Osmosis y permeabilidad del eritrocito (Resumen) Osmolalidad: Nmero de partculas osmticamente activas que se encuentran disueltas en 1kg de solvente.

Utilizando esta definicin como base, se puede clasificar el medio en el que se encuentre una clula (siempre se define en relacin al medio). Tonicidad (osmolalidad efectiva): relaciona la cantidad de partculas osmticamente activas que se encuentren en una solucin, sin embargo, solo toma en cuenta aquellas partculas no permeantes, indicando aquellas que son incapaces de atravesar libremente las membranas celulares. Toma en cuenta solamente aquellos solutos que ejercen una presin osmtica, y por lo tanto, provocan movimiento del solvente, de un lado de la membrana al otro, dependiendo del tipo de medio en el que se encuentre esta clula. Los cambios en el volumen celular se agrupan en: 1. Los cambios de volumen aniosmticos son aquellos que son inducidos por alteraciones en la osmolalidad extracelular. En condiciones fisiolgicas normales las clulas estn protegidas por la funcin renal de mantenimiento de la osmolalidad. 2 2. Los cambios isoosmticos son aquellas alteraciones en el contenido intracelular. En este caso las clulas se mantienen protegidas de estas alteraciones por el preciso balance que mantiene la clula de los ingresos y egresos de metabolitos. Mecanismo de cambio en el volumen celular: (1) la percepcin del cambio en volumen. Los estmulos que son censados durante un cambio del volumen celular y que generan mecanismos de respuesta son: 1. Hacinamiento macromolecular. Generalmente se refiera a que si disminuye o aumenta la cantidad de macromolculas, lo que nos va a afectar es la funcin enzimtica. 2. Concentracin inica. Se considera muy documentado la asociacin entre la concentracin inica de la clula en casos de alteraciones del volumen y la activacin de cascadas de sealizacin. 3. Cambios qumicos y mecnicos en la bicapa lipdica.

Osmotransduccin
Dos mecanismos celulares claramente inducidos por cambios en el volumen celular: cambios bioqumicos (en las concentraciones de macromolculas y en las concentraciones inicas) cambios mecnicos (sensados mediante la arquitectura del citoesqueleto y en la tensin de la membrana) Con relacin a estos cambios hay descritas algunas teoras de cmo puede ser que funcione este sistema. Se considera que la alteracin en la membrana puede producir que estiramiento o desdoblamiento en algunas protenas de membrana. A pesar de que la mayora de las protenas no van a sufrir variaciones significativas, ya que estn ancladas en la membrana, es importante saber que tienen receptores de estiramiento que son los que van a ser estimulados en estos cambios de volumen.

La activacin de las vas de movilizacin de osmolitos que finalmente restablecen el equilibrio osmtico y el volumen celular
Cuando las clulas son sometidas a diferentes osmolaridades tienden a presentar dos estados: aumento del volumen celular cuando son sometidas a osmolaridades menores que la intracelular. disminucin del volumen cuando son sometidas a concentraciones hiperosmolares. Parte I Observacin de cambios morfolgicos En el caso de los eritrocitos que no fueron expuestos al agua destilada ni a la solucin de salina permanecieron en un ambiente de osmolalidad plasmtica. sea que permanecieron en un medio isotnico, a raz de esto no hay diferencia entre la concentracin de solutos no permeantes entre el medio y el interior de la clula, por lo cual no hay una diferencia de presin osmtica. Al no haber diferencia en la presin osmtica no se da un flujo neto de agua a travs de las membranas de los eritrocitos, lo que permiti que estos conservaran su morfologa y tamao original. Sin embargo la administracin de lquidos con una tonicidad diferente a la del plasma originar desplazamientos de agua entre el LEC y el LIC, produciendo cambios en el volumen celular . La solucin salina de 1200 mOsm la cual es utilizada en el laboratorio es hiperosmolar. Cuando los eritrocitos son expuestos a la solucin salina 1200mOsm se crea una diferencia en la presin osmtica, por lo que se genera un movimiento de agua, en el cual, esta pasa del interior de la clula al medio, en un intento de equilibrar las concentraciones. La perdida de agua provoca una disminucin en el volumen. Adems, la forma de estas clulas vara, ests adquieren una forma estrellada, fenmeno que combina cambio de forma y disminucin del volumen y se conoce como crenacin. El agua destilada es considerada hipotnica, ya que la cantidad de solutos que posee es inferior al del eritrocito. En un intento por equilibrar las concentraciones de los solutos que se encuentran en el medio hipotnico con los del interior de la clula,

