Hormoni 2

Mecanism de aciune H hidrosolubili

receptori membranari proteine G

6.03.2013

sisteme generatoare de mesageri secunzi

Hormonii tiroidieni

 R membranari pot fi mprii n patru clase:

-R cuplai cu tirozin kinaze citosolice; -R cu activitate enzimatic intrinsec; -R cu rol de canale ionice; -R care se leag de proteine G.

R care formeaz canale pentru diferii ioni

Loc de legare pentru ligand Membran Citosol

Ligand

Ion

Trecerea ionului prin canal modific potenialul electric de-a lungul membranei.
Ex, la jonciunea nerv-muchi, acetil colina se leag la un R specific ce permite Na+ s migreze n interior i K+ s migreze n exteriorul celulei int.

Receptori cuplai cu tirozin kinaze citosolice

Acioneaz astfel: citokinele, interferonii, hormonul de cretere, prolactina Receptori nu au activitate catalitic intrinsec

Ligand

P ADP ATP P OH ATP P

P P ADP

Protein-tirozin kinaze (inactive) Protein substrat

Protein substrat fosforilat

Receptori cuplai cu tirozin kinaze citosolice.

R cu activitate enzimatic intrinsec localizat n domeniul citosolic

Exemple R specific factorului atrial natriuretic catalizeaz transformarea GTP la GMPc.

R care acioneaz ca protein fosfataze activnd alte proteine:

Protein inactiv-forilat la resturi de Tyr Protein-defosfo activ

Ligand Exterior Citosol GTP 3`,5`-GMPc PPa

R cu activitate guanilat ciclazic genereaz GMPc la legarea factorului atrial

natriuretic.

 4 clase de receptori cu activitate tirozin kinazic intrinsec

Agonitii n acest caz sunt: insulina i factorii de cretere

1)

2)

3)

4)

Domeniu extracelular Membran Domeniu intracelular

Domeniu tirozin C kinazic

Receptori tirozin kinazici. Tipul 1 (pentru EGF) i tipul 2 (pentru insulin), conin domenii extracelulare bogate n cistein. Tipurile 3 (pentru PDGF) i 4 (pentru FGF) conin domenii extracelulare asemntoare anticorpilor, iar domeniile kinazice nu sunt continue. In receptorul de tip 2 (pentru insulin), fiecare lan este legat prin puni disulfurice la lanul i la cellalt lan . Capetele N-terminale ale receptorilor, sunt extracelulare.

NH3+ -helix transmembranar Extracelular

Intracelular

OOC

 Complexul HR
transmite semnale n membran
unui sistem efector
prin intermediul unui sistem de cuplare, reprezentat de proteinele G.

Mesager prim Receptor Protein G Sistem efector

Mesager secund (AMPc, GMPc, IP3, DAG, CA2+) Rspuns biologic

Sisteme de cuplare
Proteinele G -se afl pe partea citosolic a membranei, asociate cu complexul HR
-leag nucleotide cu guanin: GDP sau GTP. -sunt proteine oligomere, formate din trei subuniti proteice ,,g cu structuri diferite. leag nucleotidele GTP sau GDP i confer identitatea proteinei G. , inhib activitatea subunitii .

Tipuri de proteine G:
Gs stimuleaz adenilat ciclaza;

Gi inhib adenilat ciclaza;

Gq activeaz fosfolipaza C

Gt sau transducina activeaz GMPcfosfodiesteraza dup

stimularea rodopsinei, ca urmare a absorbiei unui foton de ctre retinal

H GTP (mediu)

R GDP (mediu)

HR

GDP. g GTP (forma inactiv) (forma activ) g GDP (inactiv) H2O toxina holeric H3PO4

sistemul efector

Mecanismul de actiune al proteinelor G

nlocuirea GDP cu GTP din mediu
formarea subunitii - GTP activ inactivarea subunitii -GTP, ca urmare a activitii enzimatice GTP-hidrolazice proprii toxina holeric (enzim produs de bacteria Vibrio

cholerae) inactiveaz GTP-aza intrinsec subunitii s

GTP, proteina G rmnnd n forma activ

Sisteme efectoare generatoare de mesageri secunzi

sistemul adenilat ciclazei; sistemul fosfolipazei C; sistemul guanilat ciclazei; sistemul tirozin kinazei.

