РОССИЙСКАЯ
ГОСУДАРЙ-ЙВЕННОЕГ
[Г
ОБЩЕЙ ПАТРДОРИИ-И-ПАХОФЙЗЦОЛОГИИ
Начальник ) а ^ р 2 | Щ ^ 7 ^ . "^^^>:
СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОЕ ОКИСЛЕНИЕ И
МЕХАНИЗМЫ ВНУТРИКЛЕТОЧНОЙ ЗАЩИТЫ ИРИ
АДАИТАЦИИ К ИЗМЕНЕНИЮ УРОВНЯ КИСЛОРОДА.
(экспериментальное исследование)
ДИССЕРТАЦИЯ
на соискание ученой стенени доктора биологических наук
Иаучные консультанты:
член-корресиондент РАМИ, доктор
медицинских наук, нрофессор
В.В. Мороз,
доктор биологических наук
Т.Г.Сазонтова
Москва - 2005
2
ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр.
Введение 5
Обзор лнтературы 13
5.1.2. Влияние острой гипоксии на уровень экспрессии НОх-1 и HSP70 в разных орга-
нах крыс 93
5.2.1. Уровень защитных систем в миокарде у крыс Вистар и Август при стрессе 110
^^ 150
6.2. Влияние кратковременного и длительного применения СОД на соотношение про-
и антиоксидантных факторов в коже ^55
Заключеиие 191
Выоды 199
+4е +4Н*
ОН-радикал может разрывать любую С-Н или С-С-связь, при этом скорость
его взаимодействия с большинством органических соединений достигает величин,
равных скорости его диффузии [Зенков Н.К., и др., 2001]. В обычных условиях об-
разование 0Н° протекает достаточно слабо и усиливается в присутствии металлов
переменной валентности.
Гидроксильный радикал атакует боковые цепи ненасыщенных жирных ки-
слот с отщеплением водорода и образованием лииидного радикала (L°) (реакции
3), который в присутствии кислорода переходит в органические радикалы кисло-
рода (L00°) - пероксильиые радикалы. Они, в свою очередь, забирают водород
от жирнокислотных цепей фосфолипидов с образованием гидроперекисей лиии-
дов (LOOH). Одновременно с этой реакцией появляются новые липидные радика-
лы, которые могут вновь вступить в реакционный цикл.
+ 0Н° + Ог +Ш
LH -Z^ 1° • L00° • L° •
(3)
В результате свободнорадикального окисления жирнокислотных остатков
фосфолипидов образуются продукты, которые являются источниками различных
биологически активных соединений. Нолиеновые жирные ацилы до свободнора-
дикального окисления могут быть предварительно отщеплены от фосфолипидов с
помощью гидролиза их фосфолипазой типа Аг. Тогда в результате действия ли-
поксигеназы, при окислении жирных кислот образуются лейкотриены, а с помо-
щью циклооксигеназы - простагландины, тромбоксаны и простациклины. При
17
Рецепторы Рецепторы
(cross-talk)
МАРК
ERK
SAPK
Резистентность
Факторы
транскрипции
Синтез
Стресс-белков
НОРМОКСИЯ ГИПОКСИЯ
i
*, 2-оксоглутарат, витамин С
Pro-гидрокснлнро- А$п-г11дрокс11Л11ро-
ванне (Рго-402 и ваиие (Asn-803 в
Рго-564 в ODD) C-TAD)
Сукцинат
Сукцмнат Аккумуляция
СОг
HIF-la
+
димеризация с
HIF-ip
Связывание с pVHL
i
Коактиваторы транскрии-
ции СВР/рЗОО, SRC-1, TIF-2
Протеасомпая
деградация HIF-la Связываиис с ДНК
HIF-завнсимых генов
i
Биосинтез защнтиых белков
(физнологичеекий ответ на гипокеию)
Таблица 1.
Роль HIF и HIF-зависимых генов в регуляции гомеостаза клетки нри гипоксии.
Процессы НШ-зависимые гены Экспрессия
Регуляция транспорта Ог:
Эритропоэз Эритроноэтин t
Ангиогенез VEGF,VEGFR-1 и 2 t
Сосудистый тонус Эндотелин-1, iNOS, НОх-1 t
Энергетический обмеи:
Лактатдегидрогеназа т
Фосфоглицераткиназа-1 t
Альдолаза А и С t
Ферменты гликолиза: Фосфофруктокиназа L и С t
Пируваткиназа М t
Енолаза А t
Глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа t
Транснорт глюкозы Транснортеры глюкозы - GLUT-1 и 3 t
Синтез катехоламинов Тирозингидроксилаза t
Обмен железа Трансферрин, рецептор трансферрина t
Церулоплазмин t
Метаболнзм гема НОх-1 t
Факторы роста TGF-P, PGF, PDGF-P, ANGPT-1 и 2, HGF t
Регуляцня аноптоза Ингибиторы: Вс1-2, МсП T
Стимуляторы: В ах T
Регуляция активности HIF p35srj t
Примечание: TGF - transforming growth factor; PGF - placental growth factor; PDGF - piate-
let-derived growth factor; ANGPT - angiogenic factor angiopoietin; HGF - hepatocyte growth
factor.
Гем
NADPH
Гем-оксигеназа
ЫАОРН-цитохром-с-Р450-редуктаза
"^ NADP
2+
Fe
СО
Биливердин
NADPH
Биливердин-
редуктаза
NADP
Билирубин
170 1
DiNO-синтаза
160 - • НОх-1
150 -
140 -
130 -
120 •
110 •
100
6ч 12ч 18ч 24 ч
Гипоксия (2 мм рт.ст.)
Повреждение клеток
t
Окислительный
стресс
воспаление, гипоксия, Ферритин Fe-ферритин (защита)
ишемия/реперфузия,
гипероксия t
Fe Повреждение
клеток
1
ф
Z
О 150
ш 100
i
:ите.
50
К Зч 6ч 12ч
Время после гипоксии
£ 40
¥ 35
S
о.
0 30
1и 25
Z
S 20-
Сердце
I 10 Печень
о
о Легкие
— о ^ Мозг
К Зч 6ч 12ч
Время после гипоксии
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.
ЛЕГКИЕ ПЕЧЕНЬ
Блот 1. Влияние острой гипоксии на уровень индуцибельной НОх-1 в печени и
легких крыс.
Примечание: Легкие: 1 - клетки Н35 (41,5°С, 30 мин); 2 - через 12 ч после острой гипок-
сии; 3 - через 6 ч после острой гипоксии; 4 - через 3 ч после острой гипоксии; 5 - кон-
троль; Печень: 6 - через 12 ч после острой гипоксии; 7 - через 6 ч после острой гипок-
сии; 8 - через 3 ч после острой гипоксии; 9 - контроль.
