Nucleul celular n celulele eucariote, exist un organit - nucleul, care spre deosebire de nucleul celulelor procariote, este nconjurat

de un nveli nuclear. Rolul principal al nveliului nuclear este de a izola genomul celular i procesele genetice eseniale, replicarea ADN i sinteza de ARN. Caracteristica nucleului la eucariote este faptul c, acesta are n coninutul su ADN complexat cu proteine specializate (histone) care l mpacheteaz i particip la reglarea activitii sale. Rolul nucleului o rezulta din DOGMA CENTRALA A GENETICII MOLECULARE o AND--->transcriptie ARN--->translatie --->Proteine o Transcriptia :transmiterea informatiei , dintr-o anumita succesiune de baze, din structura ADN,intr-o secventa de baze complementare de ARN. Produsul transcris se numeste ARN-mesager. o Pe langa informatia necesara sintezei unui lant peptidic, contine si secvente neinformationale, care sunt indepartate prin excizie, tot in nucleu , prin ARN-procesare; o Translatia: este procesul prin care mesajul genetic, reprezentat de secventa de baze azotate a ARN mesager, este tradus intr-o secventa corespunzatoare de aminoacizi. Translatia are loc in citoplasma, la nivelul ribozomilor , care reprezinta sinteza proteinelor; o Replicatia : este procesul biochimic in care ADN este supus la o serie de procese moleculare, care se desfasoara in nucleu si care asigura autoreproducerea informatiei genetice. o NUCLEUL este considerat un centru de comanda , care functioneaza ca un computer chimic, specializat in sinteza proteinelor Caracterele generale ale nucleului Nucleul este prezent n toate celulele eucariote, cu excepia hematiilor i trombocitelor. La celulele procariote nucleul se prezint sub forma unei catene de ADN dispus circular, neconjugat cu histone. Forma nucleului corespunde n general cu forma celulei. n celulele izodiametrice i tinere nucleul este rotund, n celulele anizodiametrice nucleul este oval, n celulele cilindrice sau prismatice este fusiform sau n form de bastona, iar n celulele endoteliale secretoare sau adipoase este turtit. Formele neregulate bilobate sunt ntlnite n celulele sanguine sau n celulele maligne. Poziia nucleului este central, excentric sau bazal. Majoritatea celulelor au un singur nucleu, foarte puine din acestea sunt binucleate (7-8% din hepatocite) sau multinucleate (celulele musculare striate). Dimensiunile nucleilor variaz ntre 3 -20 n funcie de vrsta celulei i activitatea metabolic. Raportul nucleu-citoplasm indic vrsta celulei i unele criterii de malignitate. -Nucleul se caracterizeaza printr-o distributie compartimenlalizata a componentelor functionale .Membrana nucleara contine pori , si este sustinuta de o retea , formata din filamente intermediare care formeaza lamina nucleara. -Gramezile de cromatina formeaza nucleolii . Cromatina are o organizare speciala ,formand teritorii distincte ( nuclearspeckles, PML bodies and Cajal bodies) prezenti in zonele lacunare . Topografia nucleara ramane un subiect deschis , in special sub raportul extinderii cromatinei

Invelisul nuclear nveliul nuclear mparte celula ntr-un compartiment nuclear i unul citoplasmatic Este alctuit din dou membrane concentrice, care delimiteaz un spaiu perinuclear (cisterna nuclear). Aceasta se continu cu canaliculele i cisternele reticulului endoplasmic

Membrana extern se continu cu membrana reticulului endoplasmatic i prezint pe faa extern ribozomi ataai. Membrana intern este aderent nucleoplasmei de care se ataeaz heterocromatina. Din loc n loc membranele fuzioneaz i formeaz pori. Porii nucleari sunt de trei tipuri: simpli, n diafragm i cu peri compui. Acetia din urm au o form octogonal, cu diametru de 60 nm nconjurat de un inel numit anulus al crui diametru exterior este de 120 nm. Inelul este alctuit din 8 granule sferoide de natur proteic, cu diametrul de 15 nm, care dau forma octogonal porului. n centrul porului se afl o diafragm fin, o granul central i o serie de tubuli, ca structuri proprii permanente . Porul participa la transportul moleculelor (transport activ) Ulterior s-a demonstrat ca aceste proteine intra nucleu prin recrutarea karyopherins. Astfel, proteinele membranare din inelul nuclear pot actiona ca niste proteine. Din nucleu trec n citoplasm precursorii ribozomali i particulele ribonucleoproteice formate din complexe ale ARN cu proteine speciale.

