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Para lobitooo http://www.buenastareas.com/ensayos/Informe-De-Laboratorio-Propiedades-De-Las/6462987.html EXTRACCION DE ADN DE HIGADO DE POLLO I. OBJETIVO Espesificos .

Extraer el material gentico (ADN) de clulas del hgado de pollo . Establecer la relacin entre el proceso de extraccin y propiedades quimico-fisicas del ADN . Extraer ADN de un tejido animal Introduccin El ADN y ARN son biomolculas que intervienen en el almacenamiento y la transferencia de la informacin gentica. Son componentes fundamentales de la clula y constituyen en conjunto, entre el 5 y el 10% del peso seco. Normalmente no se encuentran solos sino que se hallan formando ncleo protenas, ya que suelen unirse a determinados tipos de estas, como las histonas. El ARN se localiza tanto en el citoplasma celular como en el ncleo , mitocondrias y cloroplastos, mientras que el ADN se sita fundamentalmente en el ncleo de la clula y tambin cloroplastos y mitocondrias en pequeas cantidades. Poseen una importancia manifiesta por el hecho de que ellos dirigen y llevan a cabo la sntesis de protenas, y por tanto de las enzimas necesarias para el funcionamiento celular. Por otra parte el ADN es el vehculo de la herencia que se transmite de padres a hijos de generacin en generacin. Marco La extraccin es un procedimiento de separacin en el que el soluto de una disolucin se distribuye entre dos lquidos inmiscibles, generalmente uno acuoso y otro orgnico. La extraccin es una de las tcnicas ms empleadas para separar compuestos orgnicos de las disoluciones o suspensiones acuosas en las que se encuentran. Para ello, se agita la mezcla con un disolvente orgnico inmiscible con el agua y se dejan separar ambas capas. De este modo, el soluto presente se distribuye entre las fases orgnica y acuosa de acuerdo con sus solubilidades relativas, siendo la relacin entre la concentracin de la sustancia en ambos disolventes el llamado coeficiente de distribucin o de reparto. El ADN lleva codificada la informacin gentica. En las clulas eucariontes como son las del hgado de res, se encuentra asociado a protenas histonas formando la cromatina. Esta se encuentra totalmente condensada con el fin de ocupar el mnimo volumen posible en el interior de la clula. En la prctica se obtienen buenos resultados realizando tres o cuatro extracciones consecutivas con un volumen de disolvente orgnico aproximadamente tres veces menor que el de la fase acuosa. La eleccin de disolvente depende de la naturaleza de la sustancia que se desea extraer y de su solubilidad en dicho disolvente.

CONCLUSIN EXTRACCIN E IDENTIFICACIN DE ADN En conclusin el ADN es muy importante en todos los seres vivos ya que estamos compuestos de este. Adems que su funcin principal es codificar las instrucciones esenciales para fabricar a un ser vivo ya sea

idntico en el caso de la reproduccin asexual o parecido en el caso de la reproduccin sexual Al hacer esta prctica me di cuenta de que estamos compuestos por millones de cadenas de ADN y que en una sola clula se encuentran muchas de ellas. El ADN en las clulas eucariotas se encuentra en el ncleo mientras que en las clulas procariotas que carecen de este, se encuentra disperso en el citoplasma. Para extraer el ADN de la clula tuvimos que hacer un proceso que consista en primero romper la pared y/o membrana celular, despus inhibir a las nucleasas, para despus precipitar a las protenas por lo que deduje que la clula protege de una manera al ADN de los virus es por eso que existen las nucleasas que son enzimas degradativas que protegen al ADN de que los virus no modifiquen su informacin gentica. http://platea.pntic.mec.es/~cmarti3/bio/ADN/adn/ppal.htm

