Вы находитесь на странице: 1из 6

BIOCHEMISTRY БИОХИМИЯ

OF NUCLEIC ACIDS
D. G. KNORRE
НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ
Ñ. É. äçéêêÖ
The paper deals with çÓ‚ÓÒË·ËÒÍËÈ „ÓÒÛ‰‡ÒÚ‚ÂÌÌ˚È ÛÌË‚ÂÒËÚÂÚ
some fine aspects of the
informational content of
àçîéêåÄñàéççéÖ ëéÑÖêÜÄçàÖ Ñçä.
DNA, namely the regulator êÖÉìãüíéêçõÖ êÄâéçõ à àçíêéçõ
regions of DNA and the В предыдущей статье1 было рассказано лишь о
existence of the interven- самом главном информационном содержании ДНК:
ing sequences (introns). ДНК содержит программы для синтеза свойствен-
ных данному организму белков, которые представ-
The latters are tran- ляют собой последовательности троек нуклеотидов
scribed by RNA poly- на транскрибируемой нити. Непосредственно они
merases but are further программируют синтез соответствующего кодона
мРНК. Например, будущий остаток фенилаланина
excised in the course of должен быть записан на транскрибируемой нити
the RNA maturation by ДНК как (3')dAdAdA(5'), если программируется ко-
the process termed splic- дон UUU, или как (3')dAdAdG(5'), если кодируется
кодон UUC. Участок ДНК, содержащий всю ин-
ing. The main achieve- формацию о программируемом белке, называют ге-
ments in methods of ном для данного белка. Генами называют и участки
investigations and treat- ДНК, которые содержат всю необходимую инфор-
мацию о структуре РНК (рибосомные и транс-
ment of nucleic acids are портные РНК), а также вспомогательные участки,
described. необходимые для транскрипции гена. В действи-
тельности последовательностью кодирующих три-
нуклеотидов для синтеза белков или последователь-
éÔËÒ‡Ì˚ ÌÂÍÓÚÓ˚ ‡Ò- ностью нуклеотидов, кодирующих структуру тРНК
ÔÂÍÚ˚ ËÌÙÓχˆËÓÌÌÓ- или рРНК, содержащаяся в ДНК информация не
„Ó ÒÓ‰ÂʇÌËfl Ñçä – Â- исчерпывается. Сегодня уже ясно, что оно неизме-
римо богаче, а, по-видимому, многое еще и вообще
„ÛÎflÚÓÌ˚ ‡ÈÓÌ˚ Ë неизвестно.
̇΢ˠ‚ÒÚ‡‚Ó˜Ì˚ı ÔÓ- Для создания определенной РНК необходимо,
ÒΉӂ‡ÚÂθÌÓÒÚÂÈ (ËÌ- чтобы транскрипция началась в определенной точке
ÚÓÌÓ‚). èÓÒΉÌË ÔÂ- огромной молекулы ДНК. Здесь должна оказаться и
расположиться нужным для транскрипции образом
ÂÔËÒ˚‚‡˛ÚÒfl ‚ ıӉ РНК-полимераза. Для этого существует специаль-
Ú‡ÌÒÍËÔˆËË, ÌÓ ‚˚Â- ная область, чаще всего находящаяся перед кодиру-
Á‡˛ÚÒfl ËÁ Ó·‡ÁÓ‚‡‚- ющей последовательностью, роль которой состоит
в том, чтобы связать и ориентировать определен-
¯ÂÈÒfl êçä Ò ÔÓÏÓ˘¸˛ ным образом РНК-полимеразу. Эту область, если
ÔÓˆÂÒÒ‡, ̇Á˚‚‡ÂÏÓ„Ó она расположена вдоль цепи близко от начала стар-
ÒÔ·ÈÒËÌ„ÓÏ, ÔË ÓÍÓÌ- та транскрипции, называют промотором.
˜‡ÚÂθÌÓÏ ÒÓÁ‚‡ÌËË Новое неожиданное оказалось связанным со
структурой генов эукариот. Выяснилось, что смыс-
Ïêçä. ç‡ ˝ÚÓÏ ÙÓÌ ËÁ- ловая последовательность, кодирующая определен-
·„‡˛ÚÒfl ÓÒÌÓ‚Ì˚ ÏÂ- ную последовательность аминокислот в белке или
© äÌÓ Ñ.É., 1998

