PCR Multiplex

Mltiples fragmentos amplificados al mismo tiempo. Pueden estudiarse diferentes genes al tiempo

Algunas utilidades
Anlisis de mutaciones Identificacin Clasificacin de especies

Importante
Temperatura de annealing Complementariedad de los primers Pesos diferentes Nmero de ciclos Siempre usar controles internos Marcadores de peso Ajustar los componentes de la PCR segn la cantidad de sistemas Si no son compatibles los primers: Pequeos plex

 Exones adyacentes no necesariamente tienen pesos similares

Exones analizados
2plex:
Exn 45: 547pb Exn 60: 139 pb

3plex:
Exn 6: 202 pb Exn 17: 416pb Exn 48: 506 pb

Buffer 10 x: 2ul dNTP (10Mm): 2ul MgCl2 (25mM): 2 ul Primers (10 pm/ul): 2ul ADN (100ng/ul): 2ul Polimerasa (1,2 u/ul): 1ul Agua: 9ul Total del mix: 20ul

Volumen inicial x Concentracin inicial = Volumen final x Concentracin final

[ ] inicial Buffer dNTP MgCl2 Primers ADN Polimerasa 10 X 10Mm 25mM 10 pm/ul 100ng/ul 1,2 U/ul

[ ] final 1X 1Mm 2,5mM 1 pm/ul 200ng 1,2U

Volumen 2 ul 2 ul 2 ul 2 ul 2 ul 1ul

Agua

9ul

9 ul
20ul

PCR multiplex
Desnaturalizacin inicial 94c 10 minutos Cada ciclo:
94c por 30 52c por 30 65c por 45

Extensin final 65c por 10 minutos 30 ciclos

Genome Res. 1994 3: S65-S75