90
а 80
U
S 70 « Сердце
а —• Печень
а
1 60 —*—Легкие
— о — Мозг
е денск!
50
40
2
Z 30
iiTej
20
о
о
10
0
К Зч 6ч 12ч
Время после гипоксии
Н35 12 ч бч 3ч К
ЛЕГКИЕ
Зч 6 ч 1 2 ч К К 1 2 ч 6 ч З ч Н35
СЕРДЦЕ МОЗГ
Блот 2. Влияние острой гипоксии на уровень HSP70 в легких, сердце и мозге
крыс.
Примечание: Н35 - положительный контроль на HSP70.
(Р<0,05).
Активпость каталазы мепее лабильна п через 3, 6 и 12 ч после гипоксии по-
следовательпо нарастает-на26, 36 и 39% (Р<0,05), соответственно, по сравпепию
с коптролем.
Накопец, активность глутатионпероксидазы оказывается паимепее лабиль-
пой и через 3 и 6 ч после гипоксии пе измепяется, а увеличепие ее активпости па
35% (Р<0,05) зарегистрировапо только через 12 ч после окопчапия острой гипок-
сии.
S 3,5
О)
*? 3
S 2,5
X
О)
Q.
а
t 1.5
о
•СОД
Z
ш И - Каталаза
• GP
< 0,5
К Зч 6ч 12 ч
Время после гипоксии
контролем.
Таблица 2.
Влияние острой гипоксии на активность ферментов
антиоксидантной защиты в легких крыс.
Серия СОД, Катал аза, Глутатиоппероксидаза,
у.е./мг белка мкМ НгОг/мип/мг белка мкМ NADPH/ мин/мг белка
Контроль 4,02-4,78-5,06 2,19-2,53-2,89 2,85-3,19-3,45
ОГ через 3 ч 4,14-4,19-4,65 2,24-2,30-2,93 3,37-3,53-3,7
ОГ через 6 ч 4,7-5,21-5,85 3,07-3,11-3,12* 2,78-3,37-3,7
ОГ через 12 ч 4,95-5,15-5,44 2,76-2,78-3,07 2,9-3,25-3,66
Примечание: ОГ - острая гипоксия; * - достоверность отличий (Р<0,05) по сравнению с
контролем (Mann-Whitney U Test).
Таблица 3.
Влияние острой гипоксии на активность ферментов
антиоксидантной защиты в мозге крыс.
Серия СОД, Катал аза. Глутатиопиероксидаза,
у.е./мг белка мкМ белка мкМ NADPH/ мии/мг белка
Контроль 3,97-4,12-5,19 0,18-0,20-0,20 0,77-0,86-1,25
ОГ через 3 ч 4,21-4,35-4,48 0,15-0,16-0,16* 0,90-1,0-1,07
ОГ через 6 ч 3,53-4,06-4,73
1
0,20-0,20-0,22 0,81-1,01-1,10
o r через 12 ч 3,74-3,98-4,52 | 0,16-0,20-0,16 0,95 - 0,97 - п о "
острая гипоксия;
Примечание: ОГ - острая гипоксия; ** -- достоверность
достоверность отличий (Р<0,05) по сравнению с
контролем (Mann-Whitney U Test).
Таблица 4.
Влияние острой гиноксии на активность ферментов
антиоксидантной защиты в печени крыс.
Серия СОД, Катал аза, Глутатиопнероксидаза,
у.е./мг белка мкМ НгОг/мин/мг белка мкМ NADPH/ мин/мг белка
Контроль 5,18-6,5-6,84 28,3-32,8-38,0 4,07-4,54-5,14
ОГ через 3 ч 5,48-5,75-5,6* 32,2-35,8-39,2 5,1-5,24-5,54*
ОГ через 6 ч 6,04-6,14-6,26 36,4-37,3-39,0 4,7 - 5,52 - 5,74
ОГ через 12 ч 5,63-5,64-5,72* 36,8-36,8-36,8 4,61-5,10-6,1
Примечание: ОГ - острая гипоксия; * - достоверность отличий (Р<0,05) по сравнению с
контролем (Mann-Whitney U Test).
D532 Ф Контроль
1,4 —• ОГ ч/з Зч
a - д — ОГч/збч
I '''
Ч
— о - -ОГч/з 12ч
о 1
о.
с
X
X 0,8
ш
п 0,6
Ш
0,4
Z
<и
ш
о 0,2
а
О
о мин 10 мин 30 мин 60 мин
Время окисления
9,8 л
« Контроль
—• ОГ ч/з Зч
ш ©
о — Д— ОГч/збч /
0,7 •
— 0 - - - ОГ ч/з 12ч /
Iа. 0,6-
/
/ *
^
с 1 / р
X
2 0,5-
X
ш /
0,4- /
п /7
0,3-
^' / 1
0,2-
/ jf/
ш
о
Q. 0,1 •
0- 1 1
о мин 20 мин 40 мин 75 мин
Время окисления
'Контроль
0,16 ОГ ч/з Зч
ОГ ч/з 6ч
0,14 . -О
0,12
0,1
0,08
0,06
ш 0,04
л
X
ф 0,02
о
о
а. О
>
О мин 5 мин 15 мин 25 мин 40 мин
Время окисления
0,4
о
t 0,35
Рис. 13. Уровень накопле-
ния продуктов свободнора-
i 0,3 дикального окисления, ин-
с
3 0,25 дуцированного in vitro, в
миокарде крыс в контроле и
! Контроль после острой гипоксии.
1 0,15 •- ОГ ч/з Зч Примечание: D - оптическая
Ш Д— ОГч/збч
\ 0,1 •о— ОГ ч/з 12ч плотность при 532 нм; * - дос-
g 0,05
товерность отличий (Р<0,05)
а. по сравнению с контролем
(Mann-Whitney U Test).
О мин 20 мин 40 мин 60 мин
Время окисления
103
Таким образом, носле острой гиноксии резистентность мембранных
структур к индукции свободнорадикального окисления в мозге не отличается
от контроля. В остальных тканях к 12 ч носле острой гиноксии зарегистриро-
вано новышение чувствительности мембранных структур к свободнорадн-
кальным нроцессам. Причем нанбольший уровень нродуктов свободноради-
кального окисления, индуцированного in vitro, зарегистрирован в нечени, а
наименьший - в легких и сердце.
