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Ao de la inversin para el desarrollo rural y la seguridad alimentaria UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERIA E.A.P.INGENIERIA AGRONOMA PRACTICA N 002 FOTOCOLORIMETRIA

ASIGNATURA: Bioqumica

DOCENTE: Eterio Alva Muoz

INTEGRANTE: De La Cruz Castro Luis Rhusbel

Nvo. Chimbote 03 de junio del 2013

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1. INTRODUCCIN:

Una de las mediciones ms frecuentes en bioqumica es la concentracin de una sustancia y para su determinacin se puede recurrir a dos mtodos factor de calibracin o curva de calibracin, esta ltima no siempre es correcta; es decir sus puntos de interseccin (x,y)=(concentracin, absorbancia), no se encuentran clineales , lo cual lleva a elaborar una curva irreal no representativa de lo esperado. La curva de calibracin relacin, por lo que se puede tomar como variable independiente las concentraciones (eje de las x )y como variable dependiente las absorbancias (eje de las y ),siendo posible determinar la ecuacin de la curva que se adapta mejor a los datos Y=a +x+E a=verdadero valor de la interseccin de la curva = verdadero valor de la pendiente. X,y= X es una variable pre establecido o no aleatoria , se utiliza para hacer una prediccin de Y . E=representa una variabilidad en toda medicin causada por material de vidrio sucio, variacin de temperatura, fluctuaciones elctrica, variabilidad biolgica, no linealidad, interferencias qumicas, etc. Este valor no se toma en cuenta en la ecuacin final por ser un valor constante. Una de las consideraciones que se toma en cuenta una anlisis de regresin lineal, es para cualquier valor de X exactamente conocido, existen celdas, distribuciones normales de valores de Y, quedando la ecuacin reducida a Y = a+bx a y b=son coeficientes de regresin y remplazan a a y b respectivamente Y= denota el valor predecible de la media de Y para un valor dado de X . Fianlmente lo que interesa es determinar los coeficientes de regresin, aplicando el mtodo de los minimos cuadrados, luego hallar el valor de las nuevas lecturas aplicando . Y=a+bx

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2.

OBJETIVOS: Conocer los principios bsicos de colorimetra. Hallar Determinar concentraciones el espectro de de absorcin muestras de un de compuesto protena. determinado.

Realizar curva de calibracin a partir de una muestra de albumina.

3. EQUIPOS , MATERIALES Y MTODOS: 3.1. EQUIPO: Espectrofotmetro 3.2. MATERIALES Y REACTIVO:

Soluciones a ensayar :sulfato de cobre, dicromato de potasio ,rojo de metilo Tubos de ensayo Pipetas de 1 a 10 ml. 4. RESULTADOS:

PTACTICA N 01 DE Bioqumica RESULTADOS DEL ESPECTOFOTOMETRO TUBO DE ENSAYO 1 0.123 2 0.076 3 0.291 4 0.13 5 0.374 6 0.68 7 -0.078

ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA

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PTACTICA N 01 DE Bioqumica RESULTADOS DEL ESPECTOFOTOMETRO Pergamanato de potasio 0,015% TUBO DE ENSAYO 1 -0.010 ABSORVANCIA 2 -0.005 ABSORVANCIA 3 -0.003 ABSORVANCIA 4 -0.008 ABSORVANCIA 5 -0.026 ABSORVANCIA 6 -0.031 ABSORVANCIA 7 0.007 ABSORVANCIA

Fig N 01: Se hecho a cada tubo de ensayo agua destilada respectivamente.

Fig. N02: Se agreg a cada tubo de ensayo permanganato de sodio respectivamente.

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Fig.N03: Se colocaron cada tubo de ensayo en el espectrofotmetro y se obtuvo la absorbancia de cada uno.