Trecerea unor macromolecule cu dimensiuni mult mai mari dect diametrul porului este posibil datorit deformrii precursorilor ribozomali n cursul transportului prin por, care este i un sistem de transport activ. Macromoleculele de ARNm i ADN-polimerazele, a cror greutate molecular variaz ntre 100.000 200.000 Da, trec prin por, fie prin adoptarea unei conformaii alungite, fie interacionnd cu receptorii nucleari care le faciliteaz trecerea prin lrgirea porului. Numrul porilor variaz de la un tip de celul la altul, reprezentnd n general 10% din suprafaa membranei. Spaiul perinuclear (intermembranar) este de 20-40 nm, se continu cu reticulul endoplasmatic fapt care explic modificrile rapide ale nveliului nuclear n timpul diviziunii (i se reface la sfritul ei). Lamina fibroas (lamina nuclear) se afl pe faa intern a nveliului nuclear n zona neocupat de pori i este alctuit dintr-o reea fibroas de proteine. Aceasta ndeplinete o serie de funcii i anume: - particip la meninerea formei nucleului; - intr direct n interaciune n special cu heterocromatina; - particip la dezintegrarea i refacerea nveliului nuclear n timpul diviziunii celulare.

Porii nucleari Prin pori are loc transportul moleculelor i macromoleculelor din nucleu n citoplasm sau invers pentru realizarea funciilor celulare. Particulele sunt mult mai mici dect diametrul porului, iar permeabilitatea membranei nucleare variaz de la un tip de celule la altul chiar n aceeai celul, de la o faz la alta a ciclului celular. Dimensiunile porului sunt: 9 nm n diametru i 15 nm n lungime. Prin pori trec ioni i substane cu greutate molecular mic, sub 5.000 Da. Exist i celule la care membrana nuclear reprezint o barier i pentru trecerea ionilor (K+, Na+,C1+). Trecerea moleculelor i macromoleculelor din citoplasm n nucleu se face prin porii nucleari. Acestea sunt enzimele necesare sintezei ARN, proteinele care intr n constituia cromatinei, enzimele implicate n procesele de transcripie i ARN-polimerazele. Matricea nucleara n nucleoplasm se afl nucleolul i cromatina. Matricea nuclear are rol n meninerea formei nucleului i reprezint mediul n care se sintetizeaz ADN i ARN. Aceasta conine enzime importante n formarea legturilor macroenergice i n metabolismul anaerob (n special glicoliza). Matricea nuclear este alctuit dintr-o poriune labil alctuit din proteine solubile cu greutate molecular mic, enzime, ap. ATP, ioni i o reea de proteine stabile cu greutate molecular mare, care reprezint un fel de citoschelet al nucleului.

n aceast reea s-a descris o protein fibrilar numit nucleoplasmin, un peptid fosforilat, care reprezint aproximativ 10% din totalul proteinelor nucleare. n aceast matrice nuclear intr i lamina nuclear sau fibroas a nveliului nuclear. Cea mai mare parte din proteinele nucleare sunt reprezentate de proteinele nehistonice, care intr n structura cromatinei, iar altele au rol n reglarea exprimrii genelor. Tot din aceste proteine fac parte i enzimele cum ar fi ADN i ARN- polimerazele, proteinkinazele, etc.