I 3,5
E 3
5 2,5
Ш
— • — 1 4 мкМ Са2+
5 1
— •— 24мкМСа2+
сЬ 0,5
О
= 4
I 3,5
12,5
о.
2 Ф О мин
Z
— •— 20 мин
о- 1,5
п
О 1
#
2,5
1,5
Q.
О
<
1 0,5
2 О
Q."
ВИСТАР АВГУСТ
О
•
1 20-
U
' '' 25.
50
40
20-
£ 1 30
^ 10-
л 20
с; 10-
1и 5-
о
5-
•• 10
Е п
о ° Вистар Август Вистар Август Вистар Август
Рис. 17. Уровень экспрессии HSP70 и НОх-1 в миокарде, а также уровень экс-
прессии НОх-1 в печени крыс популяции Вистар и линии Август в контроле и по-
сле стресса.
(блот 3), играющего важную роль в регуляции синтеза защитных белков и, в част-
ности, НОх-1. Известно, что при физиологических условиях уровень фактора
транскрипции HIF-la может регулироваться стероидными гормонами и оксидом
азота [Ema М. et al., 1997]. Показано, что крысы Август характеризуются более
высоким уровнем кортикостероидов в крови и оксида азота в крови и тканях, воз-
можно, поэтому у них выще и уровень фактора транскрипции HIF-la, по сравне-
нию с крысами Вистар.
После стрессорного воздействия индукция защитных белков — HSP70 и
НОх-1 значительно изменяется. В сердце уровень экспрессии стресс-
активируемого HSP70 закономерно увеличивается у обоих видов животных, одна-
ко, в разной степени: у крыс Август на 57%, а у крыс Вистар - в 2,5 раза (рис. 17).
По уровню НОх-1 различия еще более яркие - в сердце у крыс Вистар интенсив-
ность экспрессии НОх-1 после стресса осталась на контрольном уровне, а у крыс
Август снизилась в 2,8 раза.
113
После стресса в печени у крыс обеих линий уровень экспрессии HIF-la не
изменяется, то есть остается на контрольном уровне, что может свидетельствовать
о слабо выраженной гипоксической компоненте в данной модели острого стресса.
Кроме того, в печени у крыс Август после стресса уровень экспрессии индуци-
бельной формы НОх-1 так же, как и в сердце, снижается - на 43%, а у крыс Вистар
резко активируется - более чем в 8 раз (рис. 17).
В результате после стрессорного воздействия картина становится совершен-
но иной, нежели в норме. Если в контроле уровень экспрессии защитных белков
был выще у крыс Август, то после стресса - у Вистар. Таким образом, стрессор-
ное воздействие у крыс Вистар ириводит к более выражеииым измеиеииям
уровия фермеитов аитиоксидаитной защиты и других защитных белков, чем
у крыс Август.
I
о
Стресс I
о
0,25
• Контроль
•о— Стресс
0,25 Q.
0,2
0,2
0,15
0,15
0,1
0,1
0,05 ш 0,05
о
о Q.
>
О
О мин 20 мин 40 мин 60 мин О мин 20 мин 40 мин 60 мин
Время окисления Время окисления
ВИСТАР АВГУСТ
0,14 1 0,16
*
1
а.
0,12-
Iо. 0,14
0,12
с 0,1 • с
2 *
вны:
х 0.1
ш 0,08- у
ь ТБК-акт»
У 0,08
0,06-
с/ 0,06
^ • "
0,04- ш
I 0,04
Z
ш 0,02- • Контроль ф
о m 0,02 < Контроль
о
— 0 — Контроль + Н2О2 а — о — Контроль + Н2О2
0 •
О
Омин 20 мин 40 мин 60 мин Омин 20 мин 40 мин 60 мин
Время окисления Время окисления
1
О
С
u 0,5
Вистар Август
а
1
0 0,4
о
1 0,2
! о
о Вистар Август
Таблица 8.
Активность Са-транспорта в СР изолированных сердец крыс Вистар и Август нри
действии высокого уровня кальция (-dE/dT, mV/min).
Серия эксперимента 14 мкмоль Са''^ 24 мкмоль Са^"^
Контроль-Вистар 1,03-1,0-0,983 0,93 - 0,694 - 0,649^ (Р<0,05)
Контроль-НгОг-Вистар 0,938-0,861-0,85 0,614 - 0,574 - 0,559 "^ (Р<0,05)
Стресс-Вистар 1,22-1,06-0,813 0,93 - 0,813 - 0,697^ (Р<0,05)
Стресс-НгОг-Вистар 0,814 - 0,677 - 0,552^ (Р<0,05) 0,506-0,503-0,31
Контроль-Август 1,589-1,564-1,5#(Р<0,01) 0,648 - 0,646 - 0,632^ (Р<0,01)
Контроль-НгОг-Август 1,11-0,984-0,968^ (Р<0,01) 0,777 - 0,723 - 0,702^ (Р<0,05)
Стресс-Август 1,124-1,434-1,586#(Р<0,05) 0,616 - 0,993 - 0,995^* (Р<0,05)
Стресс-НгОг-Август 1,06 - 0,726 - 0,432^ (Р<0,01) 0,713 - 0,509 - 0,356^^" (Р<0,05)
Примечание: * - достоверность отличий по сравнению с контролем (Mann-Whitney U
Test); + - по сравнению с серией без Н2О2 (Mann-Whitney U Test); ^ - no сравнению с ис-
ходными значениями (Wilcoxon Matched Pairs Test); # - no сравнению с крысами популя-
ции Вистар (Mann-Whitney U Test).
140"
#
120-
100-
80-
60-
40-
20-
0-
Вистар Август
1,6
Ю 1,4
# 1,2
1
0,8
0,6
d 3 0,4
8 2 0,2-
1 0
Вистар Август Вистар Август
0,25
о
а. 0,2
с
X
2
X
а
0,15
S
0,1
0,05
А. В.
D Контроль
7ч а Ишемия
п 6 • D Ишемия+Реперфузия
* # ю 4
1 •^ 3
2
ct 2 -
О
8i. О
n.
Вистар Август Вистар Август
Рис. 26. Активность СОД в миокарде крыс Вистар и Август в контроле, после
ишемии и ишемии с реперфузией: А - левый желудочек (ишемизированная зона);
В - правый желудочек (неишемизированная зона).
Примечание: * - достоверность отличий по сравнению с контролем, # - по сравнению с
крысами линии Вистар (Mann-Whitney U Test).
А. В.
а Контроль
л
0) 1,6 о Ишемия ж
ю D Ишемия+Реперфузия 1,6
1,4
I.