Sistemul adenilat ciclazei

conine: -receptori hormonali -proteine Gs, Gi -adenilat ciclaza -fosfodiesteraza

 H care activeaz AC sunt, prin proteine Gs:

Glucagonul
Adrenalina prin receptori -adrenergici 1 i 2

ACTH (adrenocorticotrop)
Parathormonul, Calcitonina MSH, LH, TSH, somatostatina

H care inhib activitatea AC, prin proteine Gi:

adrenalina prin receptori 2

Adenilat ciclaza
enzim membranar, activat de Gs i inhibat de Gi catalizeaz formarea AMPc din ATP

NH2 N O O
-

HR

NH2 N N O O H 2C O N N

O O P O
-

O O P O
-

N N

P O
-

O H 2C

N O

Adenilatciclaza

HO

HO

P O
-

ATP

OH

AMPc

Fosfodiesteraza
Se afl n citosol i catalizeaz transformarea AMPc n AMP. Este activat de: Ca2+, insulin, prostaglandine, i este inhibat de

metilxantine (cofein, teofilin), tiroidieni, steroizi.

NH2 N N O O P O
-

Metilxantine
N O N O

NH2 N N

N N

H 2C

Fosfodiesteraza

P O
-

O H 2C

OH

AMPc

Insulin Ca2+-Calmodulin

HO

HO

5`-AMP

Mesagerii secunzi
poart informaia transmis de primul mesager (hormonul):

-modific activitatea unor proteine intracelulare

-intervin n contracie sau n asigurarea permeabilitii membranare.

 este un nucleotid ciclic, mesager secund pentru unii hormoni. concentraia intracelular a AMPc depinde de: AC i fosfodiesteraz Activitatea reglatoare a AMPc: -la procariote, controleaz exprimarea unor gene prin legarea cu o protein reglatoare;

AMPc

-la eucariote, activeaz protein-kinaze specifice, ex. protein

kinaza A.

Protein kinaze AMPc dependente

Protein kinaza-AMPc dependent este un tetramer : -2 subuniti reglatoare (R); -2 subuniti catalitice (C).
Tetramerul R2C2 este inactiv.
subunitile R din tetramerul inactiv, leag cte dou molecule de AMPc

Protein kinaza activ, activeaz prin fosforilare o protein

celular specific.

Cine confera specificitate raspunsului hormonal ?

 Particularitatea rspunsului celular depinde de:

natura proteinelor substrat pentru protein kinaze i de modul n care fosforilarea afecteaz funcia proteinei.

 Cum se stinge mesajul hormonal ?

Fosfoproteinfosfatazele
aduc proteinele fosforilate la starea anterioar
prezint multiple izoforme

activitatea lor este reglat hormonal

intervin n:
procesele de diviziune celular
transcrierea i traducerea genelor permeabilitatea membranar

 se face n cascad

Amplificarea semnalului hormonal

un singur complex H-R activeaz peste 100 de molecule Gs

Epinefrin Amplificare Adenilat ciclaz Amplificare AMPc 10-6 M kinaz Amplificare Enzim activat Amplificare Produs 10 -10 M

STINGEREA MESAJULUI HORMONAL N SISTEMUL ADENILAT CICLAZEI au loc astfel: 1) PKA fosforileaz R i i inactiveaz 2) Fosfodiesteraza scade conc. intracelular de AMPc 3) Fosfoprotein fosfatazele defosforileaz Ser i Thr din proteine

Sistemul fosfolipazei C
receptori hormonali, proteine Gq, fosfolipaza C, protein kinaza C

Fosfolipaza C
enzim membranar
catalizeaz hidroliza fosfatidil inozitol 4,5-bisfosfatului (PIP2)

Produii reaciei de hidroliz sunt: inozitol 1,4,5-trisfosfatul (IP3), i diacilglicerolul (DAG).

