DAFTAR PUSTAKA

Depkes, 2006, Pemeriksaan Miroskopis Tuberkulosis, Panduan Bagi Petugas Laboratorium Kemenkes, 2011, Modul Pelatihan Pemeriksaan Mikroskopis TB WHO, 1998, Laboratory Services in Tuberculosis Control Part 2, Microscopy, WHO, 1998 WHO, 2002, External Quality Assessment for AFB Smear Microscopy, APHL, CDC, IUATLD,KNCV, RIT, WHO RIT, 2007, Mikroskopis TB untuk Program Tuberkulosis Nasional, A. Fujiki Depkes, 2009, Penjaminan Mutu Eksternal untuk Mikroskopi AFB pada level Operasional, Kelompok Inti Nasional Pelatihan Mikroskopi TB RIT, 2009, Preparasi Sediaan Dahak BTA Yang Baik, A.Fujiki

616.995 1 Ind s

Standar Prosedur Operasional

Pemeriksaan Mikroskopis TB

38

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

DIREKTORAT JENDERAL BINA UPAYA KESEHATAN DIREKTORAT JENDERAL PENGENDALIAN PENYAKIT DAN PENYEHATAN LINGKUNGAN 2012

KEMENTERIAN KESEHATAN RI

FORMULIR HASIL PEMANTAPAN MUTU INTERNAL LABORATORIUM MIKROSKOPIS TB

Nama Laboratorium Kabupaten/ Kota Provinsi

Tanggal Uji Fungsi Nomor Batch Reagen

: ... : :
Kontrol Negatif Kontrol Positif (1+) Keterangan Tanda Tangan

Katalog Dalam Terbitan. Kementerian Kesehatan RI 616.995 1 Ind s

Indonesia. Kementerian Kesehatan RI. Direktorat Jenderal Bina Upaya Kesehatan Standar prosedur operasional pemeriksaan mikroskopis TB,-- Jakarta : Kementerian Kesehatan RI. 20121 ISBN 978-602-235-147-4 1. Judul I. TUBERCULOSIS - DIAGNOSIS II. TUBERCULOSIS - LABORATORY MANUALS III. MICROSCOPY - LABORATORY MANUALS

Penanggungjawab PMI

(Nama Jelas)

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

37

 Jangan sekali-sekali menyentuh permukaan bola lampu dengan tangan telanjang, karena lemak kulit yang tertinggal akan mengurangi terangnya sinar. Gunakan kertas tissue/ kertas lensa/ pembungkus lampu untuk memegang bola lampu saat memasangnya ke mikroskop. Sebaiknya selalu tersedia cadangan lampu dan sekering. Pastikan voltase yang digunakan sesuai, 110V atau 220V, dan bilamana perlu gunakan stabilisator voltase. Harus ada ventilasi yang cukup agar panas yang dihasilkan lampu dapat diatasi. Sebelum menyalakan lampu, putarlah regulator voltase ke minimum.

KATA PENGANTAR
Program pengendalian tuberkulosis (TB) di Indonesia telah terlihat

keberhasilannya dengan menurunnya jumlah penderita di peringkat dunia, namun untuk mencapai target MDGs pada tahun 2015 diperlukan penguatan program penanggulangan TB dengan strategi Directly Observed Treatment Shortcourse (DOTS), di mana salah satu komponennya adalah pemeriksaan mikroskopis TB yang bermutu. Standar Prosedur Operasional (SPO) merupakan bagian dari komponen mutu laboratorium TB yang disusun sebagai acuan bagi petugas laboratorium dalam melakukan pemeriksaan mikroskopis TB di berbagai tingkat pelayanan, sehingga diharapkan kualitas pemeriksaan laboratorium TB terjamin. Kami mengucapkan terima kasih kepada Kelompok Kerja Laboratorium TB dan semua pihak yang telah bekerja sama untuk menyusun Prosedur Tetap Pemeriksaan

Pengembus udara

Jangan menyentuh bola lampu saat memasang, gunakan kertas tissue

Kotak penyimpan mikroskop, harus selalu menyala walaupun mikroskop sedang dipakai

Mikroskopis TB. Harapan kami semoga buku ini bermanfaat bagi semua laboratorium khususnya laboratorium yang melakukan pemeriksaan TB dalam menjamin mutu pemeriksaannya.

Okuler harus tetap pada tempatnya, jamur atau debu dapat masuk melalui

lubang kosong tempat objektif bila lensa tidak terpasang. Bila lensa ada yang hilang, tutup rapat dengan penutup yang tersedia. Bila gambar terlihat buram atau ada bintik hitam, periksa adanya debu atau kotoran pada lensa objektif, okuler, kondensor, dan kaca sumber cahaya. Bintik hitam bergerak bila okuler diputar, berarti debu pada okuler. Bintik hitam bila sediaan digerakkan, berarti debu pada kaca sediaan. Debu pada lensa dapat dihilangkan dengan menggunakan sikat halus atau dengan meniupkan udara dengan penghembus udara di atas permukaan lensa.

Direktur Jenderal Bina Upaya Kesehatan

Dr. Supriyantoro, SpP, MARS

36

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

7. Fokuskan gambar dengan mata kanan dengan cara melihat ke dalam okuler kanan dan sesuaikan dengan tombol pengatur focus halus. 8. Fokuskan gambar dengan mata kiri dengan cara melihat ke dalam okuler kiri dan putar. cincin penyesuai diopter sampai didapatkan gambar yang paling jelas, baik untuk mata kiri maupun mata kanan. 9. Buka iris/diafragma sampai 70 80%, hingga lapangan pandang terang dengan merata. 10. Teteskan minyak imersi di atas sediaan (aplikator jangan menyentuh sediaan) dan putar lensa objektif 100 x ke tempatnya sampai berbunyi klik. 11. Fokuskan dengan menggunakan tombol pengatur fokus halus, bukan dengan pengatur fokus kasar sampai didapatkan gambar yang paling jelas. 12. Begitu sediaan selesai dibaca, putar objektif 100 x menjauhi kaca sediaan, tempatkan objektif 10 x di atas sediaan, lalu sediaan diambil. 13. Bila telah selesai, atur kembali pengatur intensitas cahaya ke minimum dan matikan mikroskop dengan menekan tombol OFF. 14. Setiap selesai menggunakan mikroskop, bersihkan dengan hati-hati minyak emersi dari lensa objektif 100 x dengan menggunakan kertas lensa, kondensor diturunkan, lensa pada posisi lensa objektif terpendek. Simpan mikroskop dalam kotak mikroskop/ lemari yang dijaga kelembabannya dengan menempatkan lampu 5 watt yang selalu menyala

Perawatan mikroskop

Jangan sekali-kali membongkar bagian dalam mikroskop.

