DETERINACION DE CIDO ASCRBICO EN UN JUGO

COMERCIAL POR ESPECTROSCOPA ULTRAVIOLETA

Silva, Sebastin (cod.201243631) (sebast1217@hotmail.com)
Paredes, Lina (cod.201245221) (linaleon17@hotmail.com)
UNIVERSIDAD DEL VALLE, FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS,
DEPARTAMENTO DE QUMICA, LABORATORIO DE QUIMICA ANALTICA GENERAL.
Mayo 6 del 2013
RESUMEN

En el laboratorio realizado se determin la concentracin de cido ascrbico en un jugo
comercial, para esto se implement la espectrofotometra de luz ultravioleta, pero a su vez
se emplearon dos mtodos para hallarla, le primero fue el mtodo regular de calibracin
y el segundo mtodo fue el de adicin de estndar. Los resultados obtenidos para la
concentracin del cido ascrbico fueron: 8,136ppm para el mtodo regular de la curva
de calibracin y 2,098 ppm; experimentalmente y matemticamente se hall el
coeficiente de correlacin para ambos mtodos dando como resultados: 0,6625
experimentalmente y 0,9713 (para este se elimin un dato) matemticamente para el
mtodo de la curva de calibracin, en el caso del mtodo de adicin de estndar fue
0,9961 y 0,9959 respectivamente al anterior. En cuanto a su desviacin estndar
calculada experimentalmente fue respectivamente 0,297 y 0,0108. Se concluy que el
mtodo ms efectivo para calcular concentraciones mediante la espectrometra UV es el
mtodo de adicin estndar, ya que este no incluye efectos de matriz.

Palabras clave: vitamina C, espectrofotometra UV, mnimos cuadrados, absorbancia.

1 DATOS CALCULOS Y RESULTADOS.
Construccin de la curva de calibracin.
Preparacin de la solucin estndar:
Para preparar la solucin estndar en primer
lugar se calcul la cantidad de cido
ascrbico necesaria para hacer una solucin
de 1000ppm para posteriormente hacer otra
de 100ppm en 250ml.

( ) (

) ( ) ( )

( ) ( )

A partir de la solucin de 100ppm se toman
alcuotas de 5, 10, 15, 20 y 25 ml.
Se prepara una muestra a partir de 1 ml de
HCl 10% v/v con 1 ml del jugo comercial
previamente centrifugado en un matraz de
50ml que posteriormente se afora hasta la
marca con agua destilada. Tambin se
prepara un blanco utilizando 1ml de jugo
centrifugado 3ml de NaOH 1M y
posteriormente luego de 10 min se agrega 3
ml de HCl 10% v/v y se afora a 50ml.
Determinacin espectrofotomtrica.
Para las medidas de la curva regular se mide
las absorbancias de los patrones, muestra y
blanco preparado a la longitud de onda
previamente encontrada (260nm).
Tabla 1. Curva de calibracin de soluciones
patrn
Concentracin
solucin
patrn(ppm)
Absorbancia
5 0,001
10 0,023
15 0,125
20 0,221
X=12,5(promedio concentraciones)
Y=0,3184(promedio absorbancias)
Nota: se elimino un valor de la lista de datos
debido a que este afectaba drsticamente el
coeficiente de correlacion.
La grafica para expresar la curva de
calibracin se encuentra expresada en la
grfica 1.
Con la anterior curva de calibracin se hall
la absorbancia de la muestra problema.
Tabla 2. Absorbancia de la muestra.
Muestra problema A= 0,026

Para calcular la concentracin del cido
ascrbico se emplea la ecuacin de la recta:
Y= 0.05279X 0.47350
Dnde:
Y= Absorbancia.
X= Concentracin
Concentracin de cido ascrbico:
(0,026)= 0.05279X 0.47350
0,026 + 0,47350 = X
0,05279
X= 9,462
Nota: la concentracin calculada es debida a
los datos obtenidos en la grfica 1. A
continuacin se calcula a partir de frmulas.
Desviacin estndar.
Previamente a calcular la desviacin
estndar se debe calcular primero la
desviacin estndar de regresin.
Regresin Lineal
yy xx
xy
S S
S
r =

r es el coeficiente de correlacin.

