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PRÁCTICA # 1

“IDENTIFICACIÓN DEL NÚCLEO CELULAR”

OBJETIVOS

 Utilizar adecuadamente el microscopio óptico


 Observar en diferentes células de diferentes tejidos el núcleo y sus características

INTRODUCCIÓN

El componente más notorio y evidente cuando se observa la célula al microscopio es el núcleo. Es el centro de
control celular y encierra la información genética que le otorga a cada célula las características morfológicas,
fisiológicas y bioquímicas que le son propias. Es imprescindible para la sobrevida de la célula.

Características del núcleo interfásico

En los períodos no divisionales el núcleo no presenta en general cromosomas visibles y por eso se lo denomina
núcleo interfásico.

 Estructura: En todas las células se encuentra un


núcleo con característica morfológica similar y
constituida por una membrana nuclear, jugo nuclear,
cromatina o cromosomas y nucléolo, hablándose en
estos casos de núcleos típicos. (Nucleoide: no existe
núcleo como una estructura definida, el material nuclear
se halla disperso en gránulos por el citoplasma no
existe carioteca que limite y encierre lo componentes
nucleares)
 Forma: La forma del núcleo puede ser regular o
irregular
 Regular: esférica, ovoide, cúbica, etc.
Coincidiendo con la forma de la célula. Es decir
que la forma del núcleo coincide generalmente
con la de la célula.
 Irregular: como en los glóbulos blancos
polimorfonucleares, su morfología polilobulada y
en forma de herradura es la que le da aspecto
irregular al núcleo.
 Tamaño: Su tamaño es variable pero en general guarda relación con la célula.
Podemos referirnos a él en términos absolutos en cuyo caso daremos una medida en micrones. O hacerlo
en forma relativa y referirlo a la relación núcleo citoplasma.
 Posición: La posición del núcleo varía según el tipo de célula considerada y según la
materia acumulada en la célula. Cada célula tiene el núcleo en una posición característica en casi todas las
células animales es céntrico, en algunas como las adiposas y las de las fibras musculares estriadas
esqueléticas es excéntrico, en las epiteliales se ubica en la zona basal.
 Número: La mayoría de las células son mononucleadas pero las hay binucleadas
(células Cartilaginosas, células Hepáticas) multinucleadas (fibra muscular estriada)

Envoltura nuclear membrana nuclear o carioteca

Su importancia radica en que el proceso de transcripción de ARN, a partir de ADN está físicamente separado
tanto en el tiempo como en el espacio del sitio de la síntesis proteica, traducción. En las procariotas existe poca
posibilidad de alterar el ARN que se ha transcripto antes de que sea traducido a proteína, en cambio en las
eucariotas los ARN que se han transcripto pueden ser extensamente alterados (revisados, madurados) en el
núcleo antes de su traducción a proteína en el citoplasma. Esto se denomina procesamiento de ARN.

Al microscopio electrónico se presenta como una doble membrana (dos membranas de 90 A y un espacio
intermedio de 140 A). Podemos observar que la cromatina tiende a adherirse a su cara interna; mientras que a
su cara externa se adhieren los ribosomas. La composición química es de tipo lipoproteica. Posee múltiples
poros cuyo diámetro oscila en los 80nm.

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Poro: estructura supramolecular que parece estar organizada y mantenida en su lugar mediante la lamina
nuclear una red proteica que tapiza la parte interior de la membrana nuclear interna y ayuda a configurar el
núcleo y a organizar a los cromosomas.

El número y tamaño de los poros varía con el tipo de


célula. Se cree que en los mamíferos estos ocupan el
10% con relación a la superficie total, se encuentran
rodeados por estructuras circulares llamadas anillos
que en conjunto forman el complejo del poro. Por
dichos poros pueden pasar macromoléculas y las
unidades ribosomales pero el intercambio es
selectivo, su función es impedir la entrada de los
ribosomas activos en el núcleo. Lógicamente la
función de estos es mantener una estrecha
comunicación entre ambas partes de la célula, el
canal central por el que se produce esta mide 10 a 15
nm. Por ejemplo: hay proteínas como la ARN
polimerasa, ADN polimerasa e histonas que se
sintetizan en el citoplasma y luego deben ser
transportadas al núcleo las células tienen la
capacidad de ubicar las proteínas específicas en los
compartimentos celulares adecuados.

Existe una interesante comunicación entre la membrana nuclear y el retículo endoplásmico, (la membrana
nuclear externa forma un todo continuo con la membrana del retículo) también sabemos que en la profase de la
mitosis al desaparecer la membrana esta pasa a formar parte del retículo para en la telofase volverse a formar
en cada célula hija a expensas de aquel.

Jugo nuclear, cariolinfa, carioplasma

El jugo nuclear está en amplia comunicación con el jugo citoplasmático merced a los poros de la membrana. Al
igual que en el citoplasma, por la cariolinfa circulan iones diversos, moléculas pequeñas, macromoléculas, etc.

