Anomalas ocultas y la nueva de clasificacin del t (15; 17) la leucemia promieloctica aguda en base a las alteraciones genmicas

Abstracto
La leucemia promieloctica aguda (LPA) es una enfermedad maligna hematopoytica caracterizado por la translocacin cromosmica t (15; 17), lo que resulta en la formacin del gen PML-RARA. Aqu, muestras de 47 t (15; 17) LPA se analizaron con alta densidad de polimorfismo de un solo nucletido (SNP 250-K-chips-K y 50) en micros matrices utilizando el nuevo algoritmo AsCNAR (el nuevo anlisis de nmero de copias del alelo-especfico AsCNAR utilizando referencias annimos). La prdida de la copia del nmero neutral de heterocigosidad (LOH-CNN) fue identificado en los cromosomas 10q (3 casos), 11p (3 casos) y 19q (1 caso). Veintiocho muestras (60%) no tenan una alteracin evidente (nmero de copias normal [NC] grupo). Diecinueve muestras (40%) mostraron una o ms alteraciones genmicas: 8 muestras (17%) tenan trisoma 8, ya sea con o sin una duplicacin adicional, supresin, o la CNN-LOH (grupo 8), y 11 muestras (23%) tenan anormalidades genmicas sin trisoma 8 (otro grupo de anomalas). Estas anormalidades cromosmicas se adquirieron mutaciones somticas. Curiosamente, mutaciones FLT3 -ITD (11/47 casos) ocurrieron slo en el grupo sin alteracin genmica (grupo NC). Tomados en conjunto, estos resultados sugieren que la va de desarrollo de LPA difiera en cada grupo: FLT3 -ITD, trisoma 8, y otros cambios genmicos. Aqu, mostramos por primera vez anomalas ocultas y nuevos cambios genmicos relacionados con la enfermedad de t (15; 17) APL.

Introduccin
La leucemia promieloctica aguda (LPA) es una enfermedad hematopoytica maligna caracterizada por la translocacin cromosmica del t (15; 17), lo que resulta en la fusin del gen de la leucemia promieloctica (PML) y del receptor (cido retinoico RARA ) gen ( PML-RARA). El producto de la fusin PML-RAR homodimeriza, se une a ADN, y funciona como un represor transcripcional junto con correpresores incluyendo a la histona desacetilasa. Por lo tanto, la reactivacin de la transcripcin de RAR-dependiente es una de las principales estrategias para el tratamiento de pacientes con LPA. De hecho, todotrans retinoico (ATRA), que se une a RAR y conduce a la activacin del factor de

transcripcin, es un compuesto altamente eficaz para la induccin de la remisin de los pacientes con APL. Los ratones transgnicos revelaron que la PML-RAR es necesaria pero no suficiente para el desarrollo de APL. APL en estos ratones se produjo slo despus de un largo perodo de latencia (8,5 a 12 meses) y penetrancia fue de 15% a 30%. Estos hallazgos sugieren que tambin se requieren mutaciones genticas adicionales para el desarrollo de APL. Los genes candidatos incluyen el gen de la tirosina quinasa del receptor, FLT3 , y el oncogn, RAS . Activacin de FLT3 mutaciones se producen en aproximadamente el 30% a 35% APL muestras, y NRAS y KRAS mutaciones se encuentran en 4% a 5% y 5% a 10% de las muestras de APL, respectivamente. Interesantemente, los ratones transgnicos que coexpresan PML-RAR y, o bien FLT3 W51 (forma constitutivamente activa de murino FLT3), FLT3-ITD, o K-Ras (K12D) desarrollan APL con una corta latencia y una alta penetrancia. Hibridacin genmica comparada (CGH) es uno de los mtodos de deteccin en todo el genoma para identificar anomalas cromosmicas. Sin embargo, el anlisis de CGH no puede detectar el nmero de copia-neutral prdida de heterocigosidad (LOH-CNN). Solo nucletido polimorfismo microarray (SNP-chip) es un poderoso mtodo para examinar las alteraciones genmicas, incluyendo pequeos cambios de nmero de copia y / o CNN-LOH en varios tipos de cncer. Anlisis de SNP-chip se ha utilizado para la leucemia linfoctica crnica (CLL), de la leucemia linfoblstica aguda infantil (LLA), de la leucemia mieloide aguda (LMA), y LMA con cariotipo normal. En el presente estudio, nos centramos en t (15; 17) APL y examinamos si las alteraciones genmicas adicionales podran considerarse subcategorizar esta enfermedad sobre la base de la condicin de genmica. El uso de GCNA (anlisis del nmero de copias para GeneChips Affymetrix, Santa Clara, CA) programa y un nuevo algoritmo de AsCNAR (aleloespecfica anlisis del nmero de copias utilizando referencias annimas) proporciona una tcnica altamente sensible para detectar la CNN-LOH as como cambios de nmero de copias en la LPA.

