objetivos Especficos Marco Legal Pag. 1.- Laboratorio de Anlisis de Aguas y Recursos Biolgicos. Justificacin 1.1.- Requisitos para la Apertura y Establecimiento del Laboratorio 1.2.- Infraestructura 1.2.1.- Caractersticas del Laboratorio 1.2.2.- Ubicacin del Laboratorio 1.2.3.- Organizacin y Uso del Laboratorio 1.3.- Personal 1.4.- Normas de Bioseguridad 1.5.- Equipos y Materiales de Laboratorio Material de Vidrio Lavado y Esterilizacin de Material de Vidrio Materiales de otra Naturaleza 1.6.- Equipos de Seguridad Equipo de Proteccin Personal Material de Limpieza 1.7.- Reactivos y Medios de Cultivo Agua de Laboratorio Reactivos y Medios de Cultivo 2.- Pasos para la Elaboracin de un Plan de Toma de Muestra de Agua como evidencia en casos de Contaminacin Identificar los aspectos clave, problemas y causas de la preocupacin Elaborar un esquema de toma de muestras Tomar muestras, realizar anlisis y reportar los resultados Toma de Muestras Equipo Necesario Cantidad de muestra necesaria Procedimientos para la toma de Muestras Toma de muestra de una corriente o depsito Estabilidad de la Muestra Etiquetado del Frasco Como Manejar las Muestras Almacenamiento de las Muestras 3.- Puntos de Muestreo 4.- Parmetros a medir en el Laboratorio de Aguas 4.1.-Anlisis Fisicoqumico del Agua 4.1.1- Mtodos por Instrumentos Determinacin de pH Determinacin de la Conductividad Determinacin de Slidos Totales Disueltos Determinacin de la Salinidad Determinacin de la Temperatura Materiales y Mtodos 5 5 5 5 6 6 6 7 7 8 9 9 9 9 10 10 10 10 10 10 11 11 11 11 12 12 12 13 13 13 14 14 15 16 17 17 17 17 17 17 17 17

4.1.2.- Mtodos Volumtricos 18 Determinacin de la Alcalinidad 18 Determinacin de la Dureza 21 Determinacin de Acidez 24 Determinacin de Cloruros 25 4.1.3.- Mtodos pticos 27 Determinacin de la Turbiedad 27 Determinacin de Nitritos 29 Determinacin de Nitratos 30 Determinacin de Metales Pesados 32 Determinacin del Cobre Cu 32 Determinacin del Hierro Fe 34 Determinacin del Plomo Pb 36 Determinacin del Cromo Cr 37 Determinacin del Manganeso Mn 39 Determinacin del Zinc Zn 41 Determinacin de Sulfatos 43 4.1.4.- Determinacin de Aceites y Grasa 44 4.1.5.- Determinacin de Hidrocarburos 46 5.- Anlisis Biolgicos 48 Determinacin por Instrumentacin 48 Oxigeno Disuelto (O. D) 48 Demanda Bioqumica de Oxigeno (D.B.O) 48 Demanda Qumica de Oxigeno (D.Q.O) 48 6.- Anlisis Microbiolgicos del Agua 49 Anlisis Microbiolgicos para Coliformes Totales y Fecales 49 Mtodo de los Tubos Mltiples para Coliformes Totales y Fecales 49 Medio de Cultivo para Coliformes Totales 49 Prueba Presuntiva 49 Medio de Cultivo: Caldo Lauril Sulfato Triptosa 49 Prueba Confirmativa 50 Medio de Cultivo: Verde de Brillante de Lactosa Bilis (Brilla) 50 Medio de Cultivo para Coliformes Fecales 51 Medio de Cultivo: EC 51 Prueba Complementaria 52. Agar EMB segn Levin (agar eosina-azul de metileno-lactosa sacarosa) 52 Agar MacCONKEY 52 Calculo y Registro del Numero mas Probable MNP 53 Mtodo por el Filtro de Membrana para Coliformes Totales y Fecales 55 Medio de Cultivo para ColiFormes Totales 55 Medio de Cultivo: Agar Endo LES 55 Medio de Cultivo Para Coliformes Fecales: Caldo M-FC 57 Anlisis Microbiolgicos para Hetertrofos 58 Mtodo por el Filtro de Membrana para Hetertrofos 59 Medios de Cultivo: Agar RHP 59 Mtodo de la Placa Fluida 60 Medio de Cultivo: Agar NWRI 60 7.- Recursos Biolgicos 62

Identificacin de Fitoplancton y Zooplancton ndices para Determinar la Dinmica de Poblaciones Metodologas para realizar un Inventario Rpido de Peces, Mamferos Aves y Anfibios Reptiles Peces Aves Mamferos Anfibios y Reptiles Insectos

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Conclusiones Recomendaciones Bibliografa Anexos

INTRODUCCION La diversidad de los ecosistemas selvticos tropicales terrestres y acuticos, es de vital importancia para mantener la diversidad de especies presentes en estos, as como los mltiples procesos ecolgicos; sin embargo todos estos procesos biolgicos y ambientales se ven amenazados por las actividades que desarrollan las empresas extractoras y transportadoras de gas, empresas madereras, transporte fluvial y otros. Actualmente los ecosistemas acuticos en el Bajo Urubamba son los mas afectados por estas actividades alterando la calidad de los cuerpos hdricos, y en muchas ocasiones contaminndola con elementos nocivos. Estos cuerpos de agua son de vital importancia no slo por ser ecosistemas, ricos en biodiversidad acutica, sino tambin para las comunidades que habitan en las riberas de los ros, donde se abastecen de stos para satisfacer primordialmente su necesidad de alimentacin, siendo la fuente importante los peces que se encuentran en los ros y quebradas. A fin de establecer medidas correctivas y preventivas para la conservacin del ambiente y los recursos hdricos en el Bajo Urubamba, es necesario la instalacin e implementacin de un Laboratorio para el Anlisis de Aguas y Recursos Biolgicos, que permita su monitoreo. ya que al agua se le debe considerar un medio vivo, un sistema ecolgico en equilibrio que presenta propiedades fsicas, qumicas y biolgicas, necesarios de conocer, asi como sus cambios por accin antrpica. OBJETIVO Realizar una propuesta tcnica para la implementacin y funcionamiento laboratorio de anlisis de aguas y recursos biolgicos. OBJETIVOS ESPECIFICOS Definir parmetros de los anlisis de agua a monitorear con sus metodologas respectivas. Proponer el lugar donde se ubicar el laboratorio. Proponer los puntos de muestro para su monitoreo. Proponer tcnicas de monitoreo de recursos biolgicos (relacionados a biomasa y dinmica de poblaciones) de un

MARCO LEGAL DECRETO LEY N 17752 LEY GENERAL DE AGUAS (24/07/1969) Las aguas, sin excepcin alguna, son de propiedad del Estado, y su dominio es inalienable e imprescriptible. No hay propiedad privada de las aguas ni derechos adquiridos sobre ellas. El uso justificado y racional del agua, slo puede ser otorgado en armona con el inters social y el desarrollo del pas. DECRETO SUPREMO N 261-69-AP. Reglamento de los Ttulos I, II y III del Decreto Ley N 17752Ley General de Aguas . DECRETO SUPREMO N 41-70-AG. Complementacin del Reglamento del Ttulo III del D.L. N 17752Ley General de Aguas. DECRETO SUPREMO N 007-83-SA. Modifica Reglamento de laLey General de Aguas. 5

DECRETO SUPREMO N 007-88-SA. Actualizan las tarifas establecidas por Arts. 207 y 208 del Reglamento de la Ley General de Aguas. DECRETO SUPREMO N 003-2003-SA Modifican artculo 82 del Reglamento de los Ttulos I, II y III de laLey General de Aguas. DECRETO SUPREMO N 274-69-AP/DGA. Reglamento del Ttulo IV del Decreto Ley N 17752 Ley General de Aguas DECRETO SUPREMO N 929-73-AG. Reglamento del Ttulo VI del Decreto Ley N 17752Ley General de Aguas. DECRETO SUPREMO N 1098-75-AG. Reglamento del Ttulo VII del Decreto Ley N 17752Ley General de Aguas. DECRETO SUPREMO N 473-71-AG. Reglamento del Ttulo VIII del Decreto Ley N 17752 Ley General de Aguas DECRETO SUPREMO N 939-73-AG. Reglamento del Ttulo IX del Decreto Ley N 17752Ley General de Aguas. DECRETO SUPREMO N 495-71-AG. Reglamento del Ttulo X del Decreto Ley N17752Ley General de Aguas. 1.- LABORATORIO DE ANALISIS DE AGUAS Y RECURSOS BIOLOGICOS. JUSTIFICACION La cuenca del Urubamba en estos ltimos aos se ve afectada por las actividades que realizan las diferentes empresas que operan a lo largo de ella, ocasionando alteraciones en los diferentes ecosistemas presentes en la zona; por tal motivo es importe la implementacin de un laboratorio de anlisis de aguas y recursos biolgicos, con la finalidad de monitorear la calidad de las aguas y vigilar sus recursos. 1.1.- REQUISITOS PARA LA APERTURA Y LABORATORIO. ESTABLECIMIENTO DEL

Los trmites de apertura y establecimiento DEL LABORATORIO, se realizarn en el Ministerio de Salud, ( Anexo N 01) Para que un laboratorio tenga acreditacin, los tramites se realizan en el INDECOPI 1.2.- INFRAESTRUCTURA El laboratorio de anlisis de aguas debe contar con 4 ambientes separados y servicios higinicos. Un ambiente pequeo para la recepcin de muestras: Un ambiente para el laboratorio de aguas: Un ambiente para el lavado y esterilizacin de material Un ambiente para el almacn

1.2.1.- Caractersticas del Laboratorio El laboratorio debe ser localizado en un ambiente limpio bien ventilado e iluminado, libre de polvo, de corrientes de aire, con temperatura y humedad controlada Los pisos deben ser lavables, resistentes y mantenerse desinfectados, limpios y libres de objetos salientes en los que pueda tropezar el personal. Los mismos deben mantenerse secos y si estn encerados se debe utilizar cera antideslizante; de igual manera las paredes lisas y de fcil limpieza Puertas y ventanas, deben ser de cierre hermtico, que permitan una presin de aire ligeramente positivo. En cuanto a las instalaciones elctricas, se debe revisar las conexiones, tomacorrientes que sean adecuados de acuerdo al requerimiento de cada uno de los equipos y suficientes tomas de energa elctrica y puesta a tierra. Suministro de agua, suficientes lavaderos con agua caliente y fra, para la distribucin del agua, las tuberas deben ser de acero inoxidable u otro material no txico. Las mesas de trabajo a una altura conveniente, de preferencia deben ser de acero inoxidable, amplias y de superficies lisas y lavables para procesar muestras. Los ambientes deben poseer armarios, cajones y estantes para proteger a los materiales limpios esterilizados, medios y reactivos. El ambiente de recepcin de muestras debe de contar con un escritorio sillas, una mesa pequea para colocar las muestras, una computadora e impresora, archivadores y material de escritorio. El laboratorio debe tener un grupo electrgeno. El laboratorio debe de contar con una planta de tratamiento de residuos slidos y lquidos ya que se trabajar con reactivos contaminantes y estos no pueden ser eliminados al ro directamente (el tamao depender de la cantidad de muestras que se procesen) Ventilacin natural o mecnica controlada.

1.2.2.- Ubicacin del Laboratorio Las instalaciones del Laboratorio de Anlisis de Aguas y Recursos Biolgicos debe ser ubicado en la Comunidad Nativa de Camisea como primera opcin y la Comunidad Nativa de Shivancoreni como segunda alternativa. Se proponen estas dos comunidades por que a partir del prximo ao, contarn con fluido elctrico durante las 24 horas. 1.2.3.- Organizacin y Uso del Laboratorio .Todos los equipos deben ser inventariados y localizados en un lugar apropiado. .Los colorantes y reactivos de uso continuo, deben ser revisados en su calidad y cantidad, despus de cada cierto periodo de tiempo. .Las pipetas usadas en el anlisis deben ser descartadas a un vaso de precitacin o a un frasco de base ancha que contenga agua y desinfectante .No se bebe abandonar el material limpio ni contaminado en las mesas de trabajo, estos deben colocarse en el lugar que le corresponde.

.Finalizando el trabajo, limpiar las mesas con desinfectante y los materiales desechables deben ser descartados en un lugar apropiado en bolsas se plstico.

1.3.- PERSONAL El laboratorio de anlisis de aguas y recursos biolgicos debe de contar con el personal necesario en nmero y tener las calificaciones para desarrollar las funciones y responsabilidades correspondientes. Dadas las caractersticas y la naturaleza del trabajo realizado por un laboratorio, es importante destacar que todo personal involucrado debe mantener confidencia en las informaciones y resultados. Se requiere: a) Permanentemente Un Bilogo (anlisis microbiolgico). Un Ingeniero Qumico (anlisis fsico-qumico del agua) b) Eventuales Para realizar los monitoreos de los recursos biolgicos se requerir profesionales bilogos de las diferentes reas ( peces, mamferos mayores y menores, aves, insectos, Anfibios y otros).

1.4.- NORMAS DE BIOSEGURIDAD Cuando se trabaja en un laboratorio de anlisis de aguas y recursos biolgicos, hay que tomar ciertas precauciones, ya que pueden existir microorganismos patgenos y tambin se trabaja con reactivos nocivos que puede significar un riesgo para la salud. Es indispensable cumplir con ciertas normas de seguridad como: 1.-Usar siempre elementos de seguridad personal; como .guarda polvo, guantes, lentes, dentro del laboratorio. 2.-No se debe comer, fumar, beber, guardar alimentos en el rea del laboratorio. 3.- Lavarse las manos cuidadosamente con agua y jabn antes de ingresar y abandonar el laboratorio 4.- Antes de cada trabajo, limpiar el rea y las mesas con un desinfectante 5.-Siempre usar la tcnica de asepsia estricta y esterilizar los materiales antes y despus de su uso. 6.-Nunca pipetear con la boca, usar una bombilla de goma. 7.-Dejar el rea de trabajo en perfecto orden al momento de retirarse. 8.-Los equipos deben ser inspeccionados peridicamente por personal especializado para mantenimiento preventivo.(registrar los hallazgos) 9.-En caso de que se quiebre frascos, tubos o placas con material contaminado, se debe proceder inmediatamente a desinfectar el lugar contaminado. Cuando se preparan soluciones custicas, corrosivas e inflamables, se bebe realizar bajo una campana extractora o cubriendo el rostro con una mscara, contar con cartillas de seguridad para cada reactivo y medio de cultivo. 10.-Verificar que las llaves del gas y el suministro de agua estn cerrados y revisar que los equipo excepto incubadora y refrigeradora estn apagados y desconectados. 11.-Las autoclaves consideradas como equipos de alto riesgo, deben contar con una hoja tcnica adecuada y vlvula de alivio, adems deben estar ubicadas en un ambiente separado del laboratorio donde labora el personal.

13.-Si se trabaja con aguas contaminadas el personal del laboratorio debe ser vacunado contra la tifoidea y ttano 14.-Reportar inmediatamente cualquier accidente. 15.-El laboratorio debe tener un botiqun de primeros auxilios con los elementos necesarios 16.-Cada laboratorio debe tener una copia de un manual de seguridad e instrucciones para tratamientos de emergencias, para brindar los primeros auxilios en caso de accidentes. 1.5.- EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO Equipos. Refrigerador.- un laboratorio de anlisis de aguas debe disponer de un refrigerador manteniendo la temperatura de 4 grados centgrados, para almacenamiento y conservacin de muestras y reactivos. Autoclave.- es esencial para esterilizar la mayora de los soportes microbiolgicos. Este es capaz de mantener una temperatura interna de 121 C bajo una presin de 15 libras, ha de estar equipado con un termmetro de calibrado para medir la temperatura dentro de la cmara de esterilizacin con un manmetro de presin y con vlvulas de seguridad directamente conectadas al tubo de suministro de vapor saturado y ha de ser capaz de alcanzar la temperatura deseada en 30 minutos. No es recomendable utilizar una autoclave vertical ni una olla a presin, por las dificultades para ajustar y mantener la temperatura de esterilizacin y los posibles riesgos que conlleva su uso. Incubadora.- Las incubadoras deben de mantener una temperatura constante en todo momento y en todas las zonas. Balanzas.- se utilizar balanzas con una sensibilidad de almenos 0,1g para cargas de 150g y pesas adecuadas. Para pesar cantidades pequeas (inferiores a 2g) se utilizarn balanzas analticas con una sensibilidad de 1 mg para una carga de 10g.Las mas recomendadas son las balanzas de pesada rpida y de un solo plato. Bao Maria.-Los baos Maria termo controlados deben emplearse en todos los casos en que la temperatura tenga que mantenerse dentro de un margen de tolerancia de 0 a 1 C, La tapa del bao Mara bebe estar bien ajustado para impedir una excesiva evaporacin de la humedad. Horno.- El horno de aire caliente se emplea para esterilizar la mayora de los instrumentos de vidrio del laboratorio. Debe de ser de tamao suficiente para evitar el hacinamiento; ha de ser capaz de proporcionar temperatura uniforme y debe ir equipado con un termmetro calibrado que registre con precisin temperaturas comprendidas entre 160 y 180 C Balanza.- El laboratorio debe constar con dos balanzas de carga superior, una de ellas con una capacidad de 2000g y una sensibilidad de 0.1g y la otra con una capacidad de 100 -200 g. y una sensibilidad de 1mg. Espectrofotmetro.-Es un instrumento que permite medir la intensidad de la luz transmitida; se utiliza mucho en anlisis qumicos. Medidor de pH..-se utilizarn instrumento electrnicos, de una exactitud de al menos de 0.1 unidades de pH, para determinaos valores de pH. Destilador de Agua.