=
=
n
i
i i xy
y y x x S
1
) )( (

2
) (

= x x S
i xx


2
) (

= y y S
i yy

Xi es cada valor de la concentracin de los
estndares utilizados para de la curva de
calibracin.
x Es el promedio de todas las
concentraciones de los estndares.
Yi es cada valor de la absorbancia obtenido
para los diferentes estndares utilizados para
la curva de calibracin.
y Es el promedio de las absorbancias.
Sxy= 1,905
Sxx= 125
Syy=0,030771
r= 0,9713


Pendiente e intercepto en eje y:
xx
xy
S
S
b =
x b y a =
b es la pendiente
a es el intercepto o interseccin con el eje y.
b= 0,01524
a=-0,098
Desviacin estndar de la regresin:
2
2

=
n
S b S
S
xx yy
R

Sr= 0,02948559
xx
R
b
S
S
s =

b b
ts b IC =

xx
R a
S
x
n
S s
2
1
+ =
a a
ts a IC =


Sb= 0,00264 ICb=0,01524 0,01135
Sa= 0,0164 ICa= 0,098 0,0709
Concentracin de la muestra:
x
y a
b
o
o
=


xx
R
x
S b
y y
n m b
s
s
1 1 1
2
0
0
|
.
|

\
|
+ + =

Xo corresponde a la concentracin de la
muestra y Sxo a su desviacin estndar.
m es el nmero de lecturas para obtener un
y
0
promedio.
Xo=8,13648294ppm
Sxo= 3,64049835
Intervalo de confianza:
0 0
x
o
x
ts x IC =

t con (n-2) grados de libertad, donde n es el
nmero de estndares utilizados para hacer
la curva de calibracin.
8,136515,66
Mtodo de adicin de estndar.
Para el mtodo de adicin de estndar se
realiz un proceso similar al anterior mtodo,
exceptuando para este no se realiza una
muestra problema y todas las alcuotas
contienen 1ml de jugo comercial.
Tabla 3. Absorbancias de las soluciones.
Concentracin
solucin
patrn(ppm)
absorbancia
0 0,044
5 0,163
10 0,267
15 0,357
20 0,495
X=10 (promedio concentraciones)
Y=0,2652 (promedio absorbancias)
La grafica con respecto a la anterior tabla se
encuentra como la grfica 2.
Concentracin del cido ascrbico.
Se extrapola la recta y con la formula
obtenida se calcula la concentracin.
0= 0.04376X + 0.04644
-0,04644 = X
0,04376
X= |-1,06| = 1,06
La concentracin previamente calculada se
debe a la ecuacin dada en la grfica 2.
Al igual que el previo mtodo se utilizan las
mismas frmulas mostradas.
Regresin Lineal
Sxy= 4,374
Sxx= 250
Syy=0,1206128
r= 0,9959
Pendiente e intercepto en eje y:
b= 0,02192
a=0,046
Desviacin estndar de la regresin:
Sr= 0,01279583
Sb= 0,000954 ICb=0,02192 0,0041
Sa=0,009907 ICa= 0,046 0,426
Concentracin de cido ascrbico.
x
a
b
E =

xx
R
E
x
S b
y
n b
s
s
2
2
1
+ =

x
E
es la concentracin de la muestra
problema en este caso y s
xE
es su desviacin
estndar.
Xe= 2,09854015ppm
Sxe= 0,5173694
Intervalo de confianza:
224 , 2 098 , 2 =
E
x
IC

