METODO DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACIN RITCHIE FUNDAMENTO:

INTRODUCCIN
Esta tcnica forma parte de una serie de anlisis coproparasitoscopicos considerados de concentracin fue descrita por Ritchie en 1948, es de utilidad para la bsqueda de huevos quistes y larvas. Es empleada cuando no se observan parsitos en el mtodo directo y para aumentar la probabilidad de observar parsitos en las muestras estudiadas. Se basa en la concentracin de los quistes y h u e v o s p o r sedimentacin mediante la centrifugacin, con l a a y u d a d e f o r m o l y t e r p a r a separar y visualizar los elementos parasitarios. U n a s v e n t a j a s q u e t i e n e e s t e m t o d o e s c o n c e n t r a r y n o d e f o r m a r l a s f o r m a s parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una tcnica para evaluacin de tratamiento y determinacin de frecuencia.

PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN

Es fundamento de la tcnica se basa en el uso de la fuerza centrfuga que obligara a los parsitos a ir al fondo del tubo, del ter que elimina los detritus orgnicos, mientras que el formol ayuda a mantener la integridad de las formas parasitarias que se concentran.

MATERIAL y EQUIPO Centrfuga Tubos de ensaye cnicos de 15 ml G a s a c o r t a d a e n c u a d r o s d e 1 5 c m por Embudos de polietileno Vasos de precipitado de 50 ml Aplicadores de madera Pipetas Pasteur con bulbo Portaobjetos de 26 X 76 mm Cubreobjetos de 22 X 22 mm Solucin salina isotnica Solucin de formaldehido al 10% Microscopio Materia fecal

LISTA DE REQUERIMIENTOS
Reactivos NUM. 1 2 3 NOMBRE DEL REACTIVO Formaldehdo Eter etlico o de petrleo Solucin salina CONCENTRACIN 40 % Q. P. 0.9% CANTIDAD 500 ML 300 ML 1000 ml

METODO a) Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia f e c a l e n e l v a s o d e p r e c i p i t a d o , s e a a d e n 1 0 m l d e s o l u c i n s a l i n a y s e homogeniza. b) Se f iltra la suspensin a tra vs de la g a s a c o l o c a d a e n e l e m b u d o , recogiendo el filtrado en el tubo cnico. c) Se centrfuga la suspensin durante 1 min a 2000 rpm. d) Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento c o n s o l u c i n salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo las veces necesarias hasta que el sobrenadante sea claro. e) Al ltimo sedimento se agregan 10 ml de solucin de formaldehdo al 10%,se mezcla y se deja reposar durante 10 min. f)6.- Se aaden despus 5 ml de ter, se tapan los t u b o s c o n t a p o n e s d e caucho y se agitan enrgicamente durante 30 segundos. g) Se centrfuga durante 2 minutos a 1500 rpm. h) Despus de centrifugar se observan 4 capas:

ter en la superficial, un tapn de restos fecales, formaldehdo, sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.

i) Se introduce la pipeta Pasteur hasta la capa d, se extrae c o n c u i d a d o u n a gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.

j) Se le aade una gota de lugol y co n uno de los ngulos d e l c u b r e o b j e t o s , se homogeniza, cubrindolo con el mismo. k) Se observa la preparacin en el microscopio con objetivos de 10X y 40X. INTERPRETACION DE RESULTADOS: En caso de encontrar algn parasito durante la realizacin de esta prueba se d e b e r a n o t a r e n l a h o j a d e r e s u l t a d o s e l n o m b r e d e l p a r a s i t o a s c o m o s u estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)

Mtodo de Sedimentacin Simple en Copas

FUNDAMENTO Este procedimiento de decantacin en copas es una tcnica farmacutica conocida desde muchos aos en el cual se utiliza un procedimiento fsico para la separacin de mezclas. Este mtodo tambin es utilizado para el diagnostico de aquellas muestra de heces fecales sospechosas de contener huevos de Fasciola hepatica; el mtodo ha demostrado ser bondadoso para otro tipo de huevos de helmintos e incluso para quistes de protozoario. Las ventajas que tiene, sobre otro, es que hace una concentracin de volmenes considerablemente grandes de materia fecal.

MATERIAL Reactivos Verde de malaquita Detergente Agua de la llave Agua destilada Soluciones Solucin de detergente al 5% ( Se pasan 5 g de detergente de cualquier marca y se disuelve en 1000 ml de agua; el detergente que no se alcance a disolver, se sedimenta y decanta el sobrenadante o se deja

en el frasco donde se guarda la solucin, pues no interfiere en el proceso) Solucin de verde de malaquita al 1% ( Se disuelve el verde de malaquita en los 100 ml de agua y se guarda la solucin en frascos con tapn esmerilado). Vidriera Copas crnicas Pipeta pasteur Portaobjetos Cubreobjetos. Embudo Aparatos Microscopio compuesto Otros Aplicadores de madera Bulbos de caucho Gasa

METODO 1. En el recipiente donde se llevo la muestra al laboratorio se homogeneiza la muestra con agua de la llave y se hace pasar a travs de la gasa previamente colocada en un embudo y recibiendo la suspensin en la copa. 2. Se colocan 5 ml de colorante y se agita con un aplicador 3. Se agregan 5 ml de la solucin de detergente y se agita nuevamente 4. Se completa el volumen de la copa y se deja reposar durante 15 min.

5. Se decanta el sobrenadante y se agrega mas agua, mezclando con el aplicador y se deja reposar otros 15 min. 6. Se decanta nuevamente el sobrenadante. 7. Con la pipeta con bulbo, se toma del sedimento la muestra que se coloca en el portaobjetos y se pone el cubreobjetos. 8. Se observa con el microscopio, usando objetivos de 10X y 40X, cuando sea necesario. 9. Se hacen tres preparaciones de cada sedimento para asegurar la positividad de la muestra. Cuando se tiene suficiente practica se puede utilizar la lupa del microscopio, sobre todo cundo se busca la F. hepatica.

BIBLIOGRAFA
Biagi Francisco, Enfermedades Parasitarias, 3ra edicin, Manual Moderno, 2004 Tay Jorge, Parasitologa, 6va edicin, Mndez Editores, 2010. Becerril Marco, Parasitologa Mdica, 2da edicin, Mc Graw Hill, 2008. Gmez Marn Jorge E., Protozoologa Mdica, 1ra edicin Manual Moderno, 2010. Jimnez Cardoso Enedina, Control de calidad en Parasitologa, 1ra edicin, editorial Prado, 2006. Rodrguez, Atlas de Parasitologa Mdica, 1ra edicin, Mc Graw Hill, 2004.