UNIDAD N 3: Tema 3: TRANSCRIPCION DEL ADN

Blgo. Ms. Pablo Chuna Mogolln

Profesor Auxilar T.C. Area Biologa Departamento Acadmico de Ciencias - UPAO

TRANSCRIPCION
La transcripcin es el proceso mediante el cual, a partir de una molcula de DNA doble hlice, se sintetiza una molcula de RNA, complementara a una de las hebras de DNA.

CARACTERISTICAS GENERALES Es monocatenaria. Slo se transcribe una cadena de DNA Es selectiva. Slo se sintetiza RNA a partir de ciertas regiones del DNA. Es reiterativa. Es decir, una misma regin de DNA puede estar siendo transcrita simultneamente por varias RNA polimerasas, con lo que se obtienen muchas copias. No requiere de cebadores

REQUERIMIENTOS DE LA TRANSCRIPCION
EN PROCARIOTAS RNA Polimerasas (RNA Pol) Topoisomerasa I Pirofosfatasa. DNA molde Los 4 ribonucletidos trifosfato: (ATP, CTP, GTP, UTP) Mg++ Factores de transcripcin: sigma (), rho () EN EUCARIOTAS RNA Polimerasas (RNA Pol) I, II y III Topoisomerasa I Pirofosfatasa. DNA molde Los 4 ribonucletidos trifosfato: (ATP, CTP, GTP, UTP) Mg++, Mn++ Factores de transcripcion especficos. Activadores y represores Factores de Transcripcin basales: TFIIA, TFIIB, TFIID, TFIIE, TFIIF, TFIIH. TFIIS, TFIIIS (elongina). Poli A polimerasa. Espliceosoma

La RNA Polimerasa dependiente de DNA (procariota):

Subunidad

N de subunid. en holoenzima 2 1 1 1 1

Gen

Funcin

Alpha () Beta () Beta () Omega () Sigma ()

Rpo A Rpo B Rpo C Rpo Z Rpo D

Requerido para el ensamble de la enzima, interacta con algunas protenas regulatorias Forma una pinza y esta involucrada en la catlisis. Es el sitio de accin de rifampicina Forma una pinza y permite unin a cadena molde Contribuye en la estabilizacin de la enzima pero no es requerido para la actividad enzimtica Dirige la enzima al promotor pero no es requerida para la formacin del enlace fosfodiester

ETAPAS DE LA TRANSCRIPCION

Iniciacin: unin del RNA pol a un sitio promotor e inicio de la sntesis de la cadena. Elongacin: alargamiento de la cadena de RNA Terminacin: finaliza la sntesis y se libera la molcula de RNA completa

UNION DE LA RNA POLIMERASA AL PROMOTOR

El primer paso es la unin de la RNA polimerasa (RNA pol) al sitio promotor del DNA una secuencia especfica de varios pares de bases que determina donde empieza la sntesis de RNA y que hebra de DNA sirve como molde. Aproximadamente 10 bases corriente arriba del punto de inicio se encuentra la secuencia de 6 nucletidos, TATAAT, denominada secuencia -10 o caja Pribnow (caja TATA). Por convencin, los nucletidos se nuemran desde el punto de inicio (+1) con nmeros positivos hacia la derecha (corriente abajo -downstream) y negativos hacia la izquierda (corriente arriba - up stream).

INICIACION

Una vez que la molcula de RNA polimerasa se ha unido al promotor y se desenrolla localmente la doble hlice del DNA, una las cadenas sirve como molde para la sntesis de RNA, usando como sustrato ribonucletidos trifosfato. El punto de inicio casi siempre es una purina y suele ser adenina. La RNA pol cataliza la formacin de un enlace fosfodister entre el grupo 3 hidroxilo del primer ribonucletido trifosfato y el grupo 5 fosfato del segundo; luego va agregando nucletidos, hasta que la cadena tiene alrededor de 9 a10 nt de longitud. En este punto el sigma generalmente se separa de la molcula de la RNA pol.