se produce un flujo de agua del medio al interior del eritrocito, lo que provoca que estos se hinchen y pierdan su forma de disco bicncavo. En algunos casos los eritrocitos se rompen por el exceso de agua en su interior produciendo la salida de hemoglobina. Cuando una clula se expone a condiciones externas de hipotonicidad se produce un hinchamiento celular debido al aumento del contenido de agua que ha difundido pasivamente desde el exterior. El hinchamiento celular induce variaciones en el estado de agrupamiento de protenas citoslicas intracelulares, por eso una gran variedad de protenas quinasas como la PKC, PKA, PI-3 quinasa, FAK, MAP quinasas (JNK, ERK-1, ERK-2, p38 MAP), tirosn quinasas (TK) y otras, se han descrito alteradas durante variaciones en el volumen celular (Pasantes-Morales,2006). Tambin se ha demostrado que todos los miembros de la subfamilia de las src TK son sensibles a cambios anisotnicos, participando en la activacin de canales de Cl, canales de K+ y cotransportadores (KCC). Incluso algn miembro de la familia src ha sido propuesto como parte de un sistema sensor que junto con las integrinas y protenas G (del tipo rho) participara en la mecanotransduccin de la deformacin de la membrana en algunos modelos celulares. Por lo tanto, existen muchos candidatos para detectar cambios en el volumen celular: desde canales mecanosensibles como receptores TRPV, los cuales son sensibles a estados de hipotonicidad y otra gran variedad de protenas de membrana, citoslicas o del citoesqueleto que se alteran frente a estos cambios inducidos por el hinchamiento .. No obstante, a pesar de algunos ejemplos documentados, se desconoce con certeza la naturaleza del sistema sensor responsable de la deteccin de los cambios de volumen debido, principalmente, al carcter integrador de las vas de sealizacin activadas. Parte II. Curva de Fragilidad osmtica En el comportamiento sigmoideo de la curva de fragilidad osmtica se refleja que al exponer la clula a soluciones salinas dentro de un rango de 0 mOsm/l (agua destilada)300 mOSm/l, se determinan tres etapas en la curva que sealan los diferentes mecanismos que se estn desarrollando dentro de la clula. Se inicia con una osmolaridad semejante a la plasmtica de 300 mOsm/l y se van disminuyendo las osmolaridades de las soluciones, presentndose como medios hipotnicos para la clula. Las clulas son ms permeables al agua que a muchos otros iones, esto mediante las acuaporinas, las cuales por efecto del gradiente el agua entra en el eritrocito, y provoca un aumento en el tamao de la clula, esto es regulado por el mecanismo de disminucin reguladora del volumen (RVD). Existe otro mecanismo regulatorio que se encarga de aumentar el volumen de la clula cuando esta se encuentra en un medio hipertnico, el cual se llama mecanismo de aumento regulador del volumen (RVI). Cuando la clula se encuentra entre 200-300 mOsm/ presenta un comportamiento constante, como se observa en la curva, es decir presenta porcentajes de hemlisis semejantes. Los mecanismos de RVD estn funcionando activamente para contrarrestar el cambio. La activacin de los canales se inicia desde que se sensa aproximadamente un 5% en el cambio del volumen celular. Los cambios dados durante la activacin de los RVD incluyen: 1. Debido a la fuerza electroqumica de K+, este puede dirigirse hacia afuera de la clula, pero este requiere de la salida anloga de un anin, que generalmente es el cloruro. 2. El acoplamiento de estos dos iones puede darse gracias a los cotransportadores electroneutro de K y Cl, KCCs se activan en respuesta al aumento del volumen, y la activacin es causada por desfosforilacin. Cuatro isoformas, estos se rigen por los ciclos de la serina/ treonina fosforilacin y desfosforilacin. 