INFORME MICROBIOLOGA

INFORME DETERMINACIN DE CLOSTRIDIUM PERFRINGERS

PRESENTADO POR: KELLY PUENTES OMAR NOVA JHONNATAN CUCAITA YENNYPEREZ

INSTRUCTORA: ALEXANDRA CUCAITA

FICHA: 433472

SENA CENTRO NACIONAL DE HOTELERA, TURISMO Y ALIMENTOS CONTROL DE CALIDAD DE ALIMENTOS BOGOT D.C 2013

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1. INTRODUCCIN: El Clostridium perfringens es una bacteria anaerbica, Gram-positiva, cuyos bacilos forman esporas. Esta bacteria se distribuye ampliamente en el ambiente y con frecuencia se encuentra en el tracto digestivo de los humanos y muchos animales domsticos y asilvestrados. Las esporas de estas bacterias pueden permanecer latentes y por largo tiempo en la tierra, los sedimentos y reas sujetas a la contaminacin por eses fecales humanas y animales. El trmino para describir las enfermedades provocadas por el consumo de alimentos contaminados es: intoxicacin por C. perfringens, No obstante las cepas de tipo C de esta bacteria pueden causar una enfermedad rara pero ms aguda y que es conocida como "enteritis necrtica" o gangrena gaseosa (pig-bel), Es una enfermedad aguda que produce una marcada destruccin de la mucosa intestinal. 2. MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS EN ESTE ANALISIS: SPS (AGAR SELECTIVO SULFITO POLIMIXINA SULFADIAZINA) HISTORIA: Se trata de una modificacin del medio de Wilson y Blair y del de Mossel. Es muy cmodo de emplear al haber inhibido el crecimiento de la flora secundaria y dado su carcter moderadamente selectivo. FUNDAMENTO: La mayor parte de los clostridios reducen el sulfito a sulfuro, que se puede poner de manifiesto por el color negro producido con los iones de hierro, el sulfato de polimixina y la sulfadiazina inhiben el crecimiento de la flora acompaante y la peptona de caseina y el extracto de levadura representan el aporte de nutrientes. FORMULA (POR LITRO) Sodio Sulfito Sulfato de polimixina B Sulfadazina Peptona de casena Extracto de levadura Hierro (II)Citrato 0,5 g 0,01 mg 0,12 g 15,0 g 10,0 g 0,5 g

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Agar pH final 13,0 gr 7,0. 0,2

PREPARACION: Suspender 40 g en 1 L de agua destilada. Calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Distribuir y esterilizar a 118C durante 15 minutos. MODO DE EMPLEO: Generalmente se siembra por incorporacin en gelosa, cuando se utilizan tubos estos se sellan con aceite de vaselina estril. Incubar entre 35C y 37C durante 24 horas. El Clostridium perfringens forma colonias negras al igual que otras especies como C.botulinum y C sporogenes,Cuando se incuba a 46C,se favorece el crecimiento de C.perfringens.sin embargo, deben realizarse pruebas complementarias para la identificacin. CONTROL DE CALIDAD: Aspecto: polvo fino Color: Beige Solubilidad: ligeramente opalescente PH: 7,0. 0,2 CONTROL MICROBIOLGICO: MICROORGANISMOS Clostridium perfringens Escherichia Coli Staphylococcus Aureus Clostridium Sporegenes DESAROLLO satisfactorio Inhibido Inhibido-moderado Aceptable

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3. OBJETIVOS Adquirir destreza en el recuento de esporas de Clostridium sulfito reductor Analizar los resultados obtenidos por la muestra analizada conforme a la normatividad.

4. MATERIALES Y EQUIPOS

2 tubos de ensayo de 10 ml Erlemeyer de 150 ml Cajas de petri Pipetas Micropipeta Puntas para micropipeta Gradillas Mechero Jarra de anaerobiosis Bao de mara Cuchillo, tenedor y esptula Balanza Cintas de vaselina elstica

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Cloruro de sodio Peptona Agua destilada-des ionizada Muestra Agar Sulfito Polimixina Sulfadiazina (SPS)

5. MTODO Se pesaron 10 gramos de cada muestra colectada, las que, por separado, se aadieron a matraces conteniendo 90 mL de solucin salina fisiolgica peptonada (SSFP) estril, obtenindose de esta forma una dilucin al 1/10. A partir de esta dilucin, se hicieron diluciones al 1/100 y al 1/1000. mL y se deposit en tubos estriles y, a continuacin, se agreg el medio de cultivo sulfito polimixina sulfadiazina (SPS). Se dej solidificar, y luego se agreg 1mL del mismo medio de cultivo a fin de asegurar la anaerobiosis. as, se llevaron a incubar a 37 C por 24 horas. colonias negras, y se cuantificaron. procedi a seleccionar cinco colonias negras, para luego sembrarlas en caldo tioglicolato y se incub a 45 C por 24 horas. realiz la coloracin Gram y se sembr en el medio nitrato movilidad y en el medio el medio de cultivo gelatina lactosa, a fin de verificar la reduccin de nitratos a nitritos, movilidad, licuefaccin de la Gelatina y degradacin de la lactosa, respectivamente.

