Utilitatea markerilor moleculari in patologia meningo-cerebrala

Conf. Dr. Cornelia Amalinei

ROLUL IMUNOHISTOCHIMIEI N DIAGNOSTICUL TUMORILOR CEREBRALE

1. identificarea originii / tipului celulelor tumorale 2. stabilirea potenialului proliferativ 3. evaluarea graniei ntre tumor i esutul adiacent (marginea tumorii) 4. excluderea proceselor reactive (boli cu demielinizare, boli infecioase etc) 5. dezvoltarea / revelarea de noi markeri prognostic-predictivi ct i a celor ce pot fi inte terapeutice

(cu importan n diagnosticul histopatologic pozitiv i diferenial)

Neuroepiteliul primitiv
Nestin + Vimentin (Vim) + Sinaptofizin (Syn) -; Neurofilamente (NF) -; Proteina acid fibrilar glial (GFAP) -

Proteinele exprimate la nivelul S.N.C. n dezvoltare i matur

Neuroni n dezvoltare & maturi

Astrocite mature Nestin -

Celule ependimale mature Nestin Vimentin + Syn -; NF -; GFAP +

Nestin Vimentin + Vimentin +/Syn +; NF +; GFAP Syn -; NF -; GFAP +

NESTINA

Aparine grupului filamentelor intermediare i este exprimat de celulele neuroepiteliului primitiv al SNC n dezvoltare. Este substituit, pn la sfritul vieii intrauterine, de proteinele neurofilamentelor (NF) n celulele angajate n difereniere pe linie neuronal, respectiv de proteina acid fibrilar glial (GFAP) la nivelul celulelor angajate n diferenere pe linie astrocitar. SNC matur celulele endoteliale SNP celulele Schwann. Anumite tumori de SNC coexprim nestina: meduloblastoamele cu difereniere neuronal sau neuronal-glial (alturi de NF), respectiv meduloblastoamele cu difereniere glial i glioame (alturi de GFAP). n glioame exist o pozitivare a nestinei direct proporional cu creterea malignitii 15% dintre astrocitoame G II 40% dintre astrocitoamele anaplazice G III 100% dintre glioblastoame G IV (Dahlstrand, Collins i Lendahl Cancer Research, 1992).

VIMENTINA
Aparine grupului filamentelor intermediare. Nu este exprimat de neuronii maturi cu 2 excepii: retina i epiteliul olfactiv. Astrocitele n dezvoltare i mature coexprim vimentina - GFAP. Coexpresia Vim - GFAP se menine i n cazul glioamelor. substituia complet a GFAP prin Vim n cazurile de extrem dedifereniere.

NEUROFILAMENTE
Aparin grupului filamentelor intermediare, fiind difereniate n funcie de greutatea molecular n 3 subuniti: mic (NF-L 68 kDa extensiv fosforilat), medie (NF-M 150 kDa) i mare (NF-H 200 kDa), ultimele dou prezentnd un gradient variabil de fosforilare, ceea ce are drept rezultat existena a multiple fosfoizoforme de NF-M i NF-H. Sunt importante n diagnosticul imunohistochimic din neurooncologie prin pozitivarea lor n neurocitoame centrale, tumori primitive neuroectodermale (PNET) meduloblastomul cu difereniere neuronal, pineoblastoamelor, ganglioneuroblastoamelor i ganglioneurinoamelor.

PROTEINA ACID FIBRILAR GLIAL (GFAP)

Protein a filamentelor intermediare descris n 1971 de Eng ca marker convenional indubitabil n imunohistochimia SNC pentru originea astroglial a celulelor imunopozitive la GFAP. Aura de indicator absolut al astrocitelor protoplasmatice i fibroase a suportat n timp un grad de relativizare, deoarece exist tumori de SNC care coexprim GFAP-ul cu alte proteine ale filamentelor intermediare (Vim i NF). Variabilitatea expresiei - determinat i de diferenele de tehnic ntre diversele laboratoare fixare (tip, timp), pretratare (termic/enzimatic). Dificultile interpretrii imunoreaciei pozitive la GFAP determinate de exprimarea nediscriminatorie astrocite neoplazice ct i de cele reactive i/sau capturate de ctre o tumor nonglial. Neajunsurile interpretrii imunoreaciei pozitive la GFAP - determinate de faptul c nu exist o corelare ntre expresia GFAP i progresia neoplaziei (dei se afirm o relaie de invers proporionalitate - expresia GFAP scade pe msura creterii anaplaziei).