Mtodos
Las muestras de pacientes El ADN de la mdula sea de 47 casos annimos de t (15; 17) APL en el diagnstico, as como 7 muestras de mdula sea de remisin completa fueron examinados. Informacin de la muestra con la forma de PML-RAR (largo, corto, o una variante), el sexo, la edad, el recuento de glbulos blancos (GB), porcentaje de blastos en la mdula sea, el estado

mutacional del FLT3 gen FLT3 -ITD nivel y cariotipo se muestran en la Tabla 1 . Este estudio recibi la aprobacin del IRB, del Centro Mdico Cedars-Sinai y el consentimiento informado se obtuvo de acuerdo con la Declaracin de Helsinki. El anlisis de SNP-chip de alta densidad ADN genmico se aisl de muestras de mdula sea a partir de t (15; 17) pacientes con APL en el diagnstico y la remisin completa, as como lneas de clulas APL NB4 y PL-21. El ADN se someti a GeneChip Human Mapping 50-K o 250 K-microarrays (SNP chip; Affymetrix) como se ha descrito anteriormente. Hibridacin, lavado, y la deteccin de la seal se realiza en la estacin de GeneChip de fluidos 400 y el escner GeneChip 3000 segn los protocolos del fabricante (Affymetrix). Microarray datos se analizaron para la determinacin tanto de nmero total y allica especfica de copia (ASCN) utilizando el programa CNAG como se ha descrito previamente , con modificaciones menores, donde se infiere el estado del nmero de copias, as como la CNN-LOH en cada SNP utilizando los algoritmos basados en modelos ocultos de Markov. Se utilizan para la agrupacin de las muestras de LMA en relacin con el estado de cambios en el nmero de copias, as como CNN-LOH, software GNAGraph (Universidad de Tokio, Tokio, Japn). Tamao, posicin y localizacin de genes fueron identificados con UCSC Genome Browser. Cambios germinales de nmero de copia previamente descritos como nmero de copias en la variante de base de datos de variantes y UCSC Genoma del navegador. Estos datos de microarrays estn disponibles para consulta pblica en la Expresin Gnica Omnibus (GEO) de bases de datos con el nmero de GSE14016 . Determinacin de secuencias SNP en los casos de CNN-LOH y FLT3 mutaciones Para validar CNN-LOH, 2 secuencias SNP (rs10500648 y rs7937815) en el cromosoma 11p de caso no. 39 al momento del diagnstico y la remisin completa, y 6 secuencias SNP (rs10491032, rs363221, rs2099803, rs2104543, rs7075893 y rs7918018) en el cromosoma 10q de caso no. 18 al momento del diagnstico se determinaron. La regin genmica de cada sitio de SNP se amplific por reaccin en cadena de la polimerasa genmica (PCR) utilizando cebadores especficos (Tabla S1, disponibles en la sangre sitio web; ver el enlace de materiales suplementarios en la parte superior del artculo en lnea), y productos de la PCR se purificaron y se secuenciado. Para las determinaciones de FLT3 -TKD y FLT3 -ITD mutaciones, PCR genmico se realiz como se ha descrito anteriormente. Cultivo de clulas, aislamiento de mRNA, y la PCR cuantitativa en tiempo real Lneas de clulas APL, NB4 y PL-21, se cultivaron en medio RPMI 1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA) con 10% de FBS (Atlanta Biologicals,, Lawrenceville, GA). El ARN total se aisl de estas clulas y no hay caso. 48 muestra de mdula sea en el diagnstico usando