Membersihkan lensa Untuk membersihkan lensa sebaiknya gunakan Ethyl ether atau pembersih lensa yang sesuai anjuran pabrik. Beberapa bahan pembersih dapat merusak permukaan lensa atau melarutkan perekat lensa setelah digunakan beberapa waktu. Bahan Pembersih Rekomendasi pabrik Ethyl ether/ethanol Alkohol Bensin Aseton/ keton Xylol
Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Penggunaan Jangka Panjang v v x x x x

Penggunaan sekali-sekali v v v v v x

ii

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

35

Lampiran 8 PENGGUNAAN DAN PEMELIHARAAN MIKROSKOP

Prinsip kerja mikroskop Cahaya yang berasal dari sumber cahaya (cermin atau sinar lampu) diteruskan ke diafragma, kondensor dan kaca sediaan yang diperiksa. Cahaya dari lensa objektif diteruskan melalui tabung mikroskop ke lensa okuler dan selanjutnya diterima oleh mata sehingga objek terlihat. Cara menggunakan mikroskop untuk pemeriksaan dahak 1. Letakkan mikroskop di meja yang permukaannya datar, tidak licin dan dekat sumber cahaya. 2. Bila menggunakan sumber cahaya lampu : a. Atur tegangan lampu ke minimum. b. Nyalakan mikroskop memakai tombol ON. c. Sesuaikan dengan pelan-pelan sampai intensitas cahaya yang diinginkan tercapai.

KATA SAMBUTAN
Tuberkulosis atau TB masih merupakan masalah kesehatan masyarakat yang menjadi tantangan global. Laboratorium TB merupakan komponen utama dalam pengendalian penyakit TB karena menjadi penentu diagnosis TB dan sebagai sarana pemantauan pengobatan pasien TB. Pemeriksaan Mikroskopis TB tetap menjadi alat diagnosis utama TB di Indonesia. Kegiatan pemeriksaan mikroskopis TB dimulai dari penjaringan suspek TB, pengumpulan contoh uji dahak, pemeriksaan mikroskopis, pencatatan pelaporan dan pemantapan mutu yang harus dilaksanakan oleh semua komponen yang terlibat sesuai dengan prosedur standar. Dokumen Standar Prosedur Operasional ini ditujukan kepada seluruh petugas laboratorium TB di fasyankes yaitu PS, PRM, PPM, RS dan Laboratorium Swasta yang menjalankan strategi DOTS agar dijadikan sebagai acuan dalam melaksanakan pemeriksaan Mikroskopis TB sesuai standar. Akhirnya kami mengucapkan terima kasih kepada semua pihak terkait yang telah ikut berkontribusi dalam menyelesaikan Standar Prosedur Operasional ini. Semoga buku ini dapat bermanfaat bagi semua pihak terkait, khususnya dalam upaya meningkatkan kualitas pemeriksaan mikroskopis TB untuk kepentingan Program Nasional Pengendalian TB.

Selalu gunakan tombol pengatur fokus untuk menurunkan meja sediaan menjauhi lensa! 3. Letakkan sediaan yang telah diwarnai ke atas meja sediaan. 4. Putar lempeng objektif ke objektif 10 x. 5. Atur dengan tombol pengatur fokus kasar dan pengatur fokus halus sampai sediaan terlihat jelas. 6. Sesuaikan jarak antar pupil sampai gambar kiri dan gambar kanan menyatu dengan cara menggesergeser kedua lensa okuler karena setiap orang mempunyai jarak antar pupil yang berbeda-beda).

Jakarta, Agustus 2012 Direktur Jenderal PP dan PL

Prof Dr. Tjandra Yoga Aditama NIP. 195509031980121001

34

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

iii

Sebelum diolah limbah cair harus dikumpulkan dalam wadah khusus yang terbuat dari plastik. Tidak dibenarkan menggunakan wadah dari gelas karena dapat pecah. Jika limbah mengandung pelarut organik, wadah harus terbuat dari bahan baja anti karat. 2. Limbah padat harus dikumpulkan dalam kotak limbah yang tutupnya dapat dibuka dengan kaki dan sebelah dalamnya dilapisi kantong plastik khusus. Kantong harus diikat sebelum diangkat dari dalam kotak. Lakukan insinerasi jika limbah dapat dibakar (misalnya: kain, kertas). Setelah dekontaminasi dan sterilisasi limbah padat di bakar atau dikubur dengan kedalaman 1,5 meter

3. Limbah Cair Melalui system IPAL/ waste water treatment

iv

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

33

otoklaf secara berk kala sebaikny ya dengan memakai m spo ora B thermophilus ai indikator. Jika J menggun nakan peman nasan kering, lakukan pada suhu sebaga 1600C selama minimal 30 meni it. Jika belum m ada otokla af, dapat digu unakan pressur re cooker pad da suhu didih selama minim mal 30 menit. 6. Tersedi ia spill box x yang berisi semua peralatan p unt tuk menangg gulangi kecelek kaan kerja be erupa tumpah han bahan in nfeksius (terdi iri atas : tissue, lap tebal, desinfectant, d s sapu kecil den ngan skop sam mpah ). 7. Tersedi ia kotak PPK yang berisi ka apas, antisep ptik, plester dll l Dra. Siti Sumartini, M.Kes Dr. Sri Widyastuti

TIM PENYUSUN

Subdit BP Mikrobiologi dan Imunologi, Dit BPPM & SK Subdit BP Mikrobiologi dan Imunologi, Dit BPPM & SK Subdit TB, Dit P2ML Subdit TB, Dit P2ML

Drg. Dyah Erty Mustikawati, MPH Dr. Nani Rizkiyani, M.Kes

B Penangana B. an peralatan Laboratorium Persia apan bahan da an alat untuk pemeriksaan Proses s dekontaminasi limbah sebelum dibuan ng atau dicuci

