Unidad 2. La Biotransformación de Xenobióticos

Unidad 2.
La biotransformacin de xenobiticos
Departamento de Farmacia, Facultad de Qumica, UNAM.

las reacciones metablicas. Los hepatocitos se presentan en forma de placas, las cuales estn unidas mediante sinusoides.
Unidad 2. La biotransformacin de xenobiticos y su importancia toxicolgica
2.1 La biotransformacin heptica de xenobiticos

Cuando los xenobiticos que ingresan por va oral, se absorben en el intestino delgado, pasan a la vena mesentrica y luego a la vena porta, la cual los conduce hacia el hgado. En este rgano es donde mayoritariamente se van a efectuar las reacciones metablicas. Cuando los xenobiticos al pasar por primera vez por el intestino y el hgado, sufren de alguna transformacin metablica, se dice que presentan un efecto de primer paso.
Figura 2-1. Paso de los xenobiticos del intestino delgado al hgado Figura 2-2. Distribucin de xenobiticos
Una vez que los xenobiticos llegan al hgado por la vena porta, se difunden hacia los hepatocitos, que son las clulas encargadas de realizar
1
Profesores: Francisco Hernndez Luis, Mara Elena Bravo Gmez, Perla Castaeda Lpez. Servicio Social (2014-12/16280): Circe Mouret-Hernndez
Unidad 2. La biotransformacin de xenobiticos

Para mejor comprensin de los procesos metablicos que se llevan a cabo en el hgado, las reacciones que ocurren en este proceso se han agrupado en tres apartados, denominados Fase I, Fase II y Fase III.

a) Reacciones de oxidacin
La oxidacin es probablemente la reaccin ms comn en el metabolismo de xenobiticos. Muchos compuestos son oxidados por un
Xenobitico Fase I
Menor polaridad
grupo no especfico de enzimas denominado mono-oxigenasas (Citocromo P450, Flavin-monoxigena), los cuales se encuentra principalmente en los microsomas hepticos, una fraccin derivada del retculo endoplsmico liso.
Tabla 2-1. Enzimas y su ubicacin celular Enzima Ubicacin Citocromo P450 retculo endoplsmico (microsomas) Favin-monooxigenasa (FMNO) retculo endoplsmico (microsomas) Prostaglandin H sintetasa retculo endoplsmico (microsomas) Xantina oxidasa citosol Alcohol deshidrogenasa citosol Aldehdo deshidrogenasa citosol, mitocondria Aldehdo oxidasa citosol Monoamina oxidasa mitocondria
Klassen C. Cassaret Doulls Toxicology. Sixth edition. Mc-Graw Hill. p. 136.
Fase II
Fase III
Mayor polaridad
Figura 2-3. Las tres Fases del metabolismo
2.2 Fase I del metabolismo: oxidacin, reduccin, hidrlisis

La importancia de la Fase I radica en lograr la biotransformacin de los grupos funcionales susceptibles que presenten los xenobiticos, a sufrir reacciones de: a) b) c) Oxidacin, Reduccin Hidrlisis
Las transformaciones efectuadas incrementan la hidrofilia de los diversos compuestos y en consecuencia facilita su excrecin corporal.
Figura 2-4. Obtencin de microsomas
2

La superfamilia citocromo P 450 (CYP)
El trmino citocromo P450 representa a un grupo de enzimas constituidas por hemprotenas (hem: porfirina y apoprotena, Figura 2.5). En el cuerpo humano se ubican principalmente en el hgado, aunque su presencia se detecta en varios otros rganos. La denominacin 450 se debe a que cuando esta hemoprotena, con el tomo de Fe en estado de oxidacin II, forma un complejo con el monxido de carbono presenta una absorbencia mxima a 450 nm en el espectro de luz visible.
[CYP Fe+2 C=O]
Estas enzimas muestran una amplia capacidad de catalizar una variedad de diversos sustratos. Uno de los aspectos importantes que hay que resaltar es que para iniciar la biotransformacin se requiere que el sustrato interaccione con el citocromo. Por lo que los diversos compuestos necesitan ser liposolubles para lograr alcanzar al sistema enzimtico ubicado en retculo plasmtico; asimismo, deben presentar grupos funcionales adecuados que puedan alterarse por reacciones enzimticas y un tamao mayor a 150 D. requiere Para catalizar la formacin de productos oxidados, el sistema de la coenzima nicotinamida adenina dinucletido fosfato
Figura 2-6. Absorbencia de CYP en complejo con monxido de carbono
(NADPH),oxgeno molecular, as como de la enzima NADPH CYP reductasa o NADH CyT b5. El CYP es una mono-oxigenasa porque al oxidar a un sustrato el producto slo presenta uno de los dos tomos de la molcula de oxgeno.
2 NADPH + H+ 2 NADP+
RH
sustrato
O2
CYP
ROH
H2O
Figura 2-7. La actividad de las mono-oxigenasas
Figura 2-5. CYP, una hemoprotena
3

Existen prcticamente dos formas de presentar al citocromo P 450. La ms reciente utiliza la raz CYP, seguido de un nmero que denota la familia (40% de homologa en la estructura primaria), la cual a su vez es seguida por una letra mayscula, para denotar la subfamilia (60% de homologa en su estructura primaria). Por ltimo, un nmero para indicar la forma correspondiente. La otra presentacin utiliza las siglas, P 450, seguido por un nmero romano para denotar la familia correspondiente (ej. P450 II).
familia CYP 1 A 1
[CYP-Fe+3]
RH CYP-Fe+3 CYP-Fe+3 RH e
-
[CYP-Fe+3RH]
subfamilia
forma individual
Familia: 45-50% de homologacin de la estructura primaria de la protena Subfamilia: 51-60% de de homologacin de la estructura primaria de la
NADPH + H+ NADP+
ROH
NADPH CYP reductasa
protena
CYP-Fe+3 RH O
H2O 2H
+
En algunas ocasiones se utiliza CYP para denotar a la protena o al

