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Inmovilizacin de papana en pelculas de pectina: aplicacin en heridas cutneas CIENCIACIERTA No.

20 octubre - diciembre de 2009 Erika Nava Reyna Karina Velzquez Manzano Damaris Mendoza Puente Anna Ilin Elda Patricia Segura Ceniceros psegura@mail.uadec.mx Facultad de Ciencias Qumicas Introduccin La inmovilizacin de enzimas es el proceso en el cual se restringen, parcial o totalmente, los grados de libertad de movimiento de las enzimas, clulas, etc., mediante la unin o adhesin a un soporte (Taylor, 1991). El uso de enzimas inmovilizadas como el tiene aumento importantes de la ventajas para de la los procesos la enzimticos, estabilidad enzima,

disminucin de costos -ya que en muchas ocasiones se pueden reutilizar los derivados enzimticos- y adems la posibilidad de disear un reactor adaptado al proceso que sea fcilmente manejable y controlable. Sin embargo, tambin pueden existir algunas desventajas en el proceso de inmovilizacin debido a que la unin entre la enzima y el soporte puede darse de tal manera que el sitio activo de sta quede impedido estricamente, evitando as el paso del sustrato, disminuyendo o eliminando la actividad enzimtica. Tambin es posible que la unin de la enzima al soporte origine un cambio conformacional que produzca una forma inactiva. Las enzimas inmovilizadas tienen aplicacin en diversas reas como el diseo de biosensores, utilizados principalmente en la medicina; control del medio ambiente y de la calidad de los alimentos; asimismo, en la industria farmacutica para la fabricacin de antibiticos; dentro de la industria alimentaria para la obtencin de edulcorantes y aditivos, y en la

industria mdica para la remocin de tejido necrtico en heridas drmicas, inmovilizadas en forma de apsitos o vendas. Actualmente, la eliminacin (desbridamiento) de este tejido necrtico se realiza mediante la aplicacin de enzimas, principalmente proteasas, las cuales degradan la fibrina, el colgeno desnaturalizado y la elastina, eliminando la necrosis, permitiendo una limpieza de la herida, acelerando as el proceso de curacin (Edelson, 1997). El desbridamiento en cualquier tipo de lcera (pie diabtico, lcera varicosa, quemaduras, etc) es esencial para que la herida cicatrice correctamente, ya que el tejido necrtico es un caldo de cultivo para bacterias y puede causar infeccin. Para que la herida cicatrice adecuadamente hay que eliminar la costra, sin daar el tejido sano subyacente. Los soportes ms utilizados actualmente para la introduccin de enzimas proteolticas son materiales de celulosa (tipo telas), alcohol polivinilico, poliamida (telas), sales de cido alqumico y colgeno, los cuales presentan un problema para su aplicacin ya que provocan la remocin del tejido sano al momento de retirarse. (Edelson, 1997; Taylor, 1991; Worsfold, 1995). Estudios recientes demuestran que la papana es eficaz en acelerar la cicatrizacin de lesiones cutneas, tanto internas como externas; se ha utilizado con gran xito en lceras plantares en pacientes con lepra y lceras varicosas y en pacientes con pie diabtico. (Robles, 2001). Uno de los problemas ms temidos, que afecta la calidad de vida de los diabticos, es la aparicin de lceras en los pies llamado "pie diabtico," (Boone, 2007; Segura, 2006) pudiendo ocasionar situaciones invalidantes como consecuencia de tratamientos quirrgicos (amputacin) que a veces son necesarias aplicar. Los problemas del pie diabtico originan unas 60 000 amputaciones al ao en pases como los EE.UU., con un costo anual de unos 200 millones de dlares. (Edelson, Armstrong, Lavery, Caicco, 1997; Townsend, Garber, Nathan, Crofford, Lachin, 1993). La historia del tratamiento del pie diabtico nos refiere a pocas previas al uso de antibiticos (dcada de los aos 30), cuando el 50% de los pacientes diabticos sufran inevitablemente de amputaciones. (Segura, Ilin, Montalvo, Zaragoza, Flores, Vargas, 2006). El tratamiento efectivo tiene su

