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Biotechnol. Agron. Soc. Environ. 2010 14(3), 417-422

Essais de culture de quelques champignons lignicoles comestibles de la rgion de Kinshasa (R.D. Congo) sur divers substrats lignocellulosiques
Simon Dibaluka Mpulusu (1), Flicien Lukoki Luyeye (1), Andr De Kesel (2), Jrme Degreef (2)
(1) (2)

Universit de Kinshasa. Facult des Sciences. Dpartement de Biologie. B.P. 190. Kinshasa XI (R.D. Congo). Jardin botanique national de Belgique. Domaine de Bouchout. B-1860 Meise (Belgique). E-mail: degreef@br.fgov.be.

Reu le 29 juillet 2009, accept le 5 janvier 2010. Neuf souches de champignons lignicoles comestibles isoles sur milieu glos et testes sur substrats de semis base de grains de mas et de sciure de bois et sur substrats de fructification base de sciure de bois et de tiges de Cyperus papyrus, ont donn des rsultats encourageants. Le rendement moyen en sporophores le plus lev, prs de 22% en poids frais, a t obtenu avec une souche locale de Pleurotus flabellatus sur tiges de C.papyrus. Un rendement moyen de 19% a t enregistr avec Lentinus squarrosulus sur un substrat base de sciure de bois. Il sagit des premires donnes mthodologiques publies sur la culture de souches locales de champignons comestibles pour lAfrique centrale. Mots cls. Culture, champignons comestibles, produits forestiers non ligneux, substrat lignocellulosique, Afrique centrale, R.D. Congo. Cultivation tests for some edible lignicolous mushrooms in the Kinshasa region (D.R. Congo) on different lignocellulosic substrates. Nine strains of edible lignicolous mushrooms isolated on agar medium and tested on spawn substrates of corn grains and sawdust, and on fruiting substrates of sawdust and stems of Cyperus papyrus, gave satisfactory results. The highest average yield in sporophores, of 22% fresh weight, was obtained with a local strain of Pleurotus flabellatus on C.papyrus stems. An average yield of 19% was recorded with Lentinus squarrosulus on sawdust substrates. This constitutes the first publication of methodological data on the cultivation of local strains of edible mushrooms for central Africa. Keywords. Cultivation, edible fungi, non-woody forest products, lignocellulosic substrate, central Africa, D.R. Congo.

1. Introduction En Afrique centrale, les champignons constituent des produits forestiers non ligneux dune importance capitale, tant du point de vue nutritionnel quconomique (Ndoye et al., 2007). Nanmoins, la saisonnalit dans lapparition des sporophores est un facteur limitant pour leur disponibilit, souvent alatoire et concentre sur quelques semaines par an, principalement en saison des pluies. Ds lors, la mise en culture des champignons se rvle tre une activit rentable pour les paysans africains. En priode de scheresse, elle permet en effet de fournir des produits frais tout en transformant des dchets agricoles en protines alimentaires de haute qualit. Bien que plus de 300 espces de champignons comestibles aient t recenses en Afrique tropicale (Zoberi, 1978 ; Rammeloo et al., 1993 ; Boa, 2006),

trs peu ont pu faire lobjet dune mise en culture. En effet, beaucoup despces de champignons africains se dveloppent exclusivement en association spcifique avec des vgtaux en formant des ectomycorrhizes, alors que dautres sont infodes des termites. Ces espces forment des relations symbiotiques actuellement encore non reproductibles en laboratoire, rendant ainsi impossible leur mise en culture (Cailleux, 1963; Chang et al., 1978; 1982; Oei, 1993; 2003). Notre choix sest donc orient vers des espces saprotrophes lignicoles (Heim et al., 1965 ; Quimio, 1982; Quimio et al., 1982; Vilela et al., 1982; Oei, 2005; De Kesel et al., 2008; Eyi Ndong et al., 2008), le plus gnralement cultivables sur des dchets dorigine agricole ou agro-industrielle largement disponibles en Afrique. linstar de quelques chercheurs qui ont pu domestiquer des souches locales (De Kesel et al., 2002; 2008; Eyi Ndong et al., 2008), nous avons dlibrment

