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2. DNA MICROSATLITE. 1. Qu son los DNA microsatlite?

R/ Los DNA microsatlite son repeticiones de dos, tres, y hasta cuatro pares de bases de nucletidos en tndem; estas simples repeticiones pueden aparecer de tres a cientos de veces (tandem). 2. Cul es el patrn de herencia de los microsatlites? R/ El tipo de herencia por el que se expresan estas secuencias de bases de DNA es a travs de la codominancia, es decir, que se expresan cada alelo heredado de cada progenitor. 3. Segn la clasificacin de los microsatlites, qu son los DNA microsatlites compuestos? R/ Consisten en repeticiones en serie de dos o ms motivos, como: GT2TG10. 4. De qu manera <<colaboran>> los microsatlites en los polimorfismos de algn carcter? R/ Los microsatlites son muy importantes en los polimorfismos, ya que estas repeticiones son de diferentes longitudes (tamao) y existen diferentes cantidades entre cada especie e individuos de una especie, lo que provoca la amplia variabilidad polimrfica.

4. SISTEMA DE RESTRICCION MODIFICACION M-R 1. Cmo sera la nomenclatura de la enzima de restriccin para el siguiente microorganismo: Diplococcus pneumoniae, cuando solo ha habido una enzima identificada? DpnI 2. Cules son las enzimas de restriccin que tienen una aplicacin ms generalizada en el diagnstico molecular? A. ER tipo I B. ER tipo II C. Er tipo III 3. Las endonucleasas, son enzimas que cortan los enlaces fosfodiester del material gentico a partir de una secuencia que reconocen. de las siguientes opciones indique el tipo de enzima de restriccin, caracterizada por ser un trimero, donde dos de sus unidades forman una porcin dimerica encargada de los procesos de

restriccin, y otra forma la porcin monomerica encargada de la metilacin del ADN. A. B. C. D. E. TIPO 1 E-COLI TIPO 2 TIPO 3 ECOP15

4. En qu tipo de mecanismo de SISTEMA DE RESTRICCIN MODIFICACIN M-R se requiere ATP? MR TIPO 1 5. Cul es el origen bacteriano de la enzima EcoRi? Escherichia coli

6. SONDAS 1. Qu es una sonda? Una sonda es un fragmento de ADN (o raramente ARN) de pequeo tamao (normalmente entre 100 y 1000 bases). 2. Para qu sirve? Se usa en biologa molecular como herramienta para detectar la presencia de ADN o ARN de secuencia complementaria parecida o igual. 3. Cules son los tipos de sonda? Sondas de ADN complementario Sondas de ADN genmico Sondas de oligonucletidos 4. Mencione una tcnica donde se usan las sondas Tcnica de Southern Blot Tcnica de Northern Blot 5. Utilidad clnica de las Sondas Sirve para detectar mutaciones, deleciones y polimorfismos.

7. TEST DE ELISA 1. Qu diferencia hay entre el test de Elisa directo y el indirecto? La diferencia entre el Elisa Directo y el Indirecto es que para el primero la enzima estar conjugada con el anticuerpo que se agregar en el segundo paso, y en el indirecto la enzima va a estar conjugada con un anti-antgeno que reaccionar con anticuerpo agregado en el segundo pasa que en este caso no tendr ninguna enzima conjugada. 2. Qu criterio hay que tener en cuenta para la clasificacin del test de Elisa? El criterio que hay que tener en cuenta en la clasificacin del test de Elisa es el componente al cual estar conjugada la enzima, esta puede estar acompaando al antgeno, al anticuerpo o en su defecto a un anti-anticuerpo. 3. Qu materiales se emplean para la realizacin de un Elisa? Microplacas de poliestireno. Lavador de placas. Lector de placas. 4. Por qu es importante marcar (con una enzima) uno de los componentes en la realizacin del test? Es importante el marcado con la enzima para que l agregar el sustrato en el penltimo paso antes de hacer la lectura, este reaccione con la enzima y se produzca el cambio en la coloracin de la muestra y de esta manera poder realizar el respectivo anlisis. 5. Qu patologas permiten ser detectadas con el test de Elisa? Las patologas que permite detectar el test de Elisa son Enfermedades producidas por parsitos (Babesias, tripanosomas, Toxoplasmosis). Enfermedades producidas por Micoplasmas. Enfermedades producidas por bacterias (Mycobacterium tuberculosis,Brucelas, Salmonelas). Enfermedades producidas por virus ( Fiebre aftosa, Rotavirus, Artritis vrica)