3. Tambin la salida de estos se da por separado a travs de varios tipos de canales de K y la salida de este se debe dar acompaada de un flujo de salida de aniones en paralelo, que se lleva a cabo a travs de VRAC. El Cl se piensa que es el sustrato preferido de VRACs. Una reduccin en la fuerza inica intracelular, cuando se da la inflamacin celular, parece ser el parmetro detectado por VRACs (son corrientes aninicas que sensan una reduccin en la fuerza inica intracelular, durante el aumento en el volumen celular ) 4. TRPs: Entrada de Ca++ (cationes), sensores explcitos de cambios en el volumen. Teoras sobre la activacin: Distencin directa de la membrana

La movilizacin de molculas de anclaje La activacin de fosfolipasas La insercin de vesculas del interior de la clula. 5. El eflujo de taurina, que en condiciones normales es modesto, aumenta de forma exponencial cuando las clulas aumentan de volumen, 30-90% de la taurina intracelular sale de la clula despus de la inflamacin. La identidad de la va de flujo de salida de la taurina es desconocido, pero se sugiere que los VRACs median este eflujo, as como el otros osmolitos orgnicos. Es importante destacar que este eflujo se lleva a cabo a diferentes tiempos comparados con el de los iones, es decir este se presenta en un tiempo ms tardo comparado con el de los iones. Despus en la curva se observa un comportamiento lineal donde a menores osmolaridades mayor hemlisis, esto se debe a que aunque todava hay dentro de la solucin algunos eritrocitos que estn solucionando el problema de aumento del volumen hay otros que no. Al final del tope de la curva se observa otra vez aplanada, es aqu donde el 100% de los eritrocitos de la solucin han sufrido hemlisis. Hay que denotar que nunca se observ una hemlisis en cero, pero esto es claramente esperable. En los seres humanos, el proceso de hemlisis puede ser inducido por razones mecnicas. Tambin es importante agregar que los mecanismos tienden a disminuir en su efectividad, conforme la osmolaridad de la solucin varie en grados extremos. Este efecto est claramente reflejado en la figura 1. III Parte. Permeabilidad de la membrana para varias molculas orgnicas en concentraciones isoosmolares. Las membranas celulares representan una importante barrera biolgica que juega un papel preponderante en la homeostasis celular y su permeabilidad a las diferentes sustancias le confieren a la clula la capacidad de especializarse en la realizacin de ciertas tareas. Casi todas las molculas utilizadas son sustancias orgnicas no cargadas; como es el caso del butanol, el Isobutanol, el etilenglicol, la etanolamina, la tiourea y la dietanolamina.Por otro lado sustancias como el agua, la urea y la glucosa presentan un mecanismo de transporte a nivel de membrana as como el NaCl. El flujo o influjo de este tipo de sustancias va a ser influenciado no solo por un gradiente qumico sino tambin por uno elctrico como en el caso del NaCl, as como la cintica de transporte de cada una de las protenas de membrana que participan en el transporte transmembranal de stos solutos y la cantidad de stas expresadas en la membrana celular. Los menores tiempos de hemlisis lo poseen las sustancias urea y butanol, a pesar de ste ltimo ser un compuesto que atraviesa la membrana por difusin simple. En concreto el eritrocito maduro del humano adulto posee transportadores de membrana para la urea, especficamente los del tipo UT-B causante de los bajos tiempos de hemlisis registrados para la urea. El ingreso de urea a la clula se debe exclusivamente al gradiente de concentraciones entre el LIC y el LEC, lo que causa el ingreso de sta, adems que no existe ningn mecanismo celular alternativo que extraiga la misma sustancia del eritrocito o bien la metabolice como en el caso de la glucosa. En el caso de sustancias como el butanol y el isobutanol con tiempos de hemlisis bajos, se sigue un patrn de difusin ms parecido a lo que determina la ley de Fick, debido a que ambas son molculas con relativa liposolubilidad y definitivamente un bajo peso molecular (PM), ambos PM 74. El tiempo de hemlisis registrado en el laboratorio para el Isobutanol es 2,3s mayor al del butanol.