base en las estrategias integrales para el cuidado de las heridas, evitar el sobrepeso, llevar un control metablico ptimo, el uso apropiado de antibiticos y, eventualmente, la intervencin quirrgica. (Frykberg, 1997). Papana: La papana es una proteasa de origen vegetal, abundante en el mercado mexicano y con un gran poder de hidrlisis. Ha sido empleada desde hace muchos aos por sus excelentes propiedades (Robles, 2001). La Papana se obtiene del ltex que se extrae de la cscara de los frutos del rbol de la papaya (Carica papaya); tanto las hojas como los frutos contienen la enzima. Sin embargo, los ttulos de produccin son ms rentables cuando se extrae de los frutos. (Otey, Westhoff, Russell, 1977). Posee un mercado mundial creciente, el cual est asociado a las numerosas nuevas aplicaciones descubiertas en la industria alimentaria, textil, farmacutica, cosmtica y artesanal. La papana tiene un peso molecular de 23 kD y su pH ptimo oscila entre 6.0 y 7.0. En 1969, Land y Roger observaron que est compuesta por 17 diferentes aminocidos que se encuentran enrollados en dos partes separadas por un puente que tiene un sitio activo con un grupo tiol (-SH) libre (Figura 1). Esta enzima se caracteriza por actuar en bajas dosis y ser de poca especificidad. Hidroliza tanto las protenas como pptidos de menor tamao, y acta principalmente sobre aminocidos bsicos (leucina, arginina y fenilalanina), as como sobre amidas y steres.

Figura 1. Estructura tridimensional de la papana.

Aplicaciones Los principales usos de la papana se encuentran dentro del sector alimentario, como clarificador de bebidas (cervezas y jugos) y ablandador de carnes; tambin es usada en la produccin de quesos para obtener productos de mejor calidad y ms cremosos, y en los cereales para enriquecer su contenido proteico. En la industria del cuero es utilizada para refinar este material tanto en apariencia como en textura y en el proceso de remocin de pelo; en la industria textil se usa para desengomar las fibras de seda y mejorar la calidad de los colorantes usados; se utiliza para recuperar la plata de las pelculas fotogrficas gastadas en los laboratorios, en la industria cosmtica para la elaboracin de cremas desmanchadoras de la piel y exfoliantes que actan disolviendo las capas ms externas de la dermis; tambin es utilizada por los laboratorios oftalmolgicos para producir tabletas enzimticas para la limpieza de lentes de contacto. Pelculas de pectina Los biopolmeros comnmente usados en la elaboracin de pelculas son carbohidratos, protenas, almidn y pectina. (Contreras, Hours, Aguilar, Reyes, y Romero, 1997; Ferreira, 1998). Generalmente, estos requieren que sus caractersticas mecnicas y reolgicas sean mejoradas; adems, deben tener tambin la permeabilidad adecuada al vapor de agua y a los gases. El uso de polmeros biodegradables para empacado ofrece una alternativa y una solucin parcial al problema de acumulacin de residuos slidos provenientes de los polmeros sintticos. (Herrmann, Nickel, and Riedel, 1998; Jayasekara, Harding, Bowater, 2004). Sin embargo, estos materiales presentan pobre estabilidad dimensional y escasa termoplasticidad, lo que provoca un uso limitado de estos. Lo anterior puede evitarse preparando mezclas de los materiales naturales con matrices termoplsticas en composites, conteniendo varios porcentajes de los biopolmeros.