Prof. Agus Sjahrurrachman, Sp.MK Kelompok Kerja Laboratorium TB Dr. Harini Janiar, Sp.PK Dr. Koesprijanti, Sp.PK Drs. Isak Solihin, M.Kes Dra. Ning Rintiswati, M.Kes Dr. Wiwi Ambarwati Dibaka ar sampai hangu us Agus Susanto, SKM, M.Kes Dr. Irfan Ediyanto Dr. Retno Kusuma Dewi Roni Chandra, S.Si, M.Biomedik Kelompok Kerja Laboratorium TB Kelompok Kerja Laboratorium TB Kelompok Kerja Laboratorium TB Kelompok Kerja Laboratorium TB Subdit BP Mikrobiologi dan Imunologi, Dit BPPM & SK Subdit BP Mikrobiologi dan Imunologi, Dit BPPM & SK Subdit TB, Dit P2ML Subdit TB, Dit P2ML KNCV

Direndam m dalam disinfekta an selama 12 jam

Direbus sampai mendidih 10 menit

C Penangana C. an Limbah Laboratorium L 1. Limbah h benda tajam m Limbah benda tajam langsung g dimasukkan dalam wa adah khusus tahan an untuk di imusnahkan di incenera ator. Bila tidak menggu unakan tusuka incene erator harus didekontamina asi sebelum dimusnahkan.

32

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Lampiran 7 INSTRUKSI KERJA PENGELOLAAN LIMBAH LABORATORIUM TB

A. Pemusnahan sisa contoh uji 1. Limbah infeksius dan tidak infeksius, baik padat maupun cair harus dikumpulkan pada tempat terpisah dalam wadah yang tidak bocor. Wadah untuk limbah tajam harus kuat terhadap tusukan. 2. Wadah contoh uji dan tutupnya, kaca sediaan yang sudah tak terpakai dan limbah padat lain harus direndam dalam larutan lysol 5% atau desinfektan lain yang cocok untuk desinfeksi M.tuberculosis selama minimal 12 jam. 3. Limbah cair bekas pewarnaan ditampung dalam wadah yang mengandung lysol sebelum dibuang ke saluran limbah. Limbah zat pewarna hanya dibuang ke saluran air kotor yang tak akan mencemari badan air/ sungai untuk konsumsi. Informasi lebih lanjut dapat ditanyakan kepada Badan Pengendalian Dampak Lingkungan (Bapedal) daerah masing-masing. 4. Insenerasi merupakan cara mengolah limbah sebelum atau setelah diotoklaf. Insenerasi idealnya dilakukan pada alat dengan dua ruang bakar, di mana pada ruang bakar pertama suhu mencapai 8000C dan pada ruang bakar kedua mencapai 10000C. Waktu retensi gas dalam ruang bakar kedua minimal 0,5 detik. Insenerator yang hanya memiliki satu ruang bakar kurang efektif untuk menangani bahan infektif. Jika memakai carbonizer pakailah sesuai petunjuk pemakaian. 5. Untuk sterilisasi dengan otoklaf dibutuhkan suhu 1210C dengan tekanan udara 1,5 sampai 2 atmosfer selama minimal 20 menit (perhitungan waktu dimulai saat suhu dan tekanan udara tersebut tercapai; jangan membuka otoklaf jika belum dingin benar dan jangan mengisi air berlebihan). Jika jumlah yang di otoklaf banyak, dianjurkan minimal 30 menit. Pastikan bahwa ada ruang kosong diantara barang yang di otoklaf. Pada saat melakukan otoklaf, pastikan bahwa tidak ada wadah yang tertutup rapat. Wadah harus sedikit dilonggarkan agar uap air dalam mudah masuk ke dalam wadah. Dianjurkan melakukan uji fungsi

vi

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

31

Cara mengisi bagian bawah: (diisi oleh petugas lab yang membaca sediaan). No. Register Lab Tanggal pemeriksaan Spesimen dahak : : : Tulis nomor yang sesuai dengan di buku register lab (TB.04). Tulis tanggal sediaan tsb diperiksa Tulis kode huruf sesuai waktu pengambilan dahak yang dikirim : Hasil : Penegakan diagnosis: Sewaktu (A), Pagi (B), Sewaktu (C) Follow up Akhir fase intensif: Sesuai waktu dan urutan specimen (D) & (E) Follow up bila 1 bulan sebelum AP : Sesuai waktu dan urutan specimen (F) & (G) Follow up AP : Sesuai waktu dan urutan specimen (H) & (I) Setelah sisipan : Sesuai waktu dan urutan specimen (J) & (K) Beri tanda rumput () pada kotak yang sesuai untuk tiap sediaan yang diperiksa. Untuk kolom 19 bta, tulis jumlah kuman yang ditemukan dalam 100 lp Diperiksa oleh : Bubuhi tanda tangan dan tulis nama lengkap petugas pemeriksa

DAFTAR ISI
KATA PENGANTAR ........................................................................................................ i KATA SAMBUTAN .......................................................................................................... iii TIM PENYUSUN ............................................................................................................. v DAFTAR ISI ...................................................................................................................vii Standar Prosedur Operasional Pemeriksaan Mikroskopis TB ........................................ 1 I. II. III. IV. V. VI. Tujuan dan Ruang Lingkup ................................................................................. 1 Tanggung jawab .................................................................................................. 1 Pra Kualifikasi Tenaga ........................................................................................ 1 Rujukan ............................................................................................................... 1 Pengertian-pengertian ......................................................................................... 2 Dokumen ............................................................................................................. 2

VII. Prosedur .............................................................................................................. 2 VIII. Instruksi Kerja...................................................................................................... 4 IX. Alasan Perubahan Versi SOP ............................................................................. 4

Lampiran 1. INSTRUKSI KERJA PENGUMPULAN DAHAK .......................................... 5 Lampiran 2 INSTRUKSI KERJA PEMBERIAN IDENTITAS SEDIAAN........................... 9 Lampiran 3 INSTRUKSI KERJA PEMBUATAN SEDIAAN ........................................... 11 Lampiran 4 INSTRUKSI KERJA PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS .............................. 16 Lampiran 5 INSTRUKSI KERJA PEMANTAPAN MUTU INTERNAL ........................... 18 Lampiran 6 INSTRUKSI KERJA PENCATATAN PELAPORAN ................................... 24 Lampiran 7 INSTRUKSI KERJA PENGELOLAAN LIMBAH LABORATORIUM TB ...... 31 Lampiran 8 PENGGUNAAN DAN PEMELIHARAAN MIKROSKOP ............................. 34 DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................................... 38