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opt pour ce type de matriel, contrairement la plupart des essais de culture initis en Afrique tropicale depuis plus de 20 ans et qui concernaient gnralement des souches importes, souvent couteuses et inadaptes au climat quatorial. Le protocole de mise en culture prsent sinspire des techniques prconises par Oei (1993, 2003) mises en oeuvre durant plus de dix annes partir de souches locales de champignons lignicoles comestibles. Il permet de valoriser diffrents dchets lignocellulosiques et prsente lavantage de pouvoir tre transpos en milieu paysan sans gros investissement financier. lexception de la publication des rsultats dessais concluants de production de sclrotes de Lentinus tuberregium (Fr.) Fr. [= Pleurotus tuber-regium (Rumph. ex Fr.) Singer] (Dibaluka et al., 1992) et dun essai limit aux cultures mycliennes (Mosibono et al., 1991), cet article constitue la premire note mthodologique relative la production de champignons comestibles partir de souches locales en Afrique centrale. 2. Matriel et mthodes Une tape prliminaire a consist inventorier, auprs des populations locales, les espces lignicoles comestibles les plus apprcies. Le choix des espces cultiver sest bas sur les rsultats dune enqute ethnomycologique mene sur le site du Lac de Ma Valle (S 04255,24 E 15200,16 ; altitude 450 m) non loin de Kinshasa (Dibaluka, 2005). Les spcimens de rfrence rcolts lors de notre travail ont t dposs lHerbier du Jardin botanique national de Belgique (BR). Les tapes de la culture des champignons mises en uvre dans le cadre de notre tude sont dtailles ci-aprs. 2.1. Prparation de milieux gloss et obtention de la culture pure (starter) Lisolement est ralis sur milieu glos PDA (filtrat de cuisson dans 1l deau dminralise de 200g patate douce+ 20g agar-agar+ 20g dextrose, port 1l) ou SDA (filtrat de cuisson dans 1 l deau dminralise de 18g son de riz+ 18g agar-agar+ 18g dextrose, port 1 l). Le milieu est chauff pendant environ 15min jusqu dissolution des ingrdients et obtention dun mlange homogne qui est rparti dans les tubes essai. Ces derniers sont bouchs avec un tampon douate coiff dun morceau de papier aluminium avant dtre striliss (120 C, 15-20 min, pression 1 atm). Aprs strilisation, les tubes sont placs en position incline afin de maximiser la surface de contact du milieu de culture aprs refroidissement. La sporulation est obtenue en plaant dans le goulot du

tube essai contenant le milieu de culture, un morceau de chapeau du champignon fix un ruban Parafilm, face hymniale dirige vers le milieu de culture. Aprs 12 h, le morceau de chapeau est enlev et le tube essai est rebouch en conditions aseptiques au-dessus de la flamme dune lampe alcool. Le tube inocul est plac dans un incubateur Millipore (32 C, 48 h) afin dacclrer la germination des spores, puis incub (~25C, 10j). La culture pure ou starter est ensuite conserve au frigidaire (4C). 2.2. Culture de semis La culture de semis consiste favoriser le dveloppement du myclium sur un substrat adquat et strile. Le produit obtenu lissue de cette opration est appel blanc-mre ou blanc de semis et sera utilis ultrieurement pour ensemencer (larder) le substrat de fructification. Prparation du substrat de semis. Deux types de substrats de semis ont t prpars: grains de mas: trempage (24h), cuisson (25min), gouttage et essorage au soleil, ajustement du pH 7 avec de la chaux teinte (~1%), rpartition du milieu (~300g) dans des bocaux hermtiquement ferms par un tampon douate et un couvercle viss, strilisation (120C, 1h, 1atm), sciure de bois : tamisage (600 g), trempage dans leau de cuisson de grains de crales (1l) enrichie avec du son de bl (200g) et du saccharose (10g), ajustement du pH 7 avec de la chaux teinte (~ 10 g), mlange du milieu dans des sachets en plastique thermorsistants ou des bocaux, aration du milieu laide dune baguette mtallique, stri- lisation (120C, 1h, 1atm). Inoculation et incubation. Linoculation du substrat de semis avec du myclium de la culture pure sur milieu glos est ralise dans des conditions de stricte asepsie, de prfrence dans une boite dinoculation o le matriel de prlvement et de transfert de linoculum est strilis grce la flamme dune lampe alcool. Lincubation des grains de mas (27-29C, 15jours) et de la sciure de bois (30jours) est ralise lobscurit, dans une armoire ferme. 2.3. Culture de fructification Prparation du substrat de production. Deux substrats de culture ont t utiliss dans des sacs en plastique: sciure de bois de Milicia excelsa (Welw.) C.C.Berg (Moraceae) (kambala), Entandrophragma spp. (Meliaceae) (lifaki), Oxystigma oxyphyllum (Harms) J.Lonard (Leguminosae) (tola rouge)