1,4
1,2
х 1,2
X 1
1
0,8 0,8
0,6 X
0,6
0,4 S 0,4
S 0,2 0,2
га
О с; О
Вистар Август Вистар Август
Рис. 27. Активность каталазы в миокарде крыс Вистар и Август в контроле, после
ишемии и ишемии с реперфузией: А - левый желудочек (ишемизированная зона);
В - правый желудочек (неишемизированная зона).
Примечание: * - достоверность отличий по сравнению с контролем; # - достоверность
отличий по сравнению с крысами линии Вистар (Mann-Whitney U Test).
128
A. В.
ВИСТАР Окз:I АВГУСТ
0,25-
g ш 0,5- #
О 0,2 •
1 0,45-
с о 0,4-
а
с 0,35-
z 0,15-
Ю X 0,3- * ш
ь ТБК-аIKTV
а, t /
0,25-
5
ТБК-ак1
0,1-
4' 0,2-
0,15-
z % Контроль
g> 0,05- Z 0,1 •
OQ
— • — Ишемия ш
О ш
a •• к -Ишемия+Реперфузия о 0,05 •
а
0 •
Омин 20 мин 40 мин 0 мин 20 мин 40 мин
Время окисления Время окисления
А. В.
0.32 ВИСТАР АВГУСТ
0,3 А
0,25
ч
о 0,25 §
о.
с а
0,2
><
л 0,2
Z
ш
0,15
п 0,15 7
Ш ш 0,1
А 0,1 л
X
а> •Контроль Iо
о о 0,05
о — • — Ишемия а
о. 0,05
•• к -Ишемия+Реперфузия
В.
35
а
S 30.
i 25
20.
о
15.
и
о 10
X
л
1. 2. 3. 4.
I 1. 2. 3. 4.
1,5
Q.
о
с 1
о
Z
п
о. 0,5
к-
я
о О
Контроль Реанимация - 7 дней Реанимация - 30 дней
с 3-1 ы DO мин
Ё Q20 мин
*
Т5
Са-транс порт, -
О1
о
Э
активности СОД, хотя уровень HSP70 также повышен (рис. 34). Через 30 дней по-
сле реанимации у животных с активным типом поведения активность СОД остава-
лась повышенной на 13% по сравнению с контролем.
ы
0) Т
S 2,5
в) 2
>ч
d 1.5
0,5
О
Контроль Реанимация - 7 дней Реанимация - 30 дней
0,15.
0,1 .
0,05.
0.
Контроль Реанимация - 7 дней Реанимация - 30 дней
3. 2. 1.
144
Таким образом, на отдаленных сроках после реанимации и у нассив-
ных, и у активных крыс в коре головного мозга ноддерживается высокий
уровень синтеза защитных белков, что нозволяет защитить ткань мозга от
чрезмерной активации свободнорадикального окислення.
10
1 1.
О."
<3 0 .
Контроль Реанимация - 7 дней
Контроль Реанимация - 7 дней
B.
10- *
14- #
_ 13 - 9•
с 12- 8-
7 .
ю 11 • 1
5 10- 6-
ш 9- Q. 5-
О 4-
<
3-
6 -
5. 11 2-
Контроль Реанимация•30 0 •
0,4- ?
ш 0,3 ш
л 0,2 л
Z
о 0,1 m
ш о
о а
о. О
> О мин 20 мин 40 мин 75 мин
О мин 20 мин 40 мин 75 мин
1
ч 0,9
о 0,8
а. 0,7
Z 0,6
ш
0,5
га
0,4 Контроль
m 0,3
Перфторан
ень
0,2
m Проксанол
о 0,1
-•—Контроль Контроль
••— Стресс Стресс
-d—Перфторан Проксанол
Проксанол + Стресс W
-• Перфторан + Стресс
а.
= 1,4
X
I 1.2
а
0,8
Ш
*: 0,6
S 0,4
о
°- 0,2
О
О мин 20 мин 40 мин
О мин 20 мин 40 мин
Время окисления Время окисления
Так, после стресса был увеличен начальный уровень окисления в 2 раза (Р<0,01) и
уровень накопления АФК-продуктов через 20 мин после индукции окисления in
vitro аскорбатом на 35% (Р<0,01) (рис. 39). Острый стресс на фоне введения пер-
фторана также снижал активность СОД (на 37%), что приводило к повышению
чувствительности мембранных структур печени к свободнорадикальным процес-
сам (рис. 39А).
При стрессе проксанол предотвращал снижение активности СОД в печени и
повышал устойчивость ее мембранных структур к действию АФК. После индук-
ции окисления in vitro уровень АФК продуктов в печени стрессированных живот-
ных на фоне проксанола был снижен - через 20 мин на 28% (Р<0,01) и через 40
мин - на 16% (Р<0,01) (рис. 39В).
А. В.
• Контроль
-^•^— Стресс 1 П Ф Контроль
N ^—•— Стресс
u Перфторан
u) 0,9 u? 0,9 A Проксанол
^—•— Перфторан -t- Стресс
О О ^—*— Проксанол + Стресс
g 0,8 f 0,8
0,7 Ч 0,7
о
0,6- =• 0,6
X
i 0,5 л
Ш
Ё 0,4
I 0,5
n
Ш 0,3
i 0,4
e 0,3
S 0,2
о Ш
^ 0,1
I 0,1
О мин 5 мин 10 мин 20 мин 40 мин О МИН 5 мин 10 мин 20 мин 40 мин
0=32 — Контроль
- Черзе 1 ч после ожога
g 1,2 ~ Через 12 ч после ожога
1 -
о
a.
>< 0 , 8
л
X
ш
I 0.6
n
Ш 0,4
m
о
5- О
О мин 7 мин 15 мин 25 мин
Время окисления
— Контроль
1,2
"• Через 1 ч после ожога
— С0Д(12дн)
— СОД (12 дн) +Ожог
Рис. 42. Влияние длительного приме-
о
а
нения экзогенной СОД на уровень сво-
0,8
боднорадикального окисления в коже
X
В) крыс.
f 0,6
Примечание: D - Оптическая плотность
при 532 нм; * - достоверность отличий по
0,4
сравнению с контролем; # - достоверность
отличий Р<0,05) по сравнению с ожогом
g 0,2 (Mann-Whitney U Test).
а
>
Время окисления
125
15
120
о
115 I 10
110
105
I
100
Контроль ПЕЧВНЬ СВ'ДЦЕ I МОЗГ ПВНЕНЬ СВ'ДЦЕ
100% О
Рис. 43. Влияние однократной гипероксии (1,5 ата, один час) на уровень защитных
антиоксидантных белков в разных органах крыс: А - каталазы, В -НОх-1.