30

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

vii

Petunjuk formulir TB.05 (Permohonan Lab untuk pemeriksaan dahak) Formulir ini diisi: Bagian atas oleh petugas yang meminta pemeriksaan dahak Bagian bawah oleh petugas yang membaca sediaan dahak. Satu penderita menggunakan satu formulir. Satu formulir digunakan untuk 3 spesimen (untuk diagnosis) atau untuk 2 spesimen (untuk follow-up pengobatan). Cara mengisi bagian atas Nama Unit Yankes Nama suspek/pasien Umur Jenis kelamin Alamat lengkap Kabupaten/Kota Klasifikasi Penyakit Alasan pemeriksaan No. Reg Kab/Kota Nomor identitas sediaan : : : : : : : : : : Tulis nama unit pengirim. Tulis nama lengkap dari suspek/pasien Tulis umur dalam tahun. Beri tanda pada kotak yang sesuai. Tulis alamat pasien secara lengkap. Tulis nama kabupaten / kota. Beri tanda pada kotak yang sesuai Beri tanda pada kotak yang sesuai Tulis no register Kab/Kota (pasien) Tulis sesuai dengan nomer yang ada pada kaca sediaan, dengan tidak mencantumkan waktu pengambilan dahak (SPS). Tulis tanggal pengambilan dahak terakhir. Tulis tanggal sediaan tsb dikirim ke Lab. Bubuhi tanda tangan dari pengambil/pembuat sediaan Beri tanda pada kotak yang sesuai

Tanggal pengambilan dahak terakhir Tanggal pengiriman sediaan Tanda tangan pengambil sediaan Secara visual dahak tampak

: : : :

viii

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

29

Petunjuk register TB.04 (Register Laboratorium TB) Buku ini untuk mencatat setiap melakukan pemeriksaan dahak dari seorang penderita (baik untuk penderita suspek maupun untuk follow-up pengobatan). Buku ini diisi oleh petugas laboratorium yang melakukan pewarnaan dan pembacaan sediaan dahak di fasilitas pelayanan kesehatan. Nomor Reg. Lab : Tulis nomor register Lab. dengan 3 digit, mulai dengan 001 pada setiap permulaan tahun anggaran dan tulis berurutan berdasarkan tanggal pemeriksaan. Tulis sesuai dengan nomor yang ada pada kaca sediaan yang diperiksa Tulis tanggal sediaan tersebut diterima Tulis tanggal pemeriksaan sediaan dahak tersebut Tulis nama lengkap Tulis umur dalam tahun pada kolom jenis kelamin yang sesuai. Tulis alamat lengkap. Tulis nama unit pengobatan yang meminta dilakukannya pemeriksaan laboratorium ini. Tulis kode huruf sesuai identitas slide/ waktu pengambilan dahak di kolom diagnosis atau follow up (3 kolom: S, P, dan S) Tulis hasil pemeriksaan dengan lengkap sesuai dengan tingkat positifnya yaitu 1+, 2+, atau 3+ atau Neg pada kolom yang sesuai. Kolom S untuk dahak sewaktu pertama, Kolom P untuk dahak pagi, dan kolom S untuk dahak sewaktu kedua. Bubuhi tanda tangan dari petugas yang melakukan pemeriksaan. Disediakan untuk hal-hal lain yang diperlukan.

Nama Laboratorium : Alamat : Penanggung jawab :

Standar Prosedur Operasional Pemeriksaan Mikroskopis TB

Kode : Versi : No. Tanggal : Halaman : 1 dari 3

I.

Tujuan dan Ruang Lingkup Prosedur tetap ini ditujukan untuk menjadi pedoman baku dalam pelayanan pemeriksaan mikroskopis TB Ruang lingkup dibatasi pada pelayanan pemeriksaan Mikroskopis TB paru di fasyankes ; dilaksanakan oleh Tim DOTS yang terdiri dari : - Poliklinik DOTS: dokter dan perawat - Laboratorium: petugas laboratorium Rangkaian kegiatan pelayanan pemeriksaan Mikroskopis TB dimulai dari penjaringan suspek, pencatatan dalam buku register TB 06, permintaan pemeriksaan 12) laboratorium (formulir TB 05), pelaksanaan pemeriksaan laboratorium (buku register TB 04 dan formulir TB 05) sampai PME (formulir TB

Nomor Identitas Sediaan

Tanggal sediaan diterima Tanggal Pemeriksaan Nama Lengkap Pasien Umur L / P Alamat Nama UPK Alasan Pemeriksaan

: : : : : : :

II.

Tanggung jawab Prosedur ini berada di bawah tanggung jawab Manajer Mutu

Hasil Pemeriksaan

III.

Pra Kualifikasi Tenaga A. Medical fitness Berbadan sehat B. Pendidikan dan Pelatihan Dokter yang telah mengikuti pelatihan TB DOTS Pemegang program TB yang telah mengikuti pelatihan TB DOTS Petugas laboratorium yang telah mengikuti pelatihan laboratorium mikroskopis TB

Tanda tangan

Keterangan

IV.

Rujukan - Pedoman Nasional Pengendalian Tuberkulosis, 2011

28

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

- Modul Pelatihan Mikroskopis TB, 2011 - Pedoman Jejaring Laboratoriu TB dan Pemantapan Mutu (Quality Assurance) Pemeriksaan Mikroskopis TB V. Pengertian-pengertian IK Tuberkulosis (TB) : : Instruksi Kerja yang bersifat teknis Penyakit menular yang dapat menyerang organ tubuh manusia (paru-paru, tulang, selaput otak, usus, dan lain-lain) yang disebabkan oleh kuman Mycobacterium tuberculosis Tersangka TB Pemantapan Mutu Internal Pemantapan Mutu Eksternal

Suspek PMI PME VI. Dokumen TB.06 TB 05 TB.04 TB 12

: : :

: Register Suspek TB TB.05 : Formulir permintaan pemeriksaan dahak mikroskopis : Register Laboratorium : Formulir untuk mengirimkan sediaan untuk keperluan uji silang

VII. Prosedur A. Penjaringan suspek Penemuan kasus TB dilakukan melalui serangkaian kegiatan mulai dari penjaringan terhadap suspek TB, pemeriksaan fisik dan laboratorium, menegakkan diagnosis dan penatalaksanaannya. Penemuan pasien TB, secara umum dilakukan secara pasif dengan promosi aktif kecuali pada kelompok khusus yang beresiko tinggi sakit TB seperti pada pasien dengan HIV, kelompok yang rentan tertular TB seperti di rutan, LP; yang hidup pada daerah kumuh, kontak dengan pasien TB BTA positif terutama anak di bawah 5 tahun dan kontak dengan pasien TB resistan obat Gejala utama pasien TB paru adalah batuk berdahak selama 2-3 minggu atau lebih. Batuk dapat diikuti dengan gejala tambahan yaitu dahak