ÚӉ˘ÂÒÍËÂ Ë ·ËÓÚÂıÌÓ- определенную последовательность нуклеотидов в


РНК, необязательно является непрерывной. Она
Îӄ˘ÂÒÍË ‰ÓÒÚËÊÂÌËfl может содержать некоторые вставочные последова-
ıËÏËË Ë ·ËÓıËÏËË ÌÛÍ- тельности, которые получили название интронов.
ÎÂËÌÓ‚˚ı ÍËÒÎÓÚ. 1
Кнорре Д.Г. Биохимия нуклеиновых кислот // Соросов-
ский Образовательный Журнал. 1996. № 3. С. 11–16.

30 ëéêéëéÇëäàâ éÅêÄáéÇÄíÖãúçõâ ÜìêçÄã, ‹8, 1998


Кодирующие последовательности, разделенные óíé ëéÇêÖåÖççÄü ïàåàü à Åàéïàåàü
интронами, в этом случае называют экзонами. При ìåÖûí ÑÖãÄíú ë çìäãÖàçéÇõåà
транскрипции получаются РНК-копии, которые äàëãéíÄåà
содержат и нужные в конечной (зрелой) молекуле Химия и биохимия нуклеиновых кислот не толь-
РНК фрагменты, и лишние, которые должны быть ко углубили наши представления об огромной груп-
удалены (вырезаны) из зрелой молекулы. Каждое пе важнейших биологических процессов, связанных
такое вырезание должно сопровождаться воссоеди- с сохранением, размножением и использованием
наследственной информации, заложенной в гене-
нением концов последовательных экзонов, между
тическом материале клеток, но дали мощный им-
которыми находился интрон. Этот процесс получил пульс для становления современной биотехнологии
название “сплайсинг”. Сплайсинг происходит с из- с важными практическими выходами. Для того что-
бирательностью, характерной для процессов, ката- бы не вслепую манипулировать нуклеиновыми кис-
лизируемых ферментами. До открытия сплайсинга лотами, было необходимо научиться изучать их
считалось общепринятым, что все ферменты имеют структуру, прежде всего составляющие их последо-
белковую природу. Однако никакие белки в некото- вательности нуклеотидов. Впервые ценой воистину
рых случаях в сплайсинге не участвуют, то есть героических усилий это было сделано для несколь-
РНК, содержащая интроны, может сама осуществ- ких тРНК, состоящих из нескольких десятков нук-
леотидов. Приятно отметить, что на первом этапе
лять селективную реакцию, причем с довольно
соревнования за установление первичной структуры
большой скоростью. В результате пришлось при- тРНК в лидирующей пятерке была и группа совет-
знать, что биологическими катализаторами могут ских ученых, возглавляемая А.А. Баевым. Однако
служить не только белки, но и рибонуклеиновые созданные в ходе этих работ методы были настолько
кислоты. По аналогии с энзимами такие катализа- трудоемки, что для прорыва в исследование ДНК и
торы получили название рибозимов. больших молекул РНК они были непригодны. Ре-
волюционные решения, принципиально отличаю-
Говоря об информационном содержании ДНК, щиеся как друг от друга, так и от первых методов,
нельзя не сказать о том, что информационное со- были найдены в США Алленом Максамом и Уолте-
держание ДНК может изменяться как в результате ром Гилбертом и в Англии Фредериком Сенгером.