Примечание: * - достоверность отличий (Р<0,05) по сравнению с контролем (Mann-
Whitney и Test).
*
5 1 •
о
о. * * * •*
с
X 0,8-
2
X
са
0,6-
• •
я
ik
ш 0,4- • Контроль
.0 - - е - -Гипероксия
Z 0,2-
0)
ю
о 0-
•.
30 мин 60 мин 90 мин
Рис. 44. Влияние однократной гипероксии (1,5 ата, один час) на чувствительность
ткани мозга к индуцированному in vitro окислению.
Примечание: D - Оптическая плотность при 532 нм; * - достоверность отличий (Р<0,05)
по сравнению с контролем (Mann-Whitney U Test).
164
0,9
о 0,8
а 0,7
X
X
0,6
а 0,5
0,4
0,3 •—Контроль
0,2 I- 'Гипероксия
0,1
01
ш О
о
$ 20 мин 40 мин 75 мин
Рис. 45. Влияние однократной гинероксии (1,5 ата, один час) на чувствительность
ткани печени к индуцированному in vitro окислению.
Примечание: D - Оптическая плотность при 532 нм; * - достоверность отличий (Р<0,05)
по сравнению с контролем (Mann-Whitney U Test).
2,5 DO мин
*
О 20 мин
#
1,5 •#
h."
U
z 0,5
n
p.
Ca-T
0
Контроль Гипероксия
Рис. 46. Влияние однократной гипероксии (1,5 ата, один час) на резистентность
Са-транспортирующей системы СР миокарда к действию автолиза.
Примечание: * - достоверность отличий (Р<0,05) по сравнению с контролем (Mann-
Whitney и Test); # - по сравнению с О мин (Wilcoxon Matched Pairs Test).
165
Таким образом, однократное часовое гинероксическое воздействие ин-
тенсивностью 1,5 ата на контрольных животных вызывает активацию сво-
боднорадикальных нроцессов ири одновременном надении резистентности
мембранных структур во всех изученных органах.
Поэтому, в методику проведения ГБО были внесены изменения, направлен-
ные на снижение агрессивности этого воздействия путем постепенного увеличе-
ния длительности ГБО (в первые 3 дня, животные получали сначала 15 мин гипе-
роксии, затем - 30, 45 и только потом - полностью 60 мин воздействие). После
этого проводили адаптацию к ГБО разной интенсивности в течение 15 дней.
60 О [АФК-продукты] in vitro
ПСОД
40 аНОх-1
20
-20
•40
-60
Таблица 14.
Влияние адаптации к периодической ГБО интенсивностью в 2 ата
на активность ферментов антиоксидантной защиты в миокарде крыс.
СОД, Каталаза, НОх-1,
Серия ОДЕ
у.е /мг белка мкМ НгОг/мин/мг белка
13,4
Контроль 1,79- -1,99--2,49 0,88-1,01 -1,2
13,0
ГБО - 2 ата 2 ,16- - 2,29 --2,91 1,15- 1,29-1,36* (Р<0,05)
Примечание: * - достоверность отличий по сравнению с контролем (Mann-Whitney U Test);
ОДЕ - относительные денситометрические единицы.
167
Стабилизирующий эффект курса ГБО интенсивностью 2 ата проявлялся и на
уровне мембранно-связанной системы Са-транспорта СР миокарда (рис. 49А и
49В). Так, зарегистрировано увеличение резистентности Са-транспортирующей
системы СР миокарда к действию высокого уровня кальция - двукратное повыше-
ние концентрации Са^^ приводит к 42% (Р<0,05) снижению скорости Са-
транспорта у контрольных животных, после курса периодической ГБО интенсив-
ностью 2 ата этот параметр достоверно не снижается (рис. 49А). Кроме того, уве-
личилась устойчивость Са-насоса к действию автолиза - через 20 мин скорость
транспорта в СР миокарда составляла 88% от исходного уровня, в отличие от кон-
троля, в котором сохранилось лишь 69% (Р<0,05) исходной активности (рис. 49В).
В.
2,5 a 14 MKM Ca2+ 2,5- Q 0 мин
D 24 MKM Ca2+ с D 2 0 мин
E
I 1 2-
Щ
E
#
a 1,5' 1,5-
Ш
#
73 I
К
юрт.
a. 1 •
о
с
u и
-тра»
I 0,5. 0,5-
n
О О
50
* *
40
30
20
10-1
-10
>. 0,9
^ 0,8
X 0,7
I 0,5
^ 0,4
|£ 0,3 Контроль
I 0,2 ГБО - 2 ата
0)
g 0,1
транспорт. -dE/dT
а 1,5 1.5
#
.о
h #•
а. 1 1
о
и
0,5 0,5
"• 1 #га
\ п
О и
Контроль ГБО-1 ,5 а т а Контроль ГБО-1,5 ата
Рис. 52. Влияние адаптации к периодической ГБО интенсивностью 1,5 ата на ус-
тойчивость Са-транспортирующей системы к эндогенным повреждающим факто-
рам: А - к высокому уровню Са^^, В - к автолизу.
Примечание: * - достоверность отличий по сравнению с контролем (Mann-Whitney U
Test); # - достоверность отличий по сравнению с 14 мкМ Са^"*" (А) или О мин (В) (Wilcoxon
Matched Pairs Test).
При снижении интенсивности ГБО с 2 ата до 1,2 ата оказалось, что защит-
ный эффект на сердце сохраняется, хотя он менее выражен (рис. 53). Повышение
устойчивости Са-транспортирующей системы СР миокарда к действию эндоген-
ных повреждающих факторов после адаптации к ГБО интенсивностью 1,2 ата со-
провождается снижением начальной скорости работы этой ферментной системы.
I D14MKM
D24MKM
I * +
#
а 1,5
•и
о
с
I
U 0,5
п ГБО-1,2 ата
Контроль
и
Рис. 53. Влияние адаптации к периодической ГБО интенсивностью 1,2 ата на ак-
тивность Са-транспортирующей системы саркоплазматического ретикулума мио-
карда крыс.
Примечание: # - достоверность отличий (Р<0,05) по сравнению с 14 мкМ Са^* (Wilcoxon
Matched Pairs Test); * достоверность отличий (Р<0,05) по сравнению с контролем (Mann-
Whitney и Test).
171
В ткани печени периодическая гипероксия интенсивностью 1,5 и 1,2 ата
приводила к ярко выраженному защитному эффекту на резистентность мембран-
ных структур от активации свободнорадикального повреждения. Из рис. 54 видно,
что при периодической гипероксии в 1,5 ата и 1,2 ата происходило снижение чув-
ствительности к действию АФК, которое было сопряжено с умеренной активацией
ферментов антиоксидантной защиты.