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

27

bercampur darah, batuk darah, sesak nafas, badan lemas, nafsu makan menurun, berat badan menurun, malaise, berkeringat malam hari tanpa kegiatan fisik, demam meriang lebih dari satu bulan. B. Pencatatan dalam register TB 06 Semua suspek dicatat dalam buku register TB 06 dan diberi nomor identitas yang kemudian digunakan sebagai nomor identitas sediaan. C. Permintaan Pemeriksaan Laboratorium (TB 05) Berdasarkan buku register TB 06, semua suspek dirujuk ke laboratorium. Petugas poli DOTS mengisi formulir TB 05 dengan lengkap sebagai pengantar pemeriksaan mikroskopis dahak. D. Pelaksanaan pemeriksaan laboratorium (TB 04 dan TB 05) Nomor identitas sediaan dari formulir TB 05 dituliskan pada pot dahak, kaca sediaan dan buku register TB 04 Hasil pemeriksaan segera dicatat pada formulir TB 05 dan buku register TB 04 Formulir TB 05 diserahkan kepada petugas poli DOTS; hasil laboratorium merupakan rahasia jabatan.

Poli DOTS TB 06 TB 05

TB 05 TB 05

Laboratorium TB 04

E. Petugas poli DOTS segera mencatat hasil pemeriksaan laboratorium dalam buku register TB 06 F. Kualitas pelayanan pemeriksaan laboratorium mikroskopis TB dipantau melalui kegiatan Pemantapan Mutu Internal dan Pemantapan Mutu Eksternal. Pemantapan Mutu Eksternal dilaksanakan melalui kegiatan uji silang, supervisi/ bimbingan teknis dan tes panel. Sediaan uji silang dikirimkan ke laboratorium rujukan uji silang menggunakan formulir TB 12 yang diisi oleh pengelola program TB Kabupaten/ Kota.

26

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

VIII. Instruksi Kerja A. B. C. D. E. F. H. IX. Pengumpulan dahak Pemberian Identitas Pembuatan Sediaan Pemeriksaan Mikroskopis PMI Pencatatan Pelaporan terkait laboratorium TB penggunaan dan pemeliharaan mikroskop

Pelaporan n disampaika an secepatny ya pada dokter pengirim, petugas har rus menja aga kerahasiaan hasil lab boratorium. J Jangan menu uliskan hasil pemeriksaan n pada sedia aan karena se ediaan dibutu uhkan untuk cro oss check/uji i silang pema antapan mut tu. D Dari formulir TB.05 T yang telah t berisi hasil h pemerik ksaan, dokter r/ petugas TB B akan m melengkapi reg gister suspek (TB.06) D Dalam rangka a menjaga kualitas k peme eriksaan labo oratorium mik kroskopis TB B, juga di ilaksanakan Pemantapan Mutu Eksternal berupa Uji Silang. Sediaan S yang g telah di iperiksa oleh laboratorium m, secara pe eriodik akan diambil sam mpel oleh pen ngelola pr rogram kab/ kota untuk k diperiksa ulang u di lab boratorium Rujukan R Uji Silang. Pengiriman ula ang sediaan untuk u uji silang g menggunak kan formulir TB B.12 Ditelaah oleh Disetujui oleh Perubahan Kode: Versi Baru Kode:

G. Pengelolaan Limbah Laboratorium TB

Alasan Perubahan Versi SOP Dikompilasi oleh Nama Tanggal Tanda tangan Area Laboratorium : Jumlah copy: Alasan perubahan :

ng, pengelola program kab b/ kota akan memberikan umpan Pada akhir periode uji silan alik ke labora atorium mikros skopis. Hasil umpan balik ini i harus digu unakan oleh petugas p ba la aboratorium mikroskopis m un ntuk meningka atkan kinerjan nya (Peningka atan Mutu)

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

25

Lampiran 6 INSTRUKSI KERJA PENCATATAN PELAPORAN

Lampiran 1. INSTRUKSI KERJA PENGUMPULAN DAHAK

1. WAKTU PENGUMPULAN CONTOH UJI DAHAK Untuk menegakkan diagnosis TB secara mikroskopis dibutuhkan tiga contoh uji dahak. Pengumpulan spesimen dahak dilakukan dalam waktu 2 hari Sewaktu Pagi Sewaktu (SPS) Dahak Sewaktu hari -1 (A) Dahak pertama diambil SEWAKTU pada saat pasien berkunjung ke fasyankes Beri pot dahak pada saat pasien pulang untuk keperluan pengumpulan dahak pagi hari berikutnya. Dahak Pagi (B) Pasien mengeluarkan dahak kedua pada PAGI hari setelah bangun tidur dan membawa contoh uji dahak ke laboratorium. Dahak Sewaktu hari -2 (C) Kumpulkan dahak ketiga (dahak SEWAKTU) di laboratorium pada saat pasien kembali ke laboratorium pada hari kedua saat membawa dahak pagi (B). 2. TEMPAT PENGUMPULAN DAHAK Dahak adalah bahan yang infeksius, pada saat berdahak aerosol/percikan dapat menulari orang yang ada disekitarnya, karena itu tempat berdahak harus berada yaitu

1. Tuliskan identitas sediaan sesuai dengan formulir permohonan lab (TB.05). Identitas sediaan ini sesuai dengan nomor urut dalam TB.06 2. Catat identitas pasien sesuai TB 05 dalam Register TB.04. 3. Tulis Nomor Register Laboratorium. Salin Nomor Register Laboratorium dalam TB 05 4. Catat hasil pemeriksaan dalam buku registerTB.04 5. Salin hasil pemeriksaan di bagian bawah TB.05. 6. Beri tanggal dan tandatangani Formulir Permohonan Laboratorium (TB 05) 7. Kembalikan Formulir Permohonan Laboratorium TB 05 kepada dokter atau UPK yang mengirimkan

ditempat

yang

jauh

dari

kerumunan

orang,

misalnya

didepan

ruang

pendaftaran,ruang pemeriksaan ,ruang obat dll. Harus diperhatikan pula arah angin pada saat berdahak, agar droplet/ percikan dahak tidak mengenai petugas.