Nucleolo

Es la fábrica celular donde se producen los ribosomas. Para poder construir sus 10 millones de ribosomas, una
célula en crecimiento debe sintetizar en cada generación celular 10 millones de copias de cada tipo de molécula
de ARNr y esto solo puede lograrse gracias a que la célula tiene varias copias de los genes que codifican los
ARNr (genes de ARNr). Las células humanas contienen unas 200 copias de ARNr distribuidas en pequeños
grupos en cinco cromosomas diferentes. Los nucléolos se dispersan durante la mitosis y se reconstruyen en
localizaciones específicas que se denominan organizadores nucleolares, estas zonas se reconocen por
presentarse como una constricción secundaria del cromosoma donde se ubican bucles de ADN.

El ARNr recién sintetizado es empaquetado


inmediatamente con proteínas ribosómicas
conformando las subunidades mayor y menor para ser
luego exportadas por separado al citoplasma en
tiempos también distintos.

Estructura esferoide casi siempre presente en las


células cuyo n° oscila entre 1 y 3. En él podemos
distinguir dos zonas:
 Zona granular, formada por partículas de
ribosomas en distintos estadios de ensamblado mide
entre 15 y 20 nm y ocupa la parte periférica del
nucléolo.
 Zona fibrilar, mide entre 5 y 10 nm y ocupa
una región más céntrica.

A diferencia de los orgánulos celulares el nucléolo


carece de membranas, su tamaño varía en diferentes
células y puede variar dentro de una misma célula.

Cromatina

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El ADN es el principal componente genético de la célula y el que lleva la información codificada de una célula a
otra y de un organismo a otro. En las células eucariotas el ADN no se encuentra suelto sino unido a proteínas
específicas llamadas histonas con las que forma una compleja estructura denominada cromatina (también se
encuentran otros tipos de proteínas cromosómicas no específicas y pequeñas cantidades de ARN). Las histonas
son cinco proteínas diferentes básicas, de carga positiva, esta propiedad hace que se unan fuertemente al ADN
que es ácido, de carga negativa.

La cromatina se presenta como una fibra de 10 nm como primer grado de organización (aunque no es muy
probable que podamos observarla en este estado, no en forma natural al menos).

El plegado de ADN es importante en las células eucarióticas por dos


motivos: en primer lugar es esencial para disponer las grandes
moléculas de ADN en forma ordenada dentro del núcleo celular. En
segundo lugar la manera en que se pliega una región del genoma de
una célula en particular determina la actividad de los genes de esta
región y es aquí donde las histonas cumplen un papel primordial.

Las histonas pueden ser agrupadas en dos:

 Histonas nucleosómicas H2A, H2B, H3, H4 que son las


responsables del plegado del ADN en los nucleosomas.
 Histonas H1 responsables del plegado de los
nucleosomas en la fibra cromatínica de 30 nm.

Si se estirara la doble hélice de ADN de cada cromosoma humano


este mediría aproximadamente 5 cm. Las histonas son las
responsables de empaquetar esta larga molécula de ADN dentro de
un núcleo de unos pocos micrones de diámetro.

Existen diversos grados de empaquetamiento y la


unidad fundamental es el nucleosoma. Él confiere a
la cromatina su aspecto de cuentas ensartadas,
cada cuenta nucleosómica posee un conjunto de 8
moléculas de histonas, 2 copias de cada una de las
cuatro histonas nucleosómicas. Estas moléculas
forman un núcleo proteico alrededor del cual se
enrolla el fragmento de ADN de doble hebra. Cada
cuenta esta separada de la siguiente por una región
de ADN espaciador que junto con la cuenta
nucleosómica constituye un nucleosoma completo.
El sistema de cuentas debe condensarse aún más
para esto los nucleosomas se empaquetan entre sí,
esta forma básica de empaquetamiento recibe el
nombre de fibra cromatínica de 30 nm. De este
empaquetamiento es responsable la histona 1. El
empaquetamiento continúa aún más, cuando se
observa la estructura de ciertos cromosomas esto
aparecen organizados en una serie de dominios
estructurales en forma de bucle la hipótesis que se
sostiene en este sentido es que las zonas de bucles
de cromatina se establecen y mantienen por acción
de ciertas proteínas.

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La cromatina durante el ciclo celular presenta distintos
aspectos que ilustramos mediante un esquema del ciclo
de condensación – descondensación de los
cromosomas. En G1 los cromosomas están dispersos;
en S se produce la duplicación que se completa en G 2.
En la metafase, M, y en la anafase, A, la condensación
es máxima y se ven los dos centrómeros (flechas).

Cromosomas

Durante la división celular la cromatina se compacta


haciéndose visible al microscopio y recibiendo el nombre
de
cromosomas.
Estos pueden
clasificarse según su forma que depende de la ubicación del
centrómero en:
 Telocéntrico: un solo brazo centrómero en uno de sus extremos.
 Metacéntrico: los brazos son iguales centrómero en el centro.
 Submetacéntrico: centrómero en medio de dos brazos desiguales
 Acrocéntrico: brazos desiguales, poseen constricción primaria,
secundaria y satélite

En los cromosomas condensados es posible distinguir varios elementos:

 Cromatida: en la metafase cada cromosoma esta formado por dos componentes simétricos cada uno de los
cuales contiene una molécula de ADN.
 Centrómero o cinetoco es la región del cromosoma donde convergen las fibras del huso mitótico, se
encuentra en una parte más delgada del cromosoma la constricción primaria.
 Telómero: extremo del cromosoma se cree que su función es evitar que se "peguen" o fusionen con otros
fragmentos. Zona que no posee información genética.
 Constricción secundaria: son constantes en su posición y tamaño, resultan útiles para identificar un
cromosoma en particular.

