PARA QUE?

En algunas especies los pares cromosmicos no pueden diferenciarse claramente considerando slo sus componentes distintivos en sentido longitudinal; se debe recurrir a tcnicas citolgicas especiales para la tincin de los cromosomas, Se evidencian "bandas" transversales (oscuras y claras) que corresponden a los distintos tipos de cromatina.

TECNICAS MAS USADAS

Bandeo G Bandeo Q

Bandeo R
Bandeo C Bandeo NOR

BANDEO G

Se utiliza tratamiento con tripsina previo a la utilizacion de Giemsa ya que la tripsina degrada la proteinas y da lugar a bandas claras y oscuras. Bandas Oscuras: Regiones de ADN ricas en A-T y pobres en genes constitutivos. Bandas Claras: Regiones de ADN con G-C Y en genes constitutivos
Regiones A-T son resistentes a la tripsina lo cual genera una coloracin oscura en el bandeamiento.

Mayor nivel de bandas = Mayor calidad del estudio

BANDEO Q

Se basa en el uso de colorantes fluorescentes como la quinqcrina. Dando a lugar bandas brillantes y oscuras. Tcnica similar al bandeo G Bandas Brillantes: Contienen regiones ricas en A-T. Bandas oscuras: G-C
Regiones con G-C reprimen la fluorescencia y por eso no se tien, al contrario que las regiones con A-T

No es muy frecuentemente utilizada

BANDEO R
Tcnica opuesta al bandeamiento y se utiliza

el calor como desnaturalizante o BrdU Bandas oscuras: G-C Bandas claras: A-T

El calor desnaturaliza las regiones ricas en A-T por eso se visualizan mas las regiones con G-C

BANDEO C

Marcan las regiones pericentromericas.

Centromericas

Permite la tincin de la heterocromatina constitutiva. Se utiliza hidroxido de sodio e hidroxido de bario para desnaturalizar el ADN.

Se usa principalmente para los cromosmas 1, 9 y 16

BANDEO NOR

Marcan las regiones de los organizadores nucleolares acrocentricos.( regiones cromosmicas que forman y mantienen el nuclolo)

BASES MOLECULARES DEL BANDEO CROMOSOMICO.

CLASIFICACIN
QFQ GTG RFA MORFOLOGICOS RHG THG BANDEOS CROMOSOMICOS CBG GBG RBA DINAMICOS RBG GB-AAu RB-AAu

Se basan en tcnicas inherentes a la heterogeneidad de la cromatina. Importante la relacin con protenas(histnicas y no histnicas) e interacciones ADN. Se subclasifican en: Tcnicas de tincin diferencial Mtodos de tincin selectiva Coloraciones con fluoroeromos especficos aislados o combinados con colorantes no fluorecentes Tinciones con anticuerpos fluorecentes.

1. 2. 3.

4.

Nomenclatura Bandeos Morfologicos

1) tipo de bandeo 2) tcnica de deteccin empleada 3) tipo de tincin.

QFQ: Bandas Q por fluorecencia usando quinacrina. GTG: Bandas G por tratamiento enzimtico con tripsina utilizando Giemsa. RFA: Bandas R por fluorecencia usando naranja de acridina. RHG: Bandas R mediante desnaturalizacin trmica utilizando Giemesa. THG: Bandas T por desnaturalizacin trmica empleando Giemesa. CBG: Bandas C por hidrxido de bario utilizando Giemesa.