H2 C HC H2 C

O O O

CO CO O
P

R1 R2

H2 C

O O OH

CO CO

R1 R2

Fosfolipaza C
HC OP O3 H 2 H2 C
OH

OP O3 H 2

P O3 H 2 O
OH

OH

OH

O
OH

OH

OP O3 H 2

OH

OP O3 H 2

Diacilglicerol (DAG)

Inozitol 1,4, 5-trisfosfat (IP3)

Fosfatidilinozitol 4,5-bisfosfat (PIP2)

IP3
determin eliberarea Ca2+ din reticulul endoplasmic n citosol Ca2+ este o entitate chimic permanent

concentraia Ca2+ poate fi modulat numai prin deplasri ntre diverse

compartimente Ca2+ citosolic pentru o celul de mamifer este de 10-7-10-6 M Ca2+ extracelular este 10-3 M

 Concentraia mic a Ca2+ n citosol este meninut prin: pompe de Ca2+ permeabilitatea natural foarte mic a membranelor pentru cationi mecanisme care depoziteaz Ca2+ n mitocondrii i reticul endoplasmic (reticul sarcoplasmic n muchi)

 Ca2+ acioneaz ca mesager secund mpreun cu:

AMPc GMPc

DAG sau
IP3
sau independent de acetia

Rolurile reglatoare ale Ca2+ sunt mediate de proteine specifice de legare a cationului

Calmodulina

protein format din 148 aa

prezent n toate celulele eucariote n concentraie mare nu este limitant pentru un proces dat poate fixa 4 ioni de Ca2+/ molecul

 complexul Ca2+- calmodulin:

-regleaz contracia muchilor netezi
-activeaz pompa de Ca2+ din membrana plasmic
-regleaz activitatea unor protein kinaze modulatori ai altor enzime -interacioneaz cu celelalte sisteme mesageriale prin reglarea activitii AC, GC, fosfodiesterazelor.

DAG

molecul liposolubil, activeaz protein kinaza C.

DAG este inactivat prin hidroliz.

 Hormonii care au ca mesager secund IP3, Ca2+, sau DAG sunt: -epinefrina prin receptori 1-adrenergici -gastrina -oxitocina -colecistokinina -hormonul eliberator al gonadotropinelor.

Protein kinaza C
enzim membranar cu multe izoforme unele sunt activate de DAG altele necesit pe lng DAG i Ca2+

are specificitate pentru resturile de serin i treonin.

Sistemul guanilat ciclazei

guanilat ciclaza GMPc mesager secund protein kinaze GMPc dependente.

GMPc
GMPc antagonizeaz efectele AMPc.

GMPc este mediatorul semnalelor luminoase n celulele retiniene cu

conuri i bastonae.
+h GMPc Deschide canale pentru Na+ GMP Inchide canale pentru Na+

Rodopsina (opsin + 11-cis retinal) (opsina - protein cu 7 segmente transmembranare)

T-GTP
Transducin

PDE

hiperpolarizarea membranei cu perceperea senzaiei de lumin.

All-trans-retinal Opsina impuls nervos

11-cis-retinal

Rodopsina

Guanilat ciclaza
prezint cel puin 2 izoforme:

membranar i una
citoplasmatic.

 Guanilat ciclaza membranar :

-funcia de receptor al semnalului extern -ct i funcia de sistem efector care genereaz (GMPc).

Factorul atrial natriuretic (natriopeptin) - 28 aa la om

-secretat de celulele cardiace atriale -acioneaz: renal zona glomerular a suprarenalelor prin: crete volumul urinar, crete eliminarea de Na, scade secrea de renin i aldosteron.

Guanilat ciclaza citoplasmatic

sistem efector pentru oxidul de azot

NO.(endothelium-derived relaxing factor, EDRF)

. NO
L-Arginin NO-sintaz L-Citrulin

NOS endotelial - EDRF NOS inductibil macrofage sau hepatocite -stimulare imunologic sau reacii inflamatorii NOS neuronal

Nitric oxid sintaza (NOS) are structur asemntoare cu citocromul P-450.