CYP-Fe RH O2
+2
mARN y CYP para referirse al gen que les da origen.
CYP-Fe+2 RH
ADN (genes)
CYP-Fe+3 RH
mARN
Protena (enzima) CYP
CYP
. O2e
-
. O2-
Treinta familias de citocromos P 450 han sido descritas, 10 en

NADPH + H+ NADP+ NADPH CYP reductasa o CyT b5 e
-
NADH Cyt b5 reductasa
NADH + H+ NAD+
mamferos, 1 en insectos, 2 en caracoles, 1 en plantas, y 2 en bacterias. Las familias identificadas en mamferos se presentan en la siguiente tabla.
Figura 2-8.
Hodgson E., Smart R.C. Introduction to Biochemical Toxicology. Third Edition. Wileyinterscience. 2001. USA. p. 72.
P 450
Tabla 2-2. Familas y subfamilias de citocromos P 450 No. de No. de Reacciones subfamilas formas
4

CYP1 CYP2 CYP3 CYP4 CYP7 CYP11 CYP17 CYP19 CYP21 CYP27 1 8 1 3 1 2 1 1 1 1 3 61 10 11 1 4 1 1 2 1 metabolismo de xenobiticos metabolismo de xenobiticos y esteroides metabolismo de xenobiticos y esteroides hidroxilacin y -1 de cidos grasos hidroxilacin 7 en el colesterol hidroxilacin 11 en esteroides hidroxilacin 17 en esteroides aromatasa hidroxilacin en C-21 en esteroides hidroxilacin en C-27 en colesterol

Abundancia en el hgado Importancia en el metabolismo de frmacos
Otros
3A4
2D6
3A4
2D6 1A2 2A6 2E 1 2C
1A2
2E 1
2C
Figura 2-9. Abundancia de CYP en el hgado y su participacin en el Tabla 2-3. Nombres triviales para algunos CYP y su presencia en diversas especies Gen Hemoprotena Nombre trivial Especie CYP1A1 CYP1A1 C,bNF-B rata P1, c, forma 6 humano Forma 6 conejo 1 A1 trucha Dah1 perro Mkah1 mono CYP1A2 CYP1A2 P-448, d, HCB rata P3, d, forma 4 humano LM4 conejo MC4 trucha Dah2 perro Mkah2 mono
metabolismo
(Hodgson E., Smart R.C. Introduction to Biochemical Toxicology. Third Edition. Wileyinterscience. 2001. USA. p. 77.
Tabla 2-4. Sustratos, inductores e inhibidores de algunos CYP Sustrato Inductor Inhibidor acetaminofen, humo de cigarro, ciprofloxacina, acetanilida, antipirina carne carbonizada, fluvoxamina, aCYP1A2 aminas aromticas, crucferas, naftoflavona cafena, estradiol, benzopireno, teofilina, tacrina, dioxina(TCDD**), warfarina safrol, omeprazol Enzima Amitriptilina, captopril, clorpromazina, cinnarizina, clozapina, codena, detrometrofan, imipramina* acetaminofen, carbamazepina, dapsona, diltiazem, diazepam, lidocana, omeprazol, taxol, teofilina, verapamil* No conocido celecoxib, fluoxetina, lobelin, quinidina,trifluoperidol, yohimbina
CYP2D6
CYP3A4
carbamazepina, fenobarbital, fenitoina, rifampina, sulfamidimina, hierba de San Juan*
clotrimazol, etinilestradiol, indinavil, ketoconazol, nicardipina, verapamil*
**TCDD = 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina *La lista completa la puede consultar en la siguiente referencias: Klassen C. Cassaret Doulls Toxicology. Sixth edition. Mc-Graw Hill. pp. 184-185. Hodgson E., Smart R.C. Introduction to Biochemical Toxicology. Third Edition. Wiley-interscience. 2001. USA. p. 74.
5

b) Reacciones de reduccin
CYP1A1 (extraheptico) CYP1A2 (heptico)
Los grupos carbonilos, azo y nitro son objetos de reduccin,

Activan algunos pro-mutgenos o pro-carcingenos: - Hidrocarburos aromticos policclicos (HAP) - Arilaminas
resultando en la formacin de grupos hidroxilos y aminos ms polares. Hay varias reductasas en el hgado, las cuales dependen de NADH o NADPH, que catalizan tales reacciones.
Tabla 2-5. Reacciones de reduccin presentes en la Fase I Sustrato Producto Enzima Ubicacin ArN=NAr ArNH2 + NH2Ar azo-reductasa Microsoma, citosol, microflora R-NO2 R-NH2 nitro-reductasa Microsoma, citosol, microflora O=Ar=O HO-Ar-OH DT-diaforasa Microsoma citosol R-S(O)-R R-S-R FMO Citosol R-CHO R-CH2OH aldehdoMicrosoma, reductasa citosol, sangre
CYP1B1 (extraheptico, menor proporcin)
Reaccin Azo Nitro Quinona Sulfxido Carbonilo
Figura 2-10. Localizacin e importancia de los CYP1

Oxidacin de las cadenas laterales CH2CH2CH2CH3 N Hidroxilacin aromtica NH C NH2 N CH2CH2CH2N Debrisoquina OH CHCH2CH2CH3 OH CH2CH2CHCH3 CH2CH2CH2CH2OH HO N -oxidacin -1 oxidacin - oxidacin CH2CH2CH2N CH3 H N NH C NH2 NHOH Anilina Imipramina CH3 CH3 N-hidroxilacin NH2 N-dealquilacin
c) Reacciones de hidrlisis
Las hidrolasas constituye un grupo de enzimas generalmente de baja especificidad, capaces de hidrolizar steres, amidas, lactonas, steres de fosfatos y sulfatos, disacridos, glicosidos, peptidos. El grupo ster es el ms lbil a sufrir tales reacciones. Recientemente, se ha mostrado que hay mltiples isoenzimas de las esterasas hepticas, algunas de las cuales han
O-dealquilacin
S-dealquilacin SCH3 O N N N H 6-Metiltiopurina O
Deaminacin oxidativa CH2CHNH2 CH3
Sulfoxidacin S
N-oxidacin (CH3)3N Trimetilamina
sido caracterizadas. La hidrlisis de varios steres por la albmina del suero ha sido tambin reportada.
Tabla 2-6. Reacciones de hidrlisis presentes en la Fase I. Reaccin Sustrato Producto Enzimas Ubicacin Hidrlisis de R-COO-R R-COOH + R-OH Esterasas Microsomas, steres citosol, sangre Hidrlisis de R-CONH-R R-COOH + R-NH2 Peptidasa Sangre, amidas lisosomas Hidrlisis de R-C(0)C-R R-COH-COH-R Epxido Microsomas, epxidos hidrolasa citosol
C2H5O
NHCCH3 N Fenacetina
Cl (CH3)3N O
CH2CH2CH2N(CH3)2 Anfetamina Clorpromacina
SH N N N H + HCOH + NH3
O CH2CCH3
HO
NHCCH3
O S
+ CH3COH
Cl
CH2CH2CH2N(CH3)2
Figura 2-11. Reacciones de oxidacin de Fase I del metabolismo
6