A) Rompimiento de membranas y pared celulares. Toma una muestra del tejido (5 gr Aprox) que hayas eligido y homogenzalo, es decir muelelo con el mortero, si el tejido es muy duro, si el tejido es muy duro licualo en seco. B) Digestion Coloca tu muestra molida (1 gr aprox), en un tubo de eppendorf de 1 ml y agrgale el Buffer de extracion (Tris- HCL 0.05 M, EDTA, 0,02 M, NaCl 0.35 M, Urea 7 M) a temperatura de cuarto (500 ul aprox). Cuando hayas agregado el Buffer de extraccin a tu muestra, agtala e incbala por 10 minutos con agitacin espordica. C) Separacin de Protenas, Carbohidratos y Lpidos A la mezcla que tienes en tu tubo de ensayo agrgale 500 ul. de Fenol/Cloroformo/Isopropanol frio usa guantes y no inhales los vapores. Agita vigorosamente en Vortex, cuidando que no se tire el contenido del tubo, deja reposar a temperatura ambiente por 5 min. Extrae la fase acuosa (500 ul.) con una micropipeta, si no se separan las fases centrifuga a 3000 rpm por 10 min, ten cuidado de equilibrar la centrifuga. Extrae la fase acuosa superior una vez centrifugada. D) Precipitacin de cidos nucleicos DNA y RNA A la fase acuosa que extrae (500 ul), colocala en un tubo de eppendorf limpio y agrgale 400 ul de etanol (100 %) frio y 75 ul de NaCl 3 M. Mezcla por inversin, suave y observa como se precipita el DNA. D) Recuperacion de la pastilla. Centrifuga tu tubo por 5 min a 3000 rpm, recoge la pastilla del fondo del tubo. E) Resuspension. Resuspende tu pastilla de DNA en 5 ml de agua destilada estril.

BIBLIOGRAFIA

Gerald karp. Biologa celular y molecular. ED McGrawHill 1998. Pg. 727-730. Biologa Molecular y Herencia. Robert A. Wallace, Jack L. King, Gerald P. Sanders., 1a edicin. Editorial

http://siladin.cch-oriente.unam.mx/coord_area_cienc_exp/biologia/GuiaBioI/Extraccion_de_ADN.pdf

analisis La extraccin de ADN requiere una serie de etapas bsicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular (sds) y la membrana plasmtica para poder acceder al ncleo de la clula, , vacindose su contenido molecular en una disolucin tampn en la que se disuelve el ADN , . En ese momento, el tampn contiene ADN y todo un
surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y otras sustancias en menor proporcin. Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrn fraccionado en cadenas ms pequeas y separado de l por accin del sds

A continuacin debe romperse tambin la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol, El alcohol es menos denso que el agua, por lo que flota en la parte superior. Debido a que se formaron
dos capas separadas, toda la grasa y protena que rompimos en los dos primeros pasos .En este caso, la protena y la grasa irn al fondo, que es la capa acuosa, donde se sienten ms confortables, mientras que el ADN prefiere la capa superior, el alcohol

Preguntas
1. El SDS acta rompiendo enlaces no covalentes en las protenas, desnaturalizndolas, provocando que estas molculas proteicas pierdan su conformacin nativa. Esto ocurre porque el SDS se une a las zonas apolares del polipptido. Cules son las funciones del NaCl, etanol absoluto y el detergente? Con el NaCl conseguimos producir el estallido de los ncleos para que queden libres las fibras de cromatina. El etanol se utiliza para precipitar la solucin del ADN. La accin de este detergente es formar un complejo con las protenas y separarlas del ADN. As nos quedar el ADN libre de las protenas que tiene asociadas, e inhibe cualquier actividad nucleasa presente en la preparacin. Por qu se lava con etanol? Porque el etanol siempre forma una capa arriba de la solucin acuosa Que otras tcnicas son empleadas en biologa molecular para la extraccin del ADN? - Separacin del DNA mediante electroforesis en gel. - Tcnica de extraccin de DNA de leucocitos (tcnica de miller) - Mtodo wizard (promega, usa) - PCR - Ultra centrifugacin - Espectrofotometra - Tcnica de sedimentacin de cidos nucleicos.

Una hidrlisis moderada fragmenta el cido nucleico en los nucletidos que se forman por la unin covalente de un fosfato y una base heterocclica a la pentosa. Las pentosas son de dos tipos: Ribosa en el ARN, y desoxirribosa en el ADN. La nica diferencia entre estos dos azcares es que la desoxirribosa tiene un tomo menos de oxgeno

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