ELONGACION

La elongacin contina cuando la RNA pol se mueve a lo largo de la molcula de DNA, desenrollando la doble hlice poco a poco y aadiendo un nucletido complementario de manera que la cadena de RNA va creciendo en direccin 5 3. La RNA pol se mueve a lo largo de la hebra molde desde 3 hacia el extremo 5. A medida que va creciendo la cadena de RNA, los ltimos nucletidos aadidos permanecen apareados con el DNA molde, formando un hbrido de RNA-DNA corto, de unos 8-12 pb. La regin que contiene la RNA Pol, el DNA y el RNA naciente se denomina burbuja de transcripcin.

TERMINACION
En la fase de terminacin, cesa la formacin de enlaces fosfodister, se disocia el hbrido DNA-RNA, se rebobina la regin fundida del DNA y la RNA Pol se libera del DNA. Terminacin independiente de rho (): Las regiones transcritas de los moldes de DNA contienen seales de terminacin (stops signals). La ms sencilla es una regin palindrmica rica en GC seguida de una regin rica en AT. El transcrito de RNA de este DNA palindrmico es autocomplementario. Por lo tanto sus bases se pueden emparejar para formar una estructura secundaria en tallo-asa estable en el transcrito de RNa. Este tallo-asa viene seguida de una secuencia de cuatro o ms residuos U. El transcrito de RNA finaliza en ellos o justamente despus.

Terminacin dependiente de rho (): Algunos sitios de terminacin requieren la participacin de un factor adicional rho (), este detecta seales de terminacin adicionales que no son reconocidas por la RNAP sola. Rho es una ATPAsa que desaloja del sitio activo de la RNA Pol al extremo 3 de una cadena de RNA en crecimiento.

ACTINOMICINA
Agente anticancer Se intercala en el DNA e inhibe la replicacin y transcription del DNA.

RIFAMPICINA
Rifamicina inhibe sntesis de RNA en bacterias. Previene elongacin de la cadena La RNA Pol permanece unida al sitio de iniciacin => previene unin de otra RNA Pol

TRANSCRIPCION EN EUCARIOTAS

El ncleo de las clulas eucariotas contiene 3 tipos de RNA Pol que difieren en la especificidad del molde, localizacin y susceptibilidad frente a los inhibidores. Las RNA Pol eucariotas son similares a las procariotas en lo que respecta a la catlisis del ataque nucleoflico del 3OH de la cadena de RNA en crecimiento, al tomo del fsforo del ribonuclesido trifosfato entrante.

Los promotores eucariotas son ms variados que los promotores procariotas

La unin de la RNA pol eucariotas al DNA requiere la participacin de protenas adicionales, denominadas factores de transcripcin Las interacciones protena-protena son muy importantes en el primer paso de la transcripcin en eucariotas La disociacin del RNA es ms importante que el lugar donde termina la transcripcin para determinar la localizacin del extremo 3 en el RNA producido. Las molculas de RNA eucariotas recin formadas normalmente experimentan un procesamiento (modificacin postranscripcional) durante y especialmente despus de la transcripcin.

El promotor es relativamente corto Consiste de la caja TATA (caja de Hogness) Importante en determinar el punto preciso de inicio de la transcripcin El centro promotor por s mismo produce un bajo nivel de transcripcin Este es llamdo transcripcin basal Los elementos regulatorios afectan la unin de la RNA polimerasa al promotor Hay dos tipos Activadores (Enhancers) Estimula la transcripcin Represores (Silencers) Inhiben la transcripcin Ellos varan su localizacin pero son encontrados a veces en la regin -50 a -100 muchas veces.