Cmara de Flujo laminar.- La cmara de flujo laminar horizontales y verticales nos permite obtener una zona estril y esta compuesta de una cmara de acero inoxidable, lmparas fluorescentes y luz de rayos ultravioleta. Su principal funcin es de proteger de la contaminacin al operador, producto y medio ambiente. Centrfugas.- aparato diseado para acelerar la separacin de partculas de slidos suspendido en lquidos. Filtro de Membrana.- se utilizara embudos de filtracin y soportes de membrana de acero inoxidable sin costuras, vidrio o plstico resistente al autoclave, que no tengan fugas ni sufran corrosin. Son aceptables los equipos de laboratorio de campo , pero son necesarios equipos y procedimientos normalizados para la filtracin en el laboratorio Agitador Magnetito.- aparato diseado para agitar las mezclas de los diferentes reactivos y medios de cultivo. Termmetro Microscopio Sistema de filtros

Material de Vidrio Para uso general en el laboratorio el material ms adecuado es el de vidrio de borosilicato muy resistente. Existen vidrios especiales con caractersticas tales como alta resistencia al ataque por lcalis, bajo contenido de boro u opacidad. Se utilizarn material de vidrio para volumetra y de uso frecuente en un laboratorio de agua. ( Anexo N 02) Lavado y Esterilizacin de Material de Vidrio Se lavar cuidadosamente todo el instrumental de vidrio con un detergente adecuado y agua caliente, se enjuagar con agua caliente para eliminar todos los residuos del compuesto lavado y por ultimo, se enjuagar con agua pura de laboratorio (agua destilada). Materiales de otra Naturaleza Mechero Bunsen Luz fluorescente Encendedor elctrico, de bencina, gas fsforo Asas y agujas de siembra Esptulas de metal o cucharas Canastillas, cestos de metal o gradillas Hornilla elctrica. Pinzas, tijeras, cuchillo Bombilla de goma para pipetas Culer con gradillas metlicas para llevar las muestras. Papel kraff, aluminio, toalla e higinico Algodn, gasa 1.6.- EQUIPOS DE SEGURIDAD Equipo de Laboratorio a) Extintores.- a menudo se recomiendo la instalacin de extintores multiusos en los laboratorios. Hay que comprobar que los extintores se revisan y recargan de forma peridica. 10

b) Envases de Seguridad.-Los envases de seguridad estn diseados para minimizar las consecuencias de un accidente o para evitar la diseminacin de materiales peligrosos. Se utilizan para transportar productos qumicos, sobre todo cidos y lcalis concentrados, Para disolventes inflamables, emplease envases sometidos a controles de calidad por los organismos pertinentes. c) Instalaciones de Almacenamiento.-Para guardar los materiales de laboratorio, hay que conocer sus propiedades as como las consecuencias de accidentes tales como derrames, explosin o fuego. Por lo general no debe almacenarse grandes cantidades de reactivo en las reas de trabajo, sino utilizar envases mas pequeos que slo contengan lo suficiente para el trabajo diario o semanal. Evtese la mezcla, en caso de accidente, de productos qumicos que puedan combinarse dando lugar a compuestos explosivos, inflamables o peligrosos; para ello debern almacenarse por separados, los materiales peligrosos en un recinto con recipientes especficos. d) Equipos de vertidos de sustancias.- La zona de almacenamiento y de trabajo debe disponer de equipo para el vertido de productos qumicos; estos equipos pueden comprarse o prepararse en el laboratorio, utilizar equipos de tamao adecuado para las cantidades utilizadas de cido, base y disolventes. e) .Avisos de Seguridad en las paredes.- Colocar en un lugar central para informar de las sustancias peligrosas existentes en el laboratorio. Equipo de Proteccin Personal El equipo y materiales de proteccin personal estn constituidos por: guardapolvos, Mascarillas, gafas de proteccin y guantes de goma pueden; utilizarse para manipular lquidos peligrosos y lavado de materiales de vidrio; los de cuero, para los materiales radioactivos, y los quirrgicos para el material patgeno. Material de Limpieza Detergentes Desinfectantes Escoba Recogedor Tachos de basura Franelas para el limpiado de mesas 1.7.- REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO Agua de Laboratorio. Para la preparacin de los reactivos y medios de cultivo, se utilizar nicamente agua destilada o desmineralizada, que haya sido analizada y que no presente trazas de metales disueltos ni de compuestos bactericidas o inhibidores. Reactivos y Medios de Cultivo (Anexo N 03) 2.- PASOS PARA LA ELABORACIN DE UN PLAN DE TOMA DE MUESTRA DE AGUA COMO EVIDENCIA EN CASOS DE CONTAMINACIN Los pasos pueden diferir entre s en consideracin de las caractersticas particulares de cada caso. No obstante, existen algunos pasos bsicos que son los ms pertinentes o adecuados en la mayora de los casos. A continuacin, presentamos los principales:

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Identificar los aspectos clave, problemas y causas de la preocupacin Consultar a los representantes de los diferentes grupos de inters, incluyendo a los pobladores Definir el rea que va a abarcar el anlisis del agua de acuerdo a las dimensiones del problema (por ejemplo: ubicacin de los puntos de descarga de contaminantes; deteccin del rea en que aparecen de manera patente o visible las manifestaciones de la contaminacin, ubicacin de las poblaciones, entre otros). Identificar los problemas de acuerdo a las referencias que se obtenga en los dos puntos anteriores y establecer prioridades para los parmetros a evaluar. Elaborar un esquema de toma de muestras Comenzar, por ejemplo, con la elaboracin de un mapa de la localidad o del curso del cuerpo de agua de donde se va a tomar la muestra. Identificar la ubicacin de los posibles puntos de descarga de contaminantes, poblaciones afectadas, entre otros. Es importante consultar con representantes de los grupos de inters, incluyendo a los consumidores. Es til informarse sobre los factores que afectan tanto la fuente de descarga como el cuerpo receptor y que pueden influir en los resultados de los anlisis. Tomar muestras, realizar anlisis y reportar los resultados Asegurarse de contar con personal adiestrado tcnicamente, para la toma de muestras y su manipulacin Asegurarse de la validez de los resultados de laboratorio (comparar con otros lugares o circunstancias similares). En algunos casos, ser necesario realizar anlisis complementarios para asegurar la validez y confiabilidad de los resultados. Organizar los sistemas de registro, archivo y comunicaciones. Retroalimentar a los grupos de inters (comunidades, gobiernos locales, entidades pblicas y privadas) con los resultados de los anlisis y conseguir el compromiso de las mismas para buscar y encontrar soluciones al problema. Toma de Muestras Ningn anlisis de laboratorio tiene sentido si la muestra tomada no es representativa del agua que se est examinando. La falta de cuidado en tomar las medidas necesarias para preparar una muestra, puede alterar por completo los resultados de un anlisis. Es muy raro que los resultados de una sola muestra sean suficientes para determinar el grado de contaminacin del agua por lo general, es necesario tomar duplicado o triplicado. Pero deben ser paralelos a las otras muestras y los otros anlisis (una muestra, en muchos casos, complementada con el anlisis de otros indicadores, dependiendo de cada caso). Es pertinente subrayar el hecho que el propsito de este documento es brindar pautas generales para la mejor y fcil manera de tomar una muestra y manejar la prueba hdrica en casos de contaminacin. El posterior anlisis de las muestras se realizar en laboratorios calificados y compete a los laboratoristas la responsabilidad de hacerlo profesionalmente. Un aspecto fundamental para el personal a cargo de la toma de muestra: Cuanto ms alto sea el nivel profesional o capacitacin del personal a cargo de la recoleccin de las muestras, tanto mayor ser la seguridad y credibilidad que tendr el resultado del anlisis como evidencia de contaminacin. En la mayora de casos, es necesario y oportuno llevar a cabo un entrenamiento del personal; este entrenamiento lo debe

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realizar personas versadas en el tema. Las actualizaciones peridicas aseguran o refuerzan el conocimiento y se pueden conocer nuevas tcnicas. Es importante tener en cuenta que, en algunos casos, es necesario tomar medidas especiales para dotar al personal con el conocimiento y las medidas necesarias para protegerlo en la manipulacin de muestras contaminadas (por ejemplo, en el caso de epidemias e indicios de la presencia de agentes patgenos potencialmente peligrosos entre otras sustancias perjudiciales para la salud-) o en el manejo de muestras con sustancias txicas, cancergenas, corrosivas, voltiles, reactivas, etc. Equipo Necesario Las muestras de agua para anlisis qumicos y/o fsicos, deben ser tomadas en frascos de vidrio neutro y de plstico de polipropileno o policarbonato (esterilizables en autoclaves) de boca ancha, limpia e incolora, con tapas hermticas igualmente limpias. Generalmente, los frascos para los anlisis qumicos y fsicos no necesitan ser estriles, pero deben estar bien limpios. Lvelos con un detergente adecuado y enjugarlos 3 a 5 veces en agua destilada para remover los residuos y olores. Para el caso de anlisis microbiolgico debe recordarse que si es preciso esterilizar los frascos y tapas. Tambin se deben seguir pautas precisas para la toma de las muestras, su manipulacin y su transporte. En el caso de anlisis microbiolgicos, las muestras deben ser analizadas en un plazo mximo de 24 horas despus de tomadas Tambin para las de anlisis fsicos y qumicos. Es necesario contar con cajas hermticas (Kuler) que guarden las muestras a una temperatura adecuada (4-8 C). De no ser as, los resultados de los anlisis microbiolgicos, fsicos, qumicos, pueden verse alterados por efecto de la temperatura. Es mejor usar hielo sinttico (bateras que se congelan) y no hielo normal, para evitar la presencia de agua derretida. Cantidad de muestra necesaria La cantidad de muestra necesaria puede variar mucho, dependiendo tanto del tipo de contaminante como de la metodologa y tcnica analtica empleada por el laboratorio. Por lo general, por punto de toma de muestra, se necesitan aproximadamente 4 litros de muestra para realizar un anlisis completo fsico y qumico y un mnimo de 250 ml ( de litro) para anlisis microbiolgicos. . (Anexo N 04) Procedimientos para la toma de muestras La toma de muestras para anlisis qumico y fsico del agua sigue, bsicamente, el mismo proceso que para el anlisis bacteriolgico, con la diferencia que para este ltimo se debe contar con frascos estriles y los frascos para el anlisis fisicoqumico se deben enjuagar con agua destilada. Al hacer la toma de muestra para el anlisis bacteriolgico se deja un espacio areo en el frasco (al menos 2.5cm) para facilitar la mezcla por agitacin, antes de proceder al anlisis y p ara el Fisicoqumico llene la frasco completamente y cierre bien la tapa inmediatamente en ambos casos. Los anlisis se deben realizar tan pronto como sea posible, y no deben retrasarse ms de 24 horas en el caso de los anlisis microbiolgicos y parasicolgicos, ni ms de 72 horas en el caso de los anlisis fsicos y qumicos. En tanto sea posible, las muestras deben guardarse entre 4-8 C durante el almacenamiento y transporte. Cuando se toman varias muestras en un mismo lugar y al mismo tiempo, se deben tomar las muestras para anlisis bacteriolgico primero, para evitar contaminarlas con el 13

equipo no esterilizado. En ambos tipos de toma de muestra, las principales consideraciones son las mismas: obtener muestras representativas de agua sin contaminarlas, cerrar muy bien los envases o frascos y llevarlos rpidamente al lugar donde se realizar el anlisis. Toma de muestra de una corriente o depsito Las muestras deben ser recogidas del centro (en puntos alejados de las orillas) del cauce del ro, riachuelo o depsito, con la boca del frasco orientado hacia la corriente en caso de ros, riachuelos, arroyos. Si la muestra es tomada desde una embarcacin, tome la muestra desde el lado de la embarcacin que est situado contra la corriente, esto es: donde la corriente choca contra la embarcacin. 1. Remueva la tapa del frasco, teniendo cuidado de no tocar la parte interna ni el cuello del mismo. 2. Sostenga el frasco desde la parte inferior. Con la boca del frasco contra la corriente, sumerja el frasco con el cuello hacia abajo, dentro del cauce del riachuelo o ro. 3. Incline el frasco hasta que el cuello del mismo apunte ligeramente hacia arriba, con la boca del mismo apuntando a la corriente. Deje que el frasco se llene.. No permita que entren salpicaduras dentro del frasco. 4. Si no es posible hacer la toma de esta forma, se coloca un peso en la base del frasco y se sumerge en el agua En cualquier caso se deber evitar el contacto con la orilla o lecho de ro, pues de lo contrario el agua puede ensuciarse. tape el frasco cuidadosamente. 5. Etiquete el frasco inmediatamente. La persona que toma las muestras no debe usar crema, repelente contra insectos, etc. al tomar muestras para anlisis fsico-qumico (por ejm. pesticidas). Estabilidad de la Muestra Las concentraciones de los agentes nocivos que se van a determinar en una muestra pueden alterarse durante el lapso que transcurre entre el momento del muestreo y el momento del anlisis, como consecuencia de: a. contaminacin externa durante la toma de muestra, b. contaminacin causada por el recipiente, o c. por procesos qumicos, fsicos o biolgicos dentro de la muestra. Si no se toman las precauciones adecuadas pueden producirse errores graves. Por ello, deben tomarse en cuenta los mtodos uniformes recomendados para evitar la contaminacin causada por el recipiente y reducir al mnimo la modificacin de las concentraciones de agentes nocivos durante el almacenamiento y transporte. Debe recordarse que, el mtodo de preservacin de la muestra con frecuencia est determinado por el mtodo de anlisis que se emplea. Para evitar complicaciones, deben realizarse pruebas para verificar que la concentracin de la sustancia en cuestin no se modifica considerablemente en el perodo entre la toma de muestra y su anlisis. (Ver Anexo N 04) Etiquetado del Frasco Todas las muestras deben tener una etiqueta que las identifique, la cual debe ser colocada inmediatamente despus de ser recolectada la muestra La informacin en la etiqueta debe incluir:

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1.- Nmero de la muestra (se trata de un nmero correlativo) del muestreador y/o del laboratorio. Es muy importante darle la debida atencin para que no haya lugar a confusin. 2.- Tipo de anlisis a realizar: bacteriolgico, fsico, qumico, otros. 3.- Nombre del lugar preciso donde se tom la muestra incluyendo: 4.- Ubicacin exacta del lugar (si se puede georeferenciar, es ideal). 5.- Temperatura del agua al momento de la toma de muestra (existen aparatos que miden, simultneamente, la temperatura, el pH y el oxgeno disuelto. Son datos muy tiles si se toman en el lugar mismo). 6.- Fecha y hora de la toma de muestra. Con respecto a la etiqueta, es importante recomendar que se llenen con lpiz, plumn indeleble o crayn graso. el uso de tientas no es recomendable porque pueden borrarse o disolverse. Adems, es importante anotar en una hoja, complementaria a la etiqueta, algunos datos tales como: Nmero de la muestra (que debe ser el mismo que aparece en la etiqueta). Nombre de la persona que realiz la toma de muestra y persona o entidad responsable de solicitar los anlisis. Observaciones y comentarios para cada caso en especial tales como: Si la muestra ha sido tomada de un ro o riachuelo, especificar datos tales como: profundidad a la cual se ha tomado la muestra. Si la muestra se ha tomado desde una embarcacin, indicar de qu tipo de embarcacin y posibles fuentes de contaminacin Si la muestra proviene de un manantial, especificar si la muestra ha sido tomada directamente del manantial o de alguna fuente recolectora (de ser este ltimo el caso, especificar el material del que est hecha la fuente recolectora) Como Manejar las Muestras Para el caso del manejo de la muestra existen 4 principios bsicos que no se pueden olvidar: mantener en sitio oscuro; mantener en ambiente fro; llevar rpido para su anlisis; cuidar la limpieza en todos los momentos. Las muestras para anlisis deben ser colectadas cuidadosamente para asegurar que sean tcnicamente representativas de la fuente de agua analizada. Debe garantizarse que no se contaminen durante su recoleccin (ya sea por otras fuentes o por la misma persona que toma la muestra). Para ello, es importante mantener el frasco cerrado hasta el momento mismo de la toma de la muestra. Es muy importante tener mucho cuidado con no tocar el interior del frasco ni el cuello o la tapa del mismo durante su manipulacin. Se debe preparar las etiquetas anticipadamente, para que se puedan emplear inmediatamente despus de la toma de las muestras para identificar claramente cada una de ellas . Almacenamiento de las Muestras Durante el perodo de almacenamiento de una prueba, se pueden dar importantes cambios en su contenido microbiolgico, fsico y qumico. Para tener un anlisis correcto del agua, las muestras para anlisis fisicoqumico (Anexo N 04) y microbiolgico deben ser analizadas dentro de las 24 horas posteriores a la toma de la muestra. Cuando se usan equipos porttiles (kits) en el campo, es posible realizar el anlisis de las muestras dentro del plazo de una hora desde la toma de la muestra, Si las muestras deben ser transportadas a otro lugar, muchas veces es imposible analizarlas

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pronto. Por lo tanto, stas deben ser almacenadas cuidadosamente y ser transportadas de manera tal que, al momento del anlisis, desde el punto de vista tcnico y cientfico, se pueda garantizar que an son representativas de la fuente de agua sujeta del anlisis. La temperatura de almacenamiento debe ser, preferiblemente entre 4 y 8 C, para mantener su estado y no facilitar procesos naturales que la alteren. Se debe llevar un registro del tiempo y de la temperatura de almacenamiento. 3.- PUNTOS DE MUESTREO Se propone muestrear los siguientes puntos georeferenciados: Pongo: Malvinas: C.N. Camisea: Microcuenca del ri Picha: C.N Kirigueti: C.N. Nuevo Mundo: Afluente Witicaya: Afluente Paquiria: C.N. Nueva Luz: CN. Miaria: Sepahua: 441m de altura, 18L 0737247, UTM 8648254 372 m de altura, 18L 0723470, UTM 8690852 365m de altura, 18L 0723921, UTM 8704014 332m de altura, 18L 0704837, UTM 8718316 325m de altura, 18L 0703685, UTM 8720366 317m de altura, 18L 0703775, UTM 8722730 307m de altura, 18L 0703222,.UTM 8728398 295m de altura,,18L 0717037, UTM 8734828 304m de altura, 18L, 0715216, UTM 8733670 219m de altura, 18L, 0718781, UTM 3508750 266m de altura, 18L, 0713423, UTM 8767898

Se propone estos puntos para realizar el anlisis y el monitoreo constante de esta agua, ya que a partir del centro operador de la Plus Petrol de las Malvinas hasta la Poblacin de Sepahua (departamento de Ucayali) hay un trafico intenso de los botes de las diferentes empresas que operan en el Bajo Urubamba, adems en caso de derrames estas aguas son vulnerables a ser contaminadas como lo que sucedi en la microcuenca del Ro Picha. A todo esto se debe indicar que a partir del prximo ao en el mes de Abril, la empresa Petro Bras empieza con las exploraciones de gas en la zona de Kirigueti. Es importante mencionar que a lo largo de toda la cuenca existe poblados de las diferentes comunidades nativas, como tambin una diversidad de ecosistemas y de especies como: mamferos, aves, anfibios, peces, insectos y otros, en donde el agua es un recurso indispensable para su supervivencia y si estos cursos de aguas se ven afectados tendr consecuencias negativas como la alteracin y perdida de los diferentes ecosistemas y consecuentemente desaparicin de muchas especies presentes en la zona como tambin afectara en la salud de los diferentes pobladores. Realizar el anlisis y monitoreo de los recursos hdricos en el Pongo es importante, ya que en este punto, las diferentes actividades es en menor grado a comparacin de los dems puntos. Los puntos de muestro deben ser en toda la cuenca del alto, medio y bajo Urubamba, Adems de los puntos ya propuestos y se debe de acudir de inmediato en casos derrames por accidente. Se recomienda que el monitoreo de la calidad de las aguas deben ser una vez por mes, y de los recursos biolgicos, por lo menos 2 veces la ao, en tiempo de lluvias y de Secas

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4.- PARAMETROS A MEDIR EN EL LABORATORIO DE AGUA Anlisis Fisicoqumico Determinacin Temperatura Determinacin pH Determinacin Salinidad Determinacin Turbiedad Determinacin Conductividad Determinacin Alcalinidad Determinacin Cloruros Determinacin Acidez Determinacin TDS (Total Slidos Disueltos) Determinacin Dureza Determinacin Sulfatos Determinacin Nitratos Determinacin Nitritos Determinacin Aceites y grasas Determinacin de Hidrocarburos Determinacin Metales pesados (Cu, Cr Fe Mn, Pb, Zn)

Biolgico Oxigeno Disuelto OD Demanda Qumica de oxigeno DQO Demanda Bioqumica del Oxigeno DBO

Microbiolgico Coliformes totales y fecales Hetertrofos

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4.1.-ANALISIS FISICOQUIMICO DEL AGUA 4.1.1- METODOS POR INSTRUMENTOS Son anlisis de lectura directa mediante el uso de equipos o instrumentos y para la confiabilidad de los resultados de este mtodo es esencial que los instrumentos estn calibrados y que se compruebe con frecuencia y comparados regularmente con un mtodo patrn o con resultados de anlisis simultneos. Bajo este tipo de anlisis se determinan los siguientes patrones de: pH, conductividad, slidos totales disueltos, salinidad, temperatura. Determinacin de pH. El pH es una medida de la concentracin de iones de Hidrgeno en el agua, fuera del rango normal de 6 a 9 pueden ser dainas para la vida acutica (por debajo de 7 son cidas y por encima de 7 son alcalinas). Estos niveles de pH pueden causar perturbaciones celulares y la eventual destruccin de la flora y fauna acutica. Determinacin de la Conductividad. La conductividad de una muestra de agua es una medida de la capacidad que tiene la solucin para transmitir corriente elctrica. Esta capacidad depende de la presencia, movilidad, valencia y concentracin de iones, as como de la temperatura del agua. Determinacin de Slidos Totales Disueltos. Los Slidos Totales Disueltos (STD) constituyen una medida de la parte de slidos en una muestra de agua que pasa a travs de un poro nominal de 2,0 m (o menos) en condiciones especficas. Determinacin de la Salinidad. La salinidad es el contenido de sal disuelta en un cuerpo de agua. Dicho de otra manera, es la concentracin de sal que hay en el agua y puede ser expresada en partes por milln (ppm) La salinidad es un factor ecolgico de alta importancia, influenciando mucho sobre los tipos de organismos que podrn vivir en esos cuerpos de agua Determinacin de la Temperatura. La lectura de la temperatura se utiliza en el clculo de diversas formas de alcalinidad, en estudios de saturacin y estabilidad respecto al carbonato de calcio, clculo de la salinidad y en operaciones generales de laboratorio, en estudios limnolgicos que requieren conocer la temperatura del agua en funcin a la profundidad. La temperatura elevada con secuencia de descargas de agua calentada, puede tener un impacto ecolgico significativo. A menudo la identificacin de la fuente hdrica como en los manantiales profundos, slo es posible efectuando medidas de temperatura Materiales y Mtodos Equipo Multparamtrico. Para el uso y procedimiento del mtodo seguir con las recomendaciones del fabricante. Flujograma para Anlisis por Instrumentos (Anexo N 05)