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et Terminalia superba Engl. & Diels. (Combretaceae) (limba) en mlange, additionne de diffrents ingrdients (Tableau1). La sciure fraiche est mise tremper puis fermenter sous bche pendant deux semaines un mois, en veillant la mlanger une fois par semaine. Le remplissage et lajout des ingrdients sont raliss, la demande, dans des sacs en plastique thermorsistants et doubls (19x28cm et 24x38cm recevant respectivement 500g et 1000g de substrat) puis striliss (120C, 1h30, 1atm), tiges de Cyperus papyrus L. (Cyperaceae) coupes en morceaux de 20 cm, trempes (24 h), essores (1 h) puis lies en bottes (~ 12 cm d) avec du fil de nylon. Les bottes sont immerges dans de leau bouillante enrichie de 1% sucre, 1% chaux teinte et 10% son de bl, puis gouttes. Les sachets en plastique thermorsistants doubls sont remplis puis striliss (120C, 1h30, 1atm). Lardage du substrat de production. Lensemencement ou lardage est ralis en conditions aseptiques dans une boite dinoculation, raison de 3% de blanc de semis par rapport la masse de substrat. Les sachets sont ensuite ferms hermtiquement laide de bouchons en mousse et dun anneau en PVC (3cm de hauteur, 2,5 3cm de diamtre). Incubation des cultures. Lincubation a lieu dans une armoire lobscurit totale (28C, 3-4semaines). Une uniformisation des conditions dincubation est assure par un dplacement alatoire des sachets de culture lintrieur de larmoire une deux fois par semaine. Lincubation est maintenue jusqu envahissement total du substrat de production par le myclium et apparition des premiers primordia. Induction de la fructification. Les sachets sont dplacs dans des abris-serres dont les murs sont confectionns laide de nattes et dans lesquels rgnent une lumire tamise, une humidit leve et des tempratures modres (23-28C en journe). Il y a lieu dviter le rayonnement solaire direct tout en permettant une bonne circulation de lair, notamment par le maintien dun espace daration entre les murs et le toit. Le contrle de lhumidit relative et de la
Tableau1. Proportions (%) dans la composition du substrat de production (teneur moyenne en eau des ingrdients 5565%)Proportions (%) in the composition of production substrate (mean water content of ingredients 55-65%). Substrat Sciure Son Son Saccharose Chaux de bois de bl de riz teinte S1 S2 87,5 82,5 10 15 1 1 1,5 1,5