ошибок при репликации, так и при действии раз- Эти методы, в особенности метод Сенгера, сделали
личных внешних факторов – облучения и обработ- возможным секвенирование нуклеиновых кислот
общим размером в миллионы нуклеотидных пар.
ки некоторыми химическими реагентами. Измене-
ния в структуре ДНК какого-либо организма носят Конечно, в рамках одной статьи рассказать в де-
талях об этих методах невозможно. Поэтому при-
название мутаций. Мутация может заключаться в
дется ограничиться изложением наиболее принци-
том, что одна пара нуклеотидов в двух цепях превра- пиальных особенностей метода, причем только
щается в другую комплементарную пару. Это, есте- метода Сенгера. Особенностью проблемы является
ственно, происходит не единовременно: сначала необходимость определить последовательное распо-
возникает одна ошибка, например dC заменяется ложение очень большого числа остатков нуклеоти-
на dT. При репликации dT отберет для введения в дов (за один проход – несколько сот). Зато свойства
новую цепь dA, а не dG, которое находилось в этом каждого остатка уже хорошо изучены. Основопола-
месте цепи у родительской ДНК. В итоге вместо па- гающая идея Сенгера состояла в том, чтобы исследо-
ры dC ⋅ dG в дочерней молекуле, а тем самым и во вать последовательность не самой ДНК или, точнее,
ее достаточно длинного фрагмента, а исследовать
всех последующих поколениях на этом месте будет
структуру новосинтезированной ДНК, полученной
находится пара dT ⋅ dA. Такие мутации получили на- на исследуемой ДНК как матрице с помощью ДНК-
звание точечных. Происходят и более значительные полимеразы. Из-за комплементарности новой ДНК
по масштабу мутации. Часто, хотя далеко не всегда, по ее последовательности нуклеотидов нетрудно
мутации имеют серьезные биологические последст- восстановить структуру матрицы. При этом оказа-
вия. Известны, например, гены, которые отвечают лось возможным частично заменить в смеси моно-
за контроль над размножением клеток, стимулируя меров, из которой синтезируется новая цепь, один
его до определенного предела и останавливая в из них на так называемый дидезоксинуклеотид. На
нужной для организма фазе. Некоторые единичные рис. 1 приведена химическая формула нуклеотида, а
изменения в таком гене приводят к тому, что спо- именно тимидинфосфата, обозначенного символом
dT. Остатком фосфорной кислоты он связан в цепи
собность к контролю за процессом деления клеток с предыдущим нуклеотидом. Его ОН-группа долж-
теряется и ген превращается в онкоген, то есть ген, на присоединить следующий нуклеотид при продол-
способствующий неограниченному размножению жении роста цепи. Оказалось, что при репликации
клеток – клетки становятся злокачественными и можно совершить небольшой обман ДНК-полиме-
возникает раковая опухоль. разы – подмешать к смеси нуклеотидов дидезокси-