En general los compuestos qumicos son convertidos por la Fase I
Consecuencias del metabolismo de la Fase I en la actividad de algunos frmacos

Tabla 2-7. Efectos por el metabolismo de xenobiticos Efecto Xenobitico Reaccin efectuada Desactivacin Barbitricos Oxidacin Co-activacin* Diacepam Oxidacin Activacin Hidrato de cloral Reduccin Incremento de la toxicidad Metanol Oxidacin
*tanto el metabolito como el frmaco presentan la misma actividad biolgica.
en una variedad de metabolitos nucleoflicos o electroflicos. La interaccin de los electrfilos ms reactivos con macromolculas celulares de importancia biolgica, juega uno de los papeles ms importantes en los aspectos de la toxicidad de xenobiticos. Adicionalmente, en algunas ocasiones, los metabolitos nucleoflicos ms estables y abundantes, pueden ser convertidos a intermediarios reactivos, de naturaleza electroflica.
Metabolitos nucleoflicos
FASE I FASE II
Xenobitico 4-ipomeanol Benzopireno Tiourea Nitrofurantoina Paraquat
Tabla 2-8. Activacin de xenobiticos en el pulmn Enzima Tipo de toxicidad P450 Necrosis de clulas clara P450, epxido hidrolasa Carcinoma P450, FMNO Dao a clulas Tipo I P450 reductasa, xantina oxidasa Fibrosis P450 reductasa Necrosis alveolar, edema
glucurnidos, steres de sulfatos
Excrecin
M Metabolitos electroflicos
FASE II
conjugados con glutatin
Excrecin
ADN, ARN, Protenas
Figura 2-12. Reacciones para metabolitos nucleoflicos y electroflicos
2.3 Fase II del metabolismo: reacciones de conjugacin

Muchos organismos, incluyendo los seres humanos, pueden realizar Las enzimas que participan en la Fase II generalmente catalizan la adicin de pequeas molculas polares a los metabolitos o frmacos para hacerlos ms polares. A estas enzimas se les denomina transferasas, ya que adicionan una sustancia endgena a un xenobitico o un metabolito del mismo. Las reacciones ms comunes son: Glucuronidacin Conjugacin con sulfato (sulfatacin) Conjugacin con glutatin (conjugados con cido mercaptrico) Metilacin Acetilacin Conjugacin con aminocidos
Tabla 2-9. Reacciones principales del la Fase II del metabolismo Conjugado Coenzima Enzima Grupos conjugados cido uridin-5UDP-glucuronosil- -OH, -COOH, Glucuronido transferasa (UGT) NH2, -NR2, -SH, difosfo--Dglucurnico (UDP-GA)
reacciones de conjugacin en determinados sitios de rganos y clulas. En las ratas y en los seres humanos, la mayor cantidad de reacciones de Fase II, ocurren en el hgado, aunque todos los rganos, incluyendo a la piel, pueden bio-transformar con alguna extensin. En las clulas, los sistemas de conjugacin estn concentrados en las membranas, el citosol, las mitocondrias, los lisosomas y el retculo endoplsmico.
7

3-fosfoadenosin5-fosfosulfato (PAPS) Glutatin (GSH) Acil o aroil activados Acetil coenzima A Sadenosilmetionina (SAM)

Reacciones de glucuronidacin
Estas reacciones involucran la transferencia de un grupo glucuronilo activado desde el cido uridin-5-difosfo--D-glucurnico (UDP-GA) hacia un grupo funcional en el xenobiotico para formar O-, S-, N-, o Cglucuronidacin. La enzima que cataliza esta reaccin se le denomina UDP glucuronosiltransferasa.
uridin-5-difosfato(UDP)
O
Sulfato
Sulfotransferasa Glutatin Stransferasa Glicina Naciltransferasa Acetiltransferasa Metiltransferasa
-OH (fenoles), NHOH Ar-X, epxido, carbocatin -COOH -OH, -NH2 -OH, -NH2, -SH, -N (heterocclos)
Glutatin Glicina Acetilo Metilo
Tabla 2-10. Reacciones de Fase II en diversos tejidos y rganos Tejido 1 2 3 4 5 Adrenal + + Vejiga + Clulas sanguneas + Cerebro + + Intestino + + + Rin + + + + + Hgado + + + + + Pulmn + + + + Placenta + Piel + + Bazo + + + Timo +
1: glucuronidacin; 2: metilacin, 3 conjugacin con glutatin 4: acetilacin; 5: conjugacin con aminocidos; 6: steres de sulfatos
6
H
HN
OH O H
O O
O
N O
OH HO
O O P
-
CH2 HO HO
+ + +
OH
cido uridin-5-difosfo-alfa-D-glucurnico (UDP-GA)
O H H OH HO H
OH
HO
O H H UDP OH
OH O H O
OH
UDP -glucuronosiltransferasa
UDP
HO H OH
Tabla 2-11. Ubicacin a nivel celular Reaccin Ubicacin Glucuronidacin Microsomas Conjugacin con sulfato Citosol Conjugacin con glutatin Microsomas , citosol Conjugacin con aminocidos Microsomas , mitocondria Acetilacin Citosol, mitocondria Metilacin Microsomas, citosol
Klassen C. Cassaret Doulls Toxicology. Sixth edition. Mc-Graw Hill. p. 136
cido UDP-glucurnico (UDP-GA)
glucurnido de fenol
Figura 2-13. Reaccin glucuronidacin
En virtud de que grupos funcionales con oxgeno, azufre, nitrgeno y carbono son susceptibles a formar glucuronidos, muchos xenobiticos, tales como alcoholes, fenoles, cidos carboxlicos, hidroxilaminas, aminas aromticas y tioles, asi como compuestos endgenos, tales como la bilirrubina y esteroides, son substratos para la UDP-glucuronosiltransferasa (UGT).
8