NADPH eFAD eFMN eCalmodulin
BH4 Reductaz L-Arginin

HEM
L-Citrulin + NO. Oxigenaz

Pentru elucidarea rolului acestei enzime n strile normale i patologice, s-a primit premiul Nobel n 1998. Au fost identificate 3 izoenzime ale NOS: NOS-I (de origine neuronal), NOS-II (din macrofage sau inductibil), NOS-III (din endoteliul vascular).

NO acioneaz paracrin asupra multor celule: -regleaz presiunea sanguin, -mediator n citotoxicitate i n neurotransmisie. -n celulele int
.

GTP
Guanilat ciclaza

NO

GMPc

Mediaz relaxarea muschilor netezi

-Hemoglobina are un rol important n transportul oxidului de azot.

O2
+e-

O2 (oxigen singlet)
+ H+

NO. ONOOanion peroxinitrit

. O
2

anion superoxid +e2 O2

HO2 radicalul hidroperoxil

+ H+

+ H+

HO2

anion peroxid NO2.... OH stare de tranzitie NO3 anion nitrat

H2 O 2 peroxid de hidrogen
+e-

.NO2 + HO.
radicalul radicalul hidroxil nitro

HO- + HO. anion radical hidroxil hidroxil + e- + 2H+ 2H2O

Hormonii tiroidieni
Hormonii tiroidieni sunt derivai iodurai ai compusului ipotetic, tironin, derivat de la tirozin.
3` 2` 3 1` 5` 6` 2 1 5 6

I
CH2 CH NH2 COOH HO O

I
CH2 CH NH2 COOH

HO

4`

Tironina I
HO O

I I 3, 5, 3`, 5` - Tetraiodotironin (Tiroxin) T4 I I

O CH2 CH NH2 COOH

I
CH2 CH NH2 COOH HO

3, 5, 3` - Triiodotironin (T3)

3, 3`, 5` - Triiodotironina (revers T3) (rT3)

Biosinteza

Unde are loc sinteza ? n celulele tiroidiene i la interfaa dintre celulele tiroidiene i coloid
Ce este coloidul ?
o soluie omogen de tireoglobulin

 Ce ete tireoglobulina ?
Glicoprotein (Proteina + resturi glucidice):
8-10 % glucide i peste

100 resturi tirozil pe molecul.

 Etapele biosintezei:
Captarea iodului n tiroid

-prin difuzie simpl

-prin transport activ, dependent de ATP (pompa de iod),

Iodul din plasm, (I-) poate fi:

-exogen, din apa potabil, alimente, sare iodat;

-endogen, rezultat din catabolismul hormonilor tiroidieni

 Oxidarea I- I+ (agent electrofil)

de ctre H2O2 format intracelular sub aciunea NADPH oxidazei (localizat pe suprafaa apical a celulelor tiroidiene)
tireoperoxidaz

NADPH + H + O2

NADP + + H2O2 2 I+ + 2 H2O

2 I- + H2O2 + 2 H+

 Iodurarea resturilor Tyr din tireoglobulin

glicoprotein cu:
8-10 % glucide i peste 100 resturi tirozil pe molecul.

Tireoglobulina este iodurat (de tireoperoxidaz) monoiodotirozin (MIT) i diiodotirozin (DIT).

NH CH H2C CO
OH

NH CH CO H2C

I
OH

(MIT)

+ n I+
NH CH CO Tireoglobulin H2C
OH

NH CH CO H2C

I
OH

(DIT)

Tireoglobulin iodurat

 Cuplarea

MIT cu DIT ;

DIT cu DIT
cu formarea de T3 i T4 ca pri componente ale
tireoglobulinei

NH CH CO H2C

I
OH

NH CH CO H3C

(MIT)

NH CH CO H2C

I
OH

NH CH H2C CO

I
O

I
OH

(DIT)

T3

NH CH CO H2C

I
OH

NH CH CO H3C

I (DIT) I H2C
OH

NH CH CO

NH CH CO H2C

I
O

I
OH

I (DIT)

T4

 Endocitoza tireoglobulinei din coloid n celule, eliberarea de T3 i T4 prin hidroliza tireoglobulinei i secreia acestora n snge.