40 Г Б О - 1 ,5 ата
30
ГБО-1,2 ата
30
20
20
10 10
ОЦ- О
-10
-10
-20
•20
• [АФК-продукты] in vitro -30
•30 • СОД
-40
аКаталаза
•40 -50
Рис. 54. Влияние адаптации к периодической ГБО интенсивностью 1,5 и 1,2 ата на
изменение (в % от контроля, принятого за 0) уровня про- и антиоксидантных сис-
тем в печени крыс.
30
25-1
20
15
10 Q [АФК-продукты] in vitro
5 • СОД
Q Каталаза
О
Рис. 55. Влияние адаптации к периодической ГБО интенсивностью 1,5 ата на из-
менение (в % от контроля, принятого за 0) уровня про- и антиоксидантных систем
в мозге крыс.
ГБО-1,2 ата
D [АФК-продукты] in vitro
ОСОД
D Каталаза
-15 DHOx-1
Рис. 56. Влияние адаптации к периодической ГБО интенсивностью 1,2 ата на из-
менение (в % от контроля, принятого за 0) уровня про- и антиоксидантных систем
в мозге крыс.
0,9
0,8
о 0,7
а.
0,6
0,5
0,4
Ш 0,3 Контроль
0,2 — •— ГО+НО
Ф
ш 0,1
о
а.
> О
О мин 10 мин 20 мин 30 мин 40 мин
Таблица 17.
Влияние нормобарической гипероксической тренировки на активность
Са-транспорта (-dE/dT, mV/min) в СР миокарда при действии автолиза.
Серия 0 мин 20 мин
Контроль 1,48-1,85-2,25 0,72-0,88-1,18#
ГО+НО 1,79-1,94-2,33 1,51-1,83-1,89*
Примечание: # - достоверность отличий (Р<0,01) по сравнению с О мин (Wilcoxon Matched
Pairs Test); * - достоверность отличий (Р<0,01) по сравнению с контролем (Mann-Whitney
и Test).
175
A. В.
О Контроль о 5
3 а>
а ГО+НО
S 4,5
о
2,5 в) 4
2 3,5
3
1,5
25
1 I 2
3 1,5
0,5
0,5
О о
СОД Каталаза GR
Контроль ГО+НО
а Контроль 80-
9-1 5-1
ПГО+пи
1
8- 4,5-
70-
1
7 •
Н/ми н/мг
6- 60-
3,5-
О) I
ю 5- S
50- 3-
4- > Q.
О D
3- 40- <
Z
2- 1
1.
30- 1 1,5-
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3 Контроль
0,2 ГО+НО
0,1
ф
о О
о
о. 20 мин 40 мин 75 мин
» 10
О)
I 8
| 7
и
I=
- л
I'
J 4
Контроль ГО+НО
ш 0,8 1,2
i 0,7
Ч 1
I 0,6 5
о
X 0,8
I 0,5
ш
I 0,4 I 0,6
n
^ 0,3
Ш
0,4-
0,2 Контроль
I
а> 0,2
ш — • — ГП+НО
о 0,1 ш
а о
> о.
0 >
20 мин 40 мин 75 мин 7 мин 15 мин 25 мин 40 мин
Аскорбатное окисление Fe/аскорбатное окисление
В.
ш 0,9
кто
2 0,8
08
о 0,7 Ч 0,7
а О
1 0,6 с
X
0,6
0,5 i 0,5
-акт!
ш
0,4 Ё 0,4
0,3
Ш 0,3 Ш Контроль
л - Контроль 0,2
Z 0,2
о — • — ГП+НО — • — ГП+НО
а 0,1 ш
о
0 а.
>
10 мин 30 мин 60 мин
30 мин 60 мин 90 мин
Fe/аскорбатное окисление
Аскорбатное окисление
I 2.5
тз
о
5 1
« Контроль
я 0,5
О — •— ГП+НО
2,5- DO мин
с
О 20 мин
I
5 2-
2 1,5-
•а #
#
Са-трансг
UI
о
9
Контроль ГП+НО
2,5
0,8 1
0,9-
10,7
о
Q.
0,8
С 0,6
0,7
X 0,5 0,6
CD
S 0,5
1- 0,4
n 0,4
БК-
0,3
ь 0,3
0,2 Контроль ш • Контроль
л 0,2
X X — • — ГП+ГО
ш ГП+ГО X
0,1 0,1
оо
ш ф
о
а О
20 мин 40 мин 75 мин
а. 7 мин 15 мин 25 мин 40 мин
А.
Q Контроль
80
8
ю 70
D ГП+ГО
1*
ю 3,5
i 60
I 3
I 2,5
о: 50
I 5 ф
z 1,5
5*
' I 40
S
I 1
о g 30
" 3 of 0,5
I 20
В.
тель ные денс»1тометрк1ческ1«еед.
3,5-
3-
0,5-
и
0-
Отн(
А. В.
D532
и,э - 0,8
о
0,8-
0,7.
I 0,7
а. с 0,6
X
м 0,6-
X
ш
I 0,5
0,5- 0,4
0,4- ^ * 7 0,3
0,3- -Контроль
й > Контроль 5 0,2
— • — ГП+НО
nj , £0 •
0) — • — ГП+НО X
ш 0,1 - А -ГП+ГО
о
g 0,1 - - * -ГП+ГО о О
а. 0- 10 мин 30 мин 60 мин
30 мин 60 мин 90 мин
Fe/аскорбатное окисление
Аскорбатное окисление
Рис. 70. Влияние ИНГТ разных режимов на уровень накопления продуктов сво-
боднорадикального окисления при его индукции in vitro в коре головного мозга
крыс различными системами окисления.
Примечание: D - оптическая плотность при 532 нм; * - достоверность отличий по сравне-
нию с контролем (Mann-Whitney U Test).
186
Таким образом, введение гипероксической компоиенты в случае режи-
ма ГП+ГО приводило к большей устойчивости ткани мозга к индукции сво-
боднорадикального окисления.
В сердце кратковременная адантация к ГП+ГО не нриводила к увеличению
активности СОД, каталазы и глутатионредуктазы, а также экспрессии HSP70 и
НОх-1 (табл. 19). Это означает, что к 15 суткам ГП+ГО адантации цроизошло
снижение интенсивности свободнорадикального сигнала, то есть достижение ста-
дии долговременной адаптации, несмотря на уменьшенное время тренировки. При
этом резистентность мембранных структур сердца к индукции свободнорадикаль-
ного окисления носле адантации к ГП+ГО увеличилась (рис. 71). Так, уровень на-
копления свободнорадикальных продуктов при его индукции in vitro, носле
ГП+ГО был на 20-30% (Р<0,01) ниже, по сравнению с контролем.