GFAP - precauii n interpretarea imunoreaciilor pozitive respectiv negative!!!

GFAP exprimat de celule non-neoplazice astrocite reactive de la periferia unui proces patologic astrocite captive ntr-o tumor non-glial

Astrocite reactive, GFAP, x400

GFAP - precauii n interpretarea imunoreaciilor pozitive respectiv negative!!!

Exist cazuri de metamorfoze spectaculoase ale celulelor neoplazice dar cu prezervarea apartenenei de linia glial astfel nct incongruena ntre aspectul celulelor n HE i surprinztoarea pozitivare a GFAP-ului este doar aparent.

GFAP - precauii n interpretarea imunoreaciilor pozitive respectiv negative!!!

Variaii ale pattern-ului de distribuie datorit neomogenitii intratumorale

fie prin existena unor zone mai dedifereniate / anaplazice GFAP- alturate altor zone mai difereniate GFAP + (glioblastoame)

fie n cazul tumorilor alctuite din cel puin 2 linii celulare diferite
histogenetic, unele GFAP +, altele GFAP - dispuse compact (geografic) sau intricat (difuz) (gliosarcoame, oligoastrocitoame)

GFAP - precauii n interpretarea imunoreaciilor pozitive respectiv negative!!! Reacii fals negative:
greeli de tehnic (fixare ndelungat sau excesiv) celulele tumorale sunt prea primitive/anaplazice ca s sintetizeze GFAP

CITOKERATINE
Aparin tot grupului filamentelor intermediare i sunt markerul celulelor epiteliale. utilizate n imunohistochimia tumorilor de SNC n primul rnd pentru discriminarea carcinoamelor metastatice de tumorile primare neuroepiteliale excepie: tumorile plexurilor choroide i focarele de metaplazie scuamoas din glioblastoame i gliosarcoame. Pozitivarea CK nu impune automat etichetarea carcinomatoas ! exist tumori primare care exprim CK (meningioame, chordoame) drept metastaz

! studii iterative (Franko et al. 1987; Cosgrove et al. 1989; Schachenmayr et al. 1991) au demonstrat reactivitatea ncruciat CK - alte proteine ale filamentelor intermediare din astrocitele normale, reactive i neoplazice

postulatul conjugrii rezultatelor imunoreaciei la CK cu cele ale markerilor nonepiteliali ai filamentelor intermediare ( GFAP i NF ) n fenotiparea tumorilor SNC

PROTEINE NEUROENDOCRINE

SINAPTOFIZINA (membrana veziculelor sinaptice) imunoreacia pozitiv echivaleaz cu difereniere pe linie neuronal / neuroendocrin (meduloblastom, neurocitom, pineocitom, gangliogliom) CROMOGRANINA-A utilizare limitat ENOLAZA NEURONAL SPECIFIC- utilizare limitat datorit reaciei ncruciate cu subunitatea exprimat de o mare varietate de celule non-neuroendocrine

ALI MARKERI

Leu 7 (HNK-1) utilizat iniial pentru identificarea limfocitelor NK, s-a remarcat ulterior prin pozitivarea membranar a celulelor productoare de mielin de la nivelul SNC (oligodendrocitele), respectiv SNP (celulele Schwann). Proteina S-100 exprimat de marea majoritate a tumorilor de SNC beneficiu discriminarea schwannoamelor de fibrosarcoame, sarcoame fusocelulare i leiomiosarcoame. LCA, CD20, CD3 importante n contextul creterii incidenei limfoamelor primare cerebrale chiar n absena imunodepresiei.

 Factorii de proliferare (PCNA, Ki-67) sau cuantificarea alterrii genelor de supresie tumoral (proteina p53) sunt operani n determinarea prognosticului tumorilor SNC EGFR supraexpresia - se asociaz cu glioblastomul G IV - NU i cu astrocitoamele G II sau G III. Tenascina (marker al moleculelor matricei extracelulare sintetizate de celulele neoplazice) - se coreleaz cu creterea gradului de malignitate intens exprimat de cele mai anaplazice forme de gliom

Principalii markeri IHC asociai tumorilor SNC (dup Haberland , 2007)

