INFORME DE LABORATORIO CLOSTRIDIUM

PRESENTADO POR:

CONTRERAS VILLALOBOS SONIA YASMIN COLONIA SANCHEZ NATALIA ANDREA GARAY PEA JORGE ALBERTO SUAREZ SOSA LIZETH ELIANA

PRESENTADO A: ALEXANDRA CUCAITA

CENTRO NACIONAL DE HOTELERIA TURISMO Y ALIMENTOS SENA TECNOLOGIA EN CONTROL DE CALIDAD DE ALIMENTOS 365267 JUNIO 2013 BOGOTA D.C

CONTENIDO

INTRODUCCIN 1. OBJETIVOS. 1.1 OBJETIVOS GENERALES. 1.2 OBJETIVOS ESPECFICOS. 2. MATERIALES Y EQUIPOS. 3. PROCEDIMIENTOS. 4. RESULTADOS. 5. DISCUSIONES. 6. CONCLUSIONES BIBLIOGRAFA.

INTRODUCCIN

Los Clostridium son organismos que se observan solos, en parejas o a lo mximo en cadenas cortas. El gnero Clostridium est ampliamente distribuido en la naturaleza, principalmente en el suelo y en el tracto intestinal de muchas especies animales incluido el hombre y puede causar infecciones de origen exgeno y de origen endgeno . Poseen antgenos somticos y flagelares que permite dividirlas en tipos y subtipos Pueden afectar a cualquier rgano o sistema, pero sobre todo a aquellos cercanos a las superficies mucosas, donde son parte abundante de la biota comensal. Asimismo, se trata frecuentemente de infecciones mixtas en donde estos microorganismos se encuentran junto a otras bacterias anaerobias. El gnero Clostridium comprende bacilos Gram positivos, la mayora mviles, anaerobios obligados, formadores de en-dosporas. C. botulinum y otras especies, son productores de distintos serotipos de toxina botulnica, poderosa neurotoxina causante del botulismo que afecta al hombre y algunos animales. Fue reconocido como entidad clnica en 1793 en Alemania y recibi ese nombre en 1870, trmino derivado de la palabra latina Abotulus que significa embutido en general. Las neurotoxinas botulnicas son protenas extremadamente txicas (1). Se comportan como Saprofitos, pero son Patgenos Oportunistas Epidemiologa: Los microorganismos son ubicuos en el suelo, el agua y las aguas residuales y forman parte de la flora microbiana normal del aparato digestivo de los animales y el ser humano. Patogenia: La importante capacidad patgena de los clostridinum se puede atribuir a las siguientes. Caractersticas: 1-Capacidad para sobrevivir a condiciones ambientales adversas mediante la formacin de esporas., 2-El rpido crecimiento en un ambiente enriquecido y privado de oxgeno. 3-Sntesis de numerosas toxinas, enterotoxinas y neurotoxinas.

1. OBJETIVOS

1.1 OBJETIVOS GENERALES. Conocer el mtodo de anlisis para determinar la contaminacin de un producto alimentacion por clostridium perfringens.

1.2 OBJETIVOS ESPECFICOS. Realizar el anlisis de clostridium perfringens a una salchicha la cual no estaba debidamente rotulada. Aprender los mtodos relacionados para la determinacin con el fin de ser aplicados en los diferentes productos a elaborar o ya elaborados en nuestros talleres. Conocer e identificar las caractersticas tpicas de estos clostridium a realizar el recuento.

2. MATERIALES Y EQUIPOS

Medios de Cultivo: Agar Sulfito-Polimixina-Sulfadiazina (SPS) Diluyente: Agua peptonada 0.1 % Muestre ( Embutidos, carne de res, cerdo y aves, y alimentos sometido a esterilizacin y escaldado) Bao Maria Jarra de anaerobiosis Placa de Petri estriles Tubos de ensayo con tapa rosca Pipetas Estriles de 1ml Frascos estriles Gradillas Mechero Bunsen Contador de colonias. Tubos de ensayo con tapa rosca Incubadora a 37C.