temprature est ralis laide dun hygromtre et dun thermomtre. Larrosage du sol, jonch de morceaux de briques, raison de 2 3 fois par jour, permet de garder un taux dhumidit lev dans labri. Un contrle des moisissures est assur en pulvrisant le milieu laide de chaux teinte en solution dans de leau. La destruction systmatique par le feu des sachets prsentant des larves dinsectes permet dviter une infestation massive de la champignonnire. 3. Rsultats et discussion 3.1. Inventaire Dix espces de champignons lignicoles comestibles ont t inventories dans la rgion de Kinshasa (Tableau 2). Elles appartiennent toutes au cortge classique des espces saprotrophes, abondantes dans le sous-bois de la fort dense dAfrique centrale. 3.2. Mise en culture Production de la culture mre. lexception des Auricularia, toutes les souches mises en culture partir de spores ont pouss endans 48 h aprs inoculation sur PDA. Lutilisation du SDA permet de ramener la dure dincubation des spores dauriculaires des valeurs proches des autres espces. Daprs nos essais prliminaires, le milieu SDA amliorerait galement la vitesse de croissance myclienne par rapport au PDA et ce, quelle que soit lespce mise en culture. Ce sont les Lentinus et les Pleurotus qui enregistrent les vitesses de croissance myclienne les plus leves, de lordre de 0,8 0,9 cm par jour sur milieu SDA. Production de blanc de semis. Les souches utilises pour la production de blanc de semis ont t slectionnes sur base de leur vitesse de croissance myclienne. Les temps dincubation varient de 10 35 jours (Tableau 3). Le substrat constitu de grains de mas a permis la conservation 4C du myclium pendant 2 3 mois avec maintien de sa vigueur. Un rsultat similaire a t obtenu sur sciure de bois pendant plus de trois mois temprature ambiante (~25C). Production des sporophores. Le blanc de semis de neuf souches slectionnes a t test sur trois substrats : deux constitus principalement de sciure de bois (S1 et S2) et un base de tiges de Cyperus papyrus (Cp). La vitesse denvahissement des substrats par le myclium des diffrentes espces tait assez uniforme et voisine de 0,5cm par jour. Une diffrence notoire a nanmoins t observe avec Marasmiellus inoderma

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Tableau 2. Inventaire des champignons lignicoles comestibles de la rgion de Kinshasa (noms vernaculaires en langue Kikongo)Inventory of edible lignicolous mushrooms in the Kinshasa region (vernacular names in Kikongo language). Espce Spcimen Nom vernaculaire Auricularia auricula-judae (Fr.) Qul. Auricularia delicata (E.M. Fries) Hennings Auricularia cornea Ehrenb. Marasmiellus inoderma (Berk.) Singer Lentinus squarrosulus Mont. Lentinus brunneofloccosus Pegler Nothopanus hygrophanus (Mont.) Singer Pleurotus flabellatus (Berk. et Br.) Sacc. Pleurotus cystidiosus O.K. Miller Schizophyllum commune Fr. Dibaluka 84 Dibaluka 85 Dibaluka 83 Dibaluka 70 & 244 Dibaluka 71 & 248 Dibaluka 63 Dibaluka 239 Dibaluka 76 Dibaluka 108 Dibaluka 252 Kilebo Kilebo Kilebo Nsamba nkekete Bulundu Bulundu Bunsambi

Tableau3. Comportement de diffrentes souches de champignons sur les substrats de semisReaction of different mushroom strains on the seedbed substrates. Espce Spcimen Souche Temps dincubation sur grains de mas Dibaluka 83 Dibaluka 85 Dibaluka 70 Dibaluka 63 Dibaluka 71 Dibaluka 239 Dibaluka 76 Dibaluka 108 Dibaluka 252 A.2255 AF.5115 C.1745 LB.1745 LS.2255 NT.1745 L.2054 P.2054 SCH.2965 21 jours 15-18 jours 15-18 jours 15-18 jours 18-21 jours 18-21 jours 15-18 jours 15-18 jours 10-15 jours sur sciure de bois

Auricularia cornea Auricularia delicata Marasmiellus inoderma Lentinus brunneofloccosus Lentinus squarrosulus Nothopanus hygrophanus Pleurotus flabellatus Pleurotus cystidiosus Schizophyllum commune

30-35 jours 21-30 jours 28-30 jours 30-32 jours 28-30 jours -

(Berk.) Singer sur C.papyrus (Cp) avec une vitesse de croissance myclienne proche de 1,5cm par jour. Lapparition des premiers sporophores est observe 3-4 semaines [Pleurotus (Figure 1), Lentinus]

4-5 semaines [Auricularia (Figure 2)] aprs linoculation des substrats de fructification. Les rendements moyens en sporophores (n = 6 rptitions) ont t calculs pour quatre de ces

Figure1. Pleurotus cystidiosus (souche P.2054) sur sciure de bois (S1) Pleurotus cystidiosus (strain P.2054) on sawdust (S1).