Conjugacin con glutatin (conjugados con cido mercaptrico)
En la conjugacin de los xenobiticos, especialmente de carcter electroflico, con glutatin es importante tomar en cuenta la ubicacin de los diferentes etapas del proceso. a) Los procesos enzimticos (al menos siete isoenzimas de la glutatin-S-transferasa) y no enzimticos para que ocurra la conjugacin se llevan a cabo en el citosol. b) La remocin del grupo glutamilo del conjugado por la glutamiltransferasa, la hidrlisis para remover la glicina por medio de dipeptidasas y la N-acetilacin del conjugado con cistena por la acetilcoenzima A, para producir el tioter, son procesos que se llevan a cabo por enzimas unidas a membranas.
SG OH Fase I Glutatin (GSH) conjugado de Glutatin O cido Mercaptrico O GSH = O AcCoA N-acetilacin "producto conjugado con el cido Mercaptrico" Conjugado de Cistena NHCCH3 SCH2CHCOOH HOOCCHCH2CH2CNHCHCNHCH2COOH NH2 Ac. Glutmico CH2SH Cistena Glicina prdida de Glutmico y Glicina H2O SG

aminas aromticas, tiofenos, triazinas, teres difenilos, compuestos
halogenados, nitro-compuestos, compuestos con dobles enlaces y sulfatos.

Es pac io intrac elular X organelos Fas e I E (elec trfilo)
glutatin transferasa
Es pac io extracelular X (xenobiotic o)
E-SG
conj ugado con glutatin
E-SG GSSG
NADP + 2eH+
glutatin reductasa
GSH
H2O2
glutatin peroxidasa
NADPH
GSSG
glutatin oxidado
H2O
Figura 2-15. El glutatin como un amortiguador redox
Los productos de conjugacin van a excretarse por diferente partes de organismo segn sea su peso molecular.
NH2 SCH2CHCOOH
Naftaleno
especie electroflica
Figura 2-14. Conjugacin del naftaleno con el glutatin y formacin de derivados del cido mercaptrico
Tabla 2-12. Excrecin de los derivados de las reacciones de conjugacin Tipo de reaccin Sitio preferente de excrecin Glucurnidos <250 D (rion), >250 D (hgado) Conjugados del cido mercaptrico Rion Conjugados con glutatin Hgado Sulfatos Rion Conjugados acetilados Hgado Conjugados con aminocidos Rion
A diferencia de la mayora de las reacciones de Fase II, esta conjugacin requiere de xenobiticos metablicamente activados, en lugar de co-sustratos activos. Los tipos de metabolitos que se pueden conjugar con el glutatin incluyen N-hidroxi-compuestos, uretanos, sulfonamidas,
9
O HN CH3 HN
O CH3
O HN CH3
PAP
PAPS
UDP-GA
UDP
OSO 3
sulfato transferasa
OH
UDP-glucurosil transferasa
OC 6H8O 6
sulfato de acetaminofen
acetaminofen
glucurnido de acetaminofen
NADPH2, O2
O HN CH3
H+, eROOH
CYP 2E1, 1A2, 3A4
.N
PHS
CH3
NADP, 2H2O
ROH + H2O
H+, e-
Figura 2-16. Activacin txica: tipos de metabolitos reactivos
OH
O. O HN CH3
O N CH3
activacin de xenobiticos
GSH
unin a protenas renales con dao a la mdula del rin
cidos
bases o neutros
SG OH O
UGT acilglucornido
acilCoA sintetasa
acilCoA tioster electrfilos hepatotoxicidad
CYP
peroxidasas radicales (het )
conjugado con glutatin
N-acetil-p-benzoquinoneimina (NAPQI)
unin a protenas hepticas y produccin de cirrosis
radicales (C)
Figura 2-18. Metabolismo del acetaminofn (paracetamol) Curtis D. Klaassen. Casarett and Doulls Toxicology. The basic Science of Poisons. 8 th edition. Mc Graw Hill, USA, 2013, p. 244.
hepatotoxicidad, inactivacin de CYP
discrasia sangunea
Figura 2-17. Intermediarios reactivos y dao ocasionado Curtis D. Klaassen. Casarett and Doulls Toxicology. The basic Science of Poisons. 8 th edition. Mc Graw Hill, USA, 2013, p. 192.
10

hgado
HO OH
CYP
CYP
La acetilacin es un proceso que se lleva a cabo en dos etapas. Primero ocurre la acetilacin del sitio activo de la enzima por la acetil coenzima A. Enseguida, el grupo acetilo se transfiere al grupo amino del
OH
xenobitico. Este proceso en dos etapas permite que la enzima manifieste mayor control sobre el proceso cataltico.
mdula sea
O
estimulacin
OH
supresin de mdula sea por unin a protenas y ADN