GFAP Tumori astrocitare Ependimoame Oligodendroglioame Tumori neuro-gliale PROTEINA S-100 Tumori astrocitare Ependimoame Oligodendroglioame Tumori neuro-gliale Papiloame de plexuri choroide Neurinoame Neurofibroame EMA Meningioame Papiloame de plexuri choroide SINAPTOFIZINA Tumori neuro-gliale Meduloblastom Tumori ale glandei pineale

VIMENTINA Meningioame Hemangioblastoame Hemangiopericitoame Papiloame de plexuri choroide CHROMOGRANINA Tumori neuroendocrine

CITOKERATINE Craniofaringioame Papiloame de plexuri choroide

AFP Carcinoame embrionare

PLAP Germinoame

GFAP proteina acid fibrilar glial, EMA - antigenul membranar epitelial, PLAP fosfataza alcalin placentar, AFP -fetoproteina

Diagnosticul diferenial al tumorilor solide de S.N.C. care, histopatologic, sunt formate din celule ce infiltreaz difuz parenchimul nervos, dup McKeever [1999] modificat.
Trsturi histopatologice pe H.E.
Celule fibrilare dispersate, nuclei rotunzi, uniformi i egal distanati Celule fibrilare mai aglomerate, cu citoplasm abundent, eozinofil, cu prelungiri uniform radiare din corpul celular Celule fibrilare cu nuclei angulai, aglomerai, cu amprentri reciproce, mitoze (rareori, dar atunci cnd apar sunt deosebit de utile diagnosticului) Celule mici, rotunde i albastre, discoezive, infiltrnd laminar limita i concentric pereii vasculari (angiocentricitate) Celule anaplazice aglomerate, albastre, mici sau mari, rotunde sau coluroase Celule anaplazice coezive mai mult dislocnd masa cerebral dect infiltrnd-o, dispoziie perivascular

Imunohistochimie neurohistochimie
GFAP; impregnare tehnica Holzer argentic

Diagnostic diferenial
Glioza cicatricial Glioza reactiv Marginea infiltrativ a glioamelor

GFAP pe astroglii cu prelungiri n picioare de pianjen GFAP

LCA, CD20, CD3 perivascular; GFAP pe glii reactive; reticulina laminar perivascular Sinaptofizina Citokeratine; reticulina

Limfom nonhodgkinian subtipul cu limfocite B PNET/meduloblastom, inclusiv varianta cu celule mari Metastaza carcinomatoas

Diagnosticul diferenial al leziunilor solide ale SNC, care pe coloraia uzual prezint celule clare, dup McKeever [2010], modificat. Profil imunohistochimic
Marginea leziunii
Difuz

Entitate lezional
Oligogendrogliom Xanthoastrocitom

GFAP +
Syn -

Net

Ependimom cu celule clare

EMA Syn +

Tumora neuroepitelial disembrioplazic

Neurocitom central

CD68 (KP1) +

Demielinizare Infarct Net

GFAP EMA + EMA CD68 (KP1) -

Meningiom cu celule clare Carcinom renal metastazat Hemangioblastom

Diagnosticul diferenial al tumorilor solide de S.N.C. care, histopatologic, sunt formate din celule fibrilare i/sau fusiforme, dup McKeever [1999] modificat.
Trsturi histopatologice pe H.E.
Hipercelularitate dat de celule fibrilare cu nuclei angulai, aglomerai n ciorchini, cu amprentri reciproce, mitoze (rareori, dar atunci cnd apar sunt deosebit de utile diagnosticului) Hipercelularitate; fibrilaritate n smocuri de pr, fibre Rosenthal, corpi granulari, picturi eozinofile intracelulare; mi-crochiste (pleomorfism nuclear, celule gigante multinucleate, proliferri vasculare glomeruloide, necroze fr palisade) GFAP

Imunohistochimie neurohistochimie

Diagnostic diferenial
Astrocitoame difuze

GFAP, PAS

Astrocitom pilocitic

Hipercelularitate dat de celule fibrilare cu nuclei angulai, aglomerai n ciorchini, cu amprentri reciproce, mitoze, proliferri vasculare glomeruloide; posibile rozetri perivasculare astroblastice Gemistocite 20% n 10 cmpuri la 40x Hipercelularitate, pleomorfism, mitoze, necroze serpiginoase cu palisadare, proliferri vasculare glomeruloide Hipercelularitate, rozetri perivasculare, inconstant luminale, nuclei rotunzi, monotoni, cromatina n sare i piper Hipercelularitate cu rozete fibrilare nonvasculare pineocitomatoase, alturi de structuri pineale normale neinvadate Neuroni binucleai i pleomorfi + component glial neoplazic Celule fusiforme vrtejuri meningoteliale, corpi psamomatoi Celule fusiforme, Antoni A corpi Verocay, Antoni B Celule fusiforme nucleu vlurit ntr-o matrice lax + axoni