Eliberare: T3 ,T4 , MIT, DIT i diveri aminoacizi care intr n fondul metabolic celular.

 Tiroida secret n principal T4 i

mai puin T3.

T3 din snge provine i din deiodurarea periferic a T4. T3 este de cteva ori mai activ biologic dect T4.

 Transportul HT:
TBG (thyroxine binding globulin), cu afinitate mare pentru T4. Sinteza acestei proteine este stimulat de estrogeni i micorat de androgeni i glucocorticoizi. TBPA (thyroxine-binding prealbumin), leag numai T4 Serumalbumina

Metabolismul hormonilor tiroidieni

T1/2:
6-7 zile pentru T4 1,5 zile pentru T3

Deiodurarea n esuturile periferice: ficat, rinichi, muchi. Prin monodeiodurare:

- 5-deioduraza transform 30-40% din T4 T3 biologic activ

- 5`-deioduraza transform 40% din T4 rT3 biologic inactiv -T3 i rT3 sunt deiodurai la diiodotironine i monoiodotironine inactive.

I
HO O

I
CH2 CH NH2 COOH

3, 5, 3`, 5` - Tetraiodotironin (Tiroxin) T4

I
HO O

I
CH2 CH NH2 COOH HO

I
O

I
CH2 CH NH2 COOH

I 3, 5, 3` - Triiodotironin (T3)

3, 3`, 5` - Triiodotironina (revers T3) (rT3)

 Conjugarea cu acidul glucuronic sau sulfuric i eliminarea prin bil a produilor de conjugare Transaminare i decarboxilare oxidativ a lui T4 i T3 cu formarea cataboliilor solubili, excretabili prin urin.

Roluri fiziologice
La concentraii normale sau mici manifest efecte anabolizante. stimuleaz sinteza hormonului de cretere. controleaz metabolismul oxidativ. stimuleaz oxigenarea esuturilor. crete sinteza Na+/K+-ATP azei (pomp consumatoare de ATP), prin aciune la nivel nuclear. Au roluri eseniale n dezvoltarea fetal i postnatal.

 La concentraii mari manifest efecte catabolizante. -crete viteza metabolismului bazal; -micoreaz rezervele energetice glucidice i lipidice; -catabolismul proteic se intensific. -nivelul colesterolului scade n hipertiroidism.

Reglarea secreiei Inhibiia prin feed-back pe axul hipotalamo

hipofizar a eliberrii HT
particip numai T3, prezent ca atare n snge sau
format prin deiodurarea T4.

Stress si alte semnale

Sistemul nervos central Hipotalamus Hormon de eliberare Hipofiza anterioar Tropine hipofizare Glanda hormonal tint Hormoni

 Somatostatina (antihormonul de cretere) inhib

secreia de TSH.
secreia de somatostatin este stimulat de concentraiile mari de T3.

Reglarea prin transformarea T4 n T3 activ biologic i rT3 inactiv biologic.

conversia T4 > rT3 este favorizat n inaniie pentru a diminua

arderile i consumul de materiale energogene.

Cu privire la sinteza hormonilor tiroidieni, sunt corecte urmtoarele afirmaii: A.Iodurarea se realizeaz le nivelul tirozinei libere B.Triiodotironina este precursor al tiroxinei C.Se afl sub controlul unui sistem de feed-back pozitiv la care particip TSH D.Revers T3 se obtine din T4 sub aciunea unei 5deioduraze E.Apa oxigenat necesar oxidrii I- la I+ este furnizat de NADPH oxidaz

Care dintre compuii de mai jos sunt eliberai n timpul producerii normale de hormoni tiroidieni? Tiroxina Tireoglobulina Triiodotironina Ioni de iod Diiodotironina