Matricea nuclear are o structur dinamic, prezentnd contractilitate dependent de cationii bivaleni (Ca2+, Mg2+ i mai puin de ATP). Volumul nuclear se modific prin variaiile de concentraie ale cationilor bivaleni si monovaleni. Exist diferene n concentraiile Na+ i K+, apei i ATP n nucleu fa de membran. Dinamismul matricei nucleare se observ i n micrile nucleului precum i n timpul diviziunii, cnd se dezintegreaz la sfritul profazei i se reface n timpul telofazei. Cromatina si cromozomii n interfaz cromatina este forma relaxat ,(desfurat) a cromozomilor, care se constituie n timpul diviziunii. Cromatina se asambleaz i se organizeaz formnd structuri condensate, caracteristice cromozomilor, acestea fiind de fapt dou forme ale aceluiai component: ADN i histone . Cromatina se coloreaz cu colorani bazici: hematoxilin, albastru de metilen i cu toluidin, datorit coninutului mare de ADN. n interfaz, se prezint sub dou forme: Eucromatina, care este o reea fin granulat sau filamente fine slab colorate. Eucromatina este activ aici se sintetizeaza ARN, conine gene active sau uor represate, Heterocromatina care se coloreaz intens i apare sub form de grunji mari numii i cromocentri sau cariozomi. Este inactiv metabolic, nu conine gene active i nu este transcriptibil .

ADN cromozomi-nucleu Raportul celor dou tipuri de cromatin, intensitatea coloraiei acestora n nucleu variaz n funcie de activitatea metabolic a celulelor respective. Din punct de vedere biochimic, ntre eucromatin i heterocromatin difer doar gradul de spiralizare, mpachetarea fiind mai dens n heterocromatin i mai relaxat n eucromatin. Heterocromatina constitutiv este condensat permanent n interfaz, se gsete constant n toate tipurile de celule din organism. Heterocromatina facultativ este condensat numai n anumite tipuri de celule i n anumite perioade ale dezvoltrii, cnd genele nu sunt exprimate. n unele tipuri de celule heterocromatina facultativ poate deveni eurocromatin cu gene exprimate pe care se poate sintetiza ARN. Din heterocromatina facultativ face parte i cromatina sexual Barr, care provine din inactivarea unui cromozom X din cei doi gonozomi sexuali feminini n cea de-a 14-15-a zi de la fecundaie. Aceast cromatin este caracteristic sexului feminin. Morfologic are form semilunar sau triunghiular, alipit de membrana intern a nveliului nuclear, iar n neuroni este alipit nucleolilor Nucleolul Nucleolul este prezent n toate celulele eucariote, cu excepia celulelor embrionare. Lipsa lui n aceste celule se datoreaz faptului c blastomerele se hrnesc cu vitelus, deci nu exist sintez proprie de proteine.

Nucleolul i are originea n cromozomii 13,14,15, 21, 22, care prin fuziune formeaz 1-2 nucleoli . n nucleol are loc sinteza de ARN ribozomal. Se coloreaza cu coloranti bazofilici, ai dimensiunea de l-2, nedelimitat de membran. n celulele neuronale de nucleoli se ataeaz cromatina Barr.

Ultrastructura nucleolului -componenta granular format din particule cu diametru de 15-20 nm i care reprezint precursorii ribozomilor. -componenta fbrilar alctuit din fibre fine cu diametru de circa 5 nm, format din ADN pe care se sintetizeaz ARNr (ARNr 45s). -componenta amorf umple spaiul dintre granule i fibre, formnd partea labil a nucleolului unde se asambleaz componentele granulare i fibrilare. Nucleolul este nconjurat de cromatin, fiind considerat de unii citologi ca fiind a 4-a component a nucleului (pars cromozomica). In greutatea uscat nucleolul conine 3% ADN, 7% ARN i 90% proteine . ADN este reprezentat de organizatorii nucleolari care ptrund ca nite bucle n nucleol, iar ARNr, se afl n diferite faze de maturare (45s, 41s, 32s, 28s, 18s). Datorit compoziiei mari de substan uscat, nucleolul are o structurfoarte dens, observat foarte refrigent n microscopia optic de fluorescen. Funcia de baz a nucleolului depinde de starea funcional a celulei. Raportul dintre volumul nucleului i a nucleolului este numit raport nucleo-nucleolar.