GFAP GFAP GFAP, VIM GFAP, CK

Astrocitom anaplazic difereniere astroblastic Astrocitom gemistocitic Glioblastom Ependimom

SYN, NF SYN, NF, GFAP, cresyl violet (Nissl) EMA, VIM, impregnare argentic (reticulin) S100, VIM, impregnare argentic (reticulin) VIM, S100, impregnare argentic (reticulin, axoni)

Pineocitom Gangliogliom Meningiom fibros Schwannom Neurofibrom

 Modalitile diferite de dispunere i morfologie ale expansiunilor citoplasmatice perivasculare GFAP+, furnizeaz criterii de discriminare ntre unele subtipuri de glioame (astrocitom pilocitic vs. ependimom vs. astroblastom), difereniere necesar n evaluarea oportunitii terapiei adjuvante postchirurgicale. Esenial pentru recunoaterea oricrui tip de gliom de grad nalt ce a invadat leptomeningele i cruia celulele gliale componente i s-au metamorfozat, sub calapodul reelei de reticulin reacional, devenind alungite este pstrarea imunopozitivitii pentru GFAP.

Determinarea componentei gliale n tumorile mixte, prin imunoreacia la GFAP.

HE

OLIGODENDROGLIOM, ASTROCITOM

ME

EPENDIMOM MEDULOEPITELIOM

transthyretin

+/-

+ TUMOR PLEXURI CHOROIDE

S100

GFAP

+ CHORDOM, CRANIOFARINGIOM - CARCINOM

CAM 5.2 (Ck 18,19)

Chromo granin A

ADENOM HIPOFIZAR, PARAGGL

EMA

Diagnosticul imunohistochimic al tumorilor cu celule epitelioide, McKeever [2010] modificat.

+/-

+ MENINGIOM

HMB45

+ MELANOM - HEMANGIOBLASTOM

Diagnosticul diferenial al tumorilor solide de S.N.C. care, histopatologic, sunt formate din celule mici, anaplazice i aglomerate, dup McKeever [1999] modificat.

Trsturi histopatologice pe H.E.

Celule mici, rotunde sau angulate, disparate, cu sau fr zone fibrilare
Fibrilaritate uoar, rozete Homer Wright, nuclei n form de morcov, palisade periodice Celule mici, rotunde, non-coezive; invazia peretelui vascular, cu angiocentricitate Celule coezive; caracter epitelioid

Imunohistochimie neurohistochimie
GFAP
Syn, GFAP

Diagnostic diferenial
Astrocitom cu celule mici
Tumor primitiv neuroectodermal (PNET) Limfom primar de S.N.C.

LCA, CD20, CD3; impregnare argentic (reticulina) panCK

Carcinom cu celule mici

 Glioamele difuze sau heterogene necesit prelevare chirurgical adecvat pentru ncadrarea nosologic i gradare. Consultul intraoperator ntre patolog i chirurg optimizeaz prelevarea biopsic. Majoritatea glioamelor de la GII la GIV infiltreaz difuz parenchimul SNC, astfel nct rezecia total este dificil, dac nu chiar imposibil. Excepiile includ anumite ependimoame i xanthoastrocitoame. Markerul de proliferare Ki-67 mbuntete gradarea i predicia evolutiv. GFAP-ul cu o contracolorare adecvat cu hematoxilin reprezint cel mai important marker imunohistochimic n diagnosticul astrocitoamelor. Astrocitoamele non-infiltrative la care p53 i supraexpresia EGFR sunt absente, se ncadreaz n tumori GI. Unele oligodendroglioame pot prezenta celule pozitive la markeri neuronali, n special sinaptofizina. Rareori ependimoamele pot fi pozitive pentru EMA sub dou patternuri de colorare, dot-like, respectiv ring-like intracitoplasmatic, dar nu i citokeratina CAM5.2, ceea ce permite distincia de tumorile plexurilor choroide.