Таблица 19.
Влияние нормобарической тренировки в режиме ГП+ГО на активность ферментов
антиоксидантной защиты (мг/белка) и уровень белков срочного
ответа в сердце крыс.
Ферменты Контроль ГП+ГО
СОД, у.е./мг белка 2,1-2,53-2,82 2,48-2,72-3,32
Каталаза, мкМ НгОг/мин 1,44-1,74-1,86 1,60-1,93-2,28
Глутатионредуктаза, мкМ NADPH/мин 2,18-2,49-3,05 2,14-2,36-2,83
НОх-1, относительные денситометрические ед. 5,9 5,7
HSP70, относительные денситометрические ед. 8,8 12,8
^532
I 0,7
I 0,6
ffl 0,5
n 0,4
I 0,3
ia 0,2
Ю
Контроль
о 0,1 — А — ГП+ГО
I 2,5
I
к
о
1,5
1
п
Ф Контроль
(3 0,5 — i t — m+ro
2,5- DO мин
с 0 2 0 мин
Ё
$ 2-
•U 'IP/ЭР
1,5- #•
юрт, -
1, #
U
Са-Tpai
0,5-
0'
Контроль ГП+ГО
2,5
•и
U]
•о
н
Q.
О
с
о
Z -Ф—Контроль
со
Т 0,5 -А- -ГП+ГО
250
s
о 200
fe
150
^ 100
S!
X
I
л
с;
50
s
u
о
к Зч 6ч 12ч
Время после гипоксии
ВЫВОДЫ
1. Выявлены закономерности различной активации комнонентов редокс-
сигнальной системы - фактора транскринции HIF-la, НОх-1, HSP70 и ферментов
антиоксидантной защиты при острых воздействиях - гипоксии, ишемии и стрессе.
Установлено, что активация редокс-сигнальной системы определяется изменением
соотношения про- и антиоксидантных факторов в клетке. Изменение этого соот-
ношения может быть использовано в качестве критерия повреждения или устой-
чивости клетки при действии различных факторов среды.
2. Активация свободнорадикальных процессов при остром гипоксическом
воздействии индуцирует синтез защитных белков в сердце, мозге, печени и легких.
При этом выявлены значительные тканеспецифические особенности интенсивно-
сти и скорости индукции синтеза защитных белков в ответ на острую гипоксию.
Эти параметры увеличиваются в ряду органов: для фактора транскрипции HIF-la
сердце < печень < мозг, для НОх-1 - легкие < мозг < сердце < печень и для HSP70
- печень < легкие < сердце < мозг. Уровень синтеза защитных белков в одном и
том же органе в значительной стенени зависит от чувствительности мембранных
структур к свободнорадикальным процессам.
3. Острая гипоксия, гипероксия и ишемия нарушают работу мембранного
компонента поддержания Са-гомеостаза - Са-транснортирующей системы СР
миокарда, что выражается в снижении ее активности и устойчивости к действию
повреждающих факторов. Адаптация к периодическому изменению уровня кисло-
рода приводит к увеличению резистентности мембранных структур миокарда к
свободнорадикальным процессам и повышению эффективности работы Са-насоса
СР.
4. На молекулярном уровне доказаны принципиальные отличия в устойчи-
вости к стрессорным и ишемическим повреждениям миокарда у крыс разных гене-
тических линий. Крысы Август и Вистар исходно отличаются по соотношению
про- и антиоксидантных систем, эффективности функционирования и резистент-
ности Са-транспортирующей системы СР миокарда. Повышенная устойчивость
сердца у крыс Август к ишемическим и стрессорным повреждениям, но сравнению
с крысами Вистар, в значительной степени связана с более высокой стабильностью
системы антиоксидантной защиты при этих воздействиях.
200
5. Установлены тканеспецифические особенности реакции мембранных
структур разных органов на ишемию, вызванную временной остановкой систем-
ного кровообращения у крыс с генетически детерминированным разным типом
поведения. У крыс с активным типом поведения через 7 дней после реанимации
повышается резистентность мембранных структур сердца и мозга за счет увеличе-
ния активности ферментов антиоксидантной защиты. В то же время, в печени этих
животных повышается уровепь свободнорадикального окисления на фоне сниже-
ния антиоксидантных систем. У крыс с пассивным типом поведения через 7 дней
после реанимации во всех органах происходит снижение интенсивности свобод-
норадикальных процессов за счет более высокого уровня белков срочного ответа,
в частности семейства HSPs.
6. Определено модулирующее действие антигипоксического препарата -
кровезамепителя с полифункциональными свойствами - перфторана на соотноше-
ние про- и антиоксидантных систем в разных органах. В сердце при стрессе пер-
фторан предотвращал активацию свободнорадикального окисления за счет увели-
чения активности супероксиддисмутазы и других ферментов антиоксидантной за-
щиты. Однако, в печени, более чувствительной к окислению ткани, при действии
перфторана повышалась чувствительность к индукции свободнорадикального
окисления за счет снижения активности антиоксидантных ферментов. Проксанол -
один из компонентов препарата «Перфторан» защищал мембранные структуры
сердца и печени от свободнорадикального окисления при стрессе без существен-
ной активации антиоксидантных систем клетки.
7. Кратковременное применение препарата с антиоксидантными функциями,
содержащего рекомбинантную супероксиддисмутазу предотвращает чрезмерную
активацию свободнорадикального окисления при ожоге кожи. Длителыюе приме-
нение этого препарата обладает менее выраженным протекторным эффектом на
фоне относительного снижения активности собственных антиоксидантных фер-
ментов кожи.
8. Применение экспериментально обоснованного и разработанного способа
адаптационной тренировки организма, основанного на комбинации периодов ги-
поксии и умеренной гипероксии, обладает значительным защитным действием на
мембранные структуры миокарда, мозга и печени. Формирование адаптационной
201
защиты происходит в более короткие сроки, чем при классической интервальпой
нормобарической гипоксической трепировке и без побочпых эффектов па чувст-
вительные к свободиорадикальпым процессам органы.
during brain reperfusion following cardiac arrest. // Acta Neuropathol. - 1993. - V0L86.
-P.1-9.
452. Wiese A.G., Pacifici R.E., Davies K.J.A. Transient adaptation to oxidative
stress in mammalian cells. // Arch. Biochem. Biophys. - 1995. - Vol.318, №1. - P.231-
240.