Esto se debe a otro factor que tiene que ver con la estructura molecular del compuesto. El isobutanol es un compuesto qumico con una conformacin molecular ms ramificada, esto le proporciona un mayor impedimento estrico debido a la diferente colocacin del grupo hidroxilo OH respecto al butanol Respecto a la etanolamina PM 61 y el etilenglicol PM 62, ambas sustancias presentan un peso molecular an ms bajo que el del butanol y el isobutanol, pero su estructura qumica les brinda mayor polaridad que los dos alcoholes anteriores. El mayor tiempo para la hemlisis del etilenglicol nos lleva a la observacin qumica de la mayor polaridad brindada al alcohol por sus dos grupos hidroxilo OH ante la polaridad de la amina dada por un por un grupo NH2 y un OH. Para el caso de la tiourea y la etanolamina, ambas sustancias siguen un mecanismo de difusin simple a travs de la membrana celular. La tiourea presenta una altsima polaridad y en disolucin los dos tomos de N2 y de S de cada molcula van a formar enlaces de hidrgeno entre molculas y con el agua por lo que se crea un impedimento para la libre. Por otro lado de la dietanolamina uno de los mayores factores en su difusin por la membrana es el alto PM 105 si se compara con las sustancias anteriores, adems de una baja liposolubilidad debido a su polaridad. La glucosa (PM 180) no registr hemlisis en la solucin de eritrocitos en el perodo de observacin en el laboratorio. La glucosa ingresa a la clula en gran cantidad por un mecanismo de difusin facilitada. Para esto el eritrocito posee el GLUT-1. Los eritrocitos, dependen energticamente de forma exclusiva de la glucosa y su metabolismo; una vez que ingresa a la clula se fosforila y pasa los procesos de gluclisis o glucognesis, esto contribuye a mantener el gradiente de concentraciones. El GLUT-1 es una protena de membrana que tiene 12 dominios transmembrana (12TM) con su respectiva con formacin -hlice cada uno y asas intracelulares y extracelulares que unen cada uno de los 12TM. Adems posee una alta afinidad por la glucosa. Km= 1-2mM. El GLUT-1 es especialmente importante en tejidos cuyo metabolismo energtico depende altamente de la glucosa, y es entonces que se vuelve importantsimo en el eritrocito, donde se ha llegado ha documentar que corresponde a un 5% del total en peso de la membrana plasmtica del eritrocito adems posee una alta afinidad por la glucosa. Km= 1-2mM (Bermdez, V; et al. 2007), esto hace que este transportador pueda internalizar la glucosa casi sin importar la concentracin de sta en el LEC y hace que el control nivel intracelular de glucosa y fuentes energticas en el eritrocito estn estrechamente reguladas, es por esto y el hecho del metabolismo intracelular de la glucosa que se explica el de hecho de que no se manifestara hemlisis en el laboratorio para la solucin de eritrocitos con glucosa. el GLUT-1 tambin posee un comportamiento de saturacin; similar al descrito por Michaelis Menten, es por eso que a pesar de ser una gran cantidad de glucosa presente en solucin no toda la glucosa ingresa inmediatamente a la clula y al ser incapaz de difundir por la bicapa, la hemlisis no se observar hasta que eventualmente el GLUT1 haya internalizado en los eritrocitos mucha de la glucosa de la disolucin. El NaCl en solucin se disocia en un 93% en la solucin lo que causa que los iones de Cl- y Na+ se hidraten. El Na+ posee gran cantidad de transportadores de membrana plasmtica entre los que se pueden citar cotransportadores como los SGLT, el NCC, NKCC2, NBC1. En el eritrocito se pueden cotransportar por medio del NCC iones de Na + y Cl- as como con el NKCC2, adems en las clulas rojas resulta importante el NBC capaz de transportar sodio y bicarbonato importante para la funcin de transporte de CO2 de los eritrocitos. Tambin hay protenas de transporte inverso para el sodio como el NHE y el NCX, el primero intercambia hidrogeniones con sodios lo que resultara importante en la regulacin del pH celular y el NCX transporta 3 molculas de Sodio por cada Calcio. De la misma forma para el Cl- existen transportadores de membrana celular como el AE de especial importancia en el eritrocito como el NHE pues es capaz de intercambiar bicarbonato por cloruro. As como cotransportadores como el KCC y los mismos canales inicos especficos para cloruro. Al exponerse los eritrocitos a la solucin salina isoosmolar, se va a producir la difusin de los iones a travs de la membrana por medio de los diferentes transportadores de membrana existentes sin embargo la clula posee mecanismos muy importantes para evitar que se recargue de estos iones el LIC, el principal mecanismo lo brinda la Na+/K+ ATPasa que utiliza la energa del ATP para transportar 3 molculas de sodio fuera de la clula y a la vez hacer ingresar a ella 2 molculas de potasio. Estos mecanismos de transporte transmembranal y en especial la Bomba de Na+/K+ explican el hecho de que en el laboratorio no se observara hemlisis significativa en la solucin de eritrocitos con solucin salina que adems se encontraba en condiciones de isoosmolaridad con el eritrocito por lo que el movimiento molecular por gradientes es mnimo.