Analiza bacteriologica a apei

Recoltarea,conservarea si transportarea probelor de apa

Recoltarea,pastrarea si transportarea probelor de apa din sursele alimentare decentralizate cu apa se efectueaza in conformitate cu STAS 4979-49Apa pentru alimentare potabila ,menajera,si industriala. Modul de recoltare a apei din surse centralizate. Apa se recolteaz dup ce robinetul a fost curit cu un tampon curat i s-a lsat s curg 10 -15 minute apa stagnat din robinet. Prelevarea apei din bazinele de not. Din bazinele de not se recolteaz o prob unic, unde curentul este mai puternic, sau 3 probe (n cazul studiilor mai amnunite), cum ar fi: o prob la centru i 2 probe n apropierea malurilor. n fiecare punct a bazinului de not se recolteaz cte 1 litru de ap din stratul superior al apei. Din rezervoarele cu ap se vor recolta probe de ap de la punctul de ieire din rezervor Probele de apa din fintini pentru analiza bacteriologica trebuie de recoltat cu batometrul,care inainte de a fi scufundat in apa se flambeaza.In lipsa batometrului se admite de recoltat apa cu galeata publica,preliminar gura galetii se flambeaza.Primele doua galeti se varsa,iar din a treia se recolta apa in flacoane sterile de 0,5 l.Plicul de hirtie sau capisonul de la flacon se scoate impreuna cu dopul nemijlocit inainte de recoltarea probei,evitind atingerea dopului cu miinile.Se toarna 350 ml de apa in flacon,astfel ca la transportare sa nu se umecteze dopul.Flacoanele umplute se inchid cu dopuri rodate de cauciuc,guma de pluta si cu capison sterile de hirtie care se leaga cu ata de sfoara.Probele recoltate trebuie sa fie insotite de procesul verbal respectiv forma nr.205 U,in care este prezentata informatia ce cuprinde ora ,data ,sursa de apa,scopul investigatiei.Probele trebuie sa fie cercetate nu mai tirziu de doua ore dupa recoltare.In cazul in care este imposibil de indeplinit aceste conditii,se admite efectuarea analizei nu mai tirziu decit peste 6 ore de la recoltarea probei,pastrind in acest rastimp proba la temperatura de 1-5 *C.Flacoanele cu probe trebuie sa fie impachetate in lazi izoterme.Temperatura indicata trebuie mentinuta folosind pungi din cauciuc sau masa plastica,umplute vara cu gheata.
[Regulamentul igienic si cerinte privind calitatea apei potabile la aprovizionarea decentralizata.Protectia surselor amenajarea si mentinerea fintinilor,cismelelor,aprobat de medicul-sef sanitar de Stat al R.Moldova,M. Magdei,23 februarie 1996 Nr.06.6.3.18-96; SM ISO 5667-5:2010 Calitatea apei. Prelevare. Partea 5. Ghid de prelevarea apei potabile i apei utilizate n industria alimentar. SM ISO 5667-11:2010 Calitatea apei. Prelevare. Partea 11. Ghid general pentru prelevarea apelor subterane. ]

Pregatirea pentru analiza

Probele care sunt aduse in laborator se trec in Registrul de inregistrare a probelor si eliberarea rezultatelor investigatiilor.In acesta se trece numarul de laborator,data,ora recoltarii probei,ora intrarii in laborator,denumirea probei,cantitatea,volumul,locul recoltarii probei,conditiile speciale de recoltare,scopul investigatiei,stabilizatori,conservanti folositi la recoltarea probei,data/ora la inceputul investigatiei,ora la sfirsitul investigatiei,ora de lichidare a probei.