Figure2. Auricularia cornea (souche A.2255) sur tiges de Cyperus papyrus (Cp)Auricularia cornea (strain A.2255) on stems of Cyperus papyrus (Cp).

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souches. Pour trois des espces, nous constatons (Tableau 4) que la production des sporophores est nettement plus importante sur le substrat Cp que sur S1 et S2. Sur le substrat Cp, quelle que soit lespce mise en culture, les rendements en sporophores avoisinent 15 20%. La souche de Lentinus squarrosulus Mont. teste na, par contre, pas fructifi sur ce milieu. Des tests prliminaires, dont les rsultats ne sont pas repris dans le tableau 4, ont montr galement que la souche de Marasmiellus inoderma (C.1745) pouvait crotre indiffremment sur sciure de bois et sur tiges de papyrus, alors que les fructifications de Lentinus brunneofloccosus Pegler et de Schizophyllum commune Fr. taient limites au substrat Cp avec des rendements de lordre de 10 % seulement. Les rendements obtenus avec ces souches doivent encore tre valids et feront lobjet de publications ultrieures. 4. Conclusion Les rsultats que nous avons obtenus sont encourageants car ils dmontrent que la culture de souches locales de champignons comestibles est possible dans la rgion de Kinshasa o les substrats de production sont diversifis et disponibles en suffisance. En Afrique centrale, la culture de champignons devrait trouver sa place dans un systme agricole de type intgr qui permettrait de valoriser, comme substrat de culture, les dchets lignocellulosiques
Tableau 4. Rendement moyen (n = 6) en sporophores en fonction du substrat Mean yield (n= 6) in sporophores according to substrate. Pleurotus cystidiosus Pleurotus flabellatus Auricularia cornea Lentinus squarrosulus Espces Souches Substrats Rmoy E.T.* P.2054 L.2054 A.2255 LS.2255 S1 Cp S1 S2 Cp S2 Cp S1 Cp 9,7 3,4 17,9 3,0 17,7 5,0 10,4 2,1 21,8 2,8 11,0 1,7 15,7 5,8 19,1 1,9 -

*: Pourcentage de poids fraiscart-type de sporophores en fonction du poids frais de substratPercentage of fresh weight standard deviation of sporophores related to fresh weight of substrate; Cp: tiges de Cyperus papyrusstems of Cyperus papyrus; S1: 87,5% sciure de boissawdust, 10% son de blwheat bran, 1% saccharosesaccharose, 1,5% chaux teinteslaked lime; S2: 82,5% sciure de boissawdust, 15% son de rizrice bran, 1% saccharosesaccharose, 1,5% chaux teinteslaked lime.