24

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Pengumpulan dahak dilakukan di ruang terbuka dan mendapat sinar matahari langsung atau di ruangan dengan ventilasi yang baik, untuk mengurangi kemungkinan penularan akibat percikan dahak yang infeksius. Tempat pengumpulan dahak dilengkapi dengan prosedur mengeluarkan dahak, tempat cuci tangan dengan air mengalir dan sabun. Jangan mengeluarkan dahak di ruangan tertutup dengan ventilasi yang buruk, misalnya: Kamar kecil / toilet Ruang kerja (ruang pendaftaran, ruang pengumpulan sampel, laboratorium) Ruang tunggu, ruang umum lainnya.

6) Penyimpanan sediaan Dilakukan pengecekan ulang apakah penyimpanan sediaan sudah sesuai dengan prosedur c. Tahap Pasca Analisis Menjamin bahwa pelaksanaan tahap pasca analisis sesuai protap yaitu pelaksanaan dekontaminasi alat dan bahan infeksius; pengelolaan limbah infeksius dan non infeksius; dan pemeliharaan mikroskop. Periksa kembali pencatatan dan pelaporan sesuai dengan standar. Petugas tidak diperkenankan menuliskan laporan dengan tanda atau simbol yang tidak sesuai skala IUATLD. Contoh tidak ditemukan BTA dituliskan sebagai , seharusnya : neg; ditemukan 1-9 BTA/ 100 LPB dituliskan BTA jarang atau seharusnya dituliskan jumlah BTA yang ditemukan. Apabila ditemukan BTA harus dilaporkan dengan simbol 1+, 2+ atau 3+ sesuai dengan skala IUATLD. Tidak diperbolehkan menuliskan hasil pemeriksaan diatas kaca sediaan. Penulisan hasil positif dituliskan dengan tinta merah.

3. CARA PENGUMPULAN DAHAK Persiapan Pengumpulan contoh uji dahak

a. Persiapan pasien
Pasien diberitahu bahwa contoh uji dahak sangat bernilai untuk menentukan status penyakitnya, karena itu anjuran pemeriksaan SPS untuk pasien baru dan SP untuk pasien dalam pemantauan pengobatan harus dipenuhi. Dahak yang baik adalah yang berasal dari saluran nafas bagian bawah, berupa lendir yang berwarna kuning kehijauan (mukopurulen). Pasien berdahak dalam keadaan perut kosong, sebelum makan/minum dan membersihkan rongga mulut terlebih dahulu dengan berkumur air bersih. Bila ada kesulitan berdahak pasien harus diberi obat ekspektoran yang dapat merangsang pengeluaran dahak dan diminum pada malam sebelum mengeluarkan dahak. Olahraga ringan sebelum berdahak juga dapat merangsang dahak keluar. Dahak adalah bahan infeksius sehingga pasien harus berhati-hati saat berdahak dan mencucu tangan. Pasien dianjurkan membaca prosedur tetap pengumpulan dahak yang tersedia di tempat/lokasi berdahak.

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

23

b. Persiapan Alat
Pot dahak bersih dan kering, diameter mulut pot 4-5 cm, pasien, pot Contoh sediaan apus dahak yang baik Hasil pewarnaan apusan dengan hasil yang kurang baik transparan, bening, bertutup ulir. Pot tidak boleh bocor. Sebelum diserahkan kepada dahak harus sudah diberi identitas sesuai identitas/nomor register pada form TB 05. Formulir Permohonan Pemeriksaan Laboratorium (TB 05) Label, pensil, spidol

c. Cara Berdahak
Beri petunjuk pada pasien untuk: Kumur dengan air sebelum mengeluarkan dahak Bila memakai gigi palsu, lepaskan sebelum berkumur Tarik nafas dalam 2 3 kali dan setiap kali hembuskan nafas dengan kuat Buka tutup pot, dekatkan ke mulut, berdahak dengan kuat dan masukan ke dalam pot dahak Tutup pot dengan rapat dengan cara memutar tutupnya Pasien harus mencuci tangan dengan air dan sabun Bila perlu hal di atas dapat diulang sampai mendapatkan dahak yang berkualitas baik dan volume yang cukup (3-5 ml) Bila dahak sulit dikeluarkan, dapat dilakukan hal sebagai berikut: Lakukan olah raga ringan kemudian menarik nafas dalam beberapa kali. Bila terasa akan batuk, nafas ditahan selama mungkin lalu disuruh batuk. Malam hari sebelum tidur, banyak minum air atau menelan 1 tablet gliseril guayakolat 200 mg. Pot berisi dahak diserahkan kepada petugas laboratorium, dengan menempatkan pot dahak di tempat yang telah disediakan

Terlalu tebal

Terlalu tipis

Kurang di tengah, terlalu tipis dan kurang dekolorisasi 5) Pembacaan mikroskopis

Pewarnaan tidak merata, ukuran terlalu besar

Pembacaan dilakukan sesuai prosedur tetap. Bila di fasyankes terdapat 2 atau lebih petugas mikroskopis, maka dilakukan inter-observer blinded yaitu pembacaan sediaan dilakukan oleh 2 orang secara blinded dan dicatat.

22

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

4. PENILAIAN KUALITAS CONTOH UJI DAHAK SECARA MAKROSKOPIS Petugas laboratorium harus melakukan penilaian terhadap dahak pasien. Tanpa membuka tutup pot, petugas laboratorium melihat dahak melalui dinding pot yang transparan Hal-hal yang perlu diamati adalah : Vol 3,5 - 5 ml Kekentalan : mukoid Warna : Hijau kekuningan (purulen)
Contoh sediaan yang benar, tulisan di koran masih terbaca secara samar Contoh sediaan yang terlalu tebal, tulisan di koran tidak terbaca Contoh sediaan yang terlalu tipis, tulisan di koran terbaca dengan mudah

Bila ternyata contoh uji yang diserahkan adalah air liur, petugas harus meminta pasien berdahak kembali, sebaiknya dengan pendampingan.