Medios de Cultivo y Reactivo Agar Sulfito-Polimixina-Sulfadiazina (SPS) Agar Triptosa Sulfito Cicloserina (TSC) en frascos Schott. Agar Nitrato Movilidad en tubos 16 x 160 t/ rosca. Medio Lactosa Gelatina en tubos 16 x 160 t/ rosca. Caldo Tioglicolato en tubos 18 x 180. Agua peptonada 0,1 %. Solucin de cicloserina al 0,5 %. Emulsin de Yema de Huevo al 50 %. Solucin de naftol 0,5 % en cido actico 5 M. Solucin cido Sulfanlico 0,4 % en cido actico 2,6 M. Indicador de Anaerobiosis Oxoid, Merck o Biomerieux. Reactivos para producir anaerobiosis Oxoid (Gaspack). Slica gel con indicador u otro desecante

3. PROCEDIMIENTOS Recepcin de la muestra en el laboratorio Recibir la dilucin 10-1 de la muestra procesada en el laboratorio de Recepcin de muestras. Anotar en el cuaderno de inscripcin de muestras del laboratorio, la clave, N de muestra, fecha y naturaleza de la muestra. En el caso de muestras de brotes de ETA, anotar la informacin adicional que se disponga, si la hay. Mantener la dilucin de la muestra refrigerada mientras se prepara el material, si no est dispuesto para comenzar la siembra. El perodo transcurrido entre la preparacin del homogeneizado de la muestra y la siembra no debe superar los 20 minutos.

Siembra de la muestra Fundir el medio SPS y mantener a 47 C. Preparar las diluciones seriadas 10-2 y 10-3 o ms si fuese necesario a partir de la Dilucin 10-1 de la muestra preparada cuidando de airear lo menos posible la muestra. Para muestra de alimentos. Tomar 10 g de La muestra. Luego, ponemos todo eso en un frasco estril y le agregamos el diluyente (agua peptonada) la cantidad suficiente. Homogenizamos. Luego realizamos las diluciones respetivas (10-1, 10-2 , 10-3). De las diluciones realizadas sembramos por mtodo de siembra en Profundidad, una placa por cada dilucin. Luego enviamos a incubar, en anaerobiosis, a 37 C por 48 h. la positividad de las colonias se ver por su caracterstico color negro. Preparacin de la jarra anaerobiosis Comprobar que la slicagel est seca, por observacin de color, al hidratarse vira de azul a rosado. Comprobar viraje del color del indicador.

 Una vez comprobado el color del indicador y del slica gel, preparar la jarra de Anaerobiosis, colocando en su interior estos dos reactivos cubriendo el slica-gel con papel filtro y adherir el indicador a las paredes de la jarra. Colocar las placas sin invertir dentro de jarras de anaerobiosis. Colocar un sobre de Anaerogen, recin sacado del sobre protector en un costado de la jarra y utilizar segn instrucciones del fabricante. Tapar la jarra cuidadosamente, debe quedar hermtica. Incubacin Incubar a 37 C por 24 48 horas. En caso de no haber desarrollo (presencia de colonias negras) o son muy pequeas, incubar por 24 horas ms en anaerobiosis. Una vez concluido el perodo de incubacin, sacar las jarras de la estufa. Dejar un rato a temperatura ambiente. Comprobar que el indicador de anaerobiosis est virado de incoloro a rosado. Abrir la jarra y sacar cuidadosamente las placas. Ordenarlas de acuerdo al nmero de la muestra y a las diluciones realizadas. Lectura Recuento presuntivo de clulas viables de C. perfringens. Seleccionar las placas que contienen entre 20 y 200 colonias. Las colonias de C. perfringens en medio yema de huevo son negras con 2 a 4 mm de zona blanca opaca alrededor de la colonia como resultado de la actividad de la lecitinasa. Registrar las lecturas hoja de registro de anlisis del laboratorio RG-712.00-080. Calcular el recuento presuntivo aplicando la frmula que aparece a continuacin: Recuento presuntivo = Lectura x factor de dilucin En caso de no tener colonias aisladas, tomar con asa una porcin del cultivo inocular en Caldo tioglicolato previamente calentado en agua a ebullicin por 20 minutos y enfriado rpidamente en agua fra antes de inocular, para ello despus de cumplido el tiempo de ebullicin para eliminar el oxgeno disuelto, trasladar rpidamente los tubos y enfriar en agua de grifo. Asegurar cerrar las tapas de los tubos. Incubar durante 24 horas a 37 C en anaerobiosis. Una vez transcurrido el tiempo, observar que haya suficiente desarrollo. Sembrar por agotamiento en superficie una gota de cultivo utilizando el mismo medio que para el recuento, aplicando una segunda capa. Incubar durante 24 horas a 37 C en anaerobiosis.

