2.

COLORANTES EN BIOLOGIA

OBJETIVO: Realizar coloraciones que permitan visualizar detalles estructurales al microscopio.

GENERALIDADES: El uso de colorantes en las observaciones microscpicas se hace indispensablemente; por que permiten diferenciar estructuras biolgicas, sin los cuales se hace muy difcil su observacin, si se tiene en cuenta que las estructuras biolgicas no son coloreadas. COLORANTE, es una sustancia que transmite su color a las estructuras con las cuales se pone en contacto, actan selectivamente y no se pierde al ser lavadas con agua. CLASIFICACIN DE COLORANTES: 1. Naturales: De origen animal ejemplo el carmn. De origen vegetal ejemplo la orcena, azafrn, hematoxilina. 2. Artificiales: a. cidos: Tienen afinidad por las estructuras citoplasmticas. Son sales cuyo cido es coloreado y la base es incolora ejemplo eosina, Fucsina cida etc. b. Bsicos: Tienen afinidad por estructuras nucleares. Son sales cuya base es coloreada y el cido incoloro, ejemplo el Azul de metileno, Hematoxilina. c. Neutros: Son sales con cido y base coloreados, tien estructuras citoplasmticas y nucleares, ejemplo Giemsa, Wright, Leishmans. COLORACIN: Es el proceso por el cual una materia toma el color del colorante y puede ser: 1. Simple: Hace uso de un solo colorante y se colorean slo algunos elementos. 2. Compuesta: Se hace uso de dos colorantes, cido y bsico, que contrasten en colorantes. Una coloracin de uso frecuente es Hematoxilina-Eosina. 3. Neutra: Hace uso de colorantes neutros.

MATERIALES QUE SE REQUIEREN:

 Microscopios Lminas porta objetos (4) Lminas cubre objetos (4) Palitos de dientes Lanceta hema tolgica Alcohol Algodn Ac eite de inmersin Safranina

Goteros y pipetas Alcohol ter Hematoxilina Eosina Azul de metileno Wright Leishmans Agua destilada

PROCEDIMIENTO: A. COLORACIN SIMPLE: EN MUCOSA LABIAL 1. Con un palito de dientes raspe ligeramente la parte interna del labio. 2. Divida el porta objeto en tres partes imaginariamente, extiende la mucosa obtenida en el tercio medio de la lmina. 3. Secar el preparado al medio ambiente, o con la ayuda de un mechero. 4. Fijar la lmina con dos gotas de alcohol, durante 2 minutos. 5. Agregar dos gotas de colorante cido o bsico sobre el preparado y esperar de 2 a 3 minutos. 6. Lavar con agua de cao, a chorro fino, hasta que ya no arrastre colorante. 7. Secar la lmina al medio ambiente o al mechero. 8. Observar al microscopio a 10X, 40X, y 100X.( Use aceite de inmersin ) 9. Esquemas de las observaciones. B. COLORACIN COMPUESTA: EN MUCOSA LABIAL 1. Proceda como en el caso anterior, hasta el paso nmero 7. 2. Agregar colorante de contraste ( 2 gotas durante 2 a 3 minutos ) 3. Lavar con agua de cao. 4. Secar la lmina al mechero o al medio ambiente. 5. Observar al microscopio a 10X, 40X y 100X.

6. Esquema de las observaciones. C. COLORACIN NEUTRA: EN EXTENSIN SANGUNEA 1. Desinfectar con alcohol, la yema del dedo mayor. 2. Mediante una lanceta extraiga una gota de sangre y colquela en el extremo de un porta objeto limpio. 3. Con la ayuda de otro porta objeto, colocado sobre la gota de sangre y con una inclinacin aproximada de 45. Proceda a extender la sangre hacia adelante, con movimiento continuo. 4. Secar la lmina al medio ambiente. 5. Cubrir el extendido con 2 3 gotas del colorante Leishmans o Wright, durante 1 a 2 minutos. 6. Sobre la lmina con el colorante, agregar agua destilada, hasta cubrir la lmina y esperar 7 minutos. 7. Lavar con agua de cao. 8. Secar al medio ambiente o al mechero. 9. Observar al microscopio a 40X y 100X. 10. Esquema de las observaciones.

D. COLORACIN DE MUESTRAS VEGETALES 1. Con la ayuda de una navaja realizar el corte transversal de un tallo de geranio, u otra planta dicotilednea (se debern realizar varios cortes los que se depositan en una placa petri con agua destilada, se realizan los cortes hasta obtener uno que sea sumamente delgado). 2. Colocar una gota de agua sobre el portaobjeto 3. Colocar la muestra ms delgada de la placa petri 4. Aadir una gota de safranina 5. Observar a 100X y a 400X 6. Esquema de las observaciones

ESQUEMAS Granulocitos neutrfilos.

Observaremos ahora un neutrfilo y un eosinfilo en la misma imagen (figura 9)

Ahora pasamos a ver los leucocitos sin grnulos. Comenzaremos con los linfocitos (figuras 11-13).

Finalizaremos los agranulocitos con las imgenes de monocitos (figuras 14-16):

Un granulocito basfilo

Tejidos vegetales coloreados (Haces conductores)