Meningioame
profil IHC: EMA +, VIM +, S100 +/-, CK variabil +

EMA cu pattern membranar de marcare cel mai cert marker de diagnostic

Vim reactivitate difuz i intens dar non-diagnostic n algoritmul dg. diferenial S100 focal i de intensitate mai redus n 50% dintre meningioame CK pozitive: CK18, AE1/AE3, CAM5.2 (meningiom malign)
Ali markeri: CEA (+ 26, 43
meningiom secretor),

PgR (+

meningiom tipic),

connexin

Ki-67 ( MIB1 )- semnificaie prognostic !!!!!

Diagnostic diferenial
Vim
Meningiom Meningiom malign Hemangiopericitom
+ + +

EMA
++ + (rareori) -

S-100
(rareori)

Altele

+ (rareori) CEA (cel secretor), citokeratine + (rareori) CD34+, desmin+, Leu7+, FXIII+, citokeratine +, p53+

Neurinom
Tumora fibroas solitar

+
+

++
-

GFAP+, Leu7+/CD34 pozitiv difuz, p53 +

Diagnostic diferenial
Glioamele sunt GFAP + i EMA Schwannoamele sunt EMA-, S100 + difuz Hemangiopericitomul EMA lipsesc desmozomii n ME Hemangioblastomul EMAaranjamente caracteristice ale stromei i capilarelor Carcinomul de plex coroid are citokeratine i transthyretin Carcinoamele difuz + la citokeratine au de regul anaplazie i mitoze atipice au limite celulare distincte

Ki-67 i relaia cu gradarea meningioamelor; utilitatea n aprecierea prognosticului

n timp ce Burger i Scheithauer, autorii volumului Tumors of the CNS din seria 4 AFIP folosesc numrarea mitozelor n HE pe 10 HPF, autorii capitolului din Fletcher Diagnostic Histopathology of Tumors, Lopes i VandenBerg coreleaz gradingul meningioamelor cu indexul de marcare (labeling index LI) al Ki-67 (MIB-1), raportnd: Meningiom tipic GI: LI Ki-67 = 4% Meningiom atipic GII: LI Ki-67 = 7% Meningiom anaplazic GIII Kolles et al menioneaz indexul mitotic (MI) mediu al Ki-67 pentru: Meningiom tipic GI: MI Ki-67 = 0,7%

Meningiom atipic GII: MI Ki-67 = 2,1%

Meningiom anaplazic GIII: MI Ki-67 = 11%
ntre LI i MI Ki-67 exist o relaie neliniar LI = 0,56 MI. dup Schroder et al, 1991

Takei & Powell menioneaz studiile iterative centrate pe stabilirea unei corespondene ntre MIB1 LI i gradarea meningioamelor: Matsuno et al (1996) MIB-1 LI 3% = prag de recuren, mai ales pe o perioad de 10 de urmrire Perry et al (1998) MIB-1 LI 4.2% este semnificativ asociat cu o scdere a intervalului liber de recurene n meningioamele cu rezecie total Amatya et al (2001) MIB-1 LI mediu pentru meningioamele benigne = 1.5% meningiomele atipice = 8.1% meningioame anaplazice = 19.5% Ribalta et al (2004) indic contorizarea ariilor cel mai active mitotic.

Cu toate acestea, criteriile WHO (2007) de gradare a meningioamelor nu au inclus valori ale MIB-1 LI pentru discriminarea potenialului recidivant, rmnnd aprecierea activitii mitotice pe HE.

Diagnosticul diferenial n leziuni solide de SNC formate din celule epitelioide,

McKeever [2010].

Diagnostic

Caracteristici utilizate pentru diagnosticul diferenial Aspect histopatologic H.E. IHC / anticorpi -ACT, KP1, muramidase GFAP, CK, EMA SNC Cerebel, encefal, mduva spinrii Regiuni din filum terminale Localizare

Gitter cells microgliile active / xanthogranulom Ependimom / ependimom anaplazic Ependimom mixo-papilar

Macrofage aglomerate pline cu vacuole lipidice, nucleu excentric, non-coezive Trsturi ependimale plus celule epitelioide Epiteliu cuboidal / columnar pe papile hialine fibro-vasculare; fibrilaritate variabil Celule i nuclei rotunzi, halou clar perinuclear, cuiburi de celule ntre vase delicate Celule i nuclei rotunzi, halou clar perinuclear, cuiburi de celule ntre vase delicate, mitoze, pleomorfism nuclear. Mas voluminoas cu structur de plexuri choroide Mas voluminoas cu structur de plex ch, anaplazie, mitoze, necroz