produits au niveau de la ferme. Aprs la rcolte des sporophores, le substrat puis pourrait tre recycl comme nourriture pour le petit levage ou comme compost pour les jardins villageois. La culture de champignons est nanmoins sujette de nombreuses contraintes et, mme si la construction dune cabane de fructification et la fabrication dune boite dinoculation en constituent les principaux investissements, la production stable dun produit de qualit est la cl de la rentabilit de cette activit. Dans le cadre de notre tude, les rendements en sporophores obtenus partir de souches locales de pleurotes, de lentins et dauriculaires avoisinent 15 20% et peuvent tre considrs comme trs satisfaisants (Oei, 2003). Les rsultats des tests prliminaires raliss avec Marasmiellus inoderma rejoignent ceux enregistrs par De Kesel et al. (2008) et De Kesel et al. (2002, ut Gerronema beninensis nom. inval.) qui ont obtenu un rendement de 10 20% sur des rafles de palmier huile (Elaeis guineensis), soit peine infrieur celui de Pleurotus cystidiosus O.K. Mill s.l. Ces auteurs observent nanmoins que lenvahissement des rafles par M.inoderma est beaucoup plus rapide que par Pleurotus spp., un rsultat confirm par nos observations (croissance de 1,5cm par jour et temps dincubation infrieur, voir tableau3). La vitesse de croissance myclienne nest cependant pas en rapport direct avec le rendement ou lefficacit biologique : M. inoderma semble en effet moins efficace que Pleurotus spp. en ce qui concerne la transformation de son substrat en sporophores. Contrairement aux Pleurotus spp. dont la production est homogne, certains sporophores de M. inoderma sont de petite taille et peu charnus et ne sont gnralement pas pris en compte dans les calculs de rendement. Mme si la phase finale de la culture de cette espce ncessite des amliorations en termes dobtention de sporophores de plus grande taille, de facilitation de la rcolte et de maximisation de la production, M.inoderma constitue une espce prometteuse pour la culture low-tech en Afrique tropicale. linstar des techniques utilises au Ghana, o des dchets animaux (de poisson notamment) sont ajouts au substrat de culture pour obtenir des sporophores de pleurotes plus charnus et plus consistants (Atikpo, 2008), la possibilit denrichissement du substrat de fructification de M.inoderma devrait tre tudie. Nos efforts doivent maintenant sorienter vers le maintien en culture des souches qui ont donn de bons rsultats. lchelle locale, les principaux obstacles la culture des champignons proviennent de la difficult assurer des conditions de strilit totale du matriel dinoculation et viter le dveloppement de moisissures. La mise en place dune filire de production et de distribution de blanc de semis sain partir dune unit quipe dun laboratoire devrait tre

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envisage, si on souhaite promouvoir la culture des champignons en milieu rural en R.D. Congo.
Remerciements Nous tenons remercier vivement les responsables de la Coopration Technique Belge (CTB) pour avoir mis notre disposition les moyens financiers qui nous ont permis de mener ces recherches. Nos remerciements vont galement aux habitants des villages avoisinant le site du Lac de Ma Valle, ainsi quaux travailleurs et au reprsentant de la Confrence piscopale Nationale du Congo, pour nous avoir accueillis et avoir partag avec nous leurs connaissances mycologiques. Bibliographie Atikpo M., 2008. Sustainable mushroom production in Africa: a case study in Ghana. Afr. J. Biotechnol., 7(3), 249-253. Boa E., 2006. Produits forestiers non ligneux 17. Champignons comestibles sauvages. Vue densemble sur leurs utilisations et leur importance pour les populations, http://www.fao.org/docrep/009/y5489f/y5489f00.htm, (10.07.09). Cailleux R., 1963. O peut-on cultiver le champignon de couche? Cah. Mabok, 1, 27-30. ChangS.T. & HayesA., 1978. The biology and cultivation of edible mushrooms. New York, NY, USA: Academic Press. Chang S.T. & Quimio T.H., 1982. Tropical mushrooms. Biological nature and cultivation methods. Hong Kong: Chinese University Press. De KeselA., CodjiaJ.-C. & YorouN.S., 2002. Guide des champignons comestibles du Bnin. Meise, Belgique : Jardin botanique national de Belgique. De KeselA., GuellyA.K., YorouN.S. & CodjiaJ.-C., 2008. Ethnomycological notes on Marasmiellus inoderma from Benin and Togo (West Africa). Cryptogamie Mycologie, 29(4), 313-319. Dibaluka M.S. & Muambi S., 1992. Recherche sur la culture des champignons utiles dAfrique centrale: essai de culture de Lentinus tuberregium (Fr.) Fr. Rev. Md. Pharm. Afr., 8(2), 45-52. Dibaluka M.S., 2005. Inventaire des macromyctes de la fort du Lac de Ma Valle (Kinshasa) et essai de mise en culture de quelques espces comestibles. Mmoire indit : Facult des Sciences, Universit de Kinshasa (R.D. Congo). Eyi Ndong H., Cognet S., Degreef J. & Bracke C., 2008. Valorisation des champignons comestibles du Gabon : essai de mise en culture dune souche sauvage locale

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