 n general nucleolul ocup 20-30% din volumul nucleului, dar cu ct celula este mai tnr i mai activ n sinteza proteinelor, cu att raportul nucleolo-nuclear este mai mare. Celulele tinere au: nucleu mare eurocromatic, un nucleol mare sau mai muli nucleoli, citoplasm redus i uor bazofil. Celulele adulte prezint: nucleu mai mic, nucleoli mici i citoplasm abundent. n condiii patologice (celule maligne), nucleolii sunt mari, hipertrofiai, cu un diametru de 1/3 din nucleu sau chiar mai mare. De multe ori hipertrofia nucleului este proporional cu gradul de malignitate al tumorii. Funciile nucleolilor sunt influenate de o serie de factori fizici, chimici i biologici. De exemplu: actinomicina inhib sinteza ARNr n nucleolii celulelor canceroase. O serie de cercetri relativ recente efectuate pe culturi celulare au artat c nucleolul este termosensibil. Culturile de fibroblaste inute la temperaturi ridicate provoac liza componentei granulare din nucleol. Sinteza i asamblarea

ribozomilor este oprit prin inhibiia ARN polimerazelor. n afar de eurocromatin, heterocromatin i nucleoli, n nucleoplasm s-au evideniat granule pericromatiniene de 30 nm diametru, situate la periferia vaselor de heterocromatin, granule intercromatiniene de 20 nm diametru care apar n grupri de eucromatin i corpi nucleari (nuclear bodies), care nu au fost complet caracterizai chimic i funcional. n ceea ce privete corpii nucleari prezeni n nucleoplasm, att n condiii fiziologice ct i n condiii patologice, se pare c acetia constituie un mijloc de transport al ARNr din nucleu n citoplasm i semnific creterea activitii celulare La microscopul electronic corpii granulari apar de obicei constituii dintr-un miez granular n care granulele au dimensiunea comparabil cu cea a ribozomilor i un nveli fibrilar format din fibre groase de tip cromatin. Structura biochimic a nucleului conine macromolecule organice, ap i ioni Acizii nucleici, sunt principalele nucleoproteine i anume: ADN i ARN cu cele trei tipuri de ARNm, ARNr, ARNt. Nucleii mai conin proteine bazice i acide. Nucleoproteinele confer bazofilia nucleului.

Proteinele bazice, sunt histonele (12.000 Da, bogate n arginin, lizin i histidin) i protaminele (histone speciale) care intervin n reglarea activitii genelor. Proteinele acide solubile, sunt asociate de ARN i sunt implicate n funciile metabolice ale nucleului, i proteinele acide reziduale intr n structura cromozomilor. Proteinele-enzime se gsesc ntr-o gam variat i anume: enolaze, ADN- polimeraze, ARN-polimeraze ,fosfataze alcaline i acide, nucleotidaze,. Lipidele nucleare, sunt n cantiti reduse, fiind reprezentate de fosfolipide i colesterol, care sunt legate de proteine formnd compui lipoproteici i liponucleoproteici. Substane minerale: Nucleul conine o mare cantitate de cenu i cantiti mari de Ca, Mg, K, Na, Cu, Co. Apa, este legat de proteine, cantitatea acesteia variaz ntre 50-80% din greutatea nucleului.

Nucleul n timpul diviziunii n timpul diviziunii celulare, la sfritul profazei, nveliul nuclear se dezintegreaz iar coninutul nucleului se amestec cu cel al citoplasmei. nveliul nuclear se reface n celulele fiice n perioada telofazei. Mitoza implic desfurarea unor procese complexe fizice i biochimice prin care complexele de motilitate asigur deplasarea cromozomilor spre polii opui ai celulei precum i diviziunea citoplasmatic, astfel nct fiecare celul s primeasc cantitatea corespunztoare de organite membranare i proteine citoscheletale. Microtubulii au rol major n toate aceste procese, ei formeaz fusul mitotic i organizeaz cromozomii i citoplasma. De asemenea, intervin n micrile intracelulare care au loc n mitoz pentru structurarea i formarea fusului magnetic i interaciunea sa cu cromozomii, intervin n mecanismele prin care cromozomii se aliniaz, se separ i apoi se deplaseaz i induc micrile care cauzeaz separarea celulelor fiice. Mitoza Rezultatul mpachetrii ADN ar fi aproximativ 10.000/1. Cele 46 de macromolecule de ADN formeaz prin mpachetare 46 de cromozomi cu lungime mijlocie de 5, ceea ce ar corespunde de la 2 m de ADN n interfaz i la 200 n timpul diviziunii. Structurile specifice ale celulei mitotice sunt: microtubuli polari (situai n zona pol- centru);

microtubuli kinetocorici (lng centromerul fiecrui cromozom); microtubuli astrali (care iradiaz de la polii celulei ctre periferia acesteia). Microtubulii i structurile lor asociate formeaz un semifus. Centrul unui fus mitotic din metafaz este format din ntreptrunderea microtubulilor polari, care reprezint baza mecanic prin care se realizeaz micarea cromozomilor i alungirea celulei n anafaza i telofaza mitozei.