Apabila sediaan terlalu tipis, sediaan dapat ditambahi

Perhatian : pada saat mendampingi pasien berdahak, petugas harus berada di belakang pasien dan hindari arah angin menuju petugas.

dengan dahak, dengan catatan sediaan belum kering, sehingga tidak menimbulkan aerosol Apabila sediaan trelalu tebal, sediaan harus dibuang dan diganti dengan membuat sediaan baru. Penilaian sediaan yang telah diwarnai Evaluasi kualitas sediaan dahak dilakukan dengan penilaian terhadap 6 unsur dengan mempergunakan skala sarang laba-laba. Sediaan yang baik harus memperlihatkan sarang laba-laba yang penuh

Bila dahak yang diperoleh tetap tidak memenuhi syarat, petugas lab tetap harus melakukan pemeriksaan dengan memilih bagian yang paling kental dan beri catatan bahwa spesimen tidak memenuhi syarat / air liur

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

21

a) Endapan metilen biru atau kristal carbol fuchsin maka reagen harus disaring langsung pada saat melakukan pewarnaan. b) Dekolorisasi yang tidak sempurna maka mengganti larutan asam alkohol dengan larutan yang baik Kumpulan sediaan dahak kontrol yang belum diwarnai harus disimpan dalam kotak khusus. b. Tahap analisis 1) Memastikan prosedur tetap di laksanakan dengan baik pada setiap pemeriksaan. a) b) c) d) e) f) g) Prosedur tetap yang harus tersedia di laboratorium mikroskopis TB adalah : Prosedur tetap pengumpulan dahak Prosedur tetap pembuatan sediaan Prosedur tetap fiksasi Prosedur tetap pewarnaan. Prosedur tetap pembacaan mikroskopis Prosedur tetap pencatatan & pelaporan Prosedur tetap pengolahan limbah

Lampiran 2 INSTRUKSI KERJA PEMBERIAN IDENTITAS SEDIAAN Pemberian identitas sediaan dilakukan dengan ketentuan sebagai berikut:

Pemberian kode huruf dengan ketentuan sebagai berikut:

2) Menggunakan alat sesuai standar. Kelengkapan alat dapat dibuat dalam bentuk daftar tilik. 3) Pemberian identitas sesuai dengan standar dan dilakukan pengecekan ulang. 4) Pembuatan sediaan harus sesuai prosedur tetap. Penilaian sediaan yang belum diwarnai Sebelum melakukan pewarnaan , sediaan dapat dinilai ketebalannya dengan meletakkan sediaan yg kering 4-5 cm di atas kertas koran. Sediaan yang baik apabila kita masih dapat melihat tulisan secara samar. A,B,C : SPS dahak pasien pada pertama kali datang D,E: SP dahak pasien pada akhir minggu ke 5/masa intensif pengobatan J,K : SP dahak pasien pada akhir pemberian obat sisipan F,G: SP dahak pasien pada akhir bulan ke lima masa pengobatan H,I : SP dahak pasien pada akhir masa pengobatan

20

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Identitas sediaan dituliskan pada:

1. Pot Dahak Beri label yang jelas pada dinding pot dahak sesuai dengan nomor identitas sediaan dahak (TB 06) Label ditempelkan pada dinding pot, jangan pada tutupnya

b) Spidol dan label untuk pemberian identitas sesuai dengan nomor identitas yang tertera pada form TB 04, TB 05 , TB 06 dan kaca sediaan. 4) Uji kualitas contoh uji dahak Dahak yang diperiksa harus mukopurulen yaitu dahak yang mukoid berwarna kuning kehijauan. Petugas harus dapat memotivasi pasien agar dapat mengeluarkan dahak yang baik. Bila dahak yang diperoleh tetap tidak memenuhi syarat, petugas lab tetap harus melakukan pemeriksaan dengan memilih bagian yang paling kental dan beri catatan bahwa spesimen tidak

Pot dahak sekali pakai, bersih dan kering

2. Kaca Sediaan

Sebaiknya gunakan frosted end slide (kaca sediaan dengan salah satu ujung buram) Tulis identitas sediaan dengan pensil 2B di atas bagian yang buram (frosted) Nomor identitas sesuai dengan TB.05 5)

memenuhi syarat / air liur Uji kualitas dahak dilakukan dengan cara melihat warna dan kekentalan dahak tanpa membuka tutup pot dahak, karena itu pot dahak harus terbuat dari bahan yang transparan dan bening. Uji fungsi reagen Ziehl Neelsen Uji ini diperlukan untuk memastikan reagen Ziehl Neelsen yang tersedia dapat mewarnai M.tuberculosis dengan baik. Petugas harus membuat sediaan dahak kontrol yaitu beberapa sediaan dahak dari dahak BTA negatif dan dahak BTA 1 + yang telah difiksasi. Ketika akan menggunakan reagen Ziehl Neelsen kemasan baru maka dilakukan pewarnaan terhadap satu sediaan dahak BTA negatif dan satu sediaan dahak BTA 1+. Pewarnaan yang baik BTA tampak berwarna merah cerah dengan latar belakang biru yang terang, inti lekosit tampak jelas dan tidak ada endapan merah atau biru. Hasil uji fungsi harus dicatat dalam buku khusus yang menuliskan tanggal pelaksanaan uji fungsi, nomor batch botol reagen dan hasil pewarnaan (lihat formulir hasil PMI) Bila hasil pewarnaan dinilai baik maka reagen dapat dipakai sebaliknya bila memberikan hasil pewarnaan yang tidak baik :

10

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

19

Lampiran 5 INSTRUKSI KERJA PEMANTAPAN MUTU INTERNAL

Pemantapan Mutu Internal laboratorium mikroskopis TB terdiri dari: a. Tahap Pra analisis 1) 2) Prosedur tetap cara pengumpulan dahak. Persiapan pasien Memberikan bimbingan kepada pasien tentang cara pengumpulan dahak, waktu pengumpulan dahak dan lokasi pengumpulan dahak. 3) Persiapan alat dan bahan. a) Pot dahak sesuai standar :
bersih dan kering, bermulut lebar (diameter 4-5 cm) transparan, bening, bahan kuat, tidak mudah bocor, bertutup ulir minimal 3 dan dapat menutup rapat

Lampiran 3 INSTRUKSI KERJA PEMBUATAN SEDIAAN

ALAT-ALAT DAN REAGEN YANG DIBUTUHKAN
Kaca sediaan yang baru, bersih, jangan memakai kaca sediaan bekas

Lidi/batang bambu dengan ujung berserabut (raughend) Lidi/batang bamboo dengan ujung runcing

Lampu spiritus/ bunsen

Wadah pembuangan berisi disinfektan (misalnya lisol 5%)

Wadah pembuangan untuk aplikator. Wadah pembuangan harus tahan bocor

Jas lab bagian depan tertutup berlengan panjang dengan tangan diberi manset elastic, panjang melewati lutut.