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4.1.2.- METODOS VOLUMETRICOS Son anlisis realizadas en volumen determinado de muestra que contiene un reactivo determinado el cual al virar de color indica que la titulacin ha terminado, estos mtodos son aplicados ha cidos, los cuales son neutralizados por bases estandarizadas y de manera opuesta. Tambin se determina bases titulando con cidos estandarizados, es decir se cumple con el proceso de neutralizacin Por este mtodo se realiza la lectura de los parmetros de: Alcalinidad, dureza total, dureza Clcica, acidez y cloruros (Ver Anexo N 06)

DETERMINACION DE LA ALCALINIDAD En las aguas naturales, o sea en aquellas que no han sufrido tratamiento alguno, los bicarbonatos representan generalmente la alcalinidad, desde que son formados en considerable cantidad por accin del CO2 sobre materiales bsicos del suelo. Para los propsitos de la presente norma tcnica peruana se aplica las siguientes definiciones. pH de Punto Final: Cuando se debe solamente al contenido total de carbonatos (CO3) y bicarbonatos (HCO3), el pH en el punto de equivalencia de la titulacin, es determinado en funcin de la concentracin de dixido de carbono La concentracin de dixido de carbono a su vez, de las especies totales de carbonato presentes originalmente y de cualquier prdida que pueda haberse producido durante la titulacin. Como puntos de equivalencia para las concentraciones de alcalinidad correspondientes en mg CaCO3/L, se sugieren los valores de pH que se expresa. Tabla N 01 Valores de pH de Punto Final pH de Punto Final
Condiciones de la medicin Alcalinizad en mg CaCO3 /L: 30 150 500 Alcalinidad total Alcalinidad de Fenoptaelina

4,9 4,6 4,3

8,3 8,3 8,3

Silicatos y Fosfatos, Conocidos o supuestos Anlisis habituales o automatizados Residuos Industriales o sistemas complejos Fuente: Norma Tcnica Peruana

4,5 4,5 4,5

8,3 8,3 8,3

Alcalinidad de Fenolftaleina.-Trmino para designar la alcalinidad medida en mg/L de CaCO3 mediante titulacin a pH 8,3 independiente del indicador de color que se emplea para su determinacin. Para este efecto se puede usar el indicador de fenoptaelina o prpura de metacresol

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Alcalinidad Total.- Trmino para designar la alcalinidad medida en mg/L de CaCO3 mediante titulacin a pH 8,3 3 y pH 4,5. Las variaciones de color producidas por los indicadores como fenoptaelina o prpura de metacresol (a pH 8,3), verde de bromocresol y rojo de metilo o anaranjado de metilo (a pH 4,5) conceden utilidad a estos indicadores la determinacin de alcalinidad. Materiales y Mtodos Equipo titulador Vaso de precipitacin Agitador magntico Pipetas volumtricas de 1,3,5, 10,20, 25 y 50ml Frascos volumtricos de 1,000, 200 y 100ml. Buretas de vidrio borosilicato de 50, 25 y 10ml. Balanza analtica con precisin de 0,001mg Mtodo Volumtrico Principio La alcalinidad es una medida de la capacidad del agua o un medio acuoso para neutralizar la acidez de los iones hidrgenos. La alcalinidad del agua se debe principalmente al contenido de carbonatos, bicarbonatos e hidrxido, por lo cual se considera una indicacin de la concentracin de estos componentes, pero tambin puede incluir contribuciones de boratos, fosfatos, silicatos y otras bases. Interferencia Los jabones, las materias grasas y los slidos en suspensin o precipitados pueden recubrir el electrodo de vidrio y causar una respuesta retardada. Dejar un tiempo adicional entre las adiciones del reactivo para permitir que el electrodo recupere el equilibrio, o limpiar ste, segn sea el caso. No se debe filtrar, diluir, concentrar o alterar la muestra Reactivos Agua para diluciones Carbonato de Sodio cido sulfrico o cido clorhdrico concentrado Indicador de Verde de Bromocresol Indicador de Rojo de Metilo Indicador Prpura de metacresol Indicador Anaranjado de Metilo Indicador de Fenolftaleina I Tiosulfato de Sodio Solucin patrn de Carbonato Sdico aproximadamente. 0.05 N cido Sulfrico o cido Clorhdrico 1N Solucin de cido sulfrico o clorhdric, 0.02 N Solucin de Verde de Bromocresol, indicador de pH 4,5. Solucin indicadora de Verde de Bromocresol rojo de metilo, indicador de pH 4,5. Solucin indicadora de anaranjado de Metilo.- Indicador de pH 4,5: Solucin alcoholica de Fenolftaleina.-indicador de pH 8.3 Solucin indicadora Prpura de Metacresol, indicador de pH 8.3

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Procedimiento a) Estandarizacin de la solucin tituladota. Curva de titilacin potenciomtrica.Titular potenciomtricamente 15ml de una solucin de 0,05n de Na2CO3 diluidos con 50ml de aguas destilada, en vaso de precipitacin de 100ml, hasta un pH cercano a 5. Anotar el gasto de la solucin cida, retirar los electrodos y enjuagarlos en el mismo frasco, hervir suavemente de 3 a 5 minutos, cubrir el frasco con una de reloj. Enfriar a temperatura ambiente, enjuagar la luna de reloj dejando caer el agua en el frasco y concluir la operacin titulando gota a gota y registrando el gasto de solucin cida y la lectura de pH, entre 4 y 3. Todo el tiempo y despus de cada adicin, mezclar completamente con agitador magntico. Hacer la curva de calibracin, determinar el punto de inflexin de pH y el volumen correspondiente. Regstrese el gasto de cido y la lectura de pH en ese punto. Calcular la normalidad del cido segn la ecuacin

AxB Normalidad = ------------------5.3,00 x C donde: A = es la concentracin en mg/l de la solucin estndar de Na2CO3 (2,500 g/l) B = es la concentracin en mg/l de la solucin estndar de Na2CO3 para titulacin C = es el volumen en mililitros de solucin cida empleado. b) Determinacin de la alcalinidad por cambio de color.- seleccionar el tamao de la muestra segn la alcalinidad esperada: Volumen de muestra (ml) 100 51 25 Alcalinidad esperada (mg/L CaCO3 ) 0 100 250 500 500 1000

Acondicionar la muestra a la temperatura ambiente, medir el volumen adecuado de muestras y transferir a un erlenmeyer de 300ml. Si la muestra tiene cloro residual libre, adicionar 0,05 ml (una gota) de solucin 0,1M de Na S2O3. Adicionar 0,25ml (cinco gotas) de solucin indicadora y titular con la solucin estndar de cido, sobre una superficie blanca hasta conseguir un cambio de color persistente, caracterstico del punto de equilibrio al pH de punto final. Para apreciar mejor el cambio de coloracin, tomar 2 volmenes iguales de muestra, una de ellas servir como testigo, es decir que slo se le aadir la solucin indicadora. c) Determinacin de la alcalinidad por titulacin potenciomtrica a pH 3,7 y 8,3. Determinar el pH de la muestra. Acondicionar la muestra y realizar la titulacin con solucin cida estndar 0,02N, conforme al procedimiento para confeccionar la curva de titulacin potenciomtrica. Titular a pH de punto final sin registrar valores intermedios y sin provocar retrasos indebidos. A medida que se alcanza el punto final, realizar adiciones de cido mas pequeas, comprobando que alcance el equilibrio antes de aadir ms reactivo d) Titulacin potenciomtrica de alcalinidad baja.- Para alcalinidades menores de 20mg/l, titular 100ml a 200ml, siguiendo el procedimiento indicado en 10.3, usar una

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microbureta de 10ml y solucin cida estndar 0,02N. Detener la titulacin a un pH en un rango de 4,3 a 4,7 y registrar el volumen y el pH exacto. Se aade ms reactivo hasta el pH exacto a 0,30 unidades, registrando de nuevo el volumen Expresin de Resultados. Titulacin potenciomtrica a pH de punto final Con la formula que se indica a continuacin se calcula tanto la alcalinidad de fenolftaleina (pH final 8,3) y la alcalinidad total (pH 4,5 4,6), la diferencia es que para cada caso se emplea indicadores apropiados

Alcalinidad CaCO3 /L = donde: A = es el volumen en mililitros de cido estndar N = es la Normalidad de cido estndar Titulacin potenciomtrica de alcalinidad baja

A x N x 50000 ------------------ml. de muestra

(2B C) x N x 50000 T = Alcalinidad total, mg CaCO3 /L = ---------------------------------ml. de muestra donde: B = es el volumen en ml del cido gastado para el primer pH registrado. C = volumen total en ml del cido para alcanzar pH inferior en 0,3 unidades. N = normalidad del cido DETERMINACION DE LA DUREZA Originalmente la dureza del agua se entendi como una medida de su capacidad para precipitar el jabn. El jabn es precipitado preferentemente por los iones calcio y magnesio. Otros cationes polivalentes tambin pueden hacerlo, pero stos suelen estar presentes en formas complejas, frecuentemente con componentes orgnicos, y su influencia de la dureza del agua puede ser mnima y difcil de determinar. De acuerdo con los criterios actuales, la dureza total se define como la suma de de las concentraciones de calcio y magnesio, ambos expresados como carbonato de calcio, en miligramos por litro. Cuando la dureza es numricamente mayor que la suma de alcalinidades de carbonato y bicarbonato, esta cantidad de dureza equivalente a la alcalinidad total se denominadureza de carbonatos; la cantidad de dureza que excedan esta se llama dureza no carbonatada. Cuando la dureza es numricamente igual o menor que la suma de alcalinidades de carbonato y bicarbonatos, toda la dureza es de carbonato, estando ausente la de bicarbonato. La dureza oscila entre cero y cientos de miligramos por litro, dependiendo de la fuente o tratamiento que haya sido sometida.

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Materiales y Mtodos Matraz o Erelenmeyers Pipetas volumtricas de 10, 25 y 50ml Frascos volumtricos de 1,000, 200 y 100ml. Buretas de vidrio borosilicato de 50 y 10ml. Balanza analtica con precisin de 0,001mg Mtodo Titulomtrico de EDTA Dureza Total Principio El cido etilendiaminotetraactico y sus sales de sodio (abreviada EDTA) forman un quelato complejo soluble cuando se adiciona a una solucin de ciertos cationes metlicos. Si se adiciona una pequea cantidad de un colorante, como el Negro-Cromo T a una solucin acuosa que contenga iones de calcio y magnesio, a un valor de pH de 10 +/- 0,1, la solucin vira al rojo vino; si aade EDTA como titulante se forman complejos de calcio y magnesio, y al agotarse estos iones la solucin virar de color rojo vino a azul, que es el punto final de la titulacin. El ion magnesio debe estar presente para rendir un viraje satisfactorio, para lo cual se aade a la solucin amortiguadora una pequea cantidad de la solucin magnesica EDTA complexomtrica neutral. Esto introducir automticamente suficiente magnesio y obviara el uso de un blanco de correccin. La presencia del viraje mejorara el aumento del pH pero este no debe aumentarse indefinidamente ya que se puede precipitar el carbonato de calcio o el hidrxido de magnesio y adems por que se produce un cambio de coloracin a PH altos. El PH se debe mantener en 10. La duracin de la titilacin se fija en 5 minutos como limite, para minimizar la tendencia a la precipitacin de carbonato de calcio. Interferencia Algunos iones metlicos interfieren produciendo puntos finales o indiferenciados, o provocando un consumo estequiomtrico de EDTA. Se reduce esta interferencia aadiendo algunos inhibidores antes de la titulacin. Las materias orgnicas o en suspensin tambin pueden interferir con el punto final. Esta interferencia se elimina por evaporacin de la muestra por secado en bao de vapor y calcinacin en horno de mufla a 550 C hasta que se produzca la oxidacin completa de la materia orgnica. Diluir el residuo con 20ml de solucin de cido clorhdrico 1N, neutralizar a pH 7,0 con solucin de hidrxido de sodio 1N y completar hasta 50ml con agua destilada o desionizada; enfriar y continuar de acuerdo con el procedimiento general. Reactivos Solucin amortiguadora Indicador Negro-Cromo T Titulador EDTA Procedimiento 1.-A 50ml de muestra en un matraz Erlenmeyer agregue 2ml de la solucin amortiguadora y agite. 2.-Agregue 2ml de inhibidor (pH =10 al finalizar la titulacin)y agite. 3.-Agregue una cucharadita (0.1gr) del indicador negro cromo T.(12 gotas)

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4.-Lentamente y con agitacin agregue el titulador EDTA hasta que desaparezca el tinte rojizo. Las ltimas gotas se agregan a intervalos de 3 a 5 segundos. El color en el punto de vire normalmente es azul. 5.-El factor f se halla diluyendo a 50ml con agua didestilada, 10ml de CaCO3 Agregar 2ml de solucin amortiguadora y agite. Luego siga los procedimientos 3 y 4 anteriores. Clculos ml EDTA x 1.000 x f Dureza Total mg/lt de CaCO3 = -----------------------------------ml de muestra Notas (1) La porcin de muestras analizada debe consumir menos de 15ml del titulador. La duracin de la titulacin no debe exceder de 5 minutos, contados a partir de la adicin de la solucin amortiguadora, para reducir la tendencia a la precipitacin del CaCO3. (2) La materia orgnica suspendida o coloidal puede interferir con el vire. Se obvia este inconveniente evaporando la muestra a sequedad en bao mara y calentando el residuo a 600 grados centgrados en un horno hasta que la materia orgnica se haya oxidado completamente. El residuo se disuelve en 20ml de HCl 1N se neutraliza a 2pH 7 con NaOH 1.Se continua luego con el procedimiento general. Dureza Clcica El principio de la determinacin se basa en que al agregar el EDTA a un agua que contenga calcio y magnesio, se combina en primer lugar con el calcio presente si el pH es suficientemente alto para que la mayor parte del magnesio se precipite como hidrxido y si se usa un indicador que se combine slo con el calcio, es posible cuantificar el calcio en EDTA. A pH 1.2 el purpurato de Amonio (Murexida) tiene un color prpura y en presencia de Ca vira de prpura a rosa. El EDTA tambin extrae el Ca del complejo que forma con el Murexida, virando la coloracin de rosa a prpura. Reactivos Solucin de Hidrxido de Sodio, 1N Indicador de Prpura de amonio o Murexida Titulador EDTA, 0.01M Procedimiento 1.- Tome 50ml de la muestra 2.- Agregar 2.0 ml de Na OH, 1N. Mezcle 3.- Agregue 2 cucharadas (00.2g) de la mezcla indicadora (2 gotas) 4.- Agregue lentamente el titulador EDTA, con agitacin continua hasta el vire el color rosa al prpura (rosa a morado)

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DETERMINACION DE ACIDEZ Puede definirse como el poder de un agua de neutralizar iones hidroxilo y se expresa en trminos equivalentes de carbonato de Ca. La acidez de un agua puede deberse a la presencia de CO2 no combinado, cidos minerales y sales de cidos fuertes y bases dbiles. En esta ltima categora entran las sales de fierro y aluminio de origen mineral o industrial. El punto de equilibrio para la titulacin de un cido mineral tiene lugar a un pH alrededor de 4.5, mientras que la titulacin del CO2 libre al punto de equivalencia del bicarbonato de sodio a un pH aproximado de 8.9. Materiales y Mtodos Matraz o Erelenmeyers Pipetas volumtricas Buretas de vidrio Balanza analtica con precisin de 0,001mg Mtodo Volumtrico Interferencias. La presencia de concentracin apreciables de fierro y aluminio contribuyen con frecuencia a un vire transitorio e impreciso, por hidrlisis de esas sales estas interferencias hacen difcil una determinacin exacta. l cloro libre residual puede decolorar el indicador, en cuyo caso es necesario decolorar con una gota de Ti sulfato de Sodio 0,1n o por medio de irradiaciones ultravioleta. Reactivos Solucin de Hidrxido de Sodio 0.02N Indicador de Fenolftaleina Indicador de Anaranjado de Metilo Solucin de tiosulfato de Sodio. Aprox. 01N Procedimiento. Se recomienda que se usen volmenes de muestra que necesiten menos de 50ml. De la solucin tituladota, pues se obtiene un vire mas preciso. La determinacin se debe hacer dentro de las 24 horas. Acidez Total Se agregan 0.15 ML. (3gotas) de indicador de fenolftaleina a una muestra de volumen adecuado, 50ml, si es posible contenida en un matraz. Se titula sobre una superficie blanca con NaOH 0.02N hasta el vire a un ligero naranja de pH 4.5. Acidez de cidos Minerales Se agrega 0.1ml (2gotas) de indicador de Anaranjado de Metilo a una mezcla de volumen, adecuado, 50 100ml. Si es posible contenida en un matraz. Se titula sobre una superficie blanca, con NaOH 0.02N, hasta el vire a un ligero naranja de pH 4.5.

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Clculo ml NaOH 0.02N x 1,000 -----------------------------------ml de muestra

Acidez Total, en ppm CaCO3 =

ml NaOH 0.02N x 1,000 Acidez de cidos minerales en ppm de CaCO3 =----------------------------------ml de muestra DETERMINACION DE CLORUROS Las agua naturales contiene cloruros en concentraciones que varan ampliamente, y el contenido aumenta normalmente, cuando se incrementa el contenido mineral. Las aguas de vertiente y montaas usualmente tienen una concentracin baja de Cloruros, mientras que aguas de ro o subterrneas usualmente tienen una cantidad considerable y las aguas de mar tienen grandes concentraciones. El cloruro en forma de ion (Cl -) es uno de los aniones inorgnicos principales en. agua natural y residual. Un contenido elevado de cloruro puede daar las conducciones y estructuras metlicas y perjudica el crecimiento vegetal. Materiales y Mtodos Medidor de pH o potencimetro Frascos Erelenmeyer de 150, 200 y 250ml. Freascos volumetricos de 100 y 1000ml. Microbureta, 5ml graduados con intervales Vaso de precipitacin de 150 250ml. Pipetas de 25 y 100ml Mtodo Volumtrico del Nitrato Mercrico Principio El mtodo consiste en la titulacin del in con nitrato de mercurio Hg(NO3)2 para la formacin de cloruro mercrico soluble, ligeramente disociado. En el rango de pH de 2,3 a 2,8 la difenilcarbazona indica el punto final de la titulacin por formacin de un complejo de color prpura con los iones mercricos en exceso. El xilenocianol FF sirve de indicador de pH, para resaltar el punto final. Aumentando la concentracin del titulante y modificando las mezclas indicadoras, se amplia la gama de concentraciones medibles de iones cloruro. Interferencia El bromuro y yoduro se originan con soluciones Hg(NO3)2 del mismo modo que el in cloruro. Los iones cromato, frrico y sulfito interfieren cuando se encuentran presentes en cantidades superiores a 10mg/l

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Reactivos Agua destilada Cloruro de Sodio, NaCl cido Ntrico HNO3 Hidroxido de Sodio, NaOH S-difenilcarbazoma Xilenocianol FF. Alcohol etlico o isopropilico Bicarbonato de Sodio Nitrato de Mercurio Azul de Bromofenol Solucin para concentraciones de cloruro de sodio Solucin reactiva indicador acidificador Solucin titulante de nitrato mercrico 0,007 5M (0,014 1N) Solucin para concentraciones de cloruro superiores a 100mg/ -Solucin indicador mixtol. -Solucin indicador de nitrato mercrico 0,07 5M (0,014 1N) -Solucin patrn de nitrato mercurico 0,07 5M (0,014 1N) Procedimiento Titulacin de la muestra con cloruro inferiores a 100mg/l: - Analizar un volumen de muestra de 100ml o un volumen menor, de forma que el contenido de cloruro sea inferior a 10mg. - Colocar la muestra en un erlenmeyer. Aadir 1,0 ml de solucin indicador acidificador . (El color de la solucin debe ser verde azul en este punto; un color verde plido indica pH menor que 2,0 y el color azul indica un pH superior a 3,8). Para la mayora de aguas para consumo humano, el pH depuse de esta adicin es de 2,5. En aguas muy cidas o alcalina, ajustar el pH a 8 aproximadamente, antes de aadir la solucin reactiva indicador acidificador. - Titular la solucin de Hg(NO3)2 0,014 1N hasta el punto final de color prpura. La solucin vira de color verde azul, unas gotas antes del punto final, a color azul. Titulacin de muestras con contenido de cloruros superiores 100mg/l - Analizar un volumen de 5 ml a 50ml que requieran menos de 5ml de solucin titulante para llegar al punto final. - Colocar la muestra en un erlenmeyer - Aadir aproximadamente 0,5ml de la solucin indicador mixto y homogenizar. El color que se obtenga debe ser prpura. - Aadir solucin de cido HNO3 0,1N, gota a gota, hasta que el color cambie a amarillo. - Titular con Hg(NO3)2 0,014 1N hasta color prpura. - Determinar el blanco de titulacin empleando 100ml de agua. utilizando el mismo procedimiento.