Cromozomii metafazici sunt reprezentai de cromatin nalt condensat. Centromerul i kinetocorul sunt dou componente ale cromozomului, primul este reprezentativ pentru cromozomul metafazic, iar al doilea este o structur localizat n dreptul centromerului la care se ataeaz microtubulii kinetocorici, responsabil de micarea cromozomilor n anafaz, prin deplasarea cromozomului spre poli. Centromerul unui cromozom are rolul de a determina ataarea kinetocorului la cromozom n timpul mitozei. Anafaza unei mitoze cuprinde dou procese de motilitate distincte, care se produc concomitent. Cromatidele surori se despart prin ruperea lor n punctul de contact reprezentat de centromer, deplasndu-se apoi ctre polii opui ai celulei. Acest proces s-a numit anafaza A, i se realizeaz prin scurtarea microtubulilor kinetocorici. Simultan se produce o alungire a celulei prin ndeprtarea polilor, care vor intra n alctuirea celor dou celule fiice. Aceste procese au loc la sfritul anafazei B, care implic alungirea microtubulilor polari.

Micarea cromozomilor se face cu o vitez de 12 m/min. n anafaz microtubulii adiaceni se deplaseaz unul fa de altul ctre captul lor (-) pe cnd dineina din cili sau flageli, deplaseaz microtubulii ctre captul (+). O asemenea deplasare este determinat de o ATP -aza de tipul kinazei .

Motorul molecular de pe kinetocorul cromozomal pe care il ataseaza la. In timpul metafazei motorul impinge microtubulul care produce o miscare a cromozomului spre MTOC . Aceasta miscare separa cromatidele surori astfel incat cate o copie din fiecare cromozom se indreapta spre celulele nou formate. Aceasta se produce datorita depolimerizarii microtubulilor care se scurteaza . Citokineza este ultima faz a mitozei i const din diviziunea citoplasmei n dou compartimente Morfologia i ultrastructura cromozomilor umani. n timpul diviziunii celulare, cromozomii au aspecte morfologice caracteristice fiecrei faze a diviziunii. n profaz cromozomii au aspect filamentos, cu rare ngrori pe traiectul lor, n metafaz spiralarea s-a terminat i cromozomii au o morfologie care permite studiul cariotipului, efectuarea unei bandri i a unei cariograme. Cromozomii umani au 7-8 lungime i 1-2 grosime, au form de bastona sau de majuscule. Acetia se coloreaz intens cu colorani bazici, prin metoda Feulgen.

Un cromozom metafazic este alctuit din dou cromatide unite la nivelul unei constricii primare. La acest nivel se gsete centromerul care conine doi corpusculi, numii kinetocori, prin intermediul acestora, cromozomul se fixeaz de filamentele fusului de diviziune n metafaz. Centromerul mparte cromatidele n dou brae. Dup poziia centromerului, cromozomii sunt clasificai n : telocentrici - centromerul este situat la captul cromozomului; acrocentrici - centromerul este situat aproape de captul cromozomului; submetacentrici, la care centromerul este situat aproape de centrul cromozomului (form de "L"); metacentrici - centromerul este situat la mijlocul cromozomului i cele dou brae sunt egale (forma de "V"). Majoritatea cromozomilor sunt monocentrici . Pe lng centromeri, cromozomii prezint constricii secundare pe traiectul braelor, la nivelul crora se gsesc organizatorii nucleari. Unii cromozomi prezint la captul braului scurt un corpuscul legat printr-un filament de cromatin. Acest corpuscul sc numete satelit, iar cromozomii se numesc SAT-cromozomi. Aceste structuri cromozomiale sunt folosite n practica citogenetic pentru cariotipare, cariograme i bandare.