GFAP

Oligodendrogliom

Leu-7, S100, GFAP

Encefal

Oligodendrogliom anplazic Papilom de plexuri choroide Carcinom de plexuri choroide

Leu-7, S100, GFAP

Encefal

Laminin, CK, transthy, syn, IGF-II CK, CD44, syn, transthyretin

Ventricul IV, ventricul lateral, unghi ponto-cerebelos, plex ch V IV, ventricul lateral, unghi ponto-cerebelos, plexuri ch

Diagnosticul diferenial n leziuni solide de SNC formate din celule epitelioide, McKeever [2010] continuare
Diagnostic Caracteristici utilizate pentru diagnosticul diferenial Aspect histopatologic H.E. Meduloepiteliom Epiteliu columnar cu membran bazal pe ambele suprafee; baz fibrovascular pentru papile i tubuli Vrtejuri, corpi psamomatoi, procese celulare interdigitate, desmozomi Plaje sau trabecule de celule fisaliforme IHC / anticorpi GFAP, nestin Localizare Encefal n profunzime, coada de cal

Meningiom

VIM, EMA, S100

Coasa creierului, tentorium, meninge, plexuri choroide Coada de cal, clivus, canal vertebral Supraselar, selar Frecvent mase multiple n SNC, simpt. sistemic Frecvent mase multiple n SNC, simpt. sistemic

Chordom

CK, S100, EMA, VIM CK CK, EMA

Craniofaringiom Carcinom

Scuamos, adamantinomatos Margine net fa de esutul nervos, anaplazie, mitoze, necroze Anaplazie, mitoze, necroz

Melanom malign

HMB-45, S100

Diagnostic diferenial

GFAP

Proliferare de celule monstruoase, destul de coezive, cu citoplasma mat sau fin granular i limit net

Ependimom mixo-papilar, arii predominent papilare cu lacuri de mucine acide i neutre, n miezul conjunctivo-vascular al papilelor, PAS-AA, x200.

Ependimom mixo-papilar, arii predominent fibrilare, GFAP pozitive, DAB, x400

Diagnostic diferenial

 Majoritatea tumorilor metastazate la nivelul S.N.C. sunt carcinoame, care au diseminat hematogen plmn, sn, vezic urinar, prostat, ovar, piele etc. rar leucemiile i limfoamele maligne pot interesa secundar S.N.C.-ul mai rar sarcoamele

Frecvena cu care diversele tumori maligne metastazeaz la nivelul S.N.C.

dup Kleithues i Cavenee WHO blue book [2000]

Sediul tumorii primare

Metastaze intracraniene

Sediul tumorii primare

Compresiune epidural a mduvei spinrii

Sistem respirator Sn
Piele / melanom ?

50%
15% 10.5% 11%

Sn
Plmn Prostat Limfom

22%
15% 10% 10%

Metastazele intraparenchimatoase cerebrale

solitare (mai rar, de exemplu adenocarcinoamele gastrointestinale)

multiple (de exemplu melanomul malign tegumentar), epicentrul fiind n cortex, lng jonciunea cortico subcortical.

Imunohistochimic, metastazele carcinomatoase cerebrale citokeratine cu greutate molecular mic (prototip citokeratina CAM5.2) intens +, adesea EMA este pozitiv,

mai rareori citokeratina cu greutate molecular mare 34E12 pozitiv

GFAP negativ exclude gliomul !!!! Trebuie inut cont de posibilitatea reaciei ncruciate a pancitokeratinei AE1/AE3 cu GFAP i de corecta interpretare a gliozei capturate de frontul de avansare al metastazei

interpretri fals pozitive (un astrocitom anaplazic etichetat metastaz prin utilizarea un marker singular i total nepotrivit CK AE1 / AE3)
interpretri fals pozitive negative (astrocitele reactive GFAP+ capturate de metastaza carcinomatoas, considerate ca fiind parte a unui gliom). !!!!IHC cu CK potrivit ntr-un panel de anticorpi este util n situaiile ce nu se ncadreaz n patternul obinuit- de exemplu, interfa anfranctuoas cu parenchimul nervos sau o reacie desmoplazic intens.