Reagen ZN dengan label botol warna berlainan, tutup botol dari plastik, kotak reagen dari karton corrugated

18

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

11

1. Periksa data pasien di pot dahak dan cocokkan dengan yang ada di formulir permohonan laboratorium TB (Formulir TB 05) 2. Pindahkan data pasien dari formulir permohonan laboratorium TB (TB 05) ke register laboratorium TB (Formulir TB 04) 3. Tulis nomor identitas sediaan pada kaca sediaan 4. Tulis nomor register laboratorium pada formulir TB 04. 5. Tulis nomor register laboratorium pada formulir permohonan laboratorium TB (TB 05) 6. Berilah tanda pada kolom yang sesuai di TB 04 mengenai alasan pemeriksaan dahak sesuai formulir permohonan laboratorium TB.

Lakukan pembacaan sediaan apus sepanjang garis tengah dari ujung kiri ke kanan atau sebaliknya.

Laporkan hasil pemeriksaan mikroskopis dengan mengacu kepada skala International Union Against To Lung Disease (IUATLD)

CARA MEMBUAT SEDIAAN DAHAK

A
Spesimen dahak dengan bagian yang purulen (A) di dalam air liur (B) Ambil contoh uji dahak pada bagian yang purulen

Apa yang terlihat tidak ditemukan BTA dalam 100 lapang pandang ditemukan 1-9 BTA dalam 100 lapang pandang(tuliskan jml BTA yang ditemukan) ditemukan 10 99 BTA dlm 100 lapang pandang ditemukan 1 10 BTA setiap 1 lapang pandang(periksa minimal 50 lapang pandang)

Hasil Negatif Scanty 1+ 2+

Apa yang dituliskan Neg Tulis jumlah BTA 1+ 2+ 3+

dengan lidi

Apuskan dahak di atas kaca sediaan pada permukaan yang sama dengan nomor identitas. Apusan bentuk oval 2x3 cm kemudian ratakan dengan gerakan spiral kecil-kecil. Jangan membuat gerakan spiral bila sediaan dahak sudah kering karena akan menyebabkan aerosol. Keringkan di dalam suhu kamar

ditemukan 10 BTA dalam 1 lapang pandang(periksa 3+ minimal 20 lapang pandang) bagian yang berminyak di atas tissue atau kertas penyerap.
Sebelum menguji sediaan apus selanjutnya, bersihkan lensa objektif dengan menggunakan kertas lensa. Setelah menyelesaikan pembacaan semua sediaan bersihkan lensa objektif dengan kertas lensa yang dibasahi eter alcohol (3:7)

Setelah selesai pembacaan, bersihkan minyak dari sediaan apus dengan meletakkan

D
lidi langsung dibuang ke dalam botol berisi disinfektan.

Sediaan harus disimpan dalam kotak sediaan dengan urutan sesuai TB 04 untuk uji silang.

12

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

17

Lampiran 4 INSTRUKSI KERJA PEMERIKSAAN MIKROSKOPIS

Sediaan apus harus diperiksa secara sistematis untuk memastikan bahwa hasil yang dilaporkan telah mewakili seluruh bagian sediaan. Jangan memeriksa sediaan sebelum kering.

.Lakukan fiksasi. Gunakan pinset atau penjepit kayu untuk memegang kaca . Pastikan apusan menghadap ke atas Lewatkan 3 x melalui api dari lampu spiritus. Pemanasan yang berlebihan akan merusak hasil.

Untuk fasyankes yang hanya melakukan fiksasi (tidak melakukan pewarnaan dan pembacaan mikroskopis) maka kirimkan sediaan yang telah difiksasi ke laboratorium rujukan dengan cara : Bungkus sediaan dengan kertas tissue kemudian digulung beberapa kali agar tidak pecah atau kirimkan dalam kotak sediaan bersama Form TB 05.

Letakkan sediaan di atas meja mikroskop, permukaan sediaan menghadap ke atas. Gunakan lensa objektif 10 x untuk menetapkan fokus dan menemukan lapang pandang. Periksa sediaan untuk menentukan kualitas sediaan. Pada sediaan dahak umumnya ditemukan lebih banyak sel lekosit atau sel radang

Teteskan satu tetes minyak emersi, aplikator minyak emersi tidak boleh menyentuh kaca objek. Tetesan harus jatuh bebas ke permukaan sediaan apus agar aplikator minyak emersi tidak terkontaminasi dengan sediaan.

Cara penanganan dahak yang bercampur darah 1. Dahak dengan darah sedikit: Pilih bagian dahak yang tidak mengandung darah, dan buat sediaan seperti biasa 2. Dahak dengan darah sedang Buat sediaan, kemudian fiksasi, genangi dengan air bersih/aquades lalu digoyanggoyang sampai warna merah darah hilang. Lalu air dibuang dan bilas lagi dengan air
Putarlah lensa objektif 100x dengan hatihati ke atas sediaan apus. Jangan sekali-kali lensa menyentuh kaca sediaan.

kemudian warnai dengan Ziehl-Neelsen.

Sesuaikan fokus dengan hati-hati sampai sel terlihat jelas

16

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

13

PEWARNAAN METODE ZIEHL NEELSEN

1 2

Letakkan sediaan dengan bagian apusan menghadap ke atas pada rak yang ditempatkan di atas bak cuci atau baskom, antara satu sediaan dengan sediaan lainnya masingmasingberjarak kurang lebih 1 jari.

Genangi seluruh permukaan sediaan dengan carbol fuchsin. Saring zat warna setiap kali akan melakukan pewarnaan sediaan.
8

Miringkan sediaan menggunakan penjepit kayu atau pinset untuk membuang air

Genangi dengan asam alcohol sampai tidak tampak warna merah carbol fuchsin. Jangan sampai ada percikan ke sediaan lain
9

Panasi dari bawah dengan menggunakan sulut api setiap sediaan sampai keluar uap, jangan sampai mendidih

Dinginkan selama minimal 5 menit.

10

Genangi permukaan sediaan dengan methylene blue selama 20-30 detik

Bilas sediaan dengan air mengalir. Jangan ada percikan ke sediaan lain

11

Bilas sediaan dengan air mengalir secara hati-hati dari ujung kaca sediaan

Jangan ada percikan ke sediaan lain

Miringkan sediaan untuk mengalirkan sisa methylene blue

Keringkan sediaan pada rak pengering. Jangan keringkan dengan kertas tissue

14

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

Standar Prosedur Operasional Mikroskopis TB

15