Incidencia de moscas con tumores melanticos en dos cepas deDrosophila melanogaster; tu (1) Szts y salvajes de tipo Oregon R, criadas

a 22 C y a 29 C Rosa I. Alers Talavera 801-10-0204 Estudiante de Biologa de la Universidad de Puerto Rico Recinto de Ro Piedras Abstracto: Los tumores melanticos en Drosophila melanogaster son observados como masas negras internas y anormales; entre los genes que se han relacionado con la aparicin de dichos tumores se encuentra el gen tu (1) Szts, este es alelo condicionado a la temperatura en la cual los individuos son criados. Para esta investigacin se trabaj con individuos que contenan el genotipo tu (1) Szts y otros individuos del genotipo Oregon R, que fue tomado como grupo control. Estos individuos fueron divididos en 4 grupos donde: grupo (A) eran Ore R criados a 29 C, (B) eran Ore R criados a 22 C, (C) eran individuos tu (1) Szts criados a 29 C y (D) eran tu (1) Szts criados a 22 C. La progenie obtenida de estos cultivos fue contada y analizada estadsticamente. Se encontr un mayor nmero de incidencias de tumores melanticos en individuos criados a 29 C y en individuos de la cepa tu (1) Szts, no se hayo diferencias significativas en la incidencia de tumores relacionadas con el sexo. Los resultados obtenidos coinciden con el conocimiento ya existente de que los tumores melanticos de individuos tu (1) Sz ts se presentan en temperaturas elevadas, pero es menor en temperaturas ms bajas. (Rizki & Rizki, 1980) Tambin se observ variabilidad en la expresin del fenotipo y cierto grado de penetrancia incompleta en la expresin del gen. Introduccin: Por su fcil manejo, limitado espacio requerido para cultivo y pequeo nmero de cromosomas la Drosophila melanagoster es un organismo altamente utilizado en los laboratorios de biologa como modelo. La Drosophila melanagoster es una pequea mosca, cuya composicin gentica consta de 4 cromosomas y es fcil
Figura 1: Fenotipo salvaje de la Drosophila melanogaster en individuos macho y hembra.

de determinar el sexo del organismo a partir de una serie de bandas localizadas en su abdomen; las bandas en la hembra se encuentran ms equidistantes mientras que las del macho parecen unirse en la parte posterior del abdomen de la mosca. (ver figura 1). La Drodophila m. es muy utilizada en laboratorios de gentica por la poca cantidad de cromosomas que tienen, adems presentan mutaciones fcilmente observables como lo son el color de ojo o de piel, el tamao de las alas, etc. Para motivos de este experimento se trabaj con la aparicin
Figura 2: Tumores melanticos en Drosophila melanogaster.

de tumores melanticos. Estos son caractersticos por ser masas negras internas anormales (ver figura 2) que generalmente se generan durante la etapa larval. (Rizki & rutas

Rizki, 1980) Se ha encontrado que ms de 30 genes que regulan diferentes

metablicas y procesos de desarrollo que pueden llevar a la aparicin del fenotipo melanticos en las larvas. (Minkhina & Steward, 2006) Entre ellos est el gen tu (1) Szts, el cual se ha encontrado que genera tumores melanticos en larvas criadas a temperaturas de 26 C pero no en aquellas que son criadas temperaturas por debajo de los 18 C. (Rizki & Rizki, 1980) El que el fenotipo solo sea observado bajo ciertas condiciones lo convierte en un alelo condicional, que es aquel que solo se expresa dentro de un marco de condicionas especficas (Pierce, 2007), en este caso una temperatura de ms de 26 C. Para este experimento se trabaj con temperaturas de 22 C y 26 C, bajo estas condiciones aun cuando se observe algn grado de formacin de tumores en ambas temperaturas; la incidencias de moscas con tumores criados a 22 C ser significantemente menor a aquellas que crecieron a 29 C. (Perez-Chiesa, 1999) La otra cepa con la que se trabaja es con la Oregon R, la cual fue tomada como cepa control. Aun cuando los individuos que expresan un genotipo similar son cultivados en condiciones similares, cabe la posibilidad que dentro de la progenie haya individuos que no expresen ese genotipo. Esto comportamiento se conoce como penetrancia