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6 .CLCULOS: AGAR SULFITO POLIMIXINA Sulfadiazina (SPS) 39,4 gr ________ 1000ml x ____________ 120 ml = 4,728 gr AGUA PEPTONADA: 1P ________ 1000ml x _________ 110ml = 0.11 gr CLORURO DE SODIO (NaCl): 8.5 Gr ________ 1000ml x ____________ 110ml = 0.935 gr

7. ANLISIS DE RESULTADOS: Autoclavado: 8:30 Am

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RESULTADOS

ANLISIS

MEDIO DE CULTIVO

DILUCION

DESAROLLO

CARACTERSTIC A MACROSCPICA S Staphylococcus Aureus: *Forma: Irregular *Borde: Ondulado *Elevacin: Elevada *Superficie: Mate *Color: Beige Clostridium perfringens: *Forma: circular *Borde: entero *Elevacin. convexa *Superficie: Brillante *Color: Negro

IMGENES

Determina cin de bacterias anaerobia s del genero Clostridiu m Perfringen s

(SPS) Agar Sulfito Polimixina Sulfadiazi na

Dilucin 10-1 Caja N 1 Desarrollo de Staphylococc us Aureus y Clostridium perfringens

UFC: 41 colonias

Caja N 2: Desarrollo de Staphylococc us Aureus y Clostridium perfringens

UFC:53 colonias

Dilucin 10-2 Caja N 1 Desarrollo de Staphylococc us Aureus y Clostridium perfringens

UFC: 38 colonias

Caja N 2: Desarrollo de Staphylococc us Aureus y Clostridium

Staphylococcus Aureus: *Forma: Irregular *Borde: Ondulado *Elevacin: Elevada *Superficie: Mate *Color: Beige Clostridium perfringens:

UFC: 50 colonias

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perfringens *Forma: circular *Borde: entero *Elevacin. convexa *Superficie: Brillante *Color: Negro UFC:24 colonias Staphylococcus Aureus: *Forma: Irregular *Borde: Ondulado *Elevacin: Elevada *Superficie: Mate *Color: Beige Clostridium perfringens: *Forma: circular *Borde: entero *Elevacin. convexa *Superficie: Brillante *Color: Negro

Dilucin 10-3 Caja N 1 Desarrollo de Staphylococc us Aureus y Clostridium perfringens

Caja N 2: Desarrollo de Staphylococc us Aureus y Clostridium perfringens

UFC:30 colonias

Alimento a Analizar: Salchichn taller de crnicos elaborado por la ficha 433472 Rango: Seleccin de cajas que presentan recuento entre 15-150 UFC Clculo:

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______________________ C:es la suma de la colonas de C.perfringers. N1:Es el numero de cajas guardadas en la primera dilucin N2:E s el numero de cajas retenidas en la segunda dilucin D:es el factor de dilucin correspondiente a la primera dilucin retenida 8. DISCUSIN DE LOS RESULTADOS: Una de las posibles deducciones que podemos aportar, acerca del porque esta bacteria se encuentra tan presente en nuestro producto es porque Clostridium perfringens est ampliamente distribuido en la naturaleza y se halla en la tierra, en las aguas, en los alimentos, en el polvo, en las especias y en el tracto intestinal de las personas y de los animales; en el taller de crnicos realizamos estos productos de una manera artesanal por eso se encuentra tan expuesto a que contraiga una serie de bacterias que afecten su estado. C. perfringens llega a las carnes directamente desde los animales que se sacrifican en el matadero, o por contaminacin de la misma carne de los animales sacrificados otra conclusin que le damos es que el modo de conservacin y manipulacin desde la distribucin del matadero hasta el economato del Sena no se encuentra en muy buenas condiciones. Adems, se conoce que la carne constituye un medio ideal para el crecimiento de Microorganismos debido a sus caractersticas de pH, humedad y nutrientes. Esto explica que se debe ser muy preciso en el taller de elaboracin, ya que si no contamos con las mejores medidas en cuanto a higiene, manipulacin, cuidado y percepcin no vamos a poder erradicar en un % mucho menor a esta bacteria. Otra posible deduccin del porque obtuvimos UFC del tipo C. perfringens es debido a la operacin de escaldado y conservacin por falta de atencin detallada y su manejo inadecuado.

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CONCLUSIONES El nmero de Clostridium perfringens en nuestro producto crnico elaborado en el taller del Sena, est dentro de los parmetros permitidos para este producto. Como controladores de calidad debemos prestar atencin a cada detalle que se encuentra en la lnea de proceso para minimizar el nmero de crecimiento microbiano.

BIBLIOGRAFA http://www.slideshare.net/sangel06/manual-de-medio-de-cultivos file:///C:/Users/Familia/Downloads/170-321-1-PB.pdf http://www.bvsops.org.uy/pdf/clostridium.pdf