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ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DE CHIMBORAZO FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA BIOQUIMICA II INFORME II

1. TITULO DE LA PRCTICA Dosificacin de Protenas de la clara de huevo por Absorcin Ultravioleta. 2. INTRODUCCIN Los mtodos de dosificacin de protenas son utilizados para determinar la concentracin de protena de una muestra. Existen diferentes mtodos para cuantificar la cantidad de protena. Para la eleccin del mismo habr que tener en cuenta, entre otros: cantidad total de protena disponible, grado de pureza necesidad de conservar la muestra luego del ensayo, presencia en la muestra de compuestos que interfieran con el ensayo, rapidez con la que se necesite el resultado. Los diferentes mtodos de cuantificacin de protenas utilizan la espectrofotometra como tcnica de cuantificacin. Los mtodos de cuantificacin de protenas pueden dividirse en dos categoras: directos e indirectos. Mtodos Directos: basados en la absorcin propia de las protenas; absorcin en el ultravioleta absorcin debida a grupos prostticos de las protenas (si los hay) Mtodos Indirectos: basados en la absorcin que resulta de la interaccin de las protenas con reactivos especficos: con el reactivo de Biuret con el reactivo de Lowry con el cido bicinconnico (BCA) con el reactivo de Bradford.

Absorcin en el ultravioleta Las protenas contienen ciertos enlaces o aminocidos cuyos grupos funcionales absorben luz en el ultravioleta (UV) y por lo tanto pueden ser utilizados para cuantificar la concentracin de protena por espectrofotometra. Absorbancia a 280 nm se muestran los picos de absorcin en el ultravioleta de los aminocidos aromticos triptfano (Trp), tirosina (Tyr) y fenilalanina (Phe) asi como del enlace entre cistenas llamado tambin cistina (Cys-Cys). Por otra parte, el enlace peptdico en s mismo presenta un mximo de absorbancia a 190 nm. Si observamos el espectro de absorcin en ultravioleta del Trp y la Tyr podemos ver que ellos absorben en mayor o menor medida a 280 nm. (1) y (2) 3. JUSTIFICACIN
Las protenas son compuestos orgnicos constitudos bsicamente por carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno, y pueden contener tambin azufre, fsforo y hierro. Son vitales para las funciones corporales bsicas, incluyendo la regeneracin celular y la reparacin, mantenimiento y regulacin de tejidos, produccin enzimas y hormonas, equilibrio de fluidos, y el suministro de energa. La importancia del aporte de protenas desde la alimentacin radica fundamentalmente, en que no pueden ser obtenidas desde otros nutrientes, de modo, que para satisfacer sus necesidades siempre deben ser aportadas desde los alimentos. Por esta razn la importancia de cuantificar las protenas presentes en la clara de huevo que es el alimento que ms protenas se conoce con un PER igual a 4, adems es un alimento accesible a todas las condiciones sociales.(3)

DOSIFICACIN DE PROTENAS POR ABSORCIN ULTRAVIOLETA

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4. OBJETIVOS 4.1 OBJETIVO GENERAL Encontrar la concentracin de protenas totales (mg/dL) del a clara de huevo mediante el mtodo de absorcin ultravioleta. 4.2 OBJETIVO ESPECIFICOS 4.2.1 Conocer las absorbancias de las muestras a diferentes longitudes de onda en la franja ultravioleta. 4.2.2 Encontrar el mtodo ms rpido y econmico para dosificar protenas en muestras biolgicas. 4.2.3 Determinar el grado de estabilidad de las muestras a mediar en el espectrofotmetro. 5. FUNDAMENTO La absorcin de los aminocidos aromticos en la franja del ultravioleta con un pico en 280 nm. Para descontar la interferencia de la absorcin de los cidos nucleicos que tienden a absorber radiacin en una longitud de onda de 260 nm. Para lo cual se aplicara la siguiente formula especfica. Proteina(mg/dL)= Abs280 Abs260

6. REACCIONES No existes raciones ya que este mtodo de dosificacin se basa en la diferencia de absorbancias de los aminocidos aromticos y los cidos nucleicos; todas estas molculas absorben radiacin a diferentes longitudes de onda. Y no reaccionan con ningn tipo de reactivos para formar complejos coloreados que estos son detectados en el campo visible.