äçéêêÖ Ñ.É. Åàéïàåàü çìäãÖàçéÇõï äàëãéí 31


CH3 O к аноду с разными скоростями. Так как электрофо-
C C рез обычно проводят в очень вязкой среде (геле), то
эта среда оказывает сопротивление перемещению
O O O HC NH фрагментов, тем большее, чем больше размером
− фрагмент. Этот фактор пересиливает действие поля,
O P O P O P O CH2 N C
− − −
O O поэтому, чем длиннее фрагмент, тем медленнее он
O O O CH CH двигается, но все они располагаются в порядке, со-
ответствующем их длинам. Остается только “уви-
CH CH2 деть” место каждого фрагмента. До сих пор для этой
OH цели чаще всего используют радиоактивную метку: в
Тимидин-5'-трифосфат
нуклеотиды, из которых синтезируется новая цепь,
вводят радиоактивный фосфор. Поэтому после
окончания гель-электрофореза гель прикладывают
CH3 O
к рентгеновской пленке и на месте нахождения
C C фрагментов после проявления радиоавтографа по-
O O O HC NH являются темные пятна. На рис. 2 схематично пока-

заны такой радиоавтограф и читаемая с него после-
O P O P O P O CH2 N C довательность маленького кусочка ДНК.
− − −
O O
O O O CH CH Следует отметить, что метод Сенгера, равно как
и метод Максама–Гилберта, совершившие револю-
CH CH2 цию в изучении структуры ДНК, оказался успешным
H благодаря нарушению основного канона аналитиче-
Дидезокситимидин-5'-трифосфат ской химии, который можно сформулировать так:
если нельзя напрямую определить структуру некото-
рой молекулы, нужно ее количественно превратить в
Рис. 1. Структуры тимидин-5'-трифосфата и его
дидезоксианалога
G A T C
рибонуклеотид, у которого эта ОН-группа отсутст- G
вует. Его можно обозначить в представленном A
T
случае символом ddT. С какой-то вероятностью T
ДНК-полимераза узнает и присоединит к растущей A
цепи очень похожий ddT вместо dT. Так как синтез C
G
идет в строгом соответствии с принципом компле- T
ментарности, то это произойдет напротив той точки C
матричной ДНК, где находится комплементарный C
A
dA. Но из-за отсутствия у ddT ОН-группы эта це- G
почка не сможет расти дальше, произойдет обрыв
цепи. Обрыв с определенной вероятностью может
произойти в любой точке напротив dA. Таким обра- а (3’) X1 X2 X3 X4 X5 X6 X X X A XX A XXXX A A XA
зом, получится смесь новосинтезированных цепей
разной протяженности, причем длины (числа нук- б X 1 X 2 X 3 X 4 X 5 X 6 X X X ddT
леотидных остатков) всех этих цепей точно соответ-
в X1 X2 X3 X4 X5 X6 X X X T X X ddT
ствуют номерам остатков dA матрицы. Следова-
тельно, в таком эксперименте определяются точки г X1 X2 X3 X4 X5 X6 X X X T XX T X X X X ddT
расположения всех остатков dA в исследуемой
ДНК. Если три аналогичных эксперимента провес- д X1 X2 X3 X4 X5 X6 X X X T XX T X X X X T ddT
ти со смесями, содержащими примеси других диде-
е X1 X2 X3 X4 X5 X6 X X X T XX T XXXX T T XddT
зоксинуклеотидов: ddA, ddC и ddG, то аналогично
будут расставлены по номерам все остальные три
нуклеотида на исследуемой ДНК. Разделить же по- Рис. 2. Схема метода Сенгера и схематичное
лученные смеси по длинам не представляет труда с представление фрагмента радиоавтографа геля с
соответствующей ему последовательностью нук-
помощью электрофореза – метода, основанного на леотидов. Х и X – произвольные комплементарные
перемещении заряженных молекул под действием остатки нуклеотидов. Пронумерованы индексами
постоянного электрического поля. Дело в том, что остатки, входившие в состав праймера. dA – остат-
каждый остаток нуклеотида содержит остаток фос- ки дезоксиаденозинового нуклеотида в составе
анализируемой ДНК. dT и ddT – остатки тимидин
форной кислоты, который несет отрицательный за- монофосфата и дидезокситимидин монофосфа-
ряд. Поэтому, будучи помещены в электрическое та, включившиеся в новые цепи ДНК, полученные
поле, фрагменты разной длины будут перемещаться при репликации с помощью ДНК-полимеразы