Determinare numarului total de microorganisme

Determinarea numarului total de microorganisme in apa se realizeaza prin numarea coloniilor ce au aparut pe mediul de cultura cu agar.Initial,apa de investigat se toarna in pilnia din Pompa de filtrare a apei SARTORIUS.Apa este filtrata prin membrane filtrante sterile din celuloza,cu pori 0,45micro.m.Dupa ce toata apa a fost absorbita in colector,cu penceta sterila,scoatem filtrul si-l aplicam pe cutia Petri cu mediul Endo,se pune in termostat si se incubeaza la temperature de 37*C,pentru 18-24ore.Daca apar colonii albastre-verzui,rosii intunecate,cu luciu metalic,roze transparente,din aceste colonii se fac frotiuri colorate dupa Gram si se studiaza la microscop.Daca se vor gasi bacteria G,polimorfe,se va efectua testul oxidazei.Daca toate coloniile vor fi oxidazo +,rezultatul va fi negative.Abesnta oxidazei la coloniile rosii-intunecate cu luciu metalic confirma prezenta bacteriilor din grupa intestinala.Daca se vor inregistra colonii roze ,transparente,oxidazo-,inseamna ca sunt bacterii din grupa intestinala.Cite 2-3 colonii de fiecare tip se vor recultiva pe mediul cu glucoza.Dupa 4-5 orede incubare la temperature de 37*C se va observa daca este present acid si gaz rezultatul este+.Daca se va depista numai acid,se va pune eprubeta in thermostat pentru 24 ore,daca dupa termostatare gazul lipseste ,rezultatul este negativ.Apa potabila de baut corespunde cerintelor 287473.,daca indicele Coli nu depaseste3. Rezultatul se determina prin sumarea coloniilor de pe cele trei filter si impartit la 3.Indicele resultant se inregistreaza in jurnal si in protocolul analizei.
[Standartul de stat ;SM ISO 5667-5:2010 Analiza microbiologica a probelor de apa.
1446-76 - . ]

Depistarea microorganismelor patogene

Sursa cea mai importanta de poluare bacteriana a apei o constituie reziduu-rile, excrementele umane si animale, care pot contine germeni patogeni, de aceea in analiza apei se urmareste detectarea poluarii fecale-folosind indicatorii coliformii.Metoda pentru determinarea bacteriilor coliforme include teste

prezumtive, de confirmare, bazate in primul rand pe capacitatea bacteriilor de a fermenta lactoza cu producere de acid lactic, CO2, H2, in timp de 48 ore la 35C. Testul prezumtiv consta in inocularea probei in mediu nutritiv cu lactoza (BCLP -bulion de carne cu lactoza), mediu de imbogatire favorabil inmultirii atat a bacteriilor coliforme cat si a altor bacterii care folosesc lactoza ca sursa de carbon. Testul de confirmare, consta in inocularea culturilor din eprubetele pozitive ale testului prezumtiv pe medii selective (BBLVP- bulion bila cu lactoza verde de briliant) care inhiba dezvoltarea bacteriilor insotitoare si asigura inmultirea bacteriilor coliforme. [http://www.referat.ro/laboratoare/Analiza_microbiologica_a_apei_c400a.html
Trimis la data:2010-06-18Materia:Biologie Autor:Adriana Nicusor]

Din grupul coliform, cel mai frecvent este intalnit genul Escherichia cu specia Escherichia coli, care indica o contaminare fecala recenta. [ISO9308-1] Enterococii intestinali sunt G+,catalazo-,se prezinta ca colonii rugoase,pigmentate,de culoare roz-rosu-maro,sunt insamintate pe mediul cu lactoza,manifestind activitate lactoz pozitiva.[ISO 7899-2] Prin investigatiile de laborator sunt depistate prezenta Pseudomonas aeruginosa-bacterie G-,nesporulate,oxidazo,catalazo+,se cultiva pe mediu cu gelatina peptonata,glicerol,caseina si agar,da testul nitrat reductaza+,lichefiaza gelatina,hidrolizeaza caseina.Toate coloniile albastre-verzui confirma prezenta acestor bacterii. [EN ISO 12780]

Aprecierea calitatii apei conform indicatorilor microbiologici

Tabelul 1 A Parametrii microbiologici pentru apa potabila: Parametrul E.Coli Enterococi(Streptococi fecali) Bacterii coliforme Valoarea admisa(nr./100ml) 0 0 0 Metoda de analiza ISO 9308-1 STAS 3001/91 ISO 7899-2 IAO 9308-1

[Ttabelul 1A,anexa 7 [7] Recomandari metodice privind aplicarea metodelor instrumentale si de laborator la efectuarea supravegherii de stat a sanatatii publice in domeniul sanatatii copiilor si tinerilorChisinau-2012]

Tabelul 1B Parametrii microbiologici pentru apa potabila imbuteliata in sticle /alte recipiente. Parametrul E.Coli Enterococi(Streptococi fecali) 0/250ml Pseudomona Aeruginosa Nr.de colonii la 22*C Nr.de colonii la 37*C 0/250ml 100/1ml 20/ 1ml Valoarea admisa 0/250ml Metoda de analiza ISO9308-1 STAS3001/1991 ISO 7899-2 STAS 3001/1991 Pr EN ISO 12780 STAS 3001/91 Pr EN ISO 6222 STAS 3001/91 Pr EN ISO 6222
[Ttabelul 1B,anexa 7 [7] Recomandari metodice privind aplicarea metodelor instrumentale si de laborator la efectuarea supravegherii de stat a sanatatii publice in domeniul sanatatii copiilor si tinerilorChisinau-2012]