OH
PHS mieloperoxidasa
O SCoA X
CoA
H2NR
XX
H NR
OH
Figura 2.19. Biotransformacin del benceno
Figura 2-20. Mecanismo de acetilacin por la N-acetiltransferasa
En el hombre la N-acetilacin est determinada genticamente. Los
Acetilacin y polimorfismo
Las reacciones de acetilacin de xenobiticos primeramente ocurren sobre grupos aminos primarios; los aminos secundarios y terciarios, en general, no son acetilados. De la misma manera, procesos de diacetilacin prcticamente no son observados. En las reacciones de acetilacin, la acetil coenzima A, es la molcula donadora del acetilo en aminas alifticas. La enzima arilamina transferasa (varias isoenzimas), cataliza la acetilacin de numerosas aminas aromticas y sulfonamidas. Esta enzima ha sido detectada en el hgado, estmago, pulmones, timo, ovarios, tero, glndulas adrenales, leucocitos, riones, mdula sea, pncreas, glndulas salivales, cerebro y msculo de muchos animales (excepto los perros) incluyendo al hombre.
tres fenotipos son: a) homocigotos acetiladores rpidos, b) homocigotos acetiladores lentos y c) heterocigotos acetiladores intermedios. La
distribucin de los acetiladores rpidos y lentos depende de la raza de los individuos. Acetiladores lentos como los egipcios, acetiladores
rpidos/acetiladores lentos (50:50) en los Estados Unidos, y acetiladores rpidos/acetiladores lentos (90:10) en los orientales.
La respuesta de los individuos a la reaccin de acetilacin est determinada por factores genticos. Las enzimas con este tipo de comportamiento presentan el denominado polimorfismo gentico (rasgo monogentico heredado que existe en la poblacin en al menos 2 genotipos;
11
se considera que el locus es polimrfico si el alelo ms raro aparece con una frecuencia mnima del 1%).
ejemplo, la N-acetilacin del 2-aminofluoreno genera un compuesto carcinognico, el 2-acetilaminofluoreno.

O O P450 NCCH3 OH 2-Acetilaminoflureno PAPS Sulfotransferasa O NCCH3 + O NCCH3 OSO3-Na+ NHCCH3
Se han detectado polimorfismos genticos en ms de 30 enzimas que participan en el metabolismo de xenobiticos (acetiltransferasa, CYP, glucuronidasa, entre otros), algunos de los cuales demuestran diferencias tnicas sustanciales en la frecuencia de aparicin y en las consecuencias fenotpicas de su respuesta como son: la ampliacin del efecto teraputico de los frmacos, aparicin de reacciones adversas, dosis efectiva incrementada de frmacos y aumento de las interacciones medicamentosas, entre otras consecuencias.
O CNHNH2 Acetiltransferasa N Isoniazida N Acetilisoniazida O O O COH
Figura 2-22. Bioactivacin del 2-acetilaminofluoreno
Mapa metablico
Presenta las diversas rutas de biotransformacin que presenta un
CNHNHCCH3 Hidrolasa
xenobitico.
N Ac. isonicotnico
Generalmente
cada
compuesto
presenta
una
ruta
de
transformacin principal o predominante y otras rutas secundarias.
O CH3CN=NH H2O O CH3C +
O CH3CNHNHOH P450
O CH3CNHNH2 Acetilhidrazina
Figura 2-21. Acetilacin de la isoniazida
Aunque la acetilacin frecuentemente destruye la actividad biolgica de los compuestos, en algunas ocasiones puede provocar lo contrario. Por
12
Figura 2-24. Ruta de biotransformacin del 2,6-dinitrotolueno
Figura 2-23. Metabolismo del cianuro
13

O CH3 CYP, microsomas tolueno -oxidacin, mitocondria cido benzoico O NH O OH

Los transportadores de la Fase III se expresan en varios tejidos como: hgado, intestino, rin y cerebro; en donde actan como una barrera en contra de la entrada de xenobiticos.
cido hiprico
OH conjugacin con glicina citoplasma
La importancia fisiolgica de la Fase III radica en que en algunas

O OH
ocasiones las reacciones de conjugacin con glutatin pueden dar lugar a la activacin txica de los compuestos en lugar de facilitar su excrecin de la clula. En estos casos, este sistema sirve de proteccin, ya que disminuye la concentracin intracelular de estos compuestos txicos.
cido cinmico reduccin y aromatizacin O HO OH por microflora intstinal de humanos
Entre los transportadores involucrados en la Fase III se encuentran la glicoprotena P, las protenas asociadas a la resistencia a frmacos y el polipptido transportador de aniones orgnico.1,2 Tanto P-gp, MRPs como
HO OH
OH
OATPs se expresan en la membrana de los enterocitos intestinales, los cuales excretan xenobiticos al lumen intestinal.2
cido quinico
Figura 2-25. Ruta de biotransformacin con un producto comn Curtis D. Klaassen. Casarett and Doulls Toxicology. The basic Science of Poisons. 8 th edition. Mc Graw Hill, USA, 2013, p. 190.
2.4 Fase III del metabolismo: transporte o excrecin

En general, el metabolismo de xenobiticos se refiere a las Fases I y II, en donde, la Fase I involucra la oxidacin de compuestos y la Fase II a la conjugacin de los productos generados en la Fase I con glucurnido y glutatin, entre otros. Sin embargo, hace poco se reconoci a la Fase III como la ltima fase del metabolismo de xenobiticos, la cual se refiere al transporte o excrecin de los productos originados en la Fase II, a travs de la membrana celular para su posterior eliminacin.
OATP-polipptido transportador de aniones orgnicos, MRP-protenas asociadas a la resistencia a frmacos y P-gp- glicoprotena P. Figura 2-26. Papel de los transportadores en la entrada y salida de compuestos de la clula.
14
Protenas asociadas a la resistencia a frmacos (MRP, multidrugresistance-associated protein)