453. Wiesener M.S., Turley H., Allen W.E., Willam C , Eckardt K.-U., Talks
K.L., Wood S.M., Gatter K.C., Harris A.L., Pugh C.W., Ratcliffe P.J., Maxwell P.H. In-
duction of endothelial PAS domain protein-1 by hypoxia: chracterization and compari-
son with hypoxia-inducible factor-la. // Blood. - 1998. - Vol.92, .№7. - P.2260-2268.
454. Wong C.-M., Chun A.C.S., Kok K.H., Zhou Y., Fung P.C.W., Kung H.-F.,
Jeang K.-T., Jin D.-Y. Characterization of human and mouse peroxiredoxin IV: evidence
for inhibition by Prx-IV of epidermal growth factor- and p53-induced reactive oxygen
species. // Antioxidants and redox signaling. - 2000. - Vol.2, 3. - P.507-518.
455. Yamashita N., Nishida M., Hoshida S., Kuzuya Т., Hori M., Taniguchi N.,
Kamada Т., Tada M. Induction of manganese superoxide dismutase in rat cardiac myo-
cytes increases tolerance to hypoxia 24 hours after preconditioning. // J. Clin. Invest. -
1994. - Vol.94, ^o6. - P.2193-2199.
456. Yamashita N., Hoshida S., Nishida M., Igarashi J., Taniguchi N., Tada M.,
Kuzuya Т., Hori M. Heat shock-induced manganese superoxide dismutase enhances the
tolerance of cardiac myocytes to hypoxia-reoxigenation injury. // J. Mol. Cell. Cardiol. -
1997.-29,.№7.-Р.1805-1813.
457. Yang Z.-Z., Zhang A.Y., Yi F.-X., Li P.-L., Zou A.-P. Redox regulation of
HIF-la levels and HO-1 expression in renal medullary interstitial cells. // Am. J.
Physiol. Renal. Physiol. - 2003. - Vol.284. - P.F1207-F1215.
458. Yang Z.Z., Zou A.P. Transcriptional regulation of heme oxygenases by hy-
poxia-inducible factor-la in renal medullary interstitial cells.// Am. J. Physiol. Renal.
Physiol. - 2001. - Vol.281. - P.F900-F908.
459. Yee E.L., Pitt B.R., Billiar R.R., Kim Y.M. Effect of nitric oxide on heme
metabolism in pulmonary endothelial cells. // Am. J. Physiol. - 1996. - Vol.271. -
P.L512-L518.
460. Yu B.P. Cellular defenses against damage from reactive oxygen species. //
Physiol. Revs.- 1994.-Vol.74.-P. 139-162.
247
461. Yu F., White S.B., Zhao Q., Lee F.S. Dynamic, site-specific interaction of
hypoxia-inducible factor-la with the von Hippel-Lindau tumor suppressor protein. //
Cancer Res.-2001.-Vol.61.-P.4136-4142.
462. Zakhary R., Gaine S.P., Dinerman J.L., Ruat M., Flavahan N.A., Snyder
S.H. Heme oxygenase-2: Endothelial and neuronal localization and role in endothelium-
dependent relaxation. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1996. - Vol.93. - P.795-798.
463. Zelko I.N., Mariani T.J., Folz R.J. Superoxide dismutase multigene family:
a comparison of the Cu,Zn-SOD (SODl) Mn-SOD (S0D2), and EC-SOD (S0D3) gene
structures evolution and expression. // Free Radic. Biol. Med. - 2002. - Vol.33. - P.337-
349.
464. Zelzer E., Levy Y., Kahana C, Shilo B. Z., Rubinstein M., Cohen B. Insu-
lin induces transcription of target genes through the hypoxia-inducible factor HIF-la
/ARNT. // EMBO J. - 1998. - Vol. 17. - P.5085-5094.
465. Zhang Z., Naudhton D., Winyard P.G., Benjamin N., Blake D.R., Symons
M.C.R. Generation of nitric oxide by a nitrite reductase activity of xanthine oxidase: a
potential pathway for nitric oxide formation in the absence of nitric oxide synthase activ-
ity. // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1998. - Vol.249. - V.161-112.
466. Zhong H., Chiles K., Feldser D., Laughner E., Hanrahan C, Georgescu
M.M., Simons J.W., Semenza G.L. Modulation of hypoxia-inducible factor l a expres-
sion by the epidermal growth factor/phosphatidylinositol 3-kinase/PTEN/AKT/FRAP
pathway in human prostate cancer cells: implications for tumor angiogenesis and thera-
peutics. // Cancer. Res. - 2000. - Vol.60. - P. 1541 -1545.
467. Zhu H., Jackson Т., Bunn H.F. Detecting and responding to hypoxia. //
Nephrol. Dial. Transplant. - 2002. - Vol.17, № 1. - P.3-7.
468. Zhu H., Qiu H., Yoon H.W., Huang S., Bunn H.F. Identification of a cyto-
chrome b-type NAD(P)H oxidoreductase ubiquitously expressed in human cells. // Proc.
Natl. Acad. Sc. USA. - 1999. - Vol.96. - P.14742-14747.
469. Ziegelhoffer A., Prochazka J., Polouch V., Ostadal В., Dzurba A., Vrbjar
N. Increased affinity to substrate in sarcolemmal ATPases fron hearts acclimatized to
high altitude hypoxia. // Physiol. Bohemoslov. - 1987. - Vol.36, Я25. - P.403-415.
248
470. Zolotatjova N., Ho C, Mellgren R.L., Askari A., Huang W.H. Different
sensitivities of native and oxidized forms of Na"^/K'*'-ATPase to intracellular proteinases.
// Biochim. Biophys. Acta. - 1994. - Vol.1192, №1. - P.125-131.
471. Zou A.P., Yang Z.Z., Li P.L., Cowley A.W. Jr. Oxygendependent expres-
sion of hypoxia-inducible factor-la in renal medullary cells of rats. // Physiol. Genom-
ics.-2001.-Vol.6.-P.159-168.
472. Zulueta J.J., Yu F.-S., Hertig LA. Release of hydrogen peroxide in response
to hypoxia-reoxygenation: Role of an NAD(P)h oxidase-like enzyme in endothelial cell
plasma membrane. // Amer. J. Respir. Cell Mol Biol. - 1995. - Vol.12. - P.41-49.
473. Zweier J.L., Wang P., Samouilov A., Kuppusamy P. Enzyme-independent
formation of nitric oxide in biological tissues. // Nature Med. - 1995. - Vol.1. - P.804-
807.
249
Благодарность