32 ëéêéëéÇëäàâ éÅêÄáéÇÄíÖãúçõâ ÜìêçÄã, ‹8, 1998


другую молекулу, строение которой известно. На ществ. Химик считает, что, проведя реакцию с
этом принципе построен и замечательный метод выходом 80%, он имеет неплохой результат. Но об-
Эдмана для установления последовательности ами- щий выход стостадийного процесса при выходе 80%
нокислот в полипептидах (фрагментах белков). Ав- на каждую стадию составит 0,8100 = 10− 9, то есть одну
тор нашел химическую реакцию, которая позволяет миллиардную часть от введенного в реакцию перво-
отщепить с одного, определенного конца полипеп- го нуклеотида. Очевидно, что такой выход не может
тида один остаток аминокислоты, превратив его в быть основой для прогрессивной технологии. Меж-
так называемый тиогидантоин и не разрушая при ду тем, по крайней мере частично, неколичествен-
этом остальную цепочку. Разным аминокислотам ные выходы происходят от того, что по химическим
соответствуют разные тиогидантоины, так что лег- традициям при проведении реакции в несколько
ко определить, какая именно из 20 аминокислот, стадий нужно после каждой стадии выделить полу-
входящих в состав белков, была отщеплена. Укоро- ченный продукт, очистить его от не вступивших в
ченный на одну аминокислоту полипептид может химическую реакцию реагентов, от других приме-
быть повторно использован для определения при- сей и только потом приступать к следующей стадии.
роды следующего аминокислотного остатка. Одна- Потери, причем вполне ощутимые, на каждой ста-
ко каждый найденный аминокислотный остаток – дии неизбежны.
результат отдельной процедуры, и таким путем в
Меррифилд предложил отказаться от этой клас-
лучших случаях удается проделать несколько десят-
сической химической традиции. Согласно его идее,
ков шагов. В методе Сенгера анализируется слож-
первое звено создаваемой цепи полимера прочно,
ная смесь продуктов репликации, так что с одного
до самого конца синтеза, закрепляется химической
геля (точнее, с четырех дорожек одного геля) сразу
связью на твердом веществе-носителе, который по-
расставляются по своим местам сотни нуклеотид-
мещается в специальную трубку-реактор (колонку).
ных остатков.
Через реактор пропускается второй мономер, при-
Успешно развиты и методы химического синтеза чем в достаточном избытке, чтобы превращение
больших фрагментов нуклеиновых кислот – олиго- закрепленного мономера было как можно более
нуклеотидов. Как и в случае секвенирования, все полным. Затем избыток второго мономера и все
началось с чрезвычайно трудоемких методов. Раз- вспомогательные вещества, нужные для образования
работав и применив на практике эти методы, аме- химической связи между мономерами, отмываются
риканский ученый Гобинд Корана в 1970 году завер- пропусканием через реактор подходящего раствори-
шил синтез ДНК, кодирующей последовательность теля. Заодно отмываются и побочные вещества, по
одной из тРНК дрожжей, специфичной к амино- крайней мере те, которые не связаны с носителем.
кислоте аланину. Однако из процедуры, требовав- После этого приступают к присоединению третьего
шей многолетнего труда большого числа специали- звена. Процедуру можно повторять много раз, хотя,
стов высшей экспериментальной квалификации, в конечно, и не до бесконечности – какие-то потери
рутинный метод, выполняемый на специальных ав- и загрязнения неизбежны. Ясно, что такая процедура
томатических синтезаторах, синтез превратился су- легко поддается автоматизации. Синтезатор олиго-
щественно позднее. Это было связано как с измене- нуклеотидов (иногда его называют ген-синтезато-
нием химических процессов, положенных в основу ром) имеет несколько сосудов, содержащих отдель-
последовательного присоединения к растущей це- ные мономеры, вспомогательные вещества, нужные
пи необходимых нуклеотидов, так и в огромной ме- для синтеза, и растворители для промежуточных
ре с введением в практику так называемого твердо- промывок реактора. Все эти вещества подаются по-
фазного синтеза, общий принцип которого был очередно в реактор, содержащий носитель и расту-
предложен американским ученым Робертом Мер- щую на нем полимерную цепь с помощью насоса,
рифилдом для синтеза белков из аминокислот. который выбирает каждый раз нужный сосуд по
Как в белках, так и в нуклеиновых кислотах свя- введенной в прибор программе. В программу вво-
зи между мономерными звеньями, сколько бы их дится и та последовательность, которую следует
ни было, идентичны. В нуклеиновых кислотах это синтезировать. Этим задается структура будущего
всегда связь между остатком фосфорной кислоты, продукта. Остается только по окончании синтеза
принадлежащей одному звену мономера, и гидро- разрушить химическую связь, с помощью которой
ксильной группой (ОН) соседнего мономера. Что- первое мономерное звено было закреплено на но-
бы построить, например, фрагмент нуклеиновой сителе, и провести очистку синтезированного про-
кислоты длиной в 100 нуклеотидов, нужно последо- дукта от неизбежно накопившихся примесей. В
вательно 99 раз осуществить реакцию образования умелых руках на надежно работающих ген-синтеза-
этой связи, поочередно вводя в реакцию один мо- торах удается получать фрагменты длиной до ста
номер за другим. Сегодня проблемы образования нуклеотидов и более. Конечно же, биологически
такой связи в химии, можно сказать, не существует. интересные гены значительно длиннее. Однако уже
Вопрос в том, чтобы каждый раз проводить эту ре- на заре становления искусственного синтеза нукле-
акцию как можно более количественно и с мини- иновых кислот Корана разработал способ соедине-
мальным накоплением ненужных (побочных) ве- ния достаточно длинных олигонуклеотидов между

