PREPARATE MICROSCOPICE

CATEDRA DE MICROBIOLOGIE LP 3

COLORATII DIFERENTIALE COLORATIA ZIEHL - NEELSEN

INDICATII: - colorarea la cald a micobacteriilor din prelevate patologice sau culturi

COLORATII DIFERENTIALE COLORATIA ZIEHL - NEELSEN

Reactivi: 1. Solutie de fucsina fenicata Ziehl 2. Solutie decoloranta: amestec acid alcool (H2SO4 + alcool etilic 95) 3. Solutie recoloranta: albastru de metilen

COLORATII DIFERENTIALE COLORATIA ZIEHL - NEELSEN

Procedura: 1. Se aseaza lama cu frotiul fixat pe un suport metalic 2. Se acopera frotiul din abundenta cu sol. de fucsina fenicata 3. Se lasa 15, timp in care se fac 3 treceri cu flacara becului de gaz Bnsen pe sub lama de sticla, astfel incat sa incalzim colorantul pana la emitere de vapori.

COLORATII DIFERENTIALE COLORATIA ZIEHL - NEELSEN

Atentie! Colorantul nu trebuie sa ajunga la fierbere! Daca colorantul se evapora sau se usuca pe lama, trebuie sa adaugam colorant proaspat! 4. Se spala frotiul din abundenta cu apa de robinet

COLORATII DIFERENTIALE COLORATIA ZIEHL - NEELSEN

5. Se decoloreaza frotiul cu amestec acid alcool 2 6. Se spala cu apa de robinet 7. Recolorare cu sol. albastru de metilen 1

COLORATII DIFERENTIALE COLORATIA ZIEHL - NEELSEN

Citire si interpretare: - bacilii acido alcoolo - rezistenti (BAAR) apar rosii stralucitori - celulele inflamatorii, celulele de descuamare sau celulele tisulare, bacteriile neacido alcoolo rezistente se vor colora in nuante de albastru

COLORATII DIFERENTIALE COLORATIA KINYOUN

INDICATII: Coloratie la rece a micobacteriilor din prelevate patologice sau culturi

COLORATII DIFERENTIALE COLORATIA KINYOUN

Reactivi: A. Solutie de fucsina fenicata Kinyoun B. Solutie decoloranta de acid alcool (HCl + alcool etilic 95) C. Solutie recoloranta: albastru de metilen

COLORATII DIFERENTIALE COLORATIA KINYOUN

Procedura: 1. Colorare la rece cu sol. de fucsina fenicata Kinyoun 5 2. Spalare cu apa de robinet 3. Decolorare cu amestec acid alcool 30 4. Spalare cu apa de robinet 5. Recolorare cu albastru de metilen 1 6. Spalare cu apa de robinet.

COLORATII DIFERENTIALE COLORATIA KINYOUN

Citire si interpretare: - bacilii acido alcoolo - rezistenti (BAAR) apar rosii stralucitori - celulele inflamatorii, celulele de descuamare sau celulele tisulare, bacteriile neacido alcoolo rezistente se vor colora in nuante de albastru

COLORATII SIMPLE
Coloratia cu albastru de metilen: 2 Coloratia cu albastru de metilen, varianta Wayson: 10

COLORATII NEGATIVE
1. Coloratia negativa cu tus de India Principiu: particulele colorate nu pot penetra capsula bacteriilor sau levurilor, care apare necolorata pe fondul colorat al preparatului Indicatii: depistarea Cryptococcus neoformans, depistarea capsulei bacteriene in primoculturi, urmarirea reactiei de umflare a capsulei etc.

COLORATII NEGATIVE

Citire si interpretare: Bacteriile si levurile capsulate apar inconjurate cu un halou clar pe fondul uniform intunecat al preparatului.

COLORATII NEGATIVE

2. Coloratia negativa cu nigrozina

COLORATII FLUORESCENTE
Coloratia cu auramina rhodamina Principiu: Structuri speciale, lipoidice, asociate peretelui unor bacterii confera rezistenta la decolorarea protoplastului prin solutii de acizi sau/si alcool. Bacteriile care nu poseda asemenea structuri sunt decolorate si trebuie recolorate pentru a putea fi observate. Endosporii bacterieni, ascosporii, chistele unor protozoare (ex. Cryptosporidium) sunt de asemenea acidorezistenti gratie invelisurilor lor.

COLORATII FLUORESCENTE
Invelisurile unor microorganisme (micobacterii,endospori, chiste de Cryptosporidium etc.) sunt impermeabile si pentru colorant, care trebuie sa actioneze in solutii concentrate fie la cald, fie in prezenta unor detergenti.

COLORATII FLUORESCENTE

Indicatii: Triajul frotiurilor din prelevate patologice pentru depistarea rapida a bacililor tuberculozei.

COLORATII FLUORESCENTE
Reactivi: 1. Solutie coloranta cu Auramina O Rhodamina B 2. Solutie decoloranta (HCl conc. + alcool etilic 95) 3. Contracolorant: KMnO4

COLORATII FLUORESCENTE
Procedura: 1. Colorare cu sol. Auramina O Rhodamina B 15 2. Spalare cu apa de robinet 3. Decolorare cu acid alcool 2 4. Spalare cu apa de robinet 5. Contracolorare cu KMnO4 2
6. Spalare cu apa de robinet

COLORATII FLUORESCENTE

Examinare la microscopul cu fluorescenta cu obiectivele de 20x si 40x, asociate cu oculare de 10x.

COLORATII FLUORESCENTE
Citire si interpretare: Bacilii acido alcoolo rezistenti se coloreaza fluorescent stralucitor in galben portocaliu cu Auramina O Rhodamina B. Contracolorarea cu KMnO4 face fondul
frotiului negru eventual numai cu resturi celulare cu fluorescenta galbena slaba.

ALTE TIPURI DE COLORATII

1. Coloratia May Grnwald Giemsa (aprecierea celularitatii) 2. Coloratia pentru Fe. (hemosiderina, sangerari tisulare) 3. Coloratia PAS (depistarea fungilor se coloreaza in rosu) 4. Coloratia cu albastru de toluidina (pentru Pneumocystis carinii, P.jirovecii)

ALTE TIPURI DE COLORATII

5. Coloratia cu SUDAN III pentru lipide 6. Coloratii imunocitochimice, reactii peroxidaza antiperoxidaza etc.