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7. MATERIALES Y MTODOS

7.1 Materiales y Reactivos

7.2 Mtodos

Colocar la clara de huevo en un vaso de precipitacion. Tomar 1 ml de la clara y poner en un balon de aforo de 100ml Aforar el balon con agua destilada En un tubo de ensayo agregar 3 ml de suero fisiologico (0,9% nacl) En un segundo tubo tomar 1 ml de la solucion preparada y agregar 2ml de suero fisiologico. En un tercer tubo tomar 2ml de la solucion preparada y agregar 1ml de suero fisiologico. Leer las absorvancias en el espectrofotometro a 280 y 260 nm. Encontrar la concentracion de proteinas (mg/dl)

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MUESTRAS Clara de huevo 8. RESULTADOS

DILUCIN 1:100

Tubos Muestra diluida (mL) Lectura a 280 nm Lectura a 260 nm

1 0 0 0

2 3 1,o 2,o 0,178 0,468 0,123 0.220

Observaciones Muestra incolora Muestra incolora Muestra incolora

9. CLCULOS

TUBO 2 Proteina(mg/dL)= Abs280 Abs260 Proteina(mg/dL)= 0.178-0.123

TUBO 3 Proteina(mg/dL)= Abs280 Abs260 Proteina(mg/dL)= 0.468-0.220 Proteina(mg/dL)= 0.248 0.248 X (3/2)= 0.372 0.372 X 100= 37.20 mg/dL

Proteina(mg/dL)= 0.055
0.055 X (3/1)= 0.165 0.165 X 100= 16.5 mg/dL

10. DISCUSIN DE RESULTADOS

DETERMINACIN RESULTADO Tubo 2 16.5 mg/dL Tubo 3 37.20 mg/dL

DATO BIBLIOGRFICO 19.40 mg/dL 19.40 mg/dL(4)

Como podemos ver no hay una gran diferencia entre el valor obtenido y el dato de bibliografa esto se puede deber a diferentes motivos entre ellos el ms importante la forma de pipeteo y por la calidad del huevo.

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11. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 11.1 CONCLUSIONES Mediante el mtodo de Dosificacin de Protenas por Absorcin en el Ultravioleta pudimos encontrar la concentracin de protenas presentes en el huevo; la cantidad encontrada es 16.5 mg/dL. El valor de las absorbancias a diferentes longitudes de onda es de 0.178-0.123 para el tubo dos; mientras que para el tubo tres son de 0.468-0.220; para 280 y 260 nm respectivamente. Encontramos que el mtodo ms rpido y econmico para dosificar protenas en muestras biolgicas es el mtodo de Absorcin Ultravioleta, ya que se puede realizar de manera rpida y no gasta reactivos; el nico inconveniente es que se necesita un espectrofotmetro y no un colormetro. Determinamos que la estabilidad de las soluciones a medir en el espectrofotmetro son altamente estables por que no forman complejos coloreados; los cuales se deterioran en presencia de la luz solar. Estas soluciones fueron medidas despus de tres horas de haber realizado la prctica.

11.2

RECOMENDACIONES

Recomendamos para realizar esta prctica se mida correctamente los volmenes de de aforo y de pipeteo por que los datos pueden variar considerablemente.

12. BIBLIOGRAFA (1)http://www.buenastareas.com/ensayos/Dosificaci%C3%B3n-DeProte%C3%ADnas/4215084.html (2) http://www.balancesaludybienestar.com/la-importancia-de-las-proteinas/ (3) http://mejorestilodevida.net/Temas/t_nutricion_proteinas.htm

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13. ANEXOS

ANEXO I

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