CUESTIONARIO:

a) Qu consideraciones debern tomarse en cuenta para obtener una curva de calibracin? La curva estndar inicial debe incluir un blanco reactivo y, por lo menos, ocho estndares que cubran toda la escala de concentraciones que se usaran en los anlisis rutinarios del laboratorio y que permite medir el mtodo analtico. b) Cul de los mtodos :factor de calibracin o curva de calibracin es ms exacto .Explique. El ms exacto es el mtodo de El factor de calibracin.. c) Existe otro mtodo de ajuste de curvas? Tambin se pueden usar en ciertos casos otros tipos de curvas, como secciones cnicas (arcos circulares, elpticos, parablicos e hiperblicos)o funciones trigonomtricas(como el seno y el coseno). Por ejemplo, las trayectorias de objetos bajo la influencia de la gravedad siguen una curva parablica, si se ignora la resistencia del aire. Por tanto, ajustar los puntos de una trayectoria a una curva parablica tendra sentido. Las mareas siguen patrones sinusoides, por tanto se podra ajustar datos provenientes de mareas a una onda sinusoidal; o la suma de dos sinusoides de periodo diferente, si se considera el efecto conjunto de la luna y el sol.

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d) Qu desventajas tiene el mtodo de los mnimos cuadrados? Es necesario contar con un importante grupo de datos para obtener resultados confiables. Los resultados de la regresin son sensibles a la forma funcional si no se interpreta correctamente el termino de error, lo que puede generar conclusiones muy variadas, dependiendo dela forma en que se haya organizado inicialmente la regresin. e) Aplicaciones de la practica en el campo de su especialidad? Podemos aplicarlo para fertilizantes, materias vegetales, alimentos; tambin para anlisis de suelos para determinar Na,K,Al,Fe, y Ca para anlisis de aguas residuales, cementos, productos de petrleo y productos metalrgicos.

5. DISCUSION: Se ven en los resultados de la absorbancia a partir de las soluciones de concentracin conocida como aumentan de manera proporcional al aumento de concentracin, demostrando la relacin directamente proporcional entre la concentracin y la absorbancia. Por lo que a mayor concentracin mayor absorbancia. En cuanto a la concentracin de la solucin incgnita de absorbancia 0.087 a travs del grafico se obtuvo una concentracin lgica para ese valor de absorbancia (0.0144 g/l) pero a la hora de comprobarlo analticamente con el factor hubo una diferencia no muy grande, pero con resultados (0.0152g/l) no muy lejos de la lgica, por lo que se puede inferir que esa diferencia de valores pudo deberse a errores de precisin del grafico

6. CONCLUSIOINES: La fotocolorimetra consiste en medir la absorcin de luz que produce una determinada sustancia al paso de un color determinado. Para ello, se utiliza un aparato llamado fotocolormetro que utilizamos en el laboratorio y nos permiti medir la absorcin de la luz concretamente en una protena llamada albumina de suero sanguneo. En cuanto la curva de calibracin, como se mencion anteriormente se pudieron haber presentado varios errores en el laboratorio (precisin, limpieza, preparacin de diluciones, etc.) que impidieron obtener como resultado una grfica lineal de los datos obtenidos experimentalmente, evitando as un buen resultado y anlisis del ejercicio. Algo muy importante a comprender en el laboratorio es la importancia de la ley de Beer para hallar concentraciones desconocidas (una muestra problema) midiendo la absorbancia de la muestra patrn.

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7. OBSERVACIONES Y RECOMENDACIONES: Tener en buen estado los materiales del laboratorio. Para poder medir la concentracin de una especie qumica en una solucin, primero se debe establecer el largo de onda en la cual la solucin tiene absorbancia mxima, Max, y despus se debe preparar una curva de calibracin. Las muestras de gaseosa en el momento de medir deben estar secas. Al momento de usar la pipeta se debe usar correctamente 8. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS: http://bc.inter.edu/facultad/arodriguez/cursos/biol3503/lab8_biol3503.htm http://es.wikipedia.org/wiki/Curva_de_calibrado http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/bolarios/BiologiaCCAA/Guiones/Practica1.htm Q Amaris, R y Lopera P. Practicas de bioqumica U. de A. 1995 Skook, D.A. y West D.M. Analisis instrumental. Nueva editorial Interamerican . Mexico 1987

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