äçéêêÖ Ñ.É. Åàéïàåàü çìäãÖàçéÇõï äàëãéí 33


собой с помощью существующего у всех живых ор- ного участка новые дуплексы разрушают нагрева-
ганизмов фермента ДНК-лигазы. Так что в настоя- нием до достаточно высокой температуры, чтобы
щее время синтез генов является хотя и трудоемкой, развести исходную и новосинтезированную нити,
но вполне доступной процедурой. затем снова охлаждают до температуры, благопри-
Замечательной способностью ДНК является ятствующей образованию дуплексов с праймером и
возможность ее размножения. В принципе для это- последующей репликации. Ясно, что при каждом
го нужны лишь должным образом подготовленные таком цикле количество копий амплифицируемого
нуклеотиды и ДНК-полимераза. Поэтому, получив участка удваивается, то есть за 20 циклов можно
некоторое небольшое количество ДНК, ее можно увеличить количество интересующей исследовате-
размножить. В настоящее время эта процедура для ля последовательностей в 220 = 106 раз.
небольших молекул ДНК или определенных кусков Среди многочисленных применений ПЦР сле-
большой молекулы хорошо разработана. Она полу- дует в первую очередь отметить, что она нашла при-
чила название амплификации, или полимеразной менение для выявления мутантных генов, что имеет
цепной реакции (ПЦР). Имеется лишь одна ослож- огромное практическое значение для выявления
няющая, но без особого труда преодолимая пробле- наследуемых заболеваний. При проведении ПЦР
ма. Дело в том, что особенностью всех известных при этом вводятся такие праймеры, чтобы они по-
ДНК-полимераз является их неспособность начать могли ему простимулировать амплификацию му-
синтез новых полимерных цепей. Они могут только тантного гена, но не дали возможность амплифици-
удлинять уже существующую цепь, связанную с ровать неизмененный ген. Если выявляемая мутация
комплементарной матрицей. присутствует, то на последней стадии амплифика-
ции на фоне разнообразных фрагментов ДНК, ко-
В живых организмах эта трудность преодолева- торые не подверглись амплификации, получится
ется довольно сложным образом. Когда приходит большое количество мутантного фрагмента, кото-
время для удвоения ядерной или бактериальной рый легко обнаружить и определить, что это имен-
ДНК, вступает в действие специальный фермент, но искомый фрагмент, поскольку он имеет опреде-
выбирающий определенные участки ДНК, с кото- ленный заранее известный размер. При наличии
рых должна начаться репликация, и синтезирует на хороших реактивов и приборов удается зарегистри-
них короткие затравочные фрагменты РНК – прай- ровать изначально ничтожные количества опреде-
меры. Фермент, по сути дела, является РНК-поли- ленной последовательности. ПЦР позволяет про-
меразой, но выполняющей специальную функцию. водить такие тонкие анализы, как пренатальную
Его часто называют ДНК-праймазой. После обра- диагностику – определение нежелательной после-
зования праймера ДНК-полимераза продолжает довательности у плода на первых неделях беремен-
рост цепи уже с помощью дезоксирибонуклеотидов. ности. В зависимости от характера заболевания,
Таким образом, вначале образуется ДНК, несущая провоцируемого таким мутантным геном, можно
на 5'-конце небольшой фрагмент РНК: либо принять специальные меры для нейтрализации
(5')-dAdTdCdCdGdCdCdTdAdGdCdCdAdAdAdA-(3') негативного эффекта, вызываемого этим геном,
либо в некоторых не поддающихся профилактике
(3')-dTdAdGdGdCdGdGdAdTdCdGdGdTdTdTdT-(5') случаях рекомендовать женщине своевременно из-
бавиться от дефектного плода и тем самым предот-
dCdGdCdCdTdAdGdCdCdAdAdAdA-(3') вратить появление дефектного ребенка.
(5')-dAdTdC (3') dCdGdGdAdTdCdGdG-U-U-U-U-(5')
Возможность химически синтезировать, а также
Дочерняя нить направленно вырезать из природных ДНК различ-
(3')-dTdAdG РНК-праймер ные гены привела к рождению новой области био-
dGdCdGdGdAdTdCdGdGdTdTdTdT-(5') технологии – генной инженерии. Появились мето-
ды, позволившие вставлять произвольные гены в
(5') G-C-C-U-AdGdCdCdAdAdAdA-(3') небольшие молекулы ДНК, способные внутри оп-
Дочерняя нить ределенных клеток автономно размножаться, или
РНК-праймер
самокопироваться синхронно с репликацией кле-
точной ДНК. Появилась возможность встроить ген,
Из неспособности ДНК-полимераз начинать не свойственный данному организму, в наследст-
синтез новых цепей ДНК следует, что для осуществ- венные структуры этого организма. А поскольку ген
ления ПЦР помимо ДНК-полимеразы и мономеров может программировать образование кодируемого
необходимы праймеры. Если речь идет об ампли- им продукта – белка или РНК, – то такой организм
фикации определенного участка ДНК, то достаточ- может начать производить несвойственный ему
но ввести в систему праймеры, комплементарные продукт. Оказалось возможным производить в клет-
3'-концам выбранных участков обеих нитей. Это де- ках бактерий нужные человеку или какому-либо
лают при умеренной температуре, чтобы дуплекс важному для сельского хозяйства животному белки.
матрицы с праймером был достаточно прочным. Одним из самых впечатляющих примеров являет-
После проведения синтеза дочерних копий выбран- ся организация генноинженерного производства