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Clculo

mg/litro Cl =

(A x B) x N X 35.46 --------------------------ml de muestra

Donde: A = ml. titulante para la muestra B = ml. titulante para el blanco, y N = normalidad de la solucin Hg(NO3)2 mg/litro Na Cl = (mg/litro Cl) x l.65 4.1.3.- METODOS OPTICOS Son anlisis en el espectrofotmetro, cuyo principio se fundamenta en la cantidad de absorbancia de luz de una muestra, la cual es expresada en concentracin mediante el clculo basado en una curva patrn y de esta manera se determina el patrn en mg/l. Por este mtodo se realizara los parmetros de Turbiedad, Nitratos, Nitritos, Mn, Fe, Cu, Zn y Sulfatos ( Anexo N 07) DETERMINACION DE LA TURBIEDAD La turbidez del agua es producida por material en suspensin como arcilla, cieno o materias orgnicas e inorgnicas finamente dividas, compuestos orgnicos coloreados, plancton y otros microorganismos. La turbidez es una expresin de la propiedad ptica que origina que la luz se disperse y absorba en vez de transmitirse en lnea recta a travs de la muestra. La correlacin de la turbiedad con la concentracin en peso de la materia en suspensin es difcil de establecer, ya que en la dispersin luminosa tambin interviene el tamao, la forma y el ndice de refraccin de las partculas. Partculas pticamente negras, como las de carbona activado, pueden absorber luz y aumentar significativamente las cifras de turbidez Materiales y Mtodos Nefelmetro Celdas o tubos de medida Sistema de Filtracin Balanza analtica Pipetas volumtricas de 5ml y 10ml. Frascos volumtricos Mtodo Nefelomtrico. Principio La determinacin de la turbiedad se basa en el paso de la luz a travs de una muestra de agua y una suspensin patrn de turbiedad en idnticas condiciones.

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Cuando mayor es la incidencia dispersada mayor es la turbiedad. Como suspensin patrn de turbiedad se emplea el polmero formalina. Interferencia La turbiedad se puede determinar en cualquier muestra de agua que se encuentre libre de residuos o sedimentos gruesos. El material de vidrio sucio y la presencia de burbujas de aire, las cuales pueden presentar en la muestra durante la agitacin pueden resultar falsos. El color del agua debido a sustancias disueltas que absorben luz, da lugar a valores de turbiedad bajos. Este efecto por lo general no resulta significativo en el caso de aguas tratadas. Reactivos .Agua para dilucin Solucin I- de Sulfato de Hidracina Solucin II- de Hexametilenetetramina Preparacin.- Mezclar en un frasco 5,0 ml de solucin I y 5,0 de la solucin II. Guardar la mezcla durante 24 horas a 25C .Transferir la suspensin patrn asi obtenida a una botella de vidrio mbar para su almacenamiento. La turbiedad de esta suspensin es de 4000 UNT y es estable hasta por un ao si se almacena apropiadamente Preparacin de suspensiones patrones intermedias Diluir patrn primario de 4000 UNT con agua para dilucin. Estas suspensiones diluidas se preparan inmediatamente antes de usarlas y se descartan despus. Se puede preparar la siguientes diluciones: -Suspensin patrn de formacin de 4000 NTU. Tomar una alcuota de 10ml de suspensin patrn primaria de formalina, colocar en una fiola de 100ml y aforar con agua para dilucin. -Suspensin de formacin de 40 NTU. Tomar una alicota de 10ml de suspensin patrn de formacin de 400 NTU, colocar en una fiola de 100ml y aforar con agua para dilucin. -Suspensin patrn de formacin de 4 NTU. Tomar una alcuota de 10ml de suspensin patrn de formacin de 40 NTU, colocar en una fiola de 100ml y aforar con agua para dilucin. Calibracin del Nefelomtro Seguir instrucciones del fabricante. El equipo debe ser calibrado por lo menos cada tres meses o dependiendo del nmero de mediciones realizadas. Se debe verificar que el nefelomtro facilite lecturas estables en todos los rangos de sensibilidad empleados. Procedimiento Medicin de la turbiedad.- agitar cuidadosamente la muestra esperar que las burbujas de aire desaparezca y luego verter la muestra en la celda de medicin. Cuando sea necesario y posible, verter la muestra homogenizada en la celda de medicin y sumergir en un bao ultrasnico durante 1 a 2 segundos, o aplicar vaci para desgasificar y obtener la eliminacin total de las burbujas. Leer directamente la turbiedad en la escala del instrumento. Las muestras se deben analizar dentro de las 24 horas. y conservar en oscuridad y a 4C. Expresin de Resultados Reportar las lecturas de los valores de turbiedad con la precisin siguiente.

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Tabla N 02: Registro de lectura de Turbidez

Rango de Turbidez Precisin

0 - 1,0 1 - 10 10 - 40 100 - 100 100 - 400 400 - 1000 mayor de 1000

0,005 0,1 1 5 10 50 100

Fuente: Norma Tcnica Peruana

DETERMINACION DE NITRITOS El nitrito es inestable en presencia del Oxigeno y por lo tanto, esta ausente o presente en muy pequea cantidad en la mayora de las aguas naturales en condiciones aerbicas. La presencia de Nitrito en el agua es algunas veces tomada como ndice de polucin orgnica Materiales y Mtodos Espectrofotmetro Fotmetro de filtro Mtodo Colorimtrico Principio La concentracin de nitritos se determina por la formacin de un colorante azoico de color prpura rojizo (pH 2 a 2.5) por acoplamiento del cido sulfanilamida diazotizada con el clorhidrato de N-( 1-naftil) etilendiamina (diclorhidrato de NED) El rango de aplicacin del mtodo para medidas espectofotomtricas es de 10 a 1.000 um de N2 -N/l, y se puede aplicar de 5 a 50um de N2-N si se usan recrridos de luz de 5cn y filtro de color verde. E l sistema de color obedece a la ley de Beer hasta 180um N/l con 1cm de recorrido de luz a 543nm. Diluyendo las muestras se puede determinar concentraciones ms altas de nitritos Interferencia La incompatibilidad qumica hace improbable la coexistencia de N2 -, cloro libre y tricloruro de nitrgeno (NCl3), este proporciona un color rojo falso cuando se aade el reactivo colorante. Los iones siguientes interfieren debido a precipitacin en la condiciones de la prueba y deben estar ausentes. Sb3+, Au3+, Bi3+, Fe3+, Pb3+, Hg 3+, Ag +, cloroplatino y metavanadato. El ion cprico puede dar lugar a resultados bajos por catalizar la descomposicin de la sal de diazonio. Los iones coloreados que alteran el sistema de color tambin deben estar ausentes. Elimnese por filtracin los slidos suspendidos.

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Reactivos Agua extinta de nitrito Reactivo Colorante (cido Fosforito Sulfanilamida, Diclorhidrato) Oxalato de Sodio Sulfato Amonio Ferroso Solucin Madre de Nitrito Procedimiento Eliminacin de slidos en suspensin.- Si la muestra contiene slidos en suspendidos, filtrar a revs de un filtro de membrana de 0,45um de dimetro de poro. Desarrollo del color.- si el pH de la muestra no estuviera entre 5 y 9, ajustar a ese valor con HCl 1N o NH4OH segn convenga. Aadir 2ml de reactivo de color a 50ml de muestra a una proporcin diluida a 50ml y mezclar. Medida Fotomtrica.- Medir la absorbancia a 543nm, entre 10 minutos y 2 horas despus de aadir el reactivo de color a las muestras y patrones. Utlice como guia los siguientes recorridos de luz para las concentraciones indicadas de N2 N Tabla N 03: recorridos de luz para las concentraciones indicadas de N2 N Recorrido de Luz Cm 1 5 10 N2 -N um/l 2-25 2-6 <2

Fuente: Mtodos Normalizados para anlisis de aguas potables y residuales

Expresin de Resultados Preparar una curva patrn comparando la absorbancia de los patrones de la concentracin de N2 N. Calcular la concentracin de la muestra directamente a a partir de la curva. DETERMINACION DE NITRATOS El nitrato contiene la forma mas altamente oxidada de nitrgeno y es probablemente la forma mas estable bajo condiciones de oxigeno presente en la mayora de las aguas superficiales. El nitrgeno tambin parece ser estable bajo las condiciones normales presente debajo de la mesa de agua. Debido a su relacin con los procesos de vida, la concentracin de nitrato en el agua parece estar influida por las actividades de plantas y animales. Las bacterias juegan un papel particularmente importante en relacin al nitrato con el agua. Materiales y Mtodos Espectrofotmetro Celdas de cuarzo Sistema de Filtracin Desecador de vidrio Filtro de Membrana Balanza analtica Pipetas volumtricas 31

Frascos volumtricos Mtodo Espectrofotmetrico Principio La medicin de la absorbancia de la luz en el rango ultravioleta (UV), a la longitud de onda de 220nm permite la determinacin de nitratos. La curva de calibracin de NO3sigue la ley de Beer hasta 11mg N/L. Debido a que la metera orgnica disuelta tambin absorbe a 220nm se debe efectuar una segunda medicin a 275nm para corregir el valor debido a la absorcin de la materia orgnica, ya que el NO3- no absorbe a 275nm. El alcance de esta correccin emprica est relacionada con la naturaleza y con la concentracin de la materia orgnica y puede variar de un tipo de agua a otra. Interferencia Interfieren la materia orgnica disuelta, los tensiactivos, nitritos (NO2) e iones de Cromo (Cr6+).Puede interferir varios iones inorgnicos, que no se encuentran normalmente en el agua natural, como los cloritos y cloratos. Las sustancias inorgnicas pueden ser compensadas con un anlisis independiente de sus concentraciones y la preparacin de curvas de correccin individuales. Reactivos Agua libre de Nitratos Nitrato de Potasio Cloroformo cido clorhdrico Solucin primaria de nitratos Solucin intermedia de nitrato Solucin de cido clorhdrico Obtencin de la curva de calibracin: seguir las instrucciones del fabricante para el manejo del espectrofotmetro. Procedimiento A 50ml de muestra, aadir 1ml de solucin de HCl y mezclar bien. Si la muestra contiene slidos suspendidos, filtrar usando filtros de membrana de 0,45um Para la medicin en el espectrofotmetro leer la absorbancia, concentracin o transmitancia que corresponde al agua destilada puesta en cero de absorbancia, o concentracin o a 100% de transmitancia. Las muestras se deben analizar dentro de las 48 horas. y conservar a 4C. Una vez calibrado el instrumento, determinar la concentracin de la muestra de acuerdo al siguiente procedimiento: a) Leer las muestras en lote de 5 en 5, insertando entre lotes las soluciones de calibracin y de cero. Repetir las lecturas en caso necesario. b) Despus de introducir cada muestra, esperar que el sistema se estabilice. c) Hacer diluciones apropiadas de la muestra cuando las concentraciones estn fuera del rango de la curva de calibracin. d) Usar longitud de onda de 220nm para obtener la lectura de NO3- y a 275nm para determinar la interferencia debida a la materia orgnica

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Expresin de Resultados. Correccin por materia orgnica disuelta.- Para obtener la absorbancia debida a NO3- N2 , restar dos veces la lectura de la absorbancia a 275nm de la lectura para obtener la absorbancia debida a NO3- . Usando la muestra corregida por absorbancia obtener las concentraciones de las muestras directamente de la curva estndar. Nota: Si el valor es mayor del 10% de la lectura a 220nm, usar el mtodo del electrodo selectivo, el mtodo de cromatografa inica el mtodo por reduccin con cadmio. Clculos Calcular la concentracin de NO3 -N en la muestra, de acuerdo a la siguiente expresin: mg/L NO3 N = lectura mg/L (interpolada de la curva de calibracin) x Factor de dilucin Para expresar los resultados como nitratos, usar la siguiente mg/L NO3 = mg/L NO3 N x 4.428

DETERMINACION DE METALES PESADOS DETERMINACIO DEL COBRE Cu El cobre es un metal que ocurre naturalmente en el ambiente y tambin en plantas y en animales. El Cobre en bajos niveles es esencia para mantener buena salud. En niveles altos, el cobre puede producir efectos nocivos como por ejemplo irritacin en la nariz, la boca y los ojos, vmitos, diarrea, calambres estomacales, nausea y an la muerte. El cobre se ha encontrado en por lo menos 906 de los 1,647 sitios de la lista de prioridades nacionales identificados por la Agencia de Proteccin Ambiental (EPA). El cobre es un metal que ocurre naturalmente en el ambiente en rocas, el suelo, el agua y el aire. El cobre es un elemento esencial para plantas y animales (incluso seres humanos), lo que significa que es necesario para la vida. por tanto, las plantas y los animales deben absorber cobre de los alimentos o bebidas que ingieren, o del aire que respiran. El cobre liberado al ambiente generalmente se adhiere a partculas de materia orgnica, arcilla, tierra o arena. El cobre no se degrada en el medio ambiente. Los compuestos de cobre pueden degradarse y liberar cobre al aire, el agua o los alimentos Materiales y mtodos
Equipo calorimtrico

Espectrofotmetro Fotmetro de filtro Tubos Nessler de 100ml Mtodo de la Batocuproina Principio El ion cuproso forma un quelato de color naranja soluble en agua con bisulfato de batocuproina (sal disdica cido 2,9-dimetil-4,7difenil-1,10fenantrolindisulfnico). Aunque el color se forma en intervalo de pH 3,5 a 11, el intervalo de ph recomendado es 4 y 5.

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La muestra se tampona a un pH de aproximadamente 4,3 y se reduce con clorhidrato de hidroxilamina. Se mide la absorbancia 483nm. E l mtodo puede aplicarse de cobre hasta al menos 5mg/l con una sensibilidad de 20um/l.

Interferencia Las siguientes sustancias pueden tolerarse con un error inferior a +/- 2 por 100 Sustancias Cationes Aluminio Berilio Cadmio Calcio Cobalto (II) Cromo (III) Estroncio Hierro (II) Hierro (III) Litio Magnesio Manganeso (II) Nquel (II) Sodio Torio (IV) Zinc Aniones Clorato Cloruro Fluoruro Nitrato Nitrito Ortofosfato Perclorato Sulfato Concentracin mg/l 100 10 100 1,000 5 10 200 100 100 500 100 500 500 1,000 100 200 1,000 1,000 500 200 200 1,000 1,000 1,000

Reactivos Agua libre de cobre Solucin de cobre de reserva (cido Ntrico, lamina de cobre electroltico) Solucin de cobre patrn cido clorhdrico Solucin de clorhidrato de hidroxilamina Solucin de citrato de sodio Solucin Disulfonato de batocuproina disdica. Procedimiento Llevar con la pipeta 50ml de muestra, o porcin adecuada diluida hasta 50ml, a un erlenmeyer de 250ml. En distintos matraces de 250ml, prepara un blanco de agua de 50ml y una serie de patrones de cobre de 50ml que contengan 5, 10, 15, 20, y25ug Cu. Aadir a la muestra

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blanco y patrones, mezclando despus de cada adicin 1mlde HCl + 1, 5ml de solucin de solucin de citrato y 5ml de solucin de clorhidrato de hidroxilamina, 5ml de solucin de citrato de sodio y 5ml de solucin de disulfonato de batocuproina disdica. Pasar las clulas y leer las absorbancia en funcin de los microgramos de Cu en los patrones. Calcular la concentracin a partir de la curva de calibracin. Clcular um/Cu (en 66ml de volumen final) mg/l Cu= ------------------------------------------------ml. de muestra

DETERMINACION DEL HIERRO Fe El hierro es el cuarto elemento ms abundante en la corteza terrestre (5%). Es un metal maleable, tenaz, de color gris plateado y magntico. El hierro se encuentra en muchos otros minerales y esta presente en las aguas freticas y en la hemoglobina roja de la sangre. En condiciones reductoras, el hierro existe en estado ferroso. En ausencia de iones que forman complejos, el hierro frrico no es significativamente soluble a menos que el pH sea muy bajo. Al exponerlo al aire aadir oxidantes, el hierro ferroso se oxida al estado frrico y puede hidrolizarse para formar oxido frrico hidratado insoluble. En muestras de agua el hierro puede estar en forma de solucin autntica, estado coloidal que puedes ser peptizado por materia orgnica, en complejos inorgnicos u orgnicos de hierro o en partculas suspendidas relativamente gruesas. Puede estar en forma ferrosa o frrica, suspendida o disuelta. Materiales y Mtodos Equipo Calorimtrico Espectrofotmetro Tubos de Nessler Embudos de separacin Mtodo de la Fenantrolina Principio Este mtodo se basa en la 1.10 fenantrolina se combina con Fe ++, para formar un ion completo rojo anaranjado. El hierro se disuelve y se reduce al estado ferroso por ebullicin con cido e hidroxilamina, haciendo reaccionar posteriormente con 1,10 fenatrolina, a valores de pH de 3,2 3,3. El color rojo producido en la solucin obedece a la ley de Beer y es fcilmente medible por comparacin visual o fotomtrica. La intensidad del color es independiente del pH, en el mbito de 3 a 9 y estable cuando menor por 6 meses. Como las muestras de agua que se analizan han estado por lo general expuestas a al atmsfera por lo general expuesta a la atmsfera oxidndose el hierro ferroso a frrico, es con precipitacin de hidrxido frrico, es necesario lograr que todo el fierro est en solucin. Esto se hace tratando la porcin de la muestra a analizar con HCl, para disolver el hidrxido frrico.