incompleta. Se dice que un organismo es no penetrante a un rasgo cuando aun

poseyendo el genotipo no expresa el fenotipo correspondiente. Rasgos para los cuales individuos no penetrantes ocurren ocasional o frecuentemente son referidos como rasgos que presentan una penetrancia incompleta. (Sanders & Bowman, 2012) A su vez puede ocurrir que un mismo genotipo genere fenotipos diferentes dentro de individuos de una misma especie, se le conoce como expresin o expresividad variable al fenmeno en el cual un mismo genotipo produce fenotipos que varan en el grado de magnitud de la expresin del alelo de inters. (Sanders & Bowman, 2012) En el caso de la Drosophila melanogaster la penetrancia incompleta es observada cuando individuos criados en las condiciones permisivas para la aparicin de tumores (cepa tu(1) Szts criados a ms de 26 C) no generan los tumores, la expresin variable se puede observar en el diferente nmero de tumores encontrados en organismos que presentaron el fenotipo. El objetivo de este trabajo es observar ciertas caractersticas de la incidencia de tumores de dos cepas de Drosophila melanogaster como su expresividad en condiciones diferentes como lo son temperatura, y sus diferencias entre el sexo de los individuos observados. Metodologa: Se trabaj con dos cepas distintas de moscas Drosophila melanogaster, una de ellas eran las moscas salvajes de la variedad Oregon R (abreviada como Ore. R) y la otras eran moscas de la cepa tu(1)Szts (que en adelante ser mencionado como ts). Estas fueron cultivadas por el personal del laboratorio. Para el cultivo se dividieron en dos grupos los individuos de cada cepa. Un grupo fue cultivado a una temperatura de 22 C, mientras el otro fue cultivado a 29 C. Los cultivos fueron identificados de la siguiente manera: (A) moscas Oregon R criadas a 29 C, (B) moscas Oregon R criadas a 22 C, (C) moscas ts criadas a 29 C y (D) moscas ts criadas a 22 C. La progenie fue cuantificada luego. En cada cultivo se separaron los individuos en los cuales se poda identificar al menos un tumor, de aquellos que no tenan presencia de ellos. Estas caractersticas a su vez fueron clasificadas conforme al sexo del

individuo. Una vez recopilados los datos de los fenotipos observados (con o sin tumor) y los sexos de los individuos los datos fueron recopilados en tablas y procesados estadsticamente para determinar la relevancia de los mismos a travs de pruebas de contingencia. Resultados: Los datos obtenidos luego de contar los individuos de los frascos A, B, C y D fueron distribuidos en la Tabla 1, donde se identifica el genotipo del individuo (Ore. R o ts), la temperatura a la que fueron criados y el sexo de los mismos. Para facilitar la interpretacin de los datos en la tabla se trabaj con los porcientos de los fenotipos y entre parntesis se escribi el valor que representa dichos porcientos. Estos datos fueron luego reacomodados en tablas y sometidos a la prueba de X2 de contingencia para su anlisis. Cabe sealar que la cantidad de tumores encontrados en los individuos variaba, pero los mismos no fueron cuantificados con motivos de esta investigacin. Tabla 1: Incidencia de moscas con tumor en dos cepas de Drosophila melanogaster: Oregon R y tu(1)S2ts, criadas a 22 C y a 29 C 22 C Sexo % moscas % moscas con tumor sin tumor 0% (0) 1% (1) 0% (0) 2% (2) 100% (68) 99% (107) 100% (62) 98% (109) Total 29 C % moscas % moscas con tumor sin tumor 0% (0) 0% (0) 95% (78) 93% (64) 100% (104) 100% (67) 5% (4) 7% (5) Total

Cepa Control Oregon R

Machos

68

104

Control Hembras Oregon R ts Machos

108

67

62

82

ts

Hembras

111

69

A continuacin se presenta un ejemplo de cmo fueron los datos acomodados para su anlisis estadstico. Tabla 2: Ejemplo del reacomodo de los datos para los estudios analticos de contingencia. Experimento Clase de Clase de Total Resultados 1 Resultados 2 A a b (a+b) B c d (c+d) Total (a+c) (b+d) (a+b+c+d) De esta tabla se extraen los datos que luego son usados con las siguientes frmulas para determinar la X2 de contingencia y los grados de libertad: (| ( ( )( |) )( )( ) )( ) )