RNeasy kit (Qiagen, Valencia, CA), y 1 mg de ARN total se convirti en ADNc mediante transcripcin inversa con superndice III (Invitrogen). La expresin gnica de c-myc mRNA se cuantific con-PCR cuantitativa en tiempo real (iCycler; Bio-Rad, Hercules, CA) utilizando SYBR Green. -actina se utiliz como control. Copie el nmero del cromosoma 11p15.4 en caso de no. 39, en caso de que no 10q24.31. 18, el MYC gen en los casos no. 2, no. 18, y no. 65, y el ERG gen en el caso no. 43 se determinaron mediante PCR cuantitativa en tiempo real (Bio-Rad) utilizando SYBR Green. La regin en el cromosoma 2p21 se utiliz como control. 21 de nmero de copia de la regin 2p21 era normal segn lo determinado por el anlisis de SNP chip en estas muestras. El valor de ciclo umbral delta ( Ct) se calcul a partir del valor Ct dada por la frmula Ct = (Ct de la muestra - Control Ct). El doble cambio se calcul como 2 -? Ct . Las secuencias de cebadores se muestran en la Tabla S2.

Resultados
El anlisis de SNP chip de t (15; 17) APL muestras Se examinaron los cambios genmicos en 47 muestras de t (15; 17) APL utilizando 50-K y los anlisis de SNP-chip 250-K. Un total de 28 pacientes (60%) no mostr alteraciones genmicas detectables (nmero de copias normal [NC] grupo). Por el contrario, 19 pacientes (40%) tuvieron una o ms alteraciones genmicas: 8 pacientes (17%) tenan trisoma 8 o duplicacin en el cromosoma 8 en la regin del MYC gen, ya sea con o sin otras alteraciones genmicas (8 grupos), y 11 pacientes (23%) tenan alteraciones genmicas sin trisoma 8 (otro grupo de anomalas Figura 1; tabla 2). Uno de los casos (Caso n 65, 2%) tena 4 regiones cromosmicamente alterados, 2 casos (4%; N 39 y n 58) tenan 3 regiones cromosmicamente alterados, 8 casos (17%,. N 2, n 50. , no 3, no 18, no 13, no 37, no 19 y no 21) tenan 2 regiones cromosmicamente alterados,...... y 8 casos (17%,. no 38, no 60, no 66.. , no. 20,. n 4, no. 57, no. 43, y el no. 52) tuvieron 1 regin cromosmicamente alterados. Es importante destacar que 6 pacientes (13%) tenan CNN-LOH.

Validacin de anlisis de SNP chip

Como prueba del principal, se valid resultados SNP chip travs de una cuantificacin genmica PCR en tiempo real (QG RT-PCR) y la secuenciacin de nucletidos de los sitios de SNP. Caso no. 65 tenan una regin duplicada en el cromosoma 8, y esta regin contena el MYC gen ( Figura 2 A). QG RT-PCR mostr que los niveles de la MYC nmero de copias fueron aproximadamente 2 veces ms alta que el ADN genmico normal (Figura

2B). Otras variaciones del nmero de copias, incluyendo la duplicacin de la MYC gen en los casos no. 2 y no. 18, y la duplicacin del ERG gen en caso de no. 43 tambin fueron confirmados por QG RT-PCR (datos no mostrado). A continuacin, se valid la CNN-LOH detectada por el anlisis de SNP chip ( Figura 3 ). Si un cromosoma tiene LOH, secuencias SNP en esta regin deben tener homocigosis en el diagnstico, pero heterozigosidad en remisin completa. Por lo tanto, hemos examinado 2 SNP secuencias independientes en caso de que no. 39 en el cromosoma 11p en la regin CNN-LOH utilizando diagnstico y muestras de remisin completa. Dos sitios de SNP (rs10500648 y rs7937815) mostraron claramente una sola seal al diagnstico (homocigosis), mientras que los sitios mostraron una seal doble en remisin completa (heterocigosis; Figura 3B). Estos resultados demostraron que esta regin tuvo LOH. A continuacin, se determin el nmero de copias de la regin para excluir la posibilidad de una supresin hemizygous. Como se muestra en la figura 3 C, el nivel de ADN en la regin 11p15.4 del caso no. 39 al momento del diagnstico fue casi el mismo que el nivel de la muestra de la remisin completa, lo que indica que esta regin tena un nmero de copia normal y la regin representada CNN-LOH. Regin CNN-LOH de caso no. 18 tambin fue validado por secuenciacin de SNP y QG RT-PCR (Figura S1). Tomados en conjunto, estos resultados indican que el anlisis de SNP chip refleja claramente anormalidades cromosmicas reales. TABLA 1:Lnea de base caractersticas clnicas de 47 t (15; 17) pacientes con APL