2. DISCUSIN DE RESULTADOS.
.La vitamina C es denominada con varios
como cido ascrbico, cido hexurnico o
factor antiescorbtico. Esta vitamina se
encuentra implicada en varias funciones
inmunolgicas, antibacterianas, en la sntesis
de colgeno que sirve como componente
imprescindible en las membranas celulares,
aunque la vitamina C no es un cido porque
en su estructura no existe un grupo carboxilo
libre, entonces es considerada una lactona
que se comporta como cido, por lo que se
puede considerar como uno de ellos.
En el laboratorio realizado se determin la
concentracin del cido ascrbico de un jugo
comercial a partir de dos mtodos, el primer
mtodo; el mtodo regular de curva de
calibracin con el cual la concentracin se
hallaba mediante la preparacin de una
muestra problema con absorbancia ya
encontrada, junto con esta y la ecuacin de
la recta hallada (intercepto y pendiente) se
calcula la concentracin; esta fue 9,469ppm
experimentalmente y 7,7ppm
matemticamente; las posibles causas para
que estas difieran pueden ser a las formulas
empleadas para hallarla, debido a que un
computador puede emplear otras a las
mencionadas y que se utilizaron
matemticamente. El otro mtodo fue el de la
adicin de estndar, el cual consiste en
aadir cantidades conocidas de analito al
problema. Cuyo contenido en analito se
quiere determinar. A partir del aumento de
seal se deduce cuanto analito haba en la
muestra problema, este mtodo requiere una
respuesta lineal frente al analito; con este
mtodo se obtuvo que la concentracin de
cido ascrbico fue de: 5,154ppm.
La adicin del patrn es especialmente
apropiada cuando la composicin de la
muestra es desconocida o compleja y afecta
a la seal analtica. La matriz es todo lo que
hay en el problema, que no sea el analito.
Se define el efecto matriz como el cambio
que experimenta una seal analtica por todo
lo que hay en la muestra excepto el analito;
en esto radica las diferencias entre los dos
mtodos aplicados, el mtodo regular de la
curva de calibracin posee un efecto matriz
(posteriormente sea justificado), a diferencia
de mtodo de adicin de estndar Se elige
este mtodo como confiable, porque al
realizar la prueba t, para comprobar la
presencia de matriz, se toma como resultado
confiable ste, pues en este mtodo se logra
corregir el efecto que est presente. En este
mtodo, se tiene la ventaja de que todas las
soluciones tienen la misma cantidad de
muestra de HCl, pero se les aade alcuota a
diferentes volmenes de solucin estndar,
con el fin de generar una curva con un
comportamiento lineal, de esta forma, todas
las soluciones cuentan con igualdad de
condiciones.
Un factor que interviene a la hora de analizar
los mtodos empleados, es el coeficiente de
correlacin; para este trmino es posible
decir que cuando se analiza el coeficiente de
correlacin de ambos mtodos, lo que se
indica es la calidad de los datos, en el caso
del mtodo de espectrofotometra se obtuvo
un valor de 0.66247 y en el caso del mtodo
de Adicin de Estndar, el coeficiente de
correlacin fue de 0.9961; con este tipo de
valores, es posible decir que existe una
correlacin positiva, es decir, la mayora de
los puntos se encuentran sobre la lnea de
pendiente positiva, y s hay una relacin
entre el Eje X y el Eje Y.
En cuanto a las deviaciones estndar y los
coeficientes de correlacin calculados
matemticamente se puede decir que
ocurrieron errores por parte de un error de la
mala aplicacin de las formulas dadas, ya
que estos valores resultan ilgicos frente al
resto de datos calculados; por este motivo en
cuanto al intervalo de confianza y desviacin
estndar de las concentraciones fueron
omitidos.
3. RESPUESTA A PREGUNTAS.
1. Explique teniendo en cuenta la
estructura del cido ascrbico,
Por qu esta sustancia absorbe
en el ultravioleta?