Protenas asociadas a la resistencia a frmacos lo que puede contribuir a la disminucin en la efectividad de algunos tratamientos como el de la quimioterapia contra el cncer.
Pertenecen a la familia de transportadores ABC (ATP-binding cassettes). Llevan a cabo el transporte, dependiente de la hidrlisis de ATP, 2,
3
de los productos de las reacciones de conjugacin con glutatin,
glucurnido y sulfato, fuera de las clulas. Estos transportadores son de gran importancia debido a que las reacciones de conjugacin con glutatin son un mecanismo de defensa clave en la desintoxicacin de compuestos electrfilos txicos y en el mantenimiento de la homeostasis celular.8, 9
Glicoprotena P
La glicoprotena-p (P-gp) es uno de los primeros transportadores ABC (ATP binding cassette) identificados y estudiados, el cual necesita de la hidrlisis del ATP para llevar a cabo el transporte. compuestos de las clulas.4
2,3
En humanos, los MRPs descritos para el transporte de compuestos conjugados son: MRP1, MRP2, MRP3, MRP4, MRP5 y MRP6.9
La P-gp es una
glicoprotena de membrana de 107 kDa que regula la salida de ciertos Los complejos formados con glutatin, glucurnido o sulfato durante la Fase II son sustratos del MRP1,9 al igual que algunos aniones orgnicos Esta protena se expresa en bajas cantidades en la mayora de los tejidos, pero se encuentra en mayor cantidad en el colon, intestino delgado, conductos pancreticos, conductos biliares, rin y en las glndulas adrenales.5,6 Tambin se ha encontrado que se expresa en la barrera hematoenceflica, en donde protege al cerebro de la entrada de compuestos txicos que pudieran llegar a l a travs de la circulacin sangunea. 7 En el epitelio intestinal, las P-gp se encargan de la entrada de xenobiticos de la sangre a la luz intestinal y previene que estos compuestos regresen a la circulacin sangunea. como las sales biliares monoaninicas. Varios miembros de la familia de los MRPs pueden participar en la eliminacin de metales pesados, como Arsenito y Antimonio. El mecanismo propuesto para la eliminacin de estos metales pesados involucra la conjugacin con glutatin.10 MRP1 y posiblemente MRP5 contribuyen a la resistencia en humanos al Arsenito.11 Existen xenobiticos presentes en los alimentos que pueden ser excretados de las clulas a travs de los MRPs. Un ejemplo, es el producto de la conjugacin de la aflatoxina B1 con glutatin, el cual es un sustrato de alta afinidad para el MRP112, 13 (Figura 2-24).
15

eliminacin del compuesto, ya sea a travs del metabolismo o la eliminacin biliar 14 (Figura 2-23).
Entre los sustratos endgenos del OATP1A1 y 1B1 se encuentran, cidos biliares (colato y taurocolato), esteroides conjugados con glucurnido o sulfato, eicosanoides y hormonas tiroideas. Sin embargo, hay compuestos de origen natural que puede inhibir a estos transportadores; el OATP1A2 se inhibe por los jugos de naranja y toronja, as como por los flavonoides presentes en ellos: naringina, en el jugo de toronja y hesperidina en el jugo de naranja, lo cual afecta la entrada de xenobiticos, como frmacos, a la clula.16 Adems, OATP2B1 se inhibe significativamente por el jugo de toronja.17
Figura 2-29. Metabolismo de Fase I (oxidacin), Fase II (conjugacin) y Fase III (eliminacin) de la Aflatoxina B1 en el hgado.
Consecuencias del metabolismo en una intoxicacin aguda y crnica

La diferencia entre un proceso de destoxificacin y el de activacin txica radica en la reactividad qumica de los metabolitos formados. En la siguiente figura se muestra la integracin de la Fase I y la Fase II, en su relacin al proceso de destoxificacin y activacin txica.
Polipptido transportador de aniones orgnicos (OATP, organic anion transporting polypeptide)

Los OATPs son una gran familia de transportadores de membrana que regulan la captacin de una gran cantidad de compuestos tanto endgenos como exgenos, en especial frmacos.14 En humanos, se han descrito 11 de estos transportadores: OATP1A2, 1B1, 1B3, 1C1, 2A1, 2B1, 3A1, 4A1, 5C1, 5A1 y 6A1. De ellos, se ha caracterizado el papel que juegan OATP1B1, 1A2, 1B3 y 2B1 en la farmacocintica de frmacos. El OATP1A2 facilita la entrada de sustancias al torrente circulatorio a travs de la pared duodenal.15 En humanos, OATP1B1, 1B3, 2B1, estn localizados en los hepatocitos y permiten la entrada de compuestos de la circulacin sangunea a esta clula, lo cual representa un paso importante en la posterior
Figura 2-30. Separacin en las rutas de intoxicacin y destoxificacin metablica .
16

La oxidacin no impedida metablicamente de los xenobiticos por el CYP 2, produce metabolitos los cuales son fcilmente conjugados y por lo tanto eliminados. La oxidacin de los xenobiticos planares por el CYP1 (P 448) producen intermediarios reactivos los cuales no son fcilmente conjugados y eliminados, por lo que interaccionan con nuclefilos intracelulares provocando toxicidad y carcinogenicidad. En general los intermediarios reactivos pueden clasificarse en cuatro grupos principales que son: a) Compuestos electroflicos: (intermediario qumico que presenta deficiencia de electrones: R3C+) b) Radicales libres (son entidades qumicas que contienen un nmero impar de electrones. R3C-). c) Carbenos (son molculas en las que el carbono solo tiene seis electrones: R2C:) y nitrenos (son molculas neutras en las que el nitrgeno tiene slo seis electrones: R-N: d) Oxgeno activado (cuando el oxgeno molecular se reduce para ganar un electrn y producir un anin superoxido: O2-).
A. En la toxicidad aguda, el xenobitico A ejerce su efecto txico por la inhibicin directa de una enzima, y es subsecuentemente destoxificado y eliminado. B. En la toxicidad crnica, el xenobitico B, es activado metablicamente hacia un intermediario reactivo el cual se une covalentemente a glutatin (GSH), protenas, DNA y posiblemente a receptores reguladores. Fugura 2-31. Diferencias en el riesgo de una intoxicacin aguda y una intoxicacin crnica.
Para muchos agentes txicos, la duracin de su accin es inversamente proporcional a la velocidad a la cual ellos son metablicamente inactivados. En otras palabras, entre ms rpido sea transformado una sustancia in vivo a sus metabolitos inactivos, ms corta ser la duracin de
La mayor parte de los intermediarios reactivos son formados por el P450. Sin embargo, existen ejemplos, donde la activacin la provocan reacciones de conjugacin (Fase II).
su efecto. Las diferencias observadas en la duracin de accin de muchos agentes activos dentro de la poblacin humana son debidas primordialmente a la variacin en la composicin y cintica de los sistemas enzimticos que participan en el metabolismo.
Las consecuencias que se presentan en una exposicin aguda o crnica a un xenobitico se presentan en la siguiente figura.
17