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Tres molculas de 1,10 fenatrolina forma un quelato con cada tomo de hierro formando un complejo rojo naranja Para lograr un desarrollo rpido de color es necesario trabajar a un pH entre 2,9 y 3,5, en presencia de un exceso de fenantrolina

Interferencia Se tiene los iones interferentes los fosfatos, cromo, cobre, nquel, cobalto, zinc, mercurio, plata, cadmio, bismuto, fluoruro y algunos metales (raros). Si la muestra tiene demasiado color o materia orgnica es conveniente evaporarla y calcinar suavemente y el residuo redisolver en cido. Reactivos cido Clorhdrico concentrado Solucin tapn de Acetato de Amonio Solucin de Acetato de Sodio Solucin de Fenantrolina Reactivo de Hidroxilamina Solucin Madre de Hierro Solucin patrn de Hierro ter diisopropilico. Procedimiento Hierro Total: Si se supone que la muestra contiene menos de 2,4mg/litro de Fe., tomar con una pipeta una porcin de 50ml en un matraz de 125ml. Si se supone que la muestra contiene mayores concentraciones de Fe pipetear porciones alcuotas menores, medidas con precisin, que contengan menos de 0,12mg de Fe y se agrega agua destilada hasta completar aproximadamente 50ml. Agregar 2ml de HCL concentrado y 1ml del reactivo de Hidroxilamina. Calentar a ebullicin, agregando antes unas cuantas perlas de vidrio. Para tener la seguridad de la disolucin de todo el hierro, contine la ebullicin hasta que el volumen se reduzca a 15 - 20ml, aproximadamente 5 minutos. Si la muestra hay que calcinarla se disuelve el residuo con 2ml de solucin de fenantrolina. Mezclar bien y dejar reposar por 15 minutos para lograr el mximo desarrollo de color Pasar a un tubo nessler de 100ml, diluya hasta el aforo con agua destilada, compare con los patrones de color. Hierro Disuelto Se deja sedimentar la muestra y se decanta el sobrenadante a travs de un papel filtro fino, descartando la porcin inicial. Se contina con un volumen medio como se indica para hierro total. Hierro Suspendido Se determina los contenidos de hierro total y hierro disuelto, suspendido por diferencia.

conteniendo hierro

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Clculo mg de Fe x 1,000 mg/l de Fe= ---------------------------ml. de muestra DETERMINACION DEL PLOMO Pb El plomo es un metal gris azulino que ocurre en forma natural en pequeas cantidades en la corteza terrestre. No tiene olor ni sabor especial. El plomo se encuentra ampliamente distribuido en el medio ambiente. La mayor parte proviene de actividades como la minera, la produccin de materiales industriales y de quemar combustibles fsiles. Materiales y Mtodos Espectrofotmetro Embudos de separacin Buretas de distribucin automtica. Mtodo de la Ditizona Principio Se mezcla una muestra acidulada que contenga cantidades del orden microgramos de plomo con solucin reductora amoniacal de citrato-cianuro y se extrae con ditizona en cloroformo (CHCL3) para formar un ditizanato de plomo de color rojo cereza. Se mide fotomtricamente el color de la solucin de color mixta. El volumen de la muestra tomada ser de 2 litros cuando se emplea digestin. Interferencia La ditozina forma complejos coloreados con bismuto, estao estannoso y talio monovalente en solucin amoniacal dbil de cianuro (pH 8,5- 9,5). En solucin amoniacal fuerte (pH 10 11,5) de citrato- cianuro, los ditizonatos de estos iones son inestables y solo se pueden extraer parcialmente. Este mtodo utiliza una extraccin nica de ditizona de color mixto y pH elevado. La interferencia de estao, estannoso y talio monovalente se reduce posteriormente Cuando estos iones se oxidan durante la indigestin preliminar. Una modificacin del mtodo permite la deteccin e interferencias de bismuto. Las cantidades excesivas de bismuto, estao y talio pueden eliminarse. La ditizona en CHCl3, absorve a 510nm, controlar la interferencia mediante el empleo de concentraciones aproximadamente iguales de ditizona en exceso en muestras, patrones y blancos. El mtodo carece interferencia para la deteccin de 0,0 a 30ug Pb en presencia de 20um Ti+, 100um Sn+2, 1200 um In3+, as como 1,000um de cada uno de las siguientes: Bario, cadmio, cobalto, cobre, magnesio, manganeso, plata zinc, aluminio, cromo, hierro, estroncio y vanadio. PO4 Y SO4.-cantidades de orden de metales alcalinos no interfieren. Existe una modificacin para evitar interferencia de cantidades excesivas de bismuto o estao. Reactivos Solucin de plomo de reserva Solucin de plomo de trabajo cido Ntrico Hidrxido de Amonico Solucin de citrato cianuro

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Solucin de ditizona Solucin de sulfito de sodio Procedimiento a) Con digestin de la muestra.-Aadir a una muestra digerida, que no contenga mas de 1ml de cido conc, 2 ml de cido ntrico 1+4 y filtrar Aclarar el vaso de digestin con 50ml de agua y aadir al filtro. Aadir 50ml de solucin amoniacal de citrato-cianuro, mezclar y enfriar a temperatura ambiente. Aadir 10ml de solucin de ditizona de trabajo, sacudir vigorosamente durante 30 segundos el embudo tapado y deje que se separen las capas. Insertar algodn carente de plomo en el vstago del embudo de separacin y saque la capa inferior . Descartar 1 a 2ml de la capa CHCl 3, y llenar a continuacin la clula de absorcin. Medir la absorbancia del extracto a 510nm, utilizando una solucin de ditizona de trabajo, segn el aparato 3g, poner el espectrofotmetro a cero. b) Sin digestin de la muestra.- Aadir a 100ml de muestra acidulada (pH 2) en un embudo de separacin de 250ml , 20ml de cido ntrico 1+4 y 50ml de solucin reductora de citrato-cianuro , mezclar. Aadir 10ml de solucin de ditizona de trabajo y trabajar como se indica anteriormente. c) Curva de Calibracin.- Trazar la grafica de concentracin por lo menos de 5 patrones y un blanco en funcin de la absorbancia. Determinar la concentracin de plomo en el extracto a partir de la curva. Todas las concentraciones son ug Pb/10ml de extracto final. DETERMINACION DEL CROMO Cr El cromo es un metal que ocurre naturalmente en el ambiente en rocas, el suelo, el agua y el aire El cromo es liberado por la industria minera, actividades agrcolas, de manufactura y por la liberacin de aguas residuales a ros y lagos. El cromo tambin es liberado desde fuentes naturales como por ejemplo volcanes, polvo que sopla el viento, vegetacin en descomposicin e incendios forestales. El cromo liberado al ambiente generalmente se adhiere a partculas de, arcilla, tierra o arena Materiales y Mtodos Equipo colorimetrito Espectrofotmetro Fotmetro de filtro Embudos de separacin Mtodo Colorimetrito Principio Este mtodo mide nicamente el cromo hexavalente (Cr6). Por tanto para medir el cromo total hay que convertir todo el cromo a la forma hexavalente con permanganato de potsico. El cromo hexavalente se determina colorimtricamente por una reaccin de difenilcarbazida en solucin cida. Se produce un color rojo violeta de composicin desconocida. La reaccin es muy sensible, siendo la capacidad de absorcin molar basada en el cromo de aproximadamente 40.000 l g-1 cm-1 a 540nm. Para determinar el cromo total digirase la muestra con una mezcla cido sulfrico- ntricoy oxidese con permanganato potsico antes de la reaccin con la difenilcabazida.

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Interferencia La reaccin con la difenilcarbazida es especfica para el cromo. Las sales de molibdeno hexavalente y de mercurio reaccionarn para formar color con el reactivo, pero las intensidades son muchas mas bajas que para el cromo al pH especificado. Se puede tolerar concentraciones de hasta 200mg Mo o Hg/l. El vanadio interfiere fuertemente, pero las concentraciones hasta 10 veces del cromo no causaran problemas. La interferencia potencial del permanganato se elimina por reduccin previa con cido. El hierro a concentraciones superiores a 1mg/l, puede producir un color amarillo, pero el color del ion frrico no es fuerte y normalmente no se encuentra dificultades si se mide la absorbancia fotomtricamente a la longitud de onda apropiada. Las cantidades de molibdeno, vanadio, hierro y cobre que interfieren pueden eliminarse por extraccin de los cupferratos de estos metales con cloroformo. Reactivos Solucin cromo de reserva (K2Cr2O2) Solucin de cromo patrn Acido Nitrico Peroxido de Hidrogeno Hidroxido Amonico Solucin de permanganto de Potasio Solucin azida sdica Solucin de cupferrn Cloroformo Solucin de fenilcarbazida cido Fosforito cido Sulfrico Agua redestilada Procedimiento a) Preparacin de la curva de calibracin,- Analizar volmenes medidos de solucin de cromo patrn ( 5um/ml) que varia entre 2 y 20 ml para obtener patrones de 10 a 100ug Cr, en un matraz de 250ml, requieren las muestras tratamiento, con el cupferrn de los patrones. Pasar una porcin adecuada de cada solucin coloreada a una clula de absorcin de 1 cm y medir la absorbancia a 540nm Utilizar agua destilada como referencia, corregir las lecturas de los patrones restando la absorbancia de un blanco de reactivo que ha sido trabajado con el mismo mtodo. Trazar una curva de calibracin llevando valores de absorbancia corregidos frente a microgramos de cromo en un volumen final de 102ml. b) Analizar una porcin de muestra digerida en un matraz de 125ml con o sin las interferencias eliminadas y que contenga 10 100ug de Cr. Empleando indicador naranja de metilo aadir hidrxido de amonio conc., hasta que la solucin sea justo bsica al naranja de metilo. Aadir cido sulfrico gota a gota hasta que se vuelva cida, mas 1ml.Ajustar el volumen aproximadamente 40ml aadir un pedazo de plato poroso y calentar a ebullicin. Aadir 2 gotas de solucin de permanganato de potasio para obtener un color rojo oscuro. Si se empalidece aadir permanganato de potasio gota a gota, hasta mantener un exceso aproximadamente de 2 gotas, hervir por 2 minutos. Aadir 1ml de solucin de

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nitrato de plata y continuar una suave ebullicin por 1 minuto, desaparecido el color por completo, enfriar, aadir 2ml de cido fosforico. Para el desarrollo de color y medida utilizar cido sulfrico 0,2N y un pHmetro para ajustar a la solucin a un pH de 1. Pasar la solucin a un matraz volumtrico diluir hasta 100ml y mezclar. Aadir 2ml de la solucin de difenicarbazida mezclar y dejar reposar de 5 a 10 minutos para el total desarrollo del color. Pasar una porcin apropiada a una clula de absorcin de 1cm y medir la absorbancia a 540nm. Utilizar agua destilada como referencia. Corregir la lectura de la absorbancia restando la absorbancia de un blanco tratado con el mismo mtodo. Determinar los microgramos de cromo (um Cr) presentes a partir de la absorbancia corregida por referencia a la curva de calibracin.

Clculos ug/ Cr (en 102 volumen final) mg/ Cr /l = AxB Donde: A = ml de muestra original, y B = ml de porcin de 100ml de muestra digerida

DETERMINACION DEL MANGANESO Mn El manganeso es un metal que ocurre naturalmente y que se encuentra en muchos tipos de rocas. El manganeso puro es de color plateado, pero no ocurre naturalmente en esta forma. Se combina con otras sustancias tales como oxigeno, azufre o cloro. El manganeso tambin puede combinarse con carbono para producir compuestos orgnicos de manganeso. Algunos compuestos orgnicos de manganeso comunes incluyen pesticidas, tales como maneb o mancozeb, y metilciclopentadienil manganeso tricarbonuil (MMT) un aditivo en ciertas gasolinas... Materiales y Mtodos Equipo colorimetrito Espectrofotmetro Fotmetro de filtro Tubos nessler Mtodo de Persulfato Principio La oxidacin con persulfato de los compuestos manganosos solubles para formar permanganato se realiza en presencia de nitrato de plata. El color resultante es estable durante 24 horas al menos, si existe un exceso de persulfato y si no hay materia orgnica.

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Interferencia La interferencia de hasta 0,1 g de cloruro (Cl) en una muestra de 50 ml puede evitarse aadiendo 1 g de sulfato mercrico para formar complejos ligeramente disociados. Aun interferirn el bromuro y el yoduro y solos pueden estar en cantidades de traza. El procedimiento del persulfato puede ser empleado para agua potable con cantidades traza a pequeas de materia orgnica si se aumenta el periodo de calentamiento despus de aadir mas persulfato. Las soluciones coloreadas de otros iones inorgnicos se compensan en la etapa calorimtrica final. Las muestras que han sido expuestas al aire pueden dar resultados bajos debido a la precipitacin del dixido de manganeso (MnO2). Aadir a la muestra una gota de peroxido de hidrgeno al 30 %, despus de aadir reactivo especial para redisolver el manganeso precipitado. Reactivos Reactivo especial (H2SO4,HNO3, HPO4 Y AgNO3) Persulfato amonico Solucin de manganeso patrn. Procedimiento a) Tratamiento de la muestra.- preparar una muestra digerida segn las indicaciones de reduccin de materia orgnica y/o los cloruros en exceso, pipetear 0,5 a 2,0mg de Mn a un matraz de 250ml. Aadir agua destilada hasta 90ml si es necesario .b) Aadir 5ml de reactivo especial y una gota de peroxido de hidrgeno una porcin adecuada de la muestra.. Concentrar hasta 90ml por ebullicin y luego diluir hasta 90ml. Aadir 1g de sulfato de amonio, llevar a ebullicin y dejar hervir por 1 minuto. No utilizar bao mara, secar de la fuente de calor dejar reposar por 1 minuto y enfriar en el grifo. Diluya hasta 100ml con agua destilada y mezclar. Preparar patrones que contengan 0, 5,001,500ug de Mn tratando diversas cantidades de soluciones de Mn patrn de la misma forma. c) Comparacin con tubos de Nessler.-utilizar los patrones preparados que contienen entre 5 y 100ug/ Mn/100ml de volumen final. Comparar las muestras patrn visualmente. d) Determinacin Fotomtrica.- utilice una serie de patrones de 0 a 1,500ug Mn/100ml de volumen final. Realizar las mediciones fotomtricas frente a un blanco de agua destilada. Tabla N 04: Longitud Apropiada del Trayecto Luminoso para cantidades de Mn en 100ml de volumen final Intervalo de Mn ug 5 200 20 40 50- 1.000 100-1,500 Trayecto Luminoso 15 5 2 1 diversas

Fuente: Mtodos Normalizados para el anlisis de aguas potables y residuales

Preparar una curva de calibracin de concentracin de manganeso en funcin a la absorbancia de los patrones y determinar el Mn en la muestra a partir de la curva.

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e) Concentracin para la turbiedad o color.- Evitar la filtracin por posible retencin de parte del permanganato sobre el papel filtro. Si se emplea la comparacin visual, solo puede calcular el efecto de la turbidez sin que pueda hacerse ninguna correccin para los iones coloreados que interfieren, cando se realizan medidas fotomtricas utilice el mtodo de decoloracin que tambin corrige el color que interfiere. En cuanto se ha hecho la lectura en el fotmetro, aadir 0,05ml de solucin de peroxido de hidrogeno directamente a al muestra en al clula ptica. Mezclar y como tan pronto el color del permanganato desaparece por completo y no queda burbujas, leer de nuevo. Deduzca al absorbancia de la solucin decolorada de la absorbancia inicial para obtener la absorbancia del Mn. Clculo a) Cuando se toma la muestra original para anlisis ug Mn ( en 100ml. de volumen final) mgMn/l = -----------------------------------------------ml. de muestra

b) Cuando se toma una porcin de la muestra digerida (100ml) para el anlisis. ug Mn x 100ml. mgMn/l = -------------------------ml. de muestra

DETERMINACION DEL ZINC Zn Materiales y Mtodos Espectrofotmetro Tubos Nessler Fotmetro de filtro Embudos de separacin Mtodo de I de la Ditizona Principio Cerca de 20 metales pueden reaccionar con la ditizona para producir compuestos de coordinacin coloreados. Estos ditizonatos se pueden extraer con disolventes orgnicos tal como el tetracloruro de carbonato (CCl4). La mayora de las interferencias en la reaccin de ditozina zinc puede resolverse por ajuste del pH entre 4,4 y 5, 5 y por adicin de suficiente tiosulfato sdico. El zinc tambin forma un complejo tiosulfato dbil que tiende a retardar la lenta e incompleta reaccin entre zinc y ditozona. Por esta razn, la determinacin es emprica y exige emplear una tcnica idntica en anlisis de patrn y muestra.

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Interferencia La interferencia del bismuto, cadmio cobalto, cobre, oro , plomo, mercurio, nquel, paladio, plata y estao estagnoso en las pequeas cantidades en la que se encuentran en las aguas se elimina por formacin de complejos con tiosulfato de sodio y por ajuste del pH. El hierro frrico, el cloro residual y otros agentes oxidantes confieren a la ditizona un color pardo amarillo. La reaccin ditizona zinc es extremadamente sensible y se debe tomar las precauciones para evitar la contaminacin. La ditizona y ditozonatas se descomponen rpidamente a la luz intensa, no se debe exponer las soluciones a la luz del fotmetro mas tiempo del necesario, evitar la luz directa del sol. Reactivos Agua destilada Solucin madre de Zinc Solucin patrn de Zinc Acetato de Sdico cido Clorhdrico Solucin tampn de Acetato Solucin de Tiosulfato de sodio Solucin de Ditizona I Solucin de Ditizona II Solucin de Citrato de Sodio Tetracloruro de carbono Procedimiento a) Preparacin de patrones colorimetricos.- a una serie de embudos de 125ml aadir 0, 1,00, 200, 3,00,4,00 y 5,00ml de solucin patrn de zinc para obtener patrones para obtener patrones que comprendan 1,00, 200, 3,00,4,00 y 5,00ug de Zn respectivamente, aforar cada volumen con agua a 10ml , aadir a cada embudo 5ml de tampn de acetato y de 1ml de solucin de tiosulfato de sodio y mezclar, el pH de la solucin deber estar entre 4 y 5,5, aadir a cada embudo 10ml de ditozina II, tapar y agitar durante 4 minutos. Dejar que se separen las capas, secar el interior del vastago, por debajo de la llave del embudo empleando tiras de papel filtro y pasar la capa interior (CCl4) a una clula de absorbancia limpia y seca. b) Medida Fotomtrica.-medir el color rojo del ditozonato de zinc a 535 nm o el color verde de la ditizona sin reaccionar a 620nm, fijar el fotmetro al 100 por 100 de transmitancia con el blanco si se elige la longitud de onda de 535 nm, si se emplea 620 nm, fijar el blanco a una transmitancia del 10 por 100. Trazar la curva de calibracin. c) Tratamiento de la muestra.- si el contenido de zinc no esta dentro del intervalo de trabajo, diluir la muestra con agua o concentrar en una placa que contiene slice. Si la muestra se ha conservado en cido, evaporar una porcin hasta su secado en una placa con slice para eliminar el exceso de cido, no se debe neutralizar con hidrxidos debido a que stos suelen contener cantidades excesivas de zinc, ajustar el pH de la muestra entre 2 y 3 con HCl, empleando un pHmetro. Pasar 10ml a un embudo de separacin completar el anlisis como se describe el el paso a.( aadir a cada embudo 5ml de tampn de acetato) d) Comparacin Visual.- si no se dispone de un instrumento fotomtrico, tratar la muestras y patrones de la misma manera y pasar a tubos de ensayo emparejados o tubos nessler. La gama de colores obtenida con las diversas cantidades de zinc, es a grandes rasgos, como se indica:

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Zinc ug 0 (blanco) 1 2 3 4 6 Clculo

Color Verde Azul Azul violeta Violeta Rojo- violeta Rojo - violeta

Fuente: Mtodos Normalizados para el anlisis de aguas potables y residuales

ug Zn mgZn/l = -------------------ml de muestra

DETERMINACION DE SULFATOS El sulfato (SO4) se distribuye ampliamente en la naturaleza y puede presentarse en aguas naturales en concentraciones que van desde poco a varios de miles de miligramos por litro. Los residuos de drenes de minas puede aportar gran cantidad de sulfatos debido a la oxidacin de la pirita. Los sulfatos de sodio y magnesio ejercen una accin cataltica Materiales y Mtodos Nefelometro Espectrofotmetro Fotmetro de Filtro Cronometro o reloj Cuchara de medida de 0,2 a 0, 3ml Agitador magntico Mtodo Turbidimtrico Principio El ion sulfato (SO4) precipita en un medio de cido actico con cloruro de bario (BaCl2) de modo que forma cristales de sulfato de bario (Ba SO4) de tamao uniforme. Se mide la absorbancia luminosa de la suspensin del sulfato de bario con un fotmetro y se determina la concentracin de SO4 por comparacin de la lectura con una curva patrn Interferencias Interferir el color o la materia suspendida en gran cantidad. Parte de la materia en suspensin puede ser eliminados por filtracin. Si ambas interferencias son pequeas en comparacin con la concentracin sulfatos. Interferir tambin un exceso de Slice superior a 500ml/l, y en las aguas con gran cantidad de materia orgnica puede o no ser posible precipitar BaSO4 satisfactoriamente

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Reactivos Solucin Tampn A.( Cloruro de Magnesio, acetato de sodio, nitrato potasico, cido actico) Solucin Tampn B.-requerida cuando la concentracin en la muestra de sulfatos es inferior a 10mg/l. (Cloruro de magnesio, acetato de sodio, nitrato de potasio, sulfato de potasio y cido actico) Cloruro de Bario (BaCl2) Solucin Patrn de Sulfato . Procedimiento Formacin de Turbidez.-con el sulfato de bario, medir 100ml de muestra en un erelenmeyer de 250ml. Aadir 20ml de solucin tampn y mezclar en un agitador. Mientras se agita aadir una cucharada de cristales de BaCl2 empezando el recuento de tiempo inmediatamente. Agitar durante 60 segundos a velocidad constante. Medida de la Turbidez del Sulfato. de Bario.- Tras finalizar el periodo de agitacin, verter la solucin en la cubeta del fotmetro medir la turbidez a los 5 minutos. Preparacin de la curva de Calibracin.- Calcular la concentracin de SO4 en la muestra comparando la lectura de la turbidez con una curva calibrada preparada, sometiendo los patrones de SO4 al mtodo completo. Espciense los patrones a incrementos de 5mg/l en el rango de 0 a 40 mg SO4/l. Por encima de 40mg/l, la precisin disminuye y las suspensiones de sulfato de bario pierde estabilidad. Comprobar la fiabilidad de la curva de calibracin, llevando a un patrn en paralelo con cada 3 4 muestras. Correccin para el Color y Turbidez.- Corregir el color y turbidez realizando blancos a los que no se aadido BaSO4 Clculo

mg SO4 x 1.000 mg/lt SO4 =

--------------------------------------------

ml. de muestra Si se utiliza la solucin Tampn A, determinar la concentracin de sulfatos directamente a partir de la curva de calibracin, tras sustraer la absorbancia de la muestra antes de aadir cloruro de bario. Si se utilizo la solucin Tampn B.- sustraer las concentraciones del sulfato del blanco a partir de la concentracin aparente de sulfato, tal como se ha determinado antes: dado que la curva de calibracin no es una lnea recta, esto no es equivalente a sustraer la absorbancia del blanco de la absorbancia de la muestra. 4.1.4.- DETERMINACION DE ACEITES Y GRASA En la determinacin de grasa y aceites no se mide una cantidad absoluta de una sustancia especifica, mas bien se determina cuantitativamente grupos de sustancias con caractersticas fsicas similares sobre la base de solubilidad comn en triclorotrifluoroetano. Aceite y Grasas es cualquier material recuperado como sustancia soluble en triclorotrifluoroetano, incluye otros materiales extrables por el disolvente de una muestra acidificada (tales como los componentes de azufre, ciertos tintes orgnicos, y la clorofila) y no volatilizados durante la prueba limitacin que se

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debe entender claramente. De otro lado alguno constituyente que representan diferentes elementos qumicos, compuestos o grupo de compuestos, aceites y grasas estn definidos en el mtodo usado para su determinacin. El termino Grasa entonces, se aplica a una amplia variedad de sustancias orgnicas que son extradas de suspensiones o de soluciones acuosas por el exano y por el fren. Los hidrocarburos esteres, aceites, grasas, ceras y cidos grasos de alto peso molecular son los materiales mayormente disueltos por dichos solventes. El termino Aceite representa una gran variedad de hidrocarburos de bajo o elevado peso molecular, de origen mineral, que abarca desde gasolina hasta combustibles y aceites lubricantes. Adems incluye todos los glicridos de origen animal y vegetal que son lquidos a temperatura ordinaria. Materiales y Mtodos Aparato de Extraccin Soxhlet. Bomba de vaco u otra fuente de vaco Embudo Buchner 12cm Funda de Calentamiento Elctrico Parrilla Elctrica con cubierta Cartuchos de extraccin , de papel Papel filtro de 11 cm de dimetro Discos de Muselina de 11cm de dimetro Agitador Magntico Mtodo de Extraccin de Soxhlet Principio Los jabones metlicos solubles son hidrolizados por acidificacin. Solo los aceites y grasas slidas o viscosas presentes se separan de las muestras liquidas por filtracin Despus de la extraccin en un aparato de Soxhler con triclorotrifluoroetano, se pasa el residuo que queda despus de la evaporacin del disolvente para determinar el contenido de aceite y grasa. los compuestos que volatilizan a, o por debajo de 103C se perdern cuando se seque el filtro. Interferencias El mtodo es netamente emprico y solo se puede obtener resultados duplicados solo con ajustarse de forma estricta a todos los detalles por definicin cualquier material recuperable es aceite y grasa, por lo cual cualquier sustancia soluble es Triclorotrifluoroetano filtrable tal como elementos de azufre y ciertos orgnicos, sern extrados como aceite y grasa. La velocidad y el tiempo de extraccin en el aparato Soxhlet se debe a la variable solubilidad de las diferentes grasas. Adems la duracin del tiempo requerido para secar y enfriar el material extrado no puede ser alterado. Pueda que haya un incremento gradual en el peso, debido presumiblemente a la absorcin del oxigeno, y/o una prdida gradual de peso debido a la volatilizacin. Reactivos cido Clorhdrico Triclorotrifluoroetana Suspensin de ayuda al filtro del Slice de diatomeas 10g/litro de agua destilada.