1) INICIO DE LA TRANSCRIPCION
La sntesis de un RNA dado se produce cuando el gen respectivo, mejor dicho, sus secuencias reguladoras y el promotor, se activan por protenas especiales, llamadas factores de transcripcin. Los factores de transcripcin especficos interactuan con el regulador del gen. Los factores de transcripcion basales son requeridos por el promotor, pues se unen a la secuencia TATA para comenzar la sntesis del RNAm. EL TFIID se halla integrado por varias subunidades, una llamada TBP (TATA binding protein) y las otras TAF (TBPassociated factors). El proceso se inicia al unirse el TFIID al promotor, por medio de la TBP.

Esta unin altera la estructura de la cromatina en el promotor, que abandona su forma rectilnea y se pliega hasta formar un ngulo de unos 100. El cambio atrae tanto a los restantes factores de transcripcin basales como a la RNA polimerasa II. La RNA polimerasa II es fosforilada por el TFIIH. A continuacin la DNA polimerasa II fosforilada se desprende de los factores de transcripcin y abre la doble hlice del ADN en el sector del gen contiguo al promotor se forma la burbuja de transcripcin-, con lo cual se inicia la sntesis de RNA.

Para alargar el ARNm. La RNA polimerasa II necesita dos factores adicionales, los factores de elongacin TFSII y TFSIII (elongina). La RNA Polimerasa II agrega a la molcula de ARN unos 50 nucletidos por segundo. En los geens que codifican el ARNm ano no se ha identificado la secuencia de nucletidos responsable de la terminacin de la transcripcin.

MODIFICACIONES POSTRANSCRIPCIONALES

Agregado del capuchn (cap) en el extremo 5

Una enzima especfica incorpora una guanosina trifosfato (GTP) al extremo 5 del transcripto.

La enzima metiltransferasa toma dos grupos metilo de la S-adenosilmetionina- y los transfiere al ARNm: uno a la guanina del cap se forma as la 7-metilguanosina- y el otro al nucletido del RNAm.

Agregado de la cola de poli-A en el extremo 3

Al extremo 3 del RNAm se le agrega una secuencia de aproximadamente 250 adeninas llamadas poliA. Antes que la RNA polimerasa II alcance la secuencia de terminacin del gen, varios factores especficos reconocen en el transcripto primario una secuencia llamada seal de poliadenilacin formada por los nucletidos AAUAAA. Los factores CPSF (cleavage and polyadenylation sepcificity factor), CSTF (cleavage stimulation factors), CFI y CFII (cleavage factor). Uno de ellos corta el ARNm unos 20 nucletidos despus de la seal de poliadenilacin y el transcripto primario se separa del ADN.

Corte y Empalme Splicing

Los agentes responsables de los cortes y empalmes en el ARNm son las ribonucleoprotenas pequeas nucleares (RNAsn= small nuclear RNA), que poseen ARN rico en uridinas. Las RNApn que participan son las llamadas U1, U2, U4, U5 y U6, las cuales concurren al sector del transcripto primario que va a ser procesado y forman un complejo macromolecular denominado espliceosoma (por splicing, empalme)

CODIGO GENETICO

Se llama cdigo gentico al conjunto de correlaciones entre cada triplete de bases del RNAm (codn) y el correspondiente aminocido de la protena.

CARACTERISTICAS DEL CODIGO GENETICO: a. El cdigo gentico es casi universal. En todos los organismos estudiados (eucariotas, procariotas y virus) se observa la misma correspondencia entre tripletes y aminocidos. Existe variaciones en el cdigo gentico para la sntesis de protenas en mitocondrias. b. El cdigo gentico es degenerado. Como hay 61 tripletes que codifican los 20 aminocidos, muchos aminocidos tienen ms de un codn. Los diferentes codones para un aminocido dado se denominan codones sinnimos. c. El cdigo gentico no es ambiguo: cada triplete codifica un solo aminocido d. El cdigo incluye un codn de arranque (iniciador) AUG, que especifica metionina; y tres codones UAA, UAG y UGA- que no especifican aminocidos, sino que constituyen seales de stop o fin de traduccin (terminador) en el extremo de las cadenas de RNAm. e. Los tripletes se encuentran yuxtapuestos en el RNAm

CODIGO GENETICO