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Técnicas Cromatográficas
Fase Móvil
Es habitual
Utiliza una fase estacionaria polar y una móvil no polar
Utiliza disolventes polares
CUALITATIVAS
Identificación Cromatográfica:
o Por Datos de Retención
o Por Serie Homólogas (Indices de Retención de Kovacs)
Identificación No Cromatográfica:
o Análisis Clásicos
o Identificación por:
• Adición de Estándar
• Formación de Derivados
• Sustracción de un Componente
Identificación con Técnicas Auxiliares: UV, IR, MS, RMN
CUANTITATIVAS
Normalización de Área
Normalización de Área con Factores de Respuesta
Estandarización Externa
Estandarización Interna
Tipos de Bombas:
• Bombas reciprocas
• Bombas de desplazamiento
• Bombas neumáticas
- Válvula Inyectora: Consiste en una válvula de seis vías que
permite introducir en el flujo de solvente, la muestra contenida
en un aro o loop de volumen calibrado. Se producen pequeñas
cantidades de muestra (0.1-100μL)
PRECOLUMNAS
Se colocan delante de la columna para eliminar la materia en
suspensión y contaminantes de las disolvente.
La composición del relleno debe ser semejante a la columna
analítica
Diámetro de la partícula:
La mayoría de HPLC tradicionales se realizan con una fase
estacionaria unida al exterior de partículas esféricas de silica. Estas
partículas pueden tener diferentes medidas, siendo las de 5\mum de
diámetro las más utilizadas. Partículas más pequeñas ofrecen una
mayor superficie y una mejor separación, pero la presión que se
requiere por obtener una velocidad lineal óptima aumenta de forma
inversamente proporcional al cubo del diámetro de la partícula. Esto
significa que disminuir la medida de las partículas a la mitad,
aumentaría la resolución de la columna, pero a la vez, aumentaría la
presión necesaria en un factor de ocho.
Longitud de la columna:
Es un aspecto crítico que determina la cantidad de muestra que se
puede cargar a la columna y también influye en su sensibilidad. Las
columnas de diámetro interno más grande (>10 mm) se utilizan
normalmente en la purificación de compuestos para su utilización
posterior. En cambio, las columnas de diámetro interno menor (4-5
mm) se utilizan en el análisis cuantitativo de las muestras, y se
caracterizan por el aumento la sensibilidad y la minimización del
consumo de disolventes que conllevan. Estas columnas se suelen
denominar columnas de rango analítico y normalmente están
asociadas a un detector UV-VIS. Aparte, existen otros tipos de
columnas, como las de tipo capilar, con un diámetro inferior a 0.3
mm, utilizadas principalmente en espectrometría de masas.