Con la X2 y los grados de libertad se determin si al comparar los datos observados haba diferencias significativas entre los mismos, con esto se pudo hacer un anlisis de la incidencia de tumores en las diferentes condiciones. Para poder realizar los estadsticos a todos los valores ya presentados en la tabla 1 se les aadi 0.5. Se trabaj con un nivel de confianza del 0.05. La tabla 3 presenta los datos para la determinacin de la relacin entre el sexo y la incidencia de tumores en individuos de la cepa Oregon R criada a 29 C (grupo A). Se encontr que no hay diferencias significativas en la incidencia de tumores entre machos y hembras del grupo de individuos A. Tabla 3: Incidencia de tumores entre individuos hembras y machos de la cepa Oregon R. criados a 29 C, grupo A. Sexo Con Tumor Sin Tumor Total Machos 0.5 104.5 105 Hembras 0.5 67.5 68 Total 1 172 173 X2 0.651 Grados de libertad 1 P-Value P > 0.05

Las tablas 4, 5 y 6 presentan datos similares para los grupos B, C y D respectivamente. En todas se encontr que no haba diferencias significativas entre la incidencia de tumores y el sexo de los individuos bajo estudio. Tabla 4: Incidencia de tumores entre individuos hembras y machos de la cepa Oregon R. criados a 22 C, grupo B. Sexo Con Tumor Sin Tumor Total Machos 0.5 68.5 69 Hembras 1.5 107.5 109 Total 2 176 178 2 X 0.107 Grados de libertad 1 P-Value P > 0.05 Tabla 5: Incidencia de tumores entre individuos hembras y machos de la cepa ts criados a 29 C, grupo C. Sexo Con Tumor Sin Tumor Total Machos 78.5 4.5 83 Hembras 64.5 5.5 70 Total 143 10 153 X2 0.0778 Grados de libertad 1 P-Value P > 0.05 Tabla 6: Incidencia de tumores entre individuos hembras y machos de la cepa ts criados a 22 C, grupo D. Sexo Con Tumor Sin Tumor Total Machos 0.5 62.5 63 Hembras 2.5 109.5 112 Total 3 172 175 2 X 0.00942 Grados de libertad 1 P-Value P > 0.05 Una vez descartado la existencia de diferencias significativas entre organismos de diferentes sexos se procedi a comparar la incidencia de tumores a diferentes temperaturas dentro grupos de organismos de genotipos similares. En la tabla 7 se

presentan los datos utilizados para analizar los datos relevantes a la incidencia de tumores en individuos Oregon R criados a 22 C y a 29 C. Tabla 7: Incidencia de tumores entre individuos ts criados a 22 C y 29 C. Temperatura Con Tumor Sin Tumor Total 22 C 3 172 175 29 C 143 10 153 Total 146 182 328 2 X 275 Grados de libertad 1 P-Value P << 0.05 En esta ocasin se encontr que hay una diferencia significativa al comparar la incidencia de tumores en individuos criados a diferentes temperaturas de la cepa ts. Un anlisis similar se realiz para los individuos de la cepa salvaje Oregon R, como se presenta en la tabla 8. Para los individuos Ore. R se encontr que no existen diferencias significativas al exponer los individuos a temperaturas diferentes. Tabla 8: Incidencia de tumores entre individuos Oregon R criados a 22 C y 29 C. Temperatura Con Tumor Sin Tumor Total 22 C 1 176 178 29 C 2 172 173 Total 3 351 354 X2 0.000884 Grados de libertad 1 P-Value P > 0.05 Luego se prosigui a comprar la incidencia de tumores de acuerdo a la temperatura en la cuales los individuos se criaron de las diferentes cepas. En la Tabla 9 se presenta la comparacin de individuos criados a 22 C de las cepas Ore R. y ts. Tabla 9: Incidencia de tumores entre individuos Ore. R y ts criados a 22 C. Genotipo Con Tumor Sin Tumor Total Oregon R 2 176 178 ts 3 172 175 Total 5 348 353 2 X 0.000366 Grados de libertad 1 P-Value P > 0.05

Un anlisis similar se realiz con los individuos criados a 29 C de las dos cepas bajo estudio. En este caso s se observ que las diferencias entre los individuos de las cepas Ore R y ts eran significativas (P < 0.05, se rechaz la hiptesis nula que estableca que las diferencias no eran significativas). Tabla 10: Incidencia de tumores entre individuos Ore. R y ts criados a 29 C. Genotipo Con Tumor Sin Tumor Total Oregon R 1 172 173 ts 143 10 153 Total 144 182 326 2 X 280 Grados de libertad 1 P-Value P < 0.05 Solo se hallaron diferencias significativas al comparar incidencias de tumores en individuos criados a diferentes temperaturas de una cepa ts, y en la incidencia de tumores en individuos de genotipos diferentes criados a 29 C. Lo que apunta a que tanto el genotipo como la temperatura de crianza deben guardar algn tipo de importancia en la incidencia de tumores.