Metastaz carcinomatoas internaliznd parenchim cerebral cu glioz reactiv GFAP+ Astrocite reactive capturate de carcinomul metastatic, GFAP
McKEEVER PE Immunohistochemistry of the Nervous System in Dabbs DIAGNOSTIC IMMUNOHISTOCHEMISTRY, 3rd Edition, Saunders Elsevier, 2010

CITOKERATINELE
Aparin grupului filamentelor intermediare i sunt markerul celulelor epiteliale, fiind utilizate n imunohistochimia tumorilor de SNC n primul rnd pentru discriminarea carcinoamelor metastatice de tumorile primare neuroepiteliale (excepie tumorile plexurilor choroide, focarele de metaplazie scuamoas din glioblastoame i gliosarcoame, meningioamele focal pot fi CK +). !!!! Pozitivarea CK nu impune automat etichetarea drept metastaz carcinomatoas pentru c exist tumori primare care exprim CK (meningioame, chordoame) i, n plus, studii iterative (Franko et al. 1987; Cosgrove et al. 1989; Schachenmayr et al. 1991, citai de Wikstrand) au demonstrat cross-reactivitatea CK cu alte proteine ale filamentelor intermediare din astrocitele normale, reactive i neoplazice, de unde postulatul conjugrii rezultatelor imunoreaciei la CK, n fenotipizarea tumorilor de SNC, cu cele ale markerilor non-epiteliali ai filamentelor intermediare (GFAP i NF).

HE

Glioblastom, metaplazie scuamoas

CK

WHO Classification of Tumors: Tumors of the Nervous System, 2000

HE

OLIGODENDROGLIOM, ASTROCITOM

ME

EPENDIMOM MEDULOEPITELIOM

transthyretin

+/-

+ TUMOR PLEXURI CHOROIDE

S100

GFAP

+ CHORDOM, CRANIOFARINGIOM - CARCINOM

CAM 5.2

Cromog ranin A

ADENOM HIPOFIZAR, PARAGGL

EMA

Diagnosticul imunohistochimic al tumorilor cu celule epitelioide, McKeever [2010] modificat.

+/-

+ MENINGIOM

HMB45

+ MELANOM
- HEMANGIOBLASTOM

Diagnosticul diferenial al leziunilor solide de SNC, care pe coloraia uzual prezint celule clare, dup McKeever [2010], modificat.
Profil imunohistochimic
GFAP + EMA -

Margine a leziunii
Difuz

Entitate lezional
Oligogendrogliom Xanthoastrocitom

Syn Syn +

Net

Ependimom cu celule clare Tumora neuroepitelial disembrioplazic Neurocitom central

KP1 (CD68) + Net

Demielinizare Infarct

GFAP -

EMA +

KP1 (CD68) -

Meningiom cu celule clare

Carcinom metastazat
EMA -

renal

Hemangioblastom

Fos posterioar + Epifiz Fos anterioar

Meduloblastom Pineoblastom PNET

SINAPTOFIZIN

+ LIMFOM LCA

Diagnosticul imunohistochimic al tumorilor cu celule mici, aglomerate i anaplazice, McKeever [2010] modificat.

CD20

CAM5.2 + CARCINOM

McKeever [2010] sugereaz ca n lista de anticorpi, atunci cnd este suspectat o metastaz carcinomatoas cerebral, cu punct de plecare neprecizabil pe HE, s fie inclui anticorpi pentru:

CK cu greutate molecular joas CAM5.2 CK7 CK20

CEA
TTF-1 n funcie de datele clinice bazale (pacient de sex feminin sau masculin, date imagistice, serologice) se adaug HER2/neu, ER i PgR, respectiv PSA.
Interpretarea imunoreaciilor rezultate se face n acord cu aspectele histologice.

Algoritm de diagnostic imunohistochimic n metastazele cerebrale (carcinoame, melanom malign, respectiv interesare leucemic / limfoid secundar).

Aspect histopatologic pe HE sugestiv / suspect pentru metastaz cerebral

HMB45+ Melan A+
Melanom piele/mucoase

CAM5.2 +

CAM5.2 CK7, CK20,CEA TTF-1 CEA +

CAM5.2 LCA+ CD20+ /

(CD3+)