El cido ascrbico es un cromforo, es decir,
una sustancia que en su estructura tiene
electrones capaces de absorber energa o luz
visible y excitarse para que de tal manera
emita diversos colores y dependiendo de la
longitud de onda de la energa emitida, por el
cambio de nivel energtico de los electrones,
en tal medida, la estructura del cido
ascrbico contiene grupos funcionales que
contienen e
-
de enlace y e
-
libres con
energas de excitacin relativamente bajas;
Adems tambin presenta enlaces dobles
conjugados.
La estructura del cido ascrbico es la
siguiente:




El cido ascrbico puede presentar dos tipos
de transiciones en el rango de trabajo
establecido (entre 200 y 300 nm):
Las transiciones qt*, requieren menor
energa y mayor que las transiciones tt*
esto se debe a que los electrones q no
estn tan fuertemente enlazados como los
electronest, por lo cual hay que suministrar
menor energa.
Con base en lo anterior se podra pensar que
para el cido ascrbico las transiciones que
ms se presentan son la nt*, presentes en
el rango ultravioleta visible.
Hay que tener en cuenta la condicin de que
el cido ascrbico no presenta color.

2. Explique la razn por la cual el
blanco debe prepararse a partir de
la muestra.

El blanco se debe preparar a partir de la
muestra con el fin de hacer una correccin
automtica de las interferencias, porque en
este punto no se conoce matriz del jugo; de
esta manera cualquier absorbancia del
blanco se debe a la matriz. En el caso de
esta prctica no se realiz ningn tipo de
operacin, pues el equipo empleado para el
anlisis reporta una medida de absorbancia
comparada y corregida con el blanco
automticamente. El blanco garantiza la
disminucin o total eliminacin del error en la
medida por causa del fondo del jugo
analizado.

3. Determine si la sensibilidades de
los dos mtodos difieren
significativamente Se presenta
efectos de matriz en la
determinacin por curva regular
de calibracin?

Para saber si se presentan efectos de matriz
se debe realizar una prueba de significacin:

Prueba estadstica:
2 1
1 1
2 1
xx xx
calculado
S S
s
b b
t
R +

=

Sr=0,1395

T tabulado=0,437
F=5
T critico= 2,57 - 5%
se concluye con un 95 % de certeza que la
matriz si est presente por lo tanto se decide
que las pendientes de ambos mtodos son
significativamente diferentes entre s, por lo
tanto hay efecto de matriz.


4. El sistema que usted utiliz en
esta prctica es de doble haz.
Qu ventajas tiene este respecto
a un equipo de un solo haz?

Los instrumentos de doble haz dirigen la
radiacin de forma que una parte atraviese la
celda que contiene la muestra y la otra parte
atraviese otra celda que contiene el blanco,
de esta forma se compensan la mayora de
las fluctuaciones transitorias y el
funcionamiento irregular de la fuente,
detector y transductor.

Los detectores de un solo haz son
particularmente adecuados para las medidas
cuantitativas de absorcin a una nica.
Entonces el equipo que se emple en esta
prctica es un equipo de doble haz, pues
unos rayos pasaron a travs de la muestra, y
el resto por el blanco, que ha sido instaurado
en otra celda dentro del equipo, pero son
ledos al mismo tiempo. Los equipos de doble
haz, permiten tener mayor sensibilidad y
rapidez en el anlisis.

4. CONCLUSIONES.
- El mtodo ms adecuado a emplear
para determinar la concentracin de
un analito mediante espectroscopia
UV es el mtodo de adicin de
estndar.
- El contenido de cido ascrbico del
jugo comercial es relativamente muy
bajo segn lo calculado en la
prctica, ya que sus valores estn
bajos de las ppm (entre 2 y 9 ppm).
- El coeficiente de correlacin
preferiblemente se desea que sea un
valor muy cercano a 1 o -1, es decir
0,99 o -0,99; de esta forma se
determina si la correlacin es positiva
o negativa.
5. BIBLIOGRAFIA.
- Gary D. Christian, qumica analtica, sexta
edicin, McGraw Hill, pags: 481-497
- Harris Daniel C., anlisis qumico
cuantitativo, pg.: 88