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Procedimiento Tomar 1 litro de muestra en un frasco de vidrio de boca ancha y marcar el nivel de la muestra en el frasco para determinacin posteriormente el volumen exacto de la muestra. Acidular a pH 2 o inferior; por lo general, con 5ml de HCl. Preparar un filtro que consista en un disco de muselina cubierto con papel filtro,. humedecer el papel y la muselina y doblar los borde del papel. Utilizando la bomba de vaco, pasar 100ml de suspensin de diatomeas a travs del filtro preparado y lavar con un litro de agua destilada; el vaci se suspende cuando ya no pase agua a travs del filtro Filtra la muestra acidulada, aplicando el vaci hasta que no pase mas agua (muestra a travs del filtro). Transferir el papel filtro a un vidrio de reloj utilizando pinzas. Adicionar el material que se adhiri a los bordes de la muselina. Limpiar lo lados y el fondo del recipiente colector, y el embudo, con trozos de papel filtro impregnado con fren, teniendo cuidado en remover todas la pelculas de grasa y recolectar todo el material slido. Juntar estos trozos tonel papel filtro que se coloco en el vidrio de reloj. Enrollar el papel filtro con los trozos utilizados en la limpieza y acomodarlos dentro del cartucho de extraccin. Adicionar cualquier trozo de material que quede en el vidrio reloj, limpiar el vidrio de reloj con un papel filtro impregnado de fren y colocarlo en el cartucho de extraccin. Secar el cartucho con su contenido en una estufa de aire caliente a 103C durante 30 minutos. Adicionar al cartucho lana de vidrio o perlas de vidrios. Pesar el matraz de extraccin. Extraer el aceite y grasa en un aparato Soxhlet, usando fren, a una velocidad de 20 ciclos por hora durante 4 horas. Tomar el tiempo desde el primer ciclo. Destilar el fren del matraz de extraccin en un bao mara a 70C. por 15 minutos, haciendo pasar aire a travs del matraz por medio del vaci durante el ultimo minuto. Enfriar en un secador durante 30 minuto exactos y pesar. Clculos Si el solvente orgnico esta libre de residuos, el aumento en peso del matraz de destilacin tarado se debe principalmente a grasa y aceites. El aumento total en peso del matraz (A, mg) menos el residuo calculado de un testigo de fren (B, mg) es la cantidad de grasa y aceites en la muestra de agua.

( A + B) x 1,000 Grasas y Aceites mg/litros = -------------------------ml. de muestra

4.1.5 DETERMINACION DE HIDROCARBUROS En ausencia de productos industriales especialmente modificados, el aceite y la grasa estn compuestos fundamentalmente de materia grasa de origen animal, vegetal y de hidrocarburos del petrleo. Conocer el porcentaje de cada de uno de estos constituyentes en el aceite y grasa reduce la dificultad de determinar el origen principal del material, y simplifica la correccin de los problemas causados por el aceite y la grasa en el funcionamiento de las centrales de tratamiento de aguas residuales, y la disminucin de la contaminacin de los cursos de agua.

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Principio El gel de slice tiene la capacidad de absorber los materiales polares, si se mezclan una solucin de hidrocarburos y materiales grasos en triclorotrifuoroetano con gel de slice, los cidos grasos son extrados de la forma selectiva de la solucin. Los materiales no eliminados por adsorcin al gel de slice son considerados hidrocarburos en esta prueba. Interferencia Los hidrocarburos polares, tales como los compuestos aromticos complejos y los de derivados hidrocarburos del cloro, azufre y nitrgeno pueden ser absorbidos por el gel de slice. Cualquier compuesto distinto de los hidrocarburos y materia grasa recuperado por los procedimientos para la determinacin de aceite y gras tambin interfiere. Reactivos Fren Slice gel malla de 60 a 200 Procedimiento. Utilizar el aceite o grasa extrados por el mtodo de extraccin de Soxhlet. Cuando sea solo de inters los Hidrocarburos, introducir este procedimiento en el mtodo indicado, antes de hacer la medicin final. A 100ml de fren que contenga menos de 100mg de material graso, adicionar 3.0g de slice gel. Tapar el recipiente y agitar por 5 minutos en u agitador magntico. Filtrar la solucin a travs de papel filtro. Lavar la slice gel y el papel filtro con 10ml de Fren y combinar el lavado con el filtrado antes de efectuar las etapas de desalojo del Fren.

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5.-ANALISIS BIOLOGICOS DETERMINACION POR INSTRUMENTACION Son anlisis de lectura directa mediante el uso de equipo o instrumentos, y las ventajas de utilizar estos es de minimizar el consumo de reactivos, los volmenes de muestra y reduce el rea de trabajo. Para la confiabilidad de los resultados de este mtodo por instrumentacin es esencial que los instrumentos estn calibrados y que se compruebe con frecuencia y comparados regularmente con un mtodo patrn o con resultados de anlisis simultneos. Bajo este tipo de anlisis se determinan los siguientes patrones de: Oxigeno Disuelto Demanda Bioqumica de Oxigeno y Demanda Qumica de Oxigeno OXIGENO DISUELTO (O. D ) En una u otra forma todos lo organismos vivientes dependen del Oxigeno, para mantener el proceso metablico que produce energa para crecer y reproducirse Los niveles de oxigeno disuelto (OD) en aguas naturales y residuales dependen de la actividad fsicas, qumica, bioqumica del sistema del agua DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO (D.B.O) Es la cantidad de Oxigeno requerido por las bacterias para descomponer o estabilizar la materia del agua, bajo condiciones especificas de tiempo y temperatura.(I.MA cuenta con un equipo de anlisis para DBO) DEMANDA QUIMICA DE OXIGENO (D.Q.O) Es la medida del oxigeno equivalente al contenido de materia orgnica de una muestra que es susceptible a la oxidacin por un oxidante qumica fuerte. Es la cantidad de oxigeno necesaria para oxidar el carbono orgnico completamente a C02, H20 y NH4 Materiales y Mtodos Equipo de anlisis para la determinacin del Oxigeno Disuelto Equipo de anlisis para la determinacin de la Demando Bioqumica de oxigeno Equipo de anlisis para la determinacin de la Demanda Qumica de Oxigeno Para el uso y procedimiento del mtodo seguir con las recomendaciones del fabricante (Anexo N 7) La determinacin de estos parmetros es importante por que nos dar a conocer la cantidad de Oxigeno presente en los cuerpos de agua, ya que para la vida y desarrollo de los peces y otros organismos acuticos es necesario mantener los niveles adecuados de oxigeno en el agua.

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6.-ANALISIS MICROBIOLOGICOS DEL AGUA ANALISIS FECALES MICROBIOLOGICOS PARA COLIFORMES TOTALES Y

El grupo de las coliformes esta formado por todas las bacterias aerobias y anaerobias facultativas gran negativas, no formadoras de espora y con forma de bastn que fermentan a lactosa, produciendo gas y cido alas 48 horas a 35C. Los resultados de los tubos y diluciones replicados se comunican en trminos del Nmero Mas Probable (NMP) de microorganismos existentes. Este anlisis generalmente esta hecho para investigar casos de contaminacin con excretas de agua de consumo, aguas de ros, sistemas de tratamiento de aguas residuales, aguas de balnearios, aguas marinas y en general, para el monitoreo de la calidad del agua. Materiales y Mtodos. Autoclave Incubadora Balanza Bao Maria (Coliformes Fecales) Filtro de membrana Refrigerador Material de vidrio de rutina Agua destilad Medios de cultivo MTODO DE LOS TUBOS MLTIPLES PARA COLIFORMES TOTALES Y FECALES Medio de Cultivo para Coliformes Totales Prueba Presuntiva. Existen tres medios de cultivo para esta prueba (caldo Luaril Sulfato, Caldo Lauril Triptosa, Caldo Lactosa) Medio de Cultivo: Caldo Lauril Sulfato Triptosa Fundamento. Debido a su elevada calidad nutritiva y al tampn de fosfatos que contiene este medio de cultivo se garantiza el crecimiento y la Intensa produccin de gas. La produccin de gas puede evaluarse con tubos de fermentacin. El contenido de Luaril Sulfato inhibe notablemente el crecimiento de otras bacterias. Composicin Gramos
Triptosa Fosfato de Hidrgeno di potsico K2HPO4 Fosfato de dihidrgeno potasio KH2PO4 Cloruro de Sodio NaCl Lactosa Laurel Sulfato de Sodio 20 2.75 2.75 5.0 5.0 0.1 --------35.6

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Preparacin Disolver 35.6gr en 1,000ml de agua destilada , mzclese cuidadosamente y calintese para disolverlo, distribuir la cantidad de 10ml en los tubos de ensayo provistos de los tubos durhan invertidos. Esterilizar en el autoclave por 15 minutos a 15 libras de presin a 121C. Al final de la esterilizacin el pH es 6.8 +/- 02. Incubar por 24 horas. Procedimiento La eficacia de esta tcnica es de sembrar cantidades alcuotas de muestras de agua de 10ml, 1ml y 01ml, segn el caso que requiera en cada una de las series de los tubos mltiples. Todas las muestras deben ser agitadas vigorosamente al igual que las diluciones antes de inocular en la serie de los tubos mltiples. Se trabajara con una serie de 3 (10ml.1ml.y 0.1ml) con 5 repeticiones. Al cabo de 24 horas los tubos deben ser examinados, si no se ha producido gas se examina a las 48 horas. Prueba Confirmativa Medio de Cultivo: Verde Brillante de Lactosa Bilis (Brilla) Fundamento: La bilis y el colorante verde brillante inhibe notablemente el desarrollo de la flora contaminante e incluso Clostridios degradadores de la lactosa (C. perfringens). La fermentacin de la lactosa con formacin de gas, es un indicativo de la presencia de E.coli, se demuestra mediante los tubos de fermentacin de gas Durhan. Las otras bacterias coliformes crecen, pero sin producir gas. Composicin
Peatona de Carne Lactosa Bilys Buey Desecada Verde Brillante

Gramos
.10.0 10.0 20.0 0.0133 ------------40.0133

Preparacin Disolver 40gr en 1,000ml de agua destilada , mzclese cuidadosamente y calintese para disolverlo, distribuir la cantidad de 10ml en los tubos de ensayo provistos de los tubos durhan invertidos. Esterilizar en el autoclave por 15 minutos a 15 libras de presin a 121C. Al final de la esterilizacin el pH es 7.2 +/- 0.1 Procedimiento Llvese a la fase de confirmacin todos los tubos primarios en los que haya aparecido abundante cantidad de gas, o de crecimiento cido a las 24 horas de incubacin. Si se observa una fermentacin activa o un crecimiento cido antes de las 24 horas los tubos se llevan al medio de confirmacin sin esperar a que transcurra las 24 horas. S i hay otros tubos primarios con crecimiento cido despus de 48 horas de incubacin tambin se llevara a al fase confirmativa.

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Agtense suavemente o hgase rotar los tubos primarios que muestran formacin de gas o crecimiento cido suficiente para que se produzca una resuspensin de los mismos microorganismos. Con una asa estril de 3mm de dimetro psese una asa completa de cultivo al tubo de fermentacin que contiene el medio verde brillante de lactosa bilis , introduzca rpidamente al fondo del tubo con el medio. Repita esta operacin en todos los tubos posiblemente positivos. Incubar por 24 y 48 horas a 35C Interpretacin. La formacin de cualquier cantidad de gas en el vial invertido en el medio de fermentacin de verde brillante de lactosa bilis a las 48 horas constituye un resultado positivo en la fase confirmativa. Calclese el valor del NMP a partir del nmero de tubos positivos. Medio de Cultivo para Coliformes Fecales La prueba para coliformes fecales permite diferenciar, entre los coliformes de origen fecal (intestino de los animales de sangre caliente)y los procedentes de otras fuentes. Medio de Cultivo: EC Fundamento La lactosa favorece a las bacterias lactosa positivas, especialmente coliformes y E. coli. Los grmenes lactosa consumen lactosa con produccin de gas; las sales biliares inhiben notablemente el crecimiento de grmenes Gran positivos o de microorganismos no adaptadas al medio ambiente intestinal Composicin
Triptosa Cloruro de Sodio Lactosa Sales biliares N 3 o mezcla de sales biliares Fosfato de Hidrgeno di potsico K2HPO4 Fosfato de dihidrgeno potasio KH2PO4

Gramos
20.0 5.0 5.0 1.5 4.0 1.5 ---------37.0

Preparacin Disolver 37 gr de este medio en 1000ml de agua destilada, mezclar cuidadosamente y calentar para disolverlos. Antes de esterilizar distribuir la cantidad de 10ml en los tubos de ensayo provistos de los tubos durhan invertidos, cerrar los tubos con tapones de metal o de plstico resistentes al calor El pH debe ser de 6.9 despus de la esterilizacin. Analizar todos los tubos de fermentacin presuntivos que hayan mostrado alguna cantidad de gas o un fuerte crecimiento durante las 48 horas de inoculacin en la prueba de confirmacin. Agitar suavemente y grar los tubos de fermentacin que muestran gas o un fuerte crecimiento. Con una asa estril de metal de 3mm de dimetro, pase el cultivo a cada tuvo de fermentacin con el medio, Incubar los tubos con medio EC. a 44.5 C. durante 24 horas, poner todos los tubos con EC. en un bao de agua antes que transcurra 30 minutos de la inoculacin y mantener a una profundidad suficiente.

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Interpretacin S e considera como reaccin positiva la aparicin de gas en el medio EC. a las 24 horas o menos de incubacin La falta de gas ( a veces se produce crecimiento)constituye un resultado negativo, que indica que el origen de los microorganismos no es el aparto digestivo de los animales de sangre caliente. Los resultados se calculan mediante el NMP. Prueba Complementaria. Agar EMB segn Levin (agar eosina-azul de metileno-lactosa sacarosa) Fundamento Los colorantes contenidos en su formula inhibe a muchos grmens gram positivos de acompaamiento Composicin Gramos Peptona de carne 10.0 Lactosa 5.0 Sacarosa 5.0 Di- potasio de hidrogeno fosfato 2.0 Eosina amarilla 0.4 Azul de Metileno 0.065 Agar agar 13.5 -----------35.965 Preparacin. Disolver 36gr del en 1,000ml de agua destilada, dejar reposar 15 minutos, llevar a bao Maria (punto de ebullicin) hasta la disolucin completa.) Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 15 libras de presin y 121C. El pH medido despus de la esterilizacin es de 7.1 Agar MacCONKEY Fundamento Las sales biliares y violeta inhibe considerablemente a la flora gran positiva. La lactosa con el inhibidor de pH rojo neutro, sirve para la comprobacin de la degradacin de dicho azcar. Composicin Peptona de caseina Peptona de carne Cloruro de sodio Lactosa Mezcla de sales biliares Rojo neutro Cristal Violeta Agar ager Gramos 17.0 3.0 5.0 10.0 15.0 0.03 0.001 13.5 ----------50.031

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Preparacin. Disolver 50gr del agar en 1,000ml de agua destilada, dejar reposar por 15 minutos, calentar bao Maria (punto de ebullicin) hasta la disolucin completa.) Esterilizar en autoclave por 15 minutos a 15 libras de presin y 121C. El pH medido despus de la esterilizacin es de 7.

CALCULO Y REGISTRO DEL NUMERO MAS PROBABLE MNP El calculo de la densidad probable de bacterias coliformes totales y fecales en una muestra esta basada en la combinacin de los resultados positivos y negativos obtenidos en cada dilucin. La densidad de bacterias coliformes se expresa como NMP de coloformes totales por 100ml y NMP de coliformes fecales por 100ml. El NMP se obtiene a travs de tablas en las que se presentan lmites de confianza de 95% para cada valor de NMP determinado (Anexo N 08) Tres diluciones son necesarias para la obtencin del cdigo del NMP, Si tenemos sembrados 3 de 10ml; 3 de 1ml; y 3 de 0.1ml resultados positivos es de 3 de 10ml, 2 de 0.1ml y ninguno de 0.1ml. El cdigo resultante para la obtencin del NMP ser 3- 2- 0 Se localiza el valor en la tabla y se ajusta con la siguiente formula . Valor de la tabla del NMP x 10 NMP = -----------------------------------------------Volumen de la dilucin inicial NMP = /100ML

Cuando se utiliza ms de tres diluciones en series de diluciones decimales, slo se tomarn los resultados de tres de ellas para calcular el NMP. Para seleccionar las tres diluciones a utilizar en la determinacin del cdigo del NMP, eljase la dilucin mas alta con resultados positivos entre los 5 estudiados (no hay ninguna dilucin menor que haya dado un resultado negativo) y las dos siguientes diluciones mas altas. (Ver Anexo N 08).