9. Homoloya, L., Vradi, A., Sarkadi, B., Multidrug resistanceassociated proteins: Export pumps for conjugates with gluthatione, glucuronate or sulfate. Biofactors, 2003. 17(1-4): p. 103-114. 10. Salemo, M., Petroutsa, M., Garnier-Suillerot, A., The MRP1mediated effluxesof arsenic and antimony do not require arsenicglutathione and antimony-glutathione complex formation. J.
Bibliografa
1. Xu, C., Li, C.Y., Kong, A.N., Induction of phase I, II and III drug metabolism/transport by xenobiotics. Arch Pharm Res., 2005. 28(3): p. 249-268. 2. Yang, Y.M., Noh, K., Han, C.Y., Kim, S.G., Transactivation of genes encoding for Phase II enzymes and Phase III transporters by phytochemical antioxidants. Molecule, 2010. 15: p. 6332-6348. 3. Dean, m., Hamon, Y., Chimini, G., The human ATP-binding cassette (ABC) transporter superfamily. J. Lipid. Res., 2001. 42: p. 10071017. 4. Ishikawa, T., The ATP-dependent gluthatione S-conjugates export pump. TIBS, 1992. 17: p. 463-468. 5. Thiebaut, F., Tsuruo, T., Hamada, H., Gottesman, M.M., Pasta, I., Willingham, M.C., Cellular localization of the multidrug-resistance gene product P-glycoprotein in normal human tissues. Proc Natl Acad Sci 1987. 84: p. 7735-7738. 6. Croop, J.M., Raymond, M., Haber, D., Devault, A., Arceci, R.J., Gros, P., Housman, D.E, The three mouse multidrug resistance (mdr) genes are expressed in a tissue specific manner in normal mouse tissues. Mol Cell Biol, 1989. 9: p. 1346-1350. 7. Beaulieu, E., Demeule, M., Ghitescu, L., Beliveau, R., P-glycoprotein is strongly expressed in the luminal membranes of the endothelium of blood vessels in the brain. Biochem J, 1997. 326: p. 539-544. 8. Keppler, D., Leier, I., Jedlitschky, G., King, J., ATP-dependent transport of gluthatione S-conjugates by the multidrug resistance protein MRP1 and its apical isoform MRP2. Chemico-Biological Interactions, 1998. 111-112: p. 153-161.
Bioenerg. Biomembr, 2002. 34(2): p. 135-145. 11. Zaman, G.J., Lankelma, J., van Tellingen, O., Beijnen, J., Dekker, H., Paulusma, C., Oude Elferink, R.P., Baas, F., Borst, P., Role of glutathione in the export of compounds from cells by the multidrugresistance-associated protein. Proc Natl Acad Sci USA, 1995. 92(17): p. 7690-7694. 12. Keppler, D., Export pumps for gluthatione S-conjugates. Free Radical Biology & Medicine, 1999. 27: p. 985-991. 13. Loe, D.W., Stewart, R.K., Massey, T.E., Deeley, R.G., Cole, S.P., ATP-dependent transport of aflatoxin B1 and it glutathione conjugates by the product of the multidrug resistance protein (MRP) gene. Mol Pharmacol, 1997. 51: p. 1034-1041 14. Niemi, M., Role of OATP transporters in the disposition of drugs. Pharmacogenomics, 2007. 8: p. 787-802. 15. Kalliokoski, A., Niemi, N., Impact of OATP transporters on pharmacokinetics. British Journal of Pharmacology, 2009. 158: p. 693-705. 16. Dresser, G.K., Bailey, D.G., Leake, B.F., Schwarz, U.I., Dawson, P.A., Freeman, D.J., Fruit juices inhibit organic anion transporting polypeptides-mediated drug uptake to decrease the oral availability of fenoxfenadine. Clin Pharmacol Ther, 2002. 71: p. 11-20. 17. Satoh, H., Yamashita, F., Tsujimoto, M., Murakami, H., Koyabu, N., Ohtani, H., Citrus juices inhibit the function of human organic anion-
18

transporting polypeptide OATP-B. Drug Metab Dispos, 2005. 33: p. 518-523. 18. Loomis, T.A.; Hayes, A.N. Essentials of Toxicology Fourth edition. Academic Press, USA. 1996 19. Timbrell, J.A. Principles of Biochemical Toxicology. Ed. Taylor and Francis, LTD. London 1982, pp 134-176 20. Zakrazewski, S. F. Principles of Environmental Toxicology. ACS professional reference book, American Chemical Society, 7. 6. 5.