La pectina es un polisacrido importante usado en la industria alimentaria en jaleas, mermeladas, alimentos congelados, y ms recientemente en alimentos bajos en caloras como reemplazo de grasas y/o azcares (Panchev, Kirchev, y Kratchanov, 1989). Los geles de pectina son importantes para crear o modificar la textura de jaleas, confites y productos lcteos bajos en grasa. Es tambin utilizada como ingrediente en preparaciones farmacuticas como antidiarricos y desintoxicantes, entre otros. En la industria farmacutica es usada para reducir los niveles de colesterol en la sangre y desrdenes gastrointestinales. Otras aplicaciones de la pectina incluyen el uso de pelculas o membranas comestibles. (Beli, Thakur, et, al., 1997; Coffin, and Fishman, 1994; Otey, Westhoff, Russell, 1977). Las pelculas elaboradas de productos naturales son de gran inters cientfico y comercial, ya que estos materiales -adems de ser biodegradables- se consideran potencialmente reciclables. En los ltimos tiempos se ha incrementado la demanda hacia el uso de materiales biodegradables seguros y eco-amistosos, especialmente los subproductos de la industria de la agricultura y de transformacin de los alimentos.

La posibilidad de mtodos de reuso y su disposicin permiten que estos materiales sean excelentes candidatos para el desarrollo de una gran variedad de aplicaciones en diferentes campos; por ejemplo, en el mbito farmacutico. Sin embargo, la posibilidad de utilizar la pectina como soporte para la aplicacin de enzimas todava no ha sido evaluada. Una de las ventajas que puede proporcionar el uso de este polisacrido es su

solubilidad en agua, lo que permite la liberacin de enzimas despus de su introduccin y remocin del polmero. Actualmente se tienen nuevos usos de la pectina en mltiples aplicaciones, tales como bioencapsulacin, como soporte para la liberacin controlada de medicamentos, as como la inmovilizacin de algunas clulas y enzimas. (Klibanov, 1983). Los datos discutidos anteriormente demuestran un inters creciente en la aplicacin de pectina para la preparacin de pelculas como soporte para la inmovilizacin de papana con aplicacin en el rea farmacutica, (Kawabata, 1977). En el presente trabajo se desarrollaron pelculas compuestas de papana inmovilizada en pectina extrada de residuos de maracuy (Figura 2). El objetivo de este trabajo es el desarrollo de nuevos materiales de curacin para el tratamiento de lesiones micro y macrovasculares; en pacientes con Diabetes melitus, dando un nuevo enfoque a la aplicacin de pectina como soporte para la inmovilizacin de papana aplicado en lesiones cutneas. Los resultados obtenidos de este trabajo permiten demostrar que la

aplicacin de las pelculas de pectina con papana inmovilizada en lesiones cutneas acelera el proceso de cicatrizacin sin necesidad de realizar el desbridamiento Las pelculas son de fcil manejo, se adhieren fcilmente a las lesiones y posteriormente se eliminan con lavados. Las pelculas fueron aplicadas en ratones de laboratorio, obteniendo un 73% de cicatrizacin al 4 da de haber aplicado las pelculas de pectina-papana (Figura 3).

Figura 3. Grfica que relaciona el efecto de las pelculas de pectina y pectina/papana el tamao de la herida en animales de laboratorio (ratones). sobre

Tabla 1. Tiempo de cicatrizacin en pacientes voluntarios.


De igual manera, se aplicaron en pacientes voluntarios, observando en todos los pacientes la cicatrizacin inferior (Tabla del de 1) las al lesiones en un tiempo en significativamente ausencia Referencias bibliogrficas 1. Beli, R., Thakur, R. K., and et, al., (1997). Chemistry and uses of pectina review. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 37 (1):47. 2. Boone-Villa V. D. (2007). Optimizacin de materiales de curacin basados en enzimas y frmacos inmovilizados en pelculas de polisacridos y escalamiento del proceso de elaboracin. Tesis de Maestra de la Universidad Autnoma de Coahuila. Facultad de Ciencias Qumicas. Depto. de Biotecnologa. normalmente establecido

tratamiento.

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