Tincin y colorantes

LIF III

Tincin

La tincin (trmino ms comn) o coloracin es una tcnica auxiliar en microscopa para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio.

Las tinciones pueden ser usadas para definir y examinar tejidos en bruto (resaltando, por ejemplo, fibras musculares o tejido conectivo), poblaciones celulares (clasificando diferentes clulas sanguneas, por ejemplo) u orgnulos dentro de clulas individuales.

Los colorantes son normalmente hidrosolubles y se caracterizan por unirse a ciertas molculas presentes en los tejidos gracias a afinidades qumicas.

Los colorantes son los elementos principales de las tinciones generales. Son molculas que poseen tres componentes importantes: un esqueleto incoloro, que normalmente es un anillo aromtico de benceno, al cual se le unen dos tipos de radicales: uno que aporta el color, denominado cromforo, y otro que posibilita la unin a elementos del tejido denominado auxocromo. Al conjunto de estos tres elementos unidos en una molcula se denomina cromgeno.

Segn la naturaleza qumica del radical

auxocromo los colorantes se clasifican en:

Bsicos: son sales en las que la base aporta el color, mientras que la parte cida es incolora. Tienen apetencia por sustancias cidas del tejido como el ADN o ciertos componentes de la matriz extracelular como los glucosaminoglucanos. As, ponen de manifiesto el ncleo y el ARN, sobre todo el ARNr presente en los ribosomas por ser muy abundante, as como ciertas matrices extracelulares ricas en componentes cidos.

Ejemplos de colorantes bsicos

Ejemplos de colorantes bsicos son la tionina, safranina, azul de toluidina, el azul de metileno o la hematoxilina

Gromrulo de rion

Meristemo apical caulinar de VId

cidos

Son sales con el anin coloreado y la base incolora. Tienen apetencia por sustancias bsicas, sobre todo estructuras proteicas localizadas en el citoplasma celular y tambin el colgeno de la matriz extracelular.
Fibras colagenas de lengua de Cerdo

Ejemplos de colorantes cidos

Fucsina cida, verde rpido, naranja G o la eosina.

La Prueba de Fast Green es una Prueba rpida usada para revelar daos al pericarpio en semillas de maz. La prueba se utiliz primariamente para identificar fuentes de dao mecnico durante el acondicionamiento.

Neutros

Poseen una porcin cida y otra bsica, ambas con capacidad para aportar color. Por tanto un mismo colorante puede teir tanto las partes bsicas como las cidas de los tejidos. Por ejemplo, el eosinato de azul de metileno.

Cromoendoscopia con tincin usando azul de metileno.

Indiferentes

Realmente no se unen a elementos de los tejidos por afinidad qumica sino porque se disuelven en ellos. Por ejemplo, el colorante sudn se disuelve en los lpidos y por tanto teir a las gotas de lpidos, especialmente en los adipocitos.

Tincion de una placa en un Ateroma con sudan IV

Preparacin de colorantes

1.-Acido-Alcohol: (decolorante para tincin Ziehl-Neelsen)

cido clorhdrico concentrado ...........................................3 ml Etanol 95% .......................................................................97 ml

2.-Azul de metileno: Colorante de contraste para tincin de flagelos.

Azul de metileno.................................................................1 g Agua destilada.................................................................100 ml

3.-Azul de metileno de Loeffler: Tinciones simples.

Solucin de hidrxido potsico al 1%...................................1 ml Azul de metileno, sol. saturada en etanol al 95%................30 ml Agua destilada...................................................................100 ml

4.-Cristal violeta: Para tincin Gram y tincin simple.

Cristal violeta (violeta de genciana)............0,5 g

Agua destilada............................................100 ml

5.-Eosina: Para observacin de clulas sanguneas.

Eosina..........................................................0,3 g

cido actico glacial......................................................0,025 ml

Agua destilada...........................................100 ml

6.-Lugol: Solucin de yodo para tincin Gram.

Yodo.........................................................................................1 g Yoduro potsico.......................................................................2 g Agua destilada......................................................................300 ml

7.-Safranina: Colorante de contraste para tincin Gram (preferible a la fucsina) y esporas.

Safranina............................................................................0,25 g Agua destilada.................................................................100ml