8. SOUTHERN BLOT 1. En qu consiste el mtodo de southern blot? El mtodo de southern blot consiste en la identificacin de una secuencia particular de ADN, en una muestra de ADN analizada, en base a la utilizacin del mtodo de electroforesis y de sondas radioactivas.

2. Quin invento este mtodo? El mtodo de southern blot fue inventado por Edwin Southern en 1975. 3. Menciones tres pasos del mtodo de Southern Blot Los pasos del southern blot son: Extraccin del ADN Digestin del ADN con enzimas de restriccin Electroforesis en gel de agarosa Preparacin para el ensayo de southern blot Hibridacin con sonda radioactiva Deteccin de RFLPs (Polimorfismos de Longitud de Fragmentos de Restriccin) mediante autorradiografia 4. Explique 2 pasos del mtodo southern blot. Extraccin de ADN: existen diversos mtodos de extraccin de ADN. Lo importante es utilizara un mtodo que permita extraer el ADN de forma pura. La extraccin de ADN se puede realizar a partir del cabello, la sangre y bsicamente cualquier tejido perteneciente a una persona. Digestin del ADN con endonucleasas de restriccin: las endonucleasas de restriccin se encargan de cortar la muestra de ADN en secuencias de nucletidos especficas. Esto se realiza para facilitar el estudio de la muestra de ADN. Las enzimas de restriccin que se pueden utilizar son Ecor I y Hind III. Electroforesis en gel de agarosa: la electroforesis se realiza para separar las partculas dependiendo de su tamao. Las partculas ms pequeas migran ms rpido hacia el polo cargado, mientras que las ms grandes migran ms despacio. La funcin del gel de agarosa es oponer resistencia a la migracin de las partculas, permitiendo identificar mejor la distribucin de estas. Preparacin para el ensayo de southern blot: las partculas del gel de agarosa deben ser pasadas a una membrana de nailon. Esta membrana se coloca encima del gel de agarosa y se coloca en un medio alcalino, para favorecer la desnaturalizacin de la cadena de ADN. Con la colocacin de hojas absorbentes sobre la membrana de nailon, se logra que las partculas pasen del gel a la membrana por capilaridad. Hibridacin con sonda radioactiva: la sonda radioactiva se realiza a partir de una muestra de adn, la cual se desnaturaliza para separar las cadenas. Una de las cadenas es unida al agente radiactivo. Esta unin es posible debido a que la hebra de adn esta cargada negativamente, y el agente reactivo, positivamente. Sin embargo esta unin es dbil, por lo que se debe agregar glutaraldehido para fortalecer esa unin, y as formar la sonda radiactiva. Esa sonda se aplica a la muestra que se encuentra adherida a la membrana de nailon y si esta

presenta cadenas complementarias con la sonda, pues esta se unir a ese segmento. Deteccin de RFLPs: la deteccin de las zonas unin entre las sondas y el ADN muestra se realizara a travs de autorradiografia de la membrana de nailon.

5. Cul es la importancia medica del mtodo Southern blot? En el aspecto mdico, el mtodo southern blot sirve como mtodo diagnostico para enfermedades autoinmunes y tambin para hiperplasia suprarrenal congnita, debido al factor gentico que estas enfermedades presentan. Tambin se puede utilizar en el anlisis de mutaciones en los genes de los linfocitos en la leucemia linfoblastica crnica. Adicional a eso, el mtodo southern blot tambin es usado con frecuencia en criminalstica para comparar muestras de ADN encontradas en escenas y con la de posibles sospechosos.