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METODO POR EL FILTRO DE MEMBRANA PARA COLIFORMES TOTALES Y FECALES Esta tcnica de filtro de membrana (FM) es altamente reproducible se puede utilizar para estudiar volmenes relativamente grandes de muestra y proporciona resultados numricos mas rpidos que el mtodo de los tubos mltiples. La tcnica del filtro de membrana es extraordinariamente til para controlar las posibles situaciones de urgencia en relacin con el agua potable y para el estudio de las distintas aguas naturales. Sin embargo esta tcnica tiene limitaciones, sobre todo para estudiar aguas con elevada turbidez o que contengan bacterias no coliformes. (Mtodos Normalizados para anlisis de aguas Potables y residuales) Materiales y Mtodos Medio de Cultivo para ColiFormes Totales Agar selectivo para aislamiento y diferenciacin del Escherichia coli en la investigacin biolgica del agua. Medio de Cultivo: Agar Endo LES Composicin
Ex tracto de levadura Casitona o Tripticas Tiopeptona o tiotana Trptosa Lactosa Fosfato de Hidrgeno di potsico K2HPO4 Cloruro de Sodio NaCl Fosfato de dihidrgeno potasio KH2PO4 Luaril Sulfato de Sodio Desoxicolato de sodio Sulfato de sodio Na2So3 Fucsina bsica Agar

Gramos
1.2 3.7 3.7 7.5 9.4 3.3 3.7 1.0 0.05 0.1 1.6 0,8 15.0 ---------50.45

Preparacin Para rehidratar el medio disolver 51gr en 1 litro de agua destilada conteniendo 20ml de etanol (alcohol de 95, que controla el crecimiento de fondo y el tamao de las colonias de coliformes) dejar reposar por 15 minutos y se calienta en Bao Maria a punto deebullicin para disolver el medio por completo. Enfriar a 45 50C. uniformemente girar el frasco o agitndolo suavemente antes de verterlo en placas petri estriles en porciones de 5 -7ml por placa Preparar lo necesario de acuerdo a la cantidad de muestras a analizar en un periodo de 3 das. Las placas no se expondrn a al luz directa, sino que se conservarn en la oscuridad a 2.10C, desechndose las no utilizadas despus de 2 semanas Procedimiento Se analizaran las aguas filtrando tres volmenes distintos (diluidos o no) en funcin a la densidad bacteriana que se espere (cuadro N 1)..Cuando se filtra menos de 20ml (diluidos o no) se aadirn alrededor de 10 ml de agua de dilucin estril al embudo antes de la filtracin, se aumenta con ello el volumen del agua, lo que ayuda a tener una

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dispersin uniforme de la suspensin bacteriana en la totalidad de la superficie filtrante electiva.. Para la filtracin de la muestras se coloca con pinzas estriles un filtro de membrana estril (con la trama hacia arriba) sobre la placa porosa del receptculo. Sitese con cuidado la unidad del embudo correspondiente sobre el receptculo y fjese .La filtracin se lleva acaba bajo un vaco parcial. Todava con el filtro en su lugar, aclrese el embudo filtrado tres porciones de 20 a 30ml de agua de dilucin estril. Tras el enjuagado final y la desconexin al vaco del proceso de filtrado, desbloquese y retrese el embudo e inmediatamente quitar el filtro de membrana con una pinzas estriles, colocndolo en el medio seleccionado con un movimiento de rotacin para evitar que quede aire atrapado si esto ocurre se debe tratar de aprisionar eliminando con una pinza estril los bordes de la membrana con suavidad. Introducir una muestra de agua de lavar estril (100ml) despus de filtrar una serie de 10 muestras para comprobar posibles contaminaciones cruzadas o contaminacin de agua de lavado. Incubar la membrana de control en las mismas condiciones que las dems muestras (a 35C por 22- 24 horas) Al comienzo de cada serie de filtraciones, utilice unidades de filtracin estriles como mnima precaucin para evitar la contaminacin accidental. Considerar que se interrumpe una serie de filtraciones cuando transcurre un intervalo de 30 o mas minutos entre la filtracin de dos muestras. Si se produjera una interrupcin de este tipo, tratar la filtracin siguiente como si fuese una nueva serie y esterilizar los soportes de los filtros de membrana que se estn utilizando. Descontaminar los filtros mediante rayos ultravioleta (UV), chorro de vapor o agua hirviendo. En el caso del empleo de luz UV, bastara con la exposicin de 2 minutos Las placas se incuban por 22-24 horas a 35C en posicin invertida Interpretacin La tpica colonia de coliformes tiene un color rojo oscuro con un brillo metlico en superficie. El rea brillante puede ser un pequeo punto, o bien cubrir por completo la superficie de la colonia. Cuadro N 01: Volmenes de Muestra Recomendados Para la Prueba de Coliformes Totales en Filtro de Membrana
Volumen (X) a Filtrar ml 100 50 10 1 0.1 0.01

Origen del Agua 0.001 0.0001 Agua Potable X Piscinas X Pozos, Manantiales. X X X Lagos, Pantanos. X X X Entrada al suministro de agua. X X X Playas Pblicas. X X X Agua de Ro X X X X Alcantarillado clorado. X X X Alcantarillado no tratado X X X X Furente: Mtodos Normalizados para el anlisis de Agua potables y residuales

Clculo y Expresin de Resultados Los resultados de la densidad de coliformes es el total de coliformes por 100ml. Calclese el recuento utilizando filtros de membrana que tengan 20- 80 colonias de coliformes y no mas de 200 colonias de todos los tipos por membrana, y aplicando la siguiente ecuacin. 57

Colonias de coliformes contadas x100 Colonias de coliformes totales/100ml = ------------------------------------------------Volumen de muestra filtrada

Para recuento de coliformes comprobados, ajstese al recuento inicial, teniendo en cuenta el porcentaje de comprobacin positiva y comunquese comorecuento comprobado de coliformes por 100ml Colonias de Coliformes contadas ------------------------------------------- x100 Volumen de muestra filtrada

Porcentaje de coliformes verificados =

Medio de Cultivo Para Coliformes Fecales: Caldo M-FC Medio selectivo para demostracin y aislamiento de E.coli fecal. Medio de Cultivo: Caldo M-FC Composicin
Triptosa Proteosa peptona N3 polipeptona Extracto de levadura Lactosa Cloruro de sodio NaCl Salas biliares N 3 o mezcla de sales biliares Azul de anilina Agua destilada pH 7

Gramos
10.0 5.0 1.5 12.5 5.0 1.5 0.1 1,000ml

Preparacin. Rehidratar en agua destilada con 10ml de cido rosalito al 1 por 100 en NaOH al 0,2N. Calientar hasta casi ebullicin, retirar rpidamente del calor y enfri a menos de 50C. No se esteriliza en autoclave. Divida en porciones de 5-7ml y colquelo en placas petri de 50x 12mm donde se deja solidificar si se utiliza agar el pH final debe ser de 7.4. Conservase el medio preparado a 2-10C. descartando a las 2 semanas. Procedimiento. La tcnica de filtros de membrana para coliformes fecales es parecida con la de coliformes totales con las siguientes diferencias Para efectuar las diluciones se utilizar los volmenes que produzcan recuento de 20 60 colonias de coliformes fecales por membrana. Los cultivos en membrana para coliformes fecales se incuban en bolsas de plstico impermeables o sellar las placas individualmente con una cinta a prueba de agua para evitar la filtracin durante la inmersin sumergida en Bao Maria a 44 C durante 24 horas.

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El tiempo transcurrido desde la filtracin hasta la incubacin no debe exceder de 30 minutos. Todas las colonias azules son fecales. Recuento Las colonias producidas por bacterias de coliformes fecales en el medio M-FC presentan distintos matices de azul. Las colonias amarillo plido pueden ser de E. coli y hay que comprobar si producen gas en manitol a 44,5C. Las colonias de coliformes no fecales son de tonos grises a cremosos. En condiciones normales se observan pocas colonias de coliformes no fecales en el medio M-FC debida a la accin selectiva de la elevada temperatura y la adicin de la sal cido roslico. Las colonias se cuentan por medio de una lupa estereoscpica binocular de campo amplio y pocos aumentos (10 a 15) o mediante dispositivos pticos similares Cuadro N 02: Volmenes de Muestra Recomendados Para la Prueba de Coliformes Fecales en Filtro de Membrana
Volumen (X) a Filtrar ml 100 50 10 1 0.1 0.01 X X X X X X X X X X

Origen del Agua 0.001 Lagos y pantanos Pozos, manantiales Toma del suministro de agua Aguas naturales de bao Planta de tratamiento de aguas residuales, efluente secundario X X X Chacras de granjas, ros X X X Torrenteras X X X Alcantarillado municipal no tratado X X X Desague de establos X X X Furente: Mtodos Normalizados para el anlisis de Agua potables y residuales

Clculo y Expresin de Resultados Los resultados de la densidad de coliformes es a partir de las cantidades de la muestra que producen recuentos dentro de los limites deseados de 20 60 colonias de coliformes fecales, estos limites son mas restrictivos que los de 20 -80 colonias de coliformes totales, debido al mayor tamao en las colonias del M-FC. El clculo se realizara como se describe para coliformes totales. Los resultados se emitir en trminos de densidad de Coliformes Fecales /100ml. ANALISIS MICROBIOLOGICOS PARA HETEROTROFOS Materiales y Mtodos. Autoclave Incubadora Balanza Bao Maria (Coliformes Fecales) Filtro de membrana Refrigerador Material de vidrio de rutina Agua destilad Medios de cultivo 59

METODO POR EL FILTRO DE MEMBRANA PARA HETEROTROFOS Existen tres medios de cultivo para esta prueba (Agar RHP, Agar R2A y Agar NWRI) Medios de Cultivo: Agar RHP Este medio altamente nutritivo solo se utilizara para el mtodo de filtro de membrana Composicin Peptona Gelatina Glicerina Agar Agua destilada Gramos 20.0 25.0 10.0 15.0 1,000ml

Preparacin Mezclase todos lo ingredientes salvo la glicerina, ajuste el pH a 7.1 con NaOH al 01 N. Calintese hasta que se disuelva, adase la glicerina y poner a la autoclave por 5 minutos a 121C. Tambin se puede utilizar el Agar R2A, bajo poder nutritivo, proporciona recuentos mas elevados Preparacin de Placas Verter porciones de 5ml. de medio estril en las placas petri, las placas preparadas pueden guardarse en bolsa plstico o envases bien cerrados bajo refrigeracin y se recomienda no conservarlos mas de una semana. Tamao de Muestra El volumen que se va a filtrar vara segn el tipo de muestra. Seleccinese el tamao mximo de la misma que produzca 20 -200 UFC Procedimiento Fltrese el volumen adecuado a travs de un filtro de membrana estril de 47mm y 0.45 um de poro, en vaci parcial. Aclrese el embudo con 3 porciones de 20 a 30 ml de agua de dilucin estril. Colquese el filtro en la placa con agar. Colquese la placas ajustadas en cajas o bolsas de plstico que contengan toallas de papel humedecidas, incubar a 35 +/-o5C durante 48 horas. Recuento En los filtros de membrana cuntese las colonias con ayuda de un microscopio estereoscpico a 10 -15 aumento. Por ello es preferible colocar la placa petri en la platina del microscopio en un angula de 45, con una fuente de luz que incida verticalmente sobre las colonias. La densidad ptima de colonias por filtro es de 20 a 200, con colonias pequeas y no prximas entre si, se acepta un nmero mayor. Cuente todas las colonias que existen en la membrana, en el caso que existan 1 a 2 o menos por cuadrado. Para intervalo de 3 a 10 colonias por cuadrad, cuntese 10 cuadrados y obtengas la medida por cuadrado. Cuando exista de 10 a 20 colonias por cuadrado cuente 5 y obtenga la medida por cuadrado. Multiplicar este numero medio

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por 100 veces el inverso de la dilucin para obtener el nmero de colonias por mililitro. Si existen mas de 20 colonias por cuadrado comunquese el recuento como > 2.000 veces al reciproco de la dilucin. Los recuentos de los medios se lee como Unidades Formadoras de Colonias (UFC) calculadas. Solo se harn recuentos estimativos cuando existan colonias aisladas y seoparadas sin expansin METODO DE LA PLACA FLUIDA El mtodo de la placa fluida es fcil de poner en prctica y puede adaptarse a volmenes de muestra o de muestra diluida que axila entre 0,1 y 2,0ml. Las colonias que se producen son relativamente pequeas y compactas y muestran menor tendencia de rodear unas a otras que las producidas por crecimiento en superficie. Por otro lado las colonias sumergidas suelen tener un crecimiento ms lento, son difciles de transferir y no se describe en los estudios publicados. Para mantener la temperatura del agar es necesario de un bao de agua controlado por un termostato as, puede producirse un significativo choque de calor durante la exposicin transitoria de la muestra al agar a 45 45C. Materiales y Mtodos Cmara de Flujo Laminar Placas petri Pipetas esterilizadas Agitador magntico Tubos Medios de Cultivo S e puede utilizar el agar R2A o el agar NWRI Medio de Cultivo: Agar NWRI Composicin Peptona Caseina soluble K2PO4 MgSO4 FeCl3 Agar Agua destilada Gramos 3,0 0,5 0,2 0,05 0,001 15,0 1,000ml

Preparacin Ajustar a ph 7,2 antes de pasar por la autoclave por 15 minutos a 121C. Procedimiento Marcar cada placa con el nmero de la muestra, la dilucin y fecha Preparar cada volumen de muestra o dilucin por duplicado. Mezclar las diluciones con movimientos de arriba hacia abajo (adelante y atrs) unas 25 veces o con agitador magnetico por 15 segundos Colocar de 10 a 12 ml de medio a cada placa manteniendo a 44 46 C.

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Una vez aadido el medio a todas las placas, mzclese cuidadosamente el medio lquido con la porcin de la muestra en estudio. Girar las placas suavemente en forma horaria y antihoraria o rotando e inclinndola a la vez. Dejar solidificar las placas por 10 minutos, incubar a 35C por 48 horas en forma invertida Recuento Solo se consideraran en el recuento a las placas que muestran entre 30 a 300 colonias. , Registrar el recuento bacteriano multiplicando el numero medio por placa por el reciproco de la dilucin utilizada y presentar en Unidades Formadores de Colonia (UFC) por mililitro calculado.

METODO DE LA PLACA FLUIDA

Muestra de Agua

1 ml.

99 ml. Blanco

Volumen aadido

1 ml.

0.1 ml.

1 ml.

0.1 ml.

Placas de cultivo 1 ml. 0.1 ml. 10-2 ml. 10-3 ml.

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7.-RECURSOS BIOLOGICOS IDENTIFICACION DE FITOPLANCTON Y ZOOPLANCTON El plancton es el conjunto heterogneo de organismos que viven en suspensin en las aguas de los ocanos, lagos, estanques y ros. Como son incapaces de moverse, o a lo sumo realizan movimientos errticos, estn a merced de las corrientes y de las olas. Pueden dividirse en dos grupos principales: Fitoplancton.- (algas microscpicas) aparece en forma unicelular coloidal o filamentosa, muchas son fotosintticas y sirven de alimento al zooplancton y a otros organismos acuticos. Zooplancton.- (animales microscpicos) es el conjunto de animales diminutos con movimientos de cilios y flagelos, que constituyen los consumidores primarios de los ecosistemas acucolas. Mtodo Toma de Muestra La toma de invertebrados se suele hacer con redes de mano de tipo Kick , tomando muestras en medio del ro, en zonas de corriente, y no en las orillas. Las muestras se lavan y recogen en un frasco con formol al 4%. Procedimiento En el laboratorio se fijan con alcohol al 70%. Se observan al microscopio para determinar la especie. Se clasifican las muestras al menos hasta el nivel de taxn (especie, gnero, familia, etc.) exigido por los ndices biticos. DINAMICA DE POBLACIONES La dinmica de poblaciones es la especialidad de la ecologa que se ocupa del estudio de los cambios que sufren las poblaciones biolgicas en cuanto a tamao, dimensiones fsicas de sus individuos, estructura de edad y sexo y otros parmetros que las definen, as como de los factores que causan esos cambios y los mecanismos por los que se producen Tiene gran importancia en la gestin de los recursos biolgicos y en la evaluacin de las consecuencias ambientales por las acciones humanas. INDICES PARA DETERMINAR LA DINAMICA DE POBLACIONES Para determinar la dinmica de poblaciones mediante el uso de ndices es necesario contar con una base de datos (inventarios de los diferentes taxones). Indice de Shannon- Wiener Calcula la diversidad bitica en ecosistemas acuticos y terrestres diversidad incluida el nmero de ejemplares y la diversidad y riqueza

densidad y

ndice de diversidad de Simpson-Gini..- Expresa la probabilidad compuesta de que dos individuos extrados al azar de una comunidad pertenecen a la misma especie. Si dicha probabilidad es alta la comunidad es poco diversa.

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Indice de diversidad de McIntosh.-. Trabaja los tamaos de las poblaciones de los distintos taxones Indice de Berger-Parker.-. Mide la dominancia del taxn ms abundante ndice de Margaleet.- Numero total de especies o taxa encontrados. ndice de Captura por Unidad de Esfuerzo (CPUE) ndice relativo que nos da la idea de la abundancia densidad de los peces respecto a una unidad de esfuerzo determinada ndice de IBI.- Este sistema de calificacin de tipos de hbitat fue diseado originalmente por Karr 1991 para evaluar la condicin de los cursos de agua. Un IBI mide hasta que grado el hbitat mantiene una comunidad equilibrada, integra y adaptada de organismos que tienen una composicin, diversidad y organizacin funcional de especies comparables a los hbitat naturales de la regin.. En caso de no existir una base de datos se deben realizar inventarios rpidos para poder trabajar con los diferentes ndices de diversidad y abundancia. El mtodo de uso para la diversidad, se determinara dependiendo del tipo de especies, adicionalmente a este anlisis se puede emplear un anlisis estadstico (programa estatistica de poblaciones CD) para su comprobacin Metodologas para realizar un inventario Rpido de Peces, Mamferos, Aves y Anfibios - Reptiles PECES Mtodos La determinacin y registro d e los diferentes peces es mediante distintos mtodos de muestreo: Mtodos de muestreo Hacer reconocimiento de la zona para determinar que zonas son propicias para la evaluacin, para el muestreo de quebradas solo se considera las que tienen un ancho y profundidad significativa. En cada punto de muestreo se deben tomar los siguientes datos Ubicacin de cada punto de muestreo con coordenadas geogrficas en UTM Y altitud empleando GPS Caracterizacin fsica del punto de muestreo: ancho, profundidad, transparencia, color, fuerza de la corriente entre otros. Evaluacin y colecta de los peces empleando metodologas estandarizadas. Redes de arrastre.- para la colecta de peces se utiliza la red de arrastre a orilla de 9.6m x 17m de malla de 4mm (con una estandarizacin de 6 arrastres) y una red atarraya de 2m de dimetro y malla de 30mm (con una estandarizacin de 5 lances por pecados). Con los peces colectados determinar la especie.

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Aparato de Pesca Elctrico. Los peces se capturados se identifican, cuentan y se devuelven las especies al ro. Encuestas. Se realizaran entrevistas a personas mayores de 18 aos, habitantes de la zona o sus alrededores. AVES Mtodos La determinacin y registro de la diversidad ornitolgica es mediante una combinacin de distintos mtodos de muestreo: Mtodos de muestreo a) Observacin directa.- Consiste en la observacin directa de aves utilizando binoculares, recorriendo tramos y senderos. b) Captura de aves mediante redes de niebla Eleccin de sitio para la ubicacin de las redes de neblina.- La eleccin de las zonas de muestreo se determin mediante el previo reconocimiento de la zona y dependiendo de las caractersticas de la vegetacin, la fisiografa y la accesibilidad, en total se utilizaron 7 redes de neblina por da. Captura de ejemplares mediante redes de neblina.Estas redes se consideran como una de las formas de captura ms comunes y difundas, se debe de trabajar con un mnimo de 06 redes de neblina de 12m de largo por 2.6m de alto con 61mm de cocada, deben ser instaladas en lugares estratgicos. La hora de apertura de redes es entre las 5:00 a 6:00 am. y el cerradas entre las 4:30 a 5:30 de la tarde; Una vez capturados los ejemplares determinar la especie y fotografiar con el fin de tener un registro fotogrfico y finalmente liberar al ejemplar. Para la determinacin de las especies se emplearan guas de campo: Las redes se deben ser revisadas continuamente (cada 15 minutos hasta las 11 a.m. y posteriormente cada hora, o cada media hora). Registros auditivos (cantos) Encuestas por reconocimiento de cantos.- Recorrer tramos y senderos, escuchando con atencin los cantos de aves principalmente en las primeras horas de la maana donde existe mayor actividad de aves, con el propsito de realizar la determinacin de las especies. Las encuestas bien hechas pueden brindar datos importantes relacionados a la fauna silvestre. Estos datos pueden indicar la direccin correcta, o pueden ayudar a explicar cambios que se han observado en el nmero y distribucin de la fauna silvestre antes de ir al campo. Las entrevistas tambin permiten la recoleccin de cierto tipo de datos que son difciles de obtener de otra manera, como por ejemplo, informacin histrica de asentamientos, patrones de uso de la tierra y la presencia de fauna silvestre (Rabinonowitz, 2003).