Discusin: Con este trabajo se buscaba observar las caracterisitcas de tumores melanticos, sensibles a la temperatura en individuos de la especie Drosophila melanogaster. Entre los datos ms sobresalientes cabe sealar que no se hallaron diferencias significativas en cuanto a la incidencia de tumores entre machos y hembras en ninguno de los cultivos (ver tablas 3-6). Al comparar los datos observados aunque s se observ una mayor incidencia de tumores en machos ts criados a 29 C (ver tabla 1) estas diferencias no son lo suficientemente marcadas como para determinar una superioridad en la expresin dentro de dicho sexo. En cuanto a las temperaturas en las cuales los individuos fueron criados se encontr que una temperatura mayor (29 C) aumentaba la incidencia de tumores en

individuos con el gen de ts, pero en individuos cuyo genotipo era Oregon R no se observ diferencias significativas en la incidencias de tumores melanticos. Dentro de los individuos Oregon R, solo se observ 1 individuo dentro de los pertenecientes a la cepa Oregon R que present un tumor melantico (Ver tabla 1). Aun as esta observacin no represent un valor significativo para el anlisis (ver tabla 8) Se entiende que este individuo pudo haber representado un error a la hora de dividir los individuos en sus frascos, o que la mancha que se observ no realmente represente un tumor, ya que no se espera que en esta cepa de organismos a estas temperaturas se observen tumores. (Minhakina & Steward, 2006) En las cepas ts, la diferencia en la incidencia a partir de las temperaturas fue muy marcada (ver tabla 7). Por lo cual se entiende que hay cierta relacin entre una alta temperatura (29 C) y la incidencia de tumores melanticos en los individuos de la cepa ts. Por ltimo se compar la incidencia de tumores en condiciones similares para las cepas diferentes. Se encontr que en una temperatura de 22 C no hay diferencias significativas en la incidencia de tumores entre las cepas (ver tabla 9), a diferencia de los individuos criados a 29 C donde se pudo observar diferencias claramente marcadas entre los individuos de la cepa ts y los de la cepa Ore. R. Hubo una gran incidencia de tumores en los individuos que posean el fenotipo de la cepa ts al compararlos con aquellos de los del grupo control (ver tabla 9). Por lo cual se puede inferir que en una temperatura de 29 C los organismos de la cepa ts son los que presentaran una mayor incidencia de tumores. A partir de lo ya planteado se puede determinar que la presencia de tumores melanticos en individuos Drosophila melanagoster es mayor en aquellos individuos que contienen el genotipo tu (1) Szts que son criados a temperaturas de 29 C, no as en individuos de esta misma cepa criados a 22 C; comprobando as que la formacin de tumores de este gen pertenece a un alelo condicionado a temperaturas altas. El sexo, a partir de estos datos, no aparenta ser un factor determinante para la incidencia de los tumores, aunque sera necesario realizar otros experimentos para descartarlo por

completo. Dentro de los individuos del grupo C se pudo observar individuos que aun estado en las condiciones propicias para la formacin de tumores no presentaron el genotipo, lo que representa cierto grado de penetrancia incompleta en esta mutacin. Entre los datos observados se pudo ver que la cantidad de tumores encontrados entre los individuos variaba, estos datos no fueron contados en este experimento para el anlisis estadstico. Los mismos representan que existe expresin variable en este fenotipo. En futuras investigaciones se podra contar estos valores y compararlos con las condiciones de crecimientos de los individuos. Referencias Minkhina, S., & Steward, R. (2006, September). Melanotic Mutants in Drosophila: Pathways and Phenotypes. Genetics, 174(1), 253-263. Perez-Chiesa, Y. (1999). Incidence of Drosophila melanogaster flies with melanotic tumors for demonstrating conditionality, penetrance and variable expression. Drosophila Information Center, 131-132. Pierce, B. (2007). Genetics: A Conceptual Approach. New York: W.H. Freeman & Company. Rizki, T., & Rizki, R. (1980). Developmental Analysis of a Temperature-Sensitive Melanotic Tumor Mutant in Drosophila melanogaster. Wilhelm Roux's Archielves, 197-206. Sanders, M. F., & Bowman, J. L. (2012). Genetics Analysis: An Integrated Approach (2nd ed.). Illionois: Pearson.