Cambios en el nmero de copias en t (15; 17) muestras de APL Como se muestra en la Tabla 2, varios cambios de nmero de copia se detectaron mediante el anlisis de SNP chip. Las supresiones se encontraron en 7 casos (15%), incluyendo casos no. 65 (4q28.1, 1.33 Mb; 7q21.11-q21.12, 1,03 Mb, y 9q12-q31.3, 47.27 Mb), caso no. 2 (10q21.2-q21.3, 5,55 Mb), caso no. 50 (6p25.1-p24.3, 2,51 Mb), caso no. 37 (1q42.2, 0,02 Mb), caso no. 19 (12p13.31-p11.22, 22,49 Mb, y 13q14.2-Q14.3, 0,88 Mb), caso no. 21 (7q11.21-q-terminal, 97.03 Mb), y el caso no. 58 (17p-terminal-p11.2, 21.44 Mb). Es de destacar, eliminado regin en 12p de caso no. 19 y 17p de caso no. 58 contena la ETV6/TEL y TP53 genes, respectivamente.

FIGURA 1: Resumen de anormalidades genmicas en t (15; 17) muestras de APL . El ADN genmico de 47 t (15; 17) muestras de APL se sometieron a anlisis de SNP chip, y anormalidades genmicas se resumen. Cuadros de color se utilizan para indicar el tipo y el tamao de las anomalas: rosa (nmero de copias neutr Las duplicaciones se encontraron en 7 casos (15%), incluyendo casos no. 65 (8q24.13q24.22, 9,48 Mb), caso no. 13 (13q21.1-q-terminal, 57,27 Mb, y 15q22.2-q-terminal, 42.94 Mb), caso no. 57 (9q22.32, 0,27 Mb), caso no. 37 (18p11.31-p11.23, 0,46 Mb), caso no. 21 (1q21-q-terminal, 102.63 Mb), caso no. 43 (21q22.12-q-terminal, 10.69 Mb), y el caso no. 58 (15q24.1-q-terminal, 27,97 Mb, y 17p11.2-q21.1, 14.05 Mb). La regin duplicada en el caso de 21q no. 43 y en caso de no 17p. 58 incluido el ERG y ErbB2 genes, respectivamente. Es importante destacar que la regin duplicada en el caso de 8q no. 65 contena el MYC gen ( Figura 2 A). Siete casos tenan trisoma 8, y uno de los genes candidatos en el cromosoma 8 es el MYC gen, por lo tanto, se clasificaron caso de que no. 65 en el grupo 8.

Es de destacar que la lnea celular NB4 APL tuvo amplificacin del MYC regin gnica (8q24.21), mientras que el PL-21 lnea celular APL mostr duplicacin de la regin (Figura S2). Se compararon los niveles de ARNm de c-Myc en estas lneas celulares, y se encontr que las clulas NB4 tenan aproximadamente 6 veces mayor expresin de c-Myc que hicieron las clulas PL-21 (Figura S2). Este resultado indic que el cambio del nmero de copias se asoci con los niveles de ARNm del gen diana.

CNN-LOH en t (15; 17) muestras Varios casos tenan la misma regin cromosmica implicada en la CNN-LOH. Cromosoma 10q LOH CNN-se encontr en 3 casos (6%), incluyendo casos no. 18 (10q22.2-q-terminal), el caso no. 39 (10q21.1-q-terminal), y el caso no. 66 (10q22.2-q-terminal; Figura 1 ; Figura S3A). Esta regin incluye la tirosina quinasa del receptor de gen FGFR2 y el gen supresor de tumores PTEN ( Tabla 2 ). Los casos no. 3, no. 20, y no. 39 tena la CNN-LOH en el 11pterminal-p11.12, 11p-terminal-p11.12, y 11p-terminal-p14.1, respectivamente, y la regin comn era 28.7 Mb ( Figura 1 ; Figura S3) que contienen el tumor genes supresores de WT1 y CDKN1C , y el oncogn HRAS ( Tabla 2 ). CNN-LOH de 19q13.2-q-terminal (17,3 Mb) ocurri en un caso (no. 4, Tabla 2 ). Comparacin de los cambios cromosmicos entre el diagnstico y muestras de remisin completa Para evaluar si las alteraciones cromosmicas detectadas por el anlisis de SNP-chip se adquirieron alteraciones, mutaciones de la lnea germinal, o variantes de nmero de copias, se compararon los cambios cromosmicos entre las muestras de remisin completa (CR) el diagnstico y en los mismos pacientes. Muestras de RC de los casos