34 ëéêéëéÇëäàâ éÅêÄáéÇÄíÖãúçõâ ÜìêçÄã, ‹8, 1998


человеческого инсулина. Это чрезвычайно важный по их программам, воспроизводить вирусную нук-
гормон, производимый поджелудочной железой и леиновую кислоту и вирусные белки. Если ввести в
совершенно необходимый для усвоения сахара. Не- зараженные клетки нуклеиновую кислоту или син-
достаток, а тем более полное отсутствие инсулина тетический олигонуклеотид, комплементарный ка-
приводят к тяжелейшему и широко распространен- кой-либо жизненно важной части вирусной нукле-
ному заболеванию – диабету. Основным средством иновой кислоты, можно надеяться, что он образует
спасения диабетиков является ежедневное введе- дуплекс с этой частью и заблокирует ее способность
ние инсулина. Большая часть больных может поль- программировать работу клетки в нужном для вируса
зоваться бычьим инсулином, который добывают из направлении. Так как этот участок вирусной нуклеи-
поджелудочной железы крупного рогатого скота на новой кислоты имеет определенный биологический
мясокомбинатах. Однако существуют многие де- смысл, то такие олигонуклеотиды и нуклеиновые
сятки тысяч диабетиков, которые не могут исполь- кислоты получили название антисмысловых.
зовать чужеродный инсулин, несколько отличаю-
щийся по структуре от человеческого. Создание êÖäéåÖçÑìÖåÄü ãàíÖêÄíìêÄ
гена человеческого инсулина позволило поставить
производство человеческого инсулина с помощью 1. Кнорре Д.Г., Мызина С.Д. Биологическая химия. М.:
бактерий, то есть генноинженерными методами. В Высш. шк., 1992.
настоящее время созданы бактерии, производящие 2. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия. Новоси-
многие белки, нужные в медицине или сельском хо- бирск: Изд-во Новосиб. ун-та, 1994.
зяйстве, такие, как гормон роста для повышения 3. Шабарова З.А., Богданов А.А. Химия нуклеиновых
продуктивности мясного животноводства и челове- кислот и их компонентов. М.: Химия, 1987.
ческий интерферон для профилактики и лечения 4. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. М.: Про-
некоторых вирусных заболеваний. свещение, 1987.

Новым, пока еще нарождающимся направлени-


* * *
ем биотехнологии является антисмысловая техно-
логия. Многие заболевания, в первую очередь он- Дмитрий Георгиевич Кнорре, доктор химичес-
кологические и вирусные, связаны с появлением в ких наук, профессор, действительный член РАН,
клетках пациента чужеродной или неблагоприятно директор Новосибирского института биоорганиче-
измененной наследуемой информации. Вирусы, ской химии Сибирского отделения РАН, лауреат
например, вносят в зараженные ими клетки свои Ленинской премии. Автор более 250 публикаций,
нуклеиновые кислоты и заставляют клетки работать двух монографий и трех учебников.

äçéêêÖ Ñ.É. Åàéïàåàü çìäãÖàçéÇõï äàëãéí 35