Los organizadores nucleolares son ciertas construcciones secundarias en las que los genes codifican a los
ARNr. En el hombre los organizadores nucleolares se hallan en los cromosomas 13, 14, 15, 21 y 22 todos ellos
son acrocéntricos y tienen un pequeño cuerpo redondeado (satélite) separado del resto del cromosoma por la
constricción secundaria.1

Relación núcleo / citoplasma

En 1831 Brown indicaba que todos las células de los seres vivos tenían núcleo ( los eritrocitos carecen de él ).
En cuanto a su tamaño es variable, aunque guardan relación con el volumen citoplasmático. Esta relación se
expresa RNP = V núcleo / V célula - V núcleo, tiene que existir un equilibrio entre el volumen del citoplasma y el
nuclear. Según la expresión anterior al aumentar el volumen nuclear debe hacerlo el citoplasmático y viceversa.
El hecho de que en esta relación se produzca cualquier variación es un estímulo para la división celular.

En general los núcleos suelen tener un diámetro de 5 a 30 micrómetros. En las células reproductoras el núcleo
es de gran tamaño, como en los ovocitos y en los zigotos, puede ser el núcleo de gran tamaño en relación a la
cantidad de ARN.

Suelen ser esféricos u ovalados aunque en las células alargadas el núcleo también adopta esta forma, también
algunas células puede ser polimórfico, el que presente forma irregular indica alta actividad metabólica. Casi
todas las células son mononucleadas aunque en algunas hepáticas son trinucleadas o incluso polinucleadas
(médula ósea). La posición es variable, pero constante para cada tipo de célula.2

MATERIAL

 Microscopio óptico
 Frotis de diversos tejidos
 Aceite mineral
 Goteros

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PROCEDIMIENTO

 Observar en diferentes células el núcleo destacando:

 Forma
 Relación núcleo /citoplasma
 Granulación
 Rugosidad de membrana
 Inclusiones nucleares

RESULTADOS

 Muestra de médula ósea a 100X

Se presentan células con diversas formaciones y tipos de núcleos de forma redonda, arriñonada, irregulares,
con gránulos pericromatinianos e intercromatinianos; no se observo el nucleolo. Relación núcleo-citoplasma del
80%.

 Linfocitos (sangre periférica) a 100X

Se encuentran células de diversas formas, con núcleos redondos, sin inclusiones o granulaciones con una
relación núcleo-citoplasma del 10%.

 Células epiteliales de tumor renal a 100X

Se encuentran núcleos de forma alargada y redonda, de hecho, varios núcleos dentro de una sola célula con
gránulos intercromationianos y con una relación núcleo-citoplasma de 20%.

 Línea celular U937 a 40X

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Se observan núcleos de diversas formas, irregulares, redondos, casi ningún arriñonado y alargados con una
relación de 90% con gránulos pericromatinianos e intercromatinianos.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

 Para la médula ósea: Las células que se observaban morados y muy oscuros se encontraban en
división celular. Algunas células se observaban segmentadas (ya que su núcleo se estaba segmentando), las
células inmaduras se diferenciaban debido a que sus núcleos eran muy grandes; en general se observaron en
esta muestra todo tipo de células.
 En las células del cultivo de sangre periférica se observaron linfocitos con división celular, además de
que las células grandes se encontraban activadas debido a que estaban a punto de dividirse, esto se podía
observar por su esponjosidad, y también se observaban otros más pequeños.
 En las células del tumor renal se podían observar en una misma célula varios núcleos ya que la
célula se divide tan rápido que no alcanza a dividirse adecuadamente y ya que son cancerosas por eso se
presenta este tipo de poliploidia.
 En las células de la línea celular, es decir de las células vivas leucémicas U937, se observaron
células muertas que se diferenciaban por tener el citoplasma roto, otras que se encontraban muy expandidas
ya que se estaban muriendo (núcleos muy grandes) y otras células de tamaño normal pero con el núcleo muy
grande.

CONCLUSIÓN

En esta práctica observamos gran cantidad de núcleos y las posibles configuraciones que este puede
desarrollar, aprendimos a identificar algunas de sus características en diferentes tipos de células, en algunos
casos se observaban los cromosomas.

Esta práctica nos dará las enseñanzas básicas para trabajar con células e identificar sus componentes de
manera efectiva para posteriores prácticas y reconocer todos estos compuestos que contiene un núcleo celular
y como los núcleos de las diferentes células varían en cada tipo y como dentro de un mismo tipo celular el
núcleo puede cambiar.

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1
http://www.alipso.com/monografias/nucleo_celular/(15/09/08 05:21pm)
2
http://www.elergonomista.com/biologia/nucleo.htm (15/09/08 06:03pm)