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MAMFEROS Mtodos La determinacin y registro d e los diferentes mamferos es mediante distintos mtodos de muestreo: Mamferos pequeos (murcilagos, marsupiales y roedores).Mtodos de muestreo a) Mtodos de captura. Trampas Vctor y Sherman. Ubicar diferentes trampas con cebo en lneas de captura o transectos, separadas con un espacio entre 10 15 mt, entre cada una, en diferentes puntos del bosque. Trampas de Hoyo (Pitfall). Colocar en lneas diferentes a la de las trampas Victor Redes de niebla. Se utilizan redes de niebla de 11 x 6 m para capturar murcilagos (mamferos voladores). y la apertura de las redes deben ser en horas de la noche (18:00 hasta las 23:00 horas). Mamferos Grandes (carnvoros, edentados, primates y ungulados).b) Mtodos de observacin directa (Visualizaciones) Recorridos Realizar recorridos en trochas y senderos disponibles dentro de las zonas a estudiar. Los recorridos deben ser a un ritmo normal que permita observar el mximo de especies presentes tomando en cuenta el tiempo y la distancia de recorrido. Puntos de observacin. Se establecern estaciones donde se realizaron sesiones de observacin en intervalos de 20 minutos hasta cuatro horas, entre las 17:00 y 21.00 pm. c) Mtodos de deteccin indirecta Identificacin de evidencias. Se determinara la identificacin de especies mediante huellas, rasguos, olores, excremento y vocalizacin. Encuestas. Se realizaran entrevistas a personas mayores de 18 aos, habitantes de la zona o sus alrededores. ANFIBIOS Y REPTILES

Mtodos La determinacin y registro de Anfibios y Reptiles es mediante la Encuesta por Encuentro Visual (Visual Encounter Survey) en transectos seleccionados complementndose cuando sea posible con transectos auditivos y captura manual.

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Mtodos de muestreo a) Parcelas Horarias. La captura es mediante la tcnica de muestreo en transectos (Crump & Scott 2001), que permite la bsqueda intensiva de anfibios y reptiles en dos franjas horarias. b) Transectos lineales. Realizar recorridos en trochas y senderos disponibles dentro de las diferentes formaciones vegetales. c) Puntos de observacin. Establecer estaciones donde se realcen sesiones de observacin en intervalos de 20 minutos hasta cuatro horas, entre las 9:00 y 1.00 pm.

Encuestas. Se realizaran entrevistas a personas mayores de 18 aos, habitantes de la zona o sus alrededores. INSECTOS Mtodos La determinacin de la fauna entomolgica es mediante una combinacin de diferentes mtodos de muestreo Mtodos de Muestreo a) Observacin directa,. Consiste en examinar los puntos clave donde habitualmente se encuentran ejemplares de insectos; esta metodologa, requiere el conocimiento de la biologa de la especie que se busca. Tambin se utiliza para aprovechar el factor Lotera, el cual es a veces el nico que permite encontrar algunas especies, cuyas costumbres todava se desconocen. Este mtodo permite tener conocimientos sobre su planta husped, costumbres, etc. b) Trampas de Captura.- Se ha utilizado las siguientes trampas Manga entomolgica: Conocido tambin con el nombre de caza mariposas, sirve para capturar diferentes clases de especimenes diurnas o nocturnas con capacidad de volar. Manga de barrido: Parecida a la anterior de un material ms resistente, se utiliza para realizar barridos sobre la vegetacin herbaca o arbustiva de forma que en ella queda atrapada las diversas especies de insectos que los habitan. Trampa de intercepcin (Pit fall): Consiste en enterrar uno o varios recipientes de boca ancha, de modo que este al mismo nivel que el suelo. Sobre el recipiente se pone una piedra grande para evitar que caiga agua de lluvia, o la entrada de roedores u otra clase de depredadores de insectos. Trampa de cebo: Consiste en distribuir por el rea de estudio y en forma equidistante, diversos recipientes que contengan alguna clase de alimento potencial para los insectos

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CONCLUSIONES La propuesta tcnica para la implementacin de un laboratorio de anlisis de aguas y recursos biolgicos, nos da a conocer todos los alcances y necesidades que requiere un laboratorio para poder entrar en funcionamiento Contar con un Laboratorio de Anlisis de Aguas y recursos biolgicos en el Bajo Urubamba es muy importante, ya que en estos ltimos aos estos, se ven amenazados por las diferentes actividades que desarrollan las empresas extractoras y transportadoras de gas, trafico fluido de votes y otros La determinacin de la calidad del agua en el Bajo Urubamba es de importancia ya que estos cuerpos hdricos son fuente primordial para la supervivencia de los pobladores de la zona y de los diferentes ecosistemas acuticos y terrestres presentes. El monitoreo constante de los cuerpos hdricos y recursos naturales permitir establecer medidas preventivas y correctivas para el cuidado del medio ambiente. Se determin 21 parmetros con sus respectivas metodologas para el anlisis de aguas. El lugar para la instalacin e implementacin del laboratorio de Anlisis de aguas y recursos naturales es en la Comunidad Nativa de Camisea como primera opcin, y segunda la Comunidad Nativa de Shivancoreni. (a partir del prximo ao contaran con fluido elctrico las 24 horas)

NOTA: Es importante mencionar que se tuvo entrevistas con los diferentes presidentes de las comunidades del Bajo Urubamba a quienes se les manifest la propuesta de la Implementacin de un Laboratorio de anlisis de Aguas y Recursos Biologicos. Todos estn de acuerdo con la propuesta y adems manifiestan que es importante contar con el laboratorio en la misma zona, para que as los anlisis y resultados sean de forma inmediata. Tambin se convers con los encargados de los centros de salud y nos indicaron que existe una prevalecen alta de enfermedades por causa del agua que consumen, que mayormente es captada de los manantes y directamente del ro grande no son tratadas. A lo largo detona la cuenca del Bajo Urubamba no cuenta con programas de saneamiento bsico.

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RECOMENDACIONES. Buscar alianzas con la Plus Petrol, Petro Bras y REPSOL, y otras entidades para poder viabilizar la propuesta de la instalacin e implementacin del laboratorio de anlisis de aguas y de recursos biolgicos en el bajo Urubamba. Buscar convenios estratgicos con el Ministerio de Salud, para que se encargue del personal que laborara de forma permanente en el laboratorio. Se recomienda que el monitoreo de la calidad de las aguas deben ser una vez por mes, y de los recursos biolgicos, por lo menos 2 veces la ao, en tiempo de lluvias y de Secas
Se recomienda desarrollar investigacin sobre la calidad de aguas y poblaciones de peces en las cabeceras de los ros y puntos limtrofes de la regin.

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BIBLIOGRAFIA APHA-AWWA-WPCF, 1992. Mtodos Normalizados para el anlisis de aguas potables y residuales. Edicin Daz de Santos, S.A. Gobierno Regional Loreto, 2004. Monitoreo, Supervisin, Control y Evaluacin de Impactos Ambientales en la cuenca del Tigre y corrientes. Iquitos - Per INDECOPI1999, 2000 y 20001. Norma Tcnica Peruana IDMA. Instituto de Desarrollo y Medio Ambiente Guerrero, R Jimeno Blasco Enrique, 1988 Anlisis de Aguas y Desagues. Edicin Banco de Libros Manual de Anlisis Microbiolgico del Aguas Mendoza Rubio Manuel, 1995 Lecciones de Microbiologa y Cultivos. Cuarta Edicin Sierra Jorge H, 1983. Anlisis de Aguas y aguas Residuales Rabinnowitz, A.2003. Manual de capacitacin para la investigacin de campo y la conservacin de la vida silvestre. FAN. Bolivia. pag. 101 107. Honren 1987. Inventario y evaluacin de l0s Recursos Naturales del Medio y Bajo Urubamba. Lima, Per. Organizacin Panamericana de Salud, 2000. Gua Para un Manual de Sistemas de Calidad de un Laboratorio de Prueba. Washington, D.C OPS, OMS 1996. La Calidad del Agua Potable en Amrica Latina. Ponderacin de los Riesgos Microbiolgicos contra los Riesgos de la subproduccin de la desinfeccin Qumica. Washington D.C. Organizacin Panamericana de Salud, 2000. Gua Para un Manual de Sistemas de Calidad de un Laboratorio de Prueba. Washington, D.C Plus Petrol Per Coorporatin S.A. 2004 Estudio De Impacto Ambiental y Social Lote 56, Lnea de Base Ambiental Superintendencia Nacional de Servicios de Saneamiento, 2002. Aplicacin de Control de Calidad del Agua. Manual del Usuario. http//www.minsadigesa@minsadigesa.gob.pe dhttp://www.camisea-gtci.gob.pe/archivos/digesa/indice.pdf http://www.minem.gob.pe/archivos/dgaam/publicaciones/evats/tig_past/tig_pas 5.pdf. http://www4.ujaen.es/~mjayora/docencia_archivos/Quimica%20analitica%20am biental/presentacion%20analisis%20de%20aguas.pdf.

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http://www.perupetro.com.pe/downloads/NormasMA.doc

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ANEXOS

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Anexo N 01: Requisitos para la apertura de un Laboratorio

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Anexo N 02: Material de Vidrio

N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 Cantidad 2 3 4 20 50 12 16 150 150 50 3 2 cajas 2cajas 4 4 2 2 40 40 Material

Bureta Probetas 100, 250 y 500ml Vasos forma baja con pico graduado 50ml,100ml, 250ml, y 600ml Pipetas serologicasde 0.1ml, 1ml, 2ml, 5ml, 10ml,(para c/U4) Placas petri medianas Matraces y Erlenmeyers de 250ml y 500ml Pipetas Volumtricas 10,25, 50 y 100ml (para c/u 4) Tubos de ensayo Tubos durham 75mm de largo por 10mm de dimetro Perlas de Vidrio Fiolas de 50ml Porta Objetos Cubre objetos Embudos de Vidrio Luna de reloj Tubos Nessler de 100ml Microbureta Frascos de vidrio neutro de boca ancha (Toma de muestra) Frascos de Plastico Boca ancha Muestras

Nota: los equipos con que cuenta I.M.A son del N 1 al N 4

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Anexo N 03: Reactivos y Medios de Cultivo

REACTIVOS

Agua destilada
Carbonato de Sodio cido Sulfrico cido Clorhdrico Tiosulfato de Sodio Hidrxido de Sodio

Hidrxido de Aluminio Reactivo Colorante (cido Fosforito sulfanilamida, diclorhidrato) Oxalato de Sodio Sulfato amonio ferroso Nitrato de Potasio Cloroformo Cloruro de Magnesio Acetato de sodio, Nitrato de Potasico, Sulfato de Potasico, Cloruro de Bario (BaCl2) Triclorotrifluoroetana Suspensin de ayuda al filtro del Slice de diatomeas 10g/litro de agua destilada. cido Ntrico Clorhidrato de Hidroxilamina Citrato de Sodio Disulfonato de Batocuproina Disdica Acetato de Amonio Fenantrolina Hidroxilamina Acetato de Sodio ter Diisopropilico. Nitrato de plomo Metal de plomo puro Hidrxido Amonico Citrato Amonico Dibasico Ditizona Sulfito de sodio cido Conc Fenantrolina Hidroxilamina Fenilcarbazida Peroxido de hidrogeno Persulfato Amonico Tetracloruro de Carbono

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Nitrato de Sodio Permanganato de Potasio Cloroformo Cupferrn cido Fosforito Carbazida S-difenilcarbazoma Xilenocianol FF. Alcohol etlico o Isopropilico Bicarbonato de Sodio Azul de Bromofenol

INDICADORES Indicador de Fenolftaleina Indicador de Anaranjado de Metilo

Indicador Prpura de Metacresol Indicador rojo de metilo Indicador Verde de Bromocresol

Indicador Negro-Cromo T Indicador de Prpura de amonio o Murexida

Indicador de Prpura de Amonio o Murexida

Indicador-Acidificador MEDIOS DE CULTIVO Caldo Lauril Triptosa Caldo Verde Brillante Bilis (Brilla) Caldo E.C. Caldo M-FC Agar Endo LES Agar R2A AgarRHP Agar NWRI

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Anexo N 04: REQUISITOS PARA TOMA DE MUESTRAS DE AGUAS Y SU MANIPULACIN DETERMINACIONES BIOLOGICAS
Parmetro Material del frasco 1 Volumen requerido Conservacin/ preservacin Tiempo mximo para inicio anlisis Matriz2

BACTEORIOLOGICOS Coliformes termotolerantes (NMP) Coliformes termotolerantes (FM) Coliformes totales (NMP) Coliformes totales (FM) Escherichia (NMP) Escherichia (NMP) Enterococos (NMP) Estreptococos fecales (NMP Salmonella (A/P) Salmonella (A/P) Vibrio cholerae (A/P) Vibrio cholerae (A/P) Bacterias heterotrficas Pseudomona aeroginosa Enteroparsitos Enteroparsitos Enteroparsitos Enteroparsitos Enteroparsitos Enteroparsitos Fitoplancton cuantitativo VoP VoP VoP VoP VoP VoP VoP VoP VoP VoP VoP VoP VoP VoP PoV P P P P P VoP 250 mL 500 mL 250 mL 500 mL 250 mL 250 mL 250 mL 250 mL 2a4L 1L 2a4L 1L 100 mL 250 mL refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C 6 horas 24 horas 6 horas 24 horas 24 horas 24 horas 6 horas 6 horas 6 horas 6 horas 24 horas 24 horas 24 horas 24 horas 24 horas 24 horas 24 horas 24 horas 24 horas 24 horas 15 das AR, AS AD AR, AS AD AR, AS AD AM AM,AT AS AR AS AR cruda AD Agua embotellada AR cruda AR tratada 1ra lag AR tratada 2da lag AR tratada 3ra lag AS AP

.PARASITOLOGICO 1000 mL refrigerar a 4 C 2000 mL 4000 mL 8000 mL 4000 mL 20 L refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C

HIDROBIOLOGICOS Lugol cido formalina 5 250 mL %

Fitoplancton cualitativo VoP >5L formalina 5 % 15 das Fitoplancton cuali o VoP 250 - 5 L refrigerar a 4 C 24 horas cuantitativo (1) P(Plstico); V(Vidrio) esterilizados (2) AR(Agua Residual); AS(Agua Superficial); AD(Agua Tratada); AP(Agua Potable); AT(Agua Subterrnea); AM(Agua de Mar) Nov-06 Coordinar previamente con el laboratorio Fuente: DIGES

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REQUISITOS PARA TOMA DE MUESTRAS DE AGUAS Y SU MANIPULACIN1 DETERMINACIONES QUIMICOS

Parmetro Ph Temperatura Turbiedad Alcalinidad Color Slidos sedimentables Slidos3 Cloruros Fluoruros Sulfatos Conductividad Dureza Oxgeno disuelto DBO Fosfato Cianuros Nitritos Nitratos Aceites y grasas PoV V (A) PoV PoV PoV V mbar boca ancha PoV PoV PoV PoV PoV PoV PoV P PoV PoV PoV Material del frasco2 Volumen requerido Conservacin/ preservacin Tiempo mximo para inicio anlisis

determinacin en campo determinacin en campo 200 mL 200 mL 500 mL 1 000 mL 1 000 mL 200 mL 300 ml 100 mL 200 mL 500 mL refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C Agregar HNO3 hasta pH < 2 24 horas 24 horas 48 horas 48 horas 7 das 28 das 28 das 28 das 28 das 3 meses

determinacin en campo 1 000 mL 200 mL 1 000 mL 200 ml 200 mL 1 000 mL refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C 48 horas 48 horas

Agregar NaOH hasta 14 das pH = 12 refrigerar a 24 h / sulfuros 4 C refrigerar a 4 C refrigerar a 4 C Agregar H2SO4 hasta pH < 2 refrigerar 4C Agregar H2SO4 hasta pH < 2 refrigerar 4C 48 h 48 horas 28 d / clorada 28 das

DQO

200 mL

28 das

Fuente: DIGESA

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REQUISITOS PARA TOMA DE MUESTRAS DE AGUAS Y SU MANIPULACIN1 DETERMINACIONES QUIMICOS

Material del frasco2 Volumen requerido METALES En general Arsnico V(A) o P(A) V(A) o P(A) 1 000 mL 500 mL Agregar HNO3 hasta pH < 2 Agregar HNO3 hasta pH < 2, refrigerar 4C Agregar HNO3 hasta pH < 2, refrigerar 4C Aadir cido ascrbico, 1.000 mg/L, si existe cloro residual; refrigerar 4 C Aadir cido ascrbico, 1.000 mg/L, si existe cloro residual; refrigerar 4 C Aadir cido ascrbico, 1.000 mg/L, si existe cloro residual; refrigerar 4 C Aadir cido ascrbico, 1.000 mg/L, si existe cloro residual; refrigerar 4 C Aadir cido ascrbico, 1.000 mg/L, si existe cloro residual; refrigerar 4 C 2 meses 2 meses Conservacin/ preservacin Tiempo mximo para inicio anlisis

Parmetro

Mercurio

V(A) o P(A)

500 mL

28 das

Organoclorados

V(D) revestimiento de 1 000 mL TFE

7 das

Bifenilopoliclorados

V(D) revestimiento de 1 000 mL TFE

7 das

Organofosforados

V(D) revestimiento de 1 000 mL TFE

7 das

Piretroides

V(D) revestimiento de 1 000 mL TFE

7 das

Trihalometanos

V(D) revestimiento de 1 000 mL TFE

7 das

Agregar HCl Hidrocarburos V 1 000 mL hasta pH < 2 28 das refrigerar 4C (1) Basado en los mtodos normalizados para anlisis de aguas potables y residuales, APHA, AWWA, WPCF, 17a edicin 1987 (2) V (Vidrio); P (Plstico); V(A) o P(A) = lavado con 1 + 1 HNO3; V(D)=lavado con acetona luego hexano (3) Para slidos disueltos, fijos, suspendidos, voltiles, totales. Nov-06 Coordinar previamente con el laboratorio
Fuente: DIGESA

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Anexo N 05

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Anexo N 06

Anexo N 07 82

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Anexo N 08: Tabla del Numero Mas Probable NMP

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Anexo N 09. Equipos de Laboratorio

N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1 Cantidad Equipo Refrigeradora Espectrofotmetro Autoclave Balanza de precisin Balanza analtica

Medidor de pH Equipo de anlisis de Oxigeno Disuelto (O.D) Equipo de anlisis para Demanda Bioqumica del Oxigeno (DBO) Agitador Magntico
Bao Maria Incubadora Horno Cmara de flujo laminar Destilador de agua Filtro de Membrana Nefelmetro Equipo Multiparametros (Conductivida,T, pH, Salinidad, TDS.)

Estufa de secado, equipado con control termostatito Sistema de Filtracin Sistema de vaci Aparato de Extraccin Soxhlet.(Determinacin de aceites y grasas) Equipo de anlisis para Demanda Qumica del Oxigeno (DQO) Filtros: Crisol Gooch Microscopio

Nota: los equipos con que cuenta I.M.A son del N 1 al N 8

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Anexo N 10 MATERIALES DE OTRA NATURALEZA

Cantidad Materiales 1 1 1 3 3 5 5 5 5 25 2

Mechero Bunsen (con balon de gas) Luz Florescente

Hornilla elctrica.

Asas de siembra Agujas de Siembra Canastillas o cestos de Metal o gradillas Esptulas de metal o cucharas Pinzas de acero quirrgico Tijeras, Cuchillo Bombilla de goma para pipetas Frasco de Plstico de polipropileno o policarbonato (esterilizables en autoclaves) Culer con gradillas metlicas para llevar las muestras. Papel Kraff Papel toalla Papel Aluminio Papel higinico Algodn, gasa Encendedor electrico, de bencina,o gas o fsforo

Equipos de Seguridad Extintores Envases de seguridad Mandiles Guantes de cuero Guantes de goma Guantes quirrgicos Mascarillas Gafas de proteccin Material de Limpieza Detergentes Desinfectantes Escoba Recogedor Tachos de basura Franelas

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Anexo N: 11 Direcciones de Empresas que se dedican a la venta de equipos e insumos para implementar un laboratorio OMEGA PERU S.A. Centro de Capacitacin Av. Arequipa 2950. San Isidro Lima Per Telef: 440-7184 / 4421880 E- mail: omega@omegaperu.com.pe. Telef. 244-3490 / fax 446- 7720 Abel Pilares abrlpilares@omegaperu.com.pe. TELSTAR H.W. Kessel S.A. Telef. 244-3490 / fax 446- 7720 Abel Pilares abrlpilares@omegaperu.com.pe. CIMATEC S.A. Insumos y Equipos para Laboratorio Av. Venezuela 2392 Lima 1 Telef.336-5150 / 3365156 MERCK. Merck Peruana S.A. Reactivos. Productos qumicos. Productos para diagnostico.

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