Leucemie Limfom

CK7 + CK20 TTF-1 + HER+ ER+

PSA+ CD10+ RCC+

CK7 CK20 +

CK7 CK20

Colon

Stomac Pancreas Ci biliare

Plmn

Sn

Rinichi

Prostat

Tumora primar

BIBLIOGRAFIE:
LOWE J. - Imunohistochemistry In Neuro-Oncology in HISTOCHEMISTRY IN PATHOLOGY, Second Edition, Churchill - Livingstone, 1990. WIKSTRAND CJ et al Antibodies and molecular immunology. Immunohistochemistry and antigens of diagnostic significance in Russell & Rubinsteins PATHOLOGY OF TUMORS OF THE NERVOUS SYSTEM, 6th Edition, Arnold, 1998, p. 251-304. McKEEVER PE Immunohistochemistry of the Nervous System in Dabbs DIAGNOSTIC IMMUNOHISTOCHEMISTRY, 3rd Edition, Saunders Elsevier, 2010, p. 820 889. HABERLAND C Tumors of the Central Nervous System in CLINICAL NEUROPATHOLOGY: TEXT AND COLOR ATLAS, Demos Medical Publishing, 2007, p. 213 257. TAKEI H, POWELL SZ Diagnosing and Grading of Brain Tumors: Immunohistochemistry in Hayat METHODS OF CANCER DIAGNOSIS, THERAPY AND PROGNOSIS BRAIN CANCER, vol 8, Spinger Science, 2010, p. 33 52. McKEEVER PE. The Brain, Spinal Cord And Meninges in STERNBERG DIAGNOSTIC SURGICAL PATHOLOGY, vol I, Third Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 1999. R. Schrder, K. Bien, R. Kott, I. Meyers and R. Vssing - The relationship between Ki-67 labeling and mitotic index in gliomas and meningiomas: demonstration of the variability of the intermitotic cycle time Acta Neuropathologica Volume 82, Number 5 (1991), 389-394. H. Kolles, I. Niedermayer, Ch. Schmitt, W. Henn, R. Feld, W. I. Steudel, K. D. Zang and W. Feiden - Triple approach for diagnosis and grading of meningiomas: Histology, morphometry of Ki-67/feulgen stainings, and cytogenetics Acta Neurochirurgica Volume 137, Numbers 3-4 (1995). Paul E. McKeever Immunohistology of the Nervous System in Dabbs Diagnostic Immunohistochemistry, 3rd Edition, Saunders Elsevier, 2010, p. 820 889. D.N. Louis, B.W. Scheithauer et al Meningiomas in WHO Classification of Tumors Pathology & Genetics Tumors of the Nervous System, IARCPress, 2000, p. 176 184. Janet M Bruner, Robert D. Tien, David S. Enterline Tumors of the meninges and related tissues in Russell & Rubinsteins Pathology of Tumors of the Nervous system, 6th Edition, Arnold, 1998, p. 67 139. MB Lopez, SR VandenBerg Tumors of the Central Nervous System in Fletcher Diagnostic Histopathology of Tumors, 3rd Edition, Churchill Livingstone Elsevier, p. 1663 - 1732. PC Burger, BW Scheithauer Tumors of Central Nervous System, AFIP Atlas of Tumor Pathology, 4 series, 2007. H Takei, SZ Powell Diagnosing and Grading of Brain Tumors: Immunohistochemistry in Hayat Methods of Cancer Diagnosis, Therapy and Prognosis Brain Cancer, vol 8, Spinger Science, 2010, p. 33 52. KLEIHUES P., CAVENEE W. World Health Organization Classification of Tumours PATHOLOGY & GENETICS: TUMORS OF NERVOUS SYSTEM, IARC Press, Lyon, 2000. HABERLAND C Tumors of the Central Nervous System in CLINICAL NEUROPATHOLOGY: TEXT AND COLOR ATLAS, Demos Medical Publishing, 2007, p. 213 257. McKEEVER P. E., BLAIVAS M. - The Brain, Spinal Cord, and Meninges in STERNBERG DIAGNOSTIC SURGICAL PATHOLOGY, vol 1, Raven Press, Ltd, New York, pg. 314 369, 1989. WIKSTRAND CJ et al Antibodies and molecular immunology. Immunohistochemistry and antigens of diagnostic significance in Russell & Rubinsteins PATHOLOGY OF TUMORS OF THE NERVOUS SYSTEM, 6th Edition, Arnold, 1998, p. 251-304. McKEEVER PE Immunohistochemistry of the Nervous System in Dabbs DIAGNOSTIC IMMUNOHISTOCHEMISTRY, 3rd Edition, Saunders Elsevier, 2010, p. 820 889. TAKEI H, POWELL SZ Diagnosing and Grading of Brain Tumors: Immunohistochemistry in Hayat METHODS OF CANCER DIAGNOSIS, THERAPY AND PROGNOSIS BRAIN CANCER, vol 8, Spinger Science, 2010, p. 33 52.