Incorporacin de una base analoga, (BrdU), en el ADN durante la fase S del ciclo celular. Se denomina tambin bandeo de replicacin debido a la relacin existente entre el tiempo de incorporacin del BrdU y el patrn de replicacin. Si se incorpora BrdU durante la fase de replicacin temprana se obtiene un patrn de bandeo R destacndose las regiones ricas en G-C. Si se incorpora la base anloga durante la fase tarda de replicacin se obtiene un patrn de bandas G, destacndose las zonas de predominio de secuencias A-T. Los cromosomas pueden visualizarce utilizando distintos mtodos de tincin como Giemesa o el naranja de acridina o utilizando anticuerpos especficos

Nomenclatura Bandeos Dinamicos

GBG: Bandas G por incorporacin de BrdU utilizando Giemesa. RBA: Bandas R por incorporacin de BrdU empleando naranja de acridina. RBG: Bandas R por incorporacin de BrdU utilizando Giemesa. GB-AAu: Bandas G por incorporacin de BrdU empleando anticuerpos especficos unidos a partculas deoro coloidal. RB-AAu: Bandas R por incorporacin de BrdU usando anticuerpos especficos unidos a partculas deoro coloidal.

Bromo desexiuridina (BrdU)

Anlogo mutagnicamente activo de la timina, en que el grupo -CH3 en posicin 5' se reemplaza por Br. Tratamiento e investigacin del cancer debido a que aumenta la susceptibilidad de las clulas a la radioterapia porque inhibe la reparacin de roturas causadas por la radiacin en la doble cadena de ADN Agente mutagenico: altera los patrones de transcripcin Aumenta la afinidad de las proteinas cromosomales por las zonas de la cadena que contengan BrdU, Altera la unin de protenas reguladoras a la cadena de ADN, Inhibe la expresin de algunas funciones de diferenciacion celular Provoca alteraciones en la membrana plasmatica.

1.

PROCEDIMIENTO BANDAS G Envejecer las preparaciones en estufa a 65C / 14h o 3 dias

a temperatura ambiente

Bandeo GTG Tripsina desnaturaliza proteinas de cromosomas Tincion Giemsa o Leishman Bandeo G con colorante Wright Protocolo mas usado. Se introduce la preparacion en solucion salina de 2SSC (Citrato trisodico disuelto en NaCl 0,3M) durante 1 minuto a 65C. Esto permite que se abra la hebra de ADN Lavar la preparacion con agua destilada y secar al aire. Teir con colorante Wright al 0.25% y tampon Sorensen en proporcion 1 a 3 duraten 3 minutos

PROCEDIMIENTO BANDA C
1.

CBG bandas C obtenidas con hidroxido Barico usando Giemsa Introducir la preparacion en una cubeta con HCL 0.02N a temperatura ambiente por 10 minutos, lavar con agua y dejar secar al aire Introducir la preparacion en una cubeta a 60C con Ba(OH)2 saturado durante 1 minuto. Esto despuriniza y desnaturaliza el ADN. Lavar con agua destilada y metanol para eliminar restos de bario dos veces Dejar secar e incubar en 2xSSC a 65C / 15 min Lavar la preparacion y dejar secar Teir con colorante Leishman al 20% o Giemsa durate 5 a 10 minutos

2. 3. 4. 5. 6.

Esta tecnica degrada un 50% del material cromosomico lo que dificulta la aplicacin posterior de otras tecnicas. El unico material que queda teido es la heterocromatina constitutiva porque resiste a la degradacion

Procedimiento bandas NOR

Aadir 0.2uL de solucion de nitrato de plata al 50% filtrada a la preparacion 2. Adicionar 6 a 8 gotas de formaldehido al 0.3% (acelera la tincion) 3. Incubar a 37C durante 24h protegido de la luz
1.

BIBLIOGRAFIA

http://www.oocities.org/researchtriangle/lab/25 13/bandeos.htm Cristina Hernando Davalillo, Caracterizacion de Anomalias cromosomicas en diagnostico prenatal y postnatal mediante tecnicas de citogenetica molecular, Tesis Doctoral 2005. http://docentes.cs.urjc.es/~odeluis/Docencia/G enetmed/Bloque_1_2p.pdf http://geneticahumana.tripod.com/libros/page2 01.html http://www.fmed.uba.ar/depto/histo1a/genetica /adm/sg2.pdf