B.K. Park, H. Laverty, A. Srivastava, D.J. Antoine, D. Naisbitt, D.P. Williams. Drug bioactivation and protein adduct formation in the pathogenesis of drug-induced toxicity. Chemico-Biological Interactions 2011,192, 3036. Dominic P. Williams and B. Kevin Park. Idiosyncratic toxicity: the role of toxicophores and bioactivation. Drug Discovery Today 2003, 8, 1044-1050. Dominic P. Williams. Toxicophores: Investigations in drug safety. Toxicology 2006, 226 111. 8. Hans F. Merk, Jens M. Baron, Mark M. Neis, Daniela Hller Obrigkeit, Ann-Therese Karlberg. Skin: Major target organ of allergic reactions to small molecular weight compounds. Toxicology and Applied Pharmacology 2007, 224, 313317. 9. Kevin Park, Dominic P. Williams, Dean J. Naisbitt, Neil R. Kitteringham, Munir Pirmohamed. Investigation of toxic metabolites
Washington D.C. USA, 1991, pp. 57-65. 21. Baynes, J.W.; Monnier, V.M. The Maillard reaction in aging, diabetes and nutrition. Progress in Clinical and Biology Research, Vol 304. Ed. Alan R. Liss, Inc. USA. 1989. 22. Rea, W.J. Chemical sensitivity Vol I. Lewis Publishers USA, 1992.
Lecturas complementarias
1. Hector C. Keun. Metabonomic modeling of drug toxicity. Pharmacology and Therapeutics 2006, 109, 92 106. 2. Sbastien Anthrieu, Christophe Chesne, Ruoya Li, Christiane Guguen-Guillouzo, Andr Guillouzo. Optimization of the HepaRG cell model for drug metabolism and toxicity studies. Toxicology in Vitro 2012, 26, 12781285. 3. Shufeng Zhou, Hwee-Ling Koh, Yihuai Gao, Zhi-yuan Gong, Edmund Jon Deoon Lee. Herbal bioactivation: The good, the bad and the ugly. Life Sciences 2004, 74, 935968. 4. Sean Ekins, Yuri Nikolsky and Tatiana Nikolskaya. Techniques: Application of systems biology to absorption, distribution,
during drug development. Toxicology and Applied Pharmacology 2005, 207, S425 S434. 10. Werner J. Pichler, MD. Immune mechanism of drug hypersensitivity. Immunology and Allergy Clinics of North America 2004, 24, 373 397. 11. Werner J. Pichler, Dean J. Naisbitt, B. Kevin Park. Immune
pathomechanism of drug hypersensitivity reactions. Journal of Allergy and Clinical Immunology, 2011, 127, S74-S81. 12. Camilla K. Smith Pease. From xenobiotic chemistry and metabolism to better prediction and risk assessment of skin allergy. Toxicology 2003,192, 1-/22
metabolism, excretion and toxicity. TRENDS in Pharmacological Sciences 2005,26, 202-209.
19

Unidad 2. La Biotransformación de Xenobióticos

Загружено:

Сведения о документе

Оригинальное название

Авторское право

Доступные форматы

Поделиться этим документом

Поделиться или встроить документ

Параметры публикации

Этот документ был вам полезен?

Это неприемлемый материал?

Авторское право:

Доступные форматы

Unidad 2. La Biotransformación de Xenobióticos

Загружено:

Авторское право:

Доступные форматы

Unidad 2.

Departamento de Farmacia, Facultad de Qumica, UNAM.

Unidad 2. La biotransformacin de xenobiticos y su importancia toxicolgica

2.1 La biotransformacin heptica de xenobiticos

Unidad 2. La biotransformacin de xenobiticos

Departamento de Farmacia, Facultad de Qumica, UNAM.

Figura 2-3. Las tres Fases del metabolismo

2.2 Fase I del metabolismo: oxidacin, reduccin, hidrlisis

Unidad 2. La biotransformacin de xenobiticos

Departamento de Farmacia, Facultad de Qumica, UNAM.

[CYP Fe+2 C=O]

Figura 2-7. La actividad de las mono-oxigenasas

Figura 2-5. CYP, una hemoprotena

Unidad 2. La biotransformacin de xenobiticos

Departamento de Farmacia, Facultad de Qumica, UNAM.

NADPH CYP reductasa

En algunas ocasiones se utiliza CYP para denotar a la protena o al

mARN y CYP para referirse al gen que les da origen.

Protena (enzima) CYP

Treinta familias de citocromos P 450 han sido descritas, 10 en

NADH Cyt b5 reductasa

Unidad 2. La biotransformacin de xenobiticos

Departamento de Farmacia, Facultad de Qumica, UNAM.

2D6 1A2 2A6 2E 1 2C

carbamazepina, fenobarbital, fenitoina, rifampina, sulfamidimina, hierba de San Juan*

clotrimazol, etinilestradiol, indinavil, ketoconazol, nicardipina, verapamil*

Unidad 2. La biotransformacin de xenobiticos

Departamento de Farmacia, Facultad de Qumica, UNAM.

CYP1A1 (extraheptico) CYP1A2 (heptico)

Los grupos carbonilos, azo y nitro son objetos de reduccin,

CYP1B1 (extraheptico, menor proporcin)

Reaccin Azo Nitro Quinona Sulfxido Carbonilo

Figura 2-10. Localizacin e importancia de los CYP1

Klassen C. Cassaret Doulls Toxicology. Sixth edition. Mc-Graw Hill. p. 136.

S-dealquilacin SCH3 O N N N H 6-Metiltiopurina O

Deaminacin oxidativa CH2CHNH2 CH3

N-oxidacin (CH3)3N Trimetilamina

CH2CH2CH2N(CH3)2 Anfetamina Clorpromacina

Figura 2-11. Reacciones de oxidacin de Fase I del metabolismo

Unidad 2. La biotransformacin de xenobiticos

Departamento de Farmacia, Facultad de Qumica, UNAM.

Consecuencias del metabolismo de la Fase I en la actividad de algunos frmacos

Xenobitico 4-ipomeanol Benzopireno Tiourea Nitrofurantoina Paraquat

glucurnidos, steres de sulfatos

conjugados con glutatin

ADN, ARN, Protenas

Figura 2-12. Reacciones para metabolitos nucleoflicos y electroflicos

2.3 Fase II del metabolismo: reacciones de conjugacin

Unidad 2. La biotransformacin de xenobiticos

Departamento de Farmacia, Facultad de Qumica, UNAM.

Sulfotransferasa Glutatin Stransferasa Glicina Naciltransferasa Acetiltransferasa Metiltransferasa

Glutatin Glicina Acetilo Metilo

cido uridin-5-difosfo-alfa-D-glucurnico (UDP-GA)

cido UDP-glucurnico (UDP-GA)

Figura 2-13. Reaccin glucuronidacin

Unidad 2. La biotransformacin de xenobiticos

Departamento de Farmacia, Facultad de Qumica, UNAM.

halogenados, nitro-compuestos, compuestos con dobles enlaces y sulfatos.

Es pac io extracelular X (xenobiotic o)

Figura 2-15. El glutatin como un amortiguador redox

Unidad 2. La biotransformacin de xenobiticos

Departamento de Farmacia, Facultad de Qumica, UNAM.

CYP 2E1, 1A2, 3A4