 Registrar este procedimiento si fue realizado para aislar colonias e indicar la dilucin de las placas utilizadas. Clculo y Expresin de resultados Anotar todos los resultados en el registro. Calcular el nmero de unidades formadoras de colonias por g de muestra. El recuento confirmado se obtiene mediante la siguiente frmula: Recuento Confirmado = Promedio de Rto Presuntivo * N colonias confirmadas * dilucin N colonias sometidas a confirmacin

4. RESULTADOS.

5. DISCUSIONES

Para la elaboracin de anlisis de clostridium se toma una muestra de salchicha de la cual no se encuentra determinada la marca y fecha de vencimiento. Sin la especificacin de estos datos no se pueden determinar una informacin veraz y especfica del producto a analizar. En la elaboracin del anlisis se presentan inconvenientes con el enfriamiento del agar ya que este se realiza por medio de choque trmico para ser guardado en la caja la cual ya se encontraba cerrada, al ser las muestras finales en faltar por introducir se realiza un nuevo sellamiento en el cual no se puede determinar si pudiese ocasionar resultados diferente en el anlisis de clostridium. A los dos das siguientes se observan los cultivos los cuales no demuestran ningn crecimiento de clostridium, pero el tubo nmero 10-3 se encuentra con el agar roto lo que pudo causar dao al cultivo. Al no haber presencia de colonias negras caractersticas de Clostridium se dej en incubacin por ms tiempo para que proliferaron Clostridium. En el da 7 se analiza los tubos y se encuentra lo siguiente: En el tubo 10-1 se encuentran 8 colonias de color blanco redondeadas, y una de color grisceo pero no se encuentra colonias de clostridium lo cual se determina en presencia negativa de clostridium la muestra. En los tubos 10-2,10-3, no se encuentra presencia de colonias pero s se observ el agar roto lo cual nos permite determinar que tuvimos fallas durante la incubacin de estas muestras ya que se cometieron errores al guardarlos apresuradamente. La caja ya se encontraba cerrada con el procedimiento del alka seltzer y esperma para volver a abrir en la caja se deba repetir el procedimiento para sellar nuevamente. Esto pudo ocasionar la rotura del agar, Tambin pudo ser que el choque trmico no se haya realizado en el tiempo conveniente o de la manera ms cuidadosa para que este no sufriera roturas.

6. CONCLUSIONES

Se conocieron y desarrollaron los mtodos de aislamiento del microorganismo clostridium perfringens analizando la muestra de una salchicha desconocida sin rotulacin. Se analiz que esta no se encontraba contaminada lo cual es un producto con determinacin negativa en clostridium. Adquirimos el conocimiento de este anlisis para la determinacin de este microorganismo lo cual nos permite tener una mayor aplicacin en nuestro mbito laboral en la elaboracin de los diferentes productos los cuales puedan ser afectados por estos microorganismos asegurando la inocuidad de los alimentos. No se pudo determinar las caractersticas especficas del gnero clostridium debido a que su presencia fue negativa, para el alimento analizado.

BIBLIOGRAFA

http://www.buenastareas.com/ensayos/Resumen-Clostridium/3804031.htm http://www.comersinriesgos.com/?p=29

http://es.scribd.com/doc/6674027/Microbiologia-de-Alimentos-Practica-n-14Aislamientoe-identificacionde-Clostridium-perfringens http://es.scribd.com/doc/6672534/Microbiologia-de-Alimentos-Practica-n-13Aislamientoe-identificacion-de-Clostridium-botulinum-productora-de-toxina http://espanol.foodsafety.gov/poisoning/causes/bacteriaviruses/cperfringens/ http://www.ispch.cl/lab_amb/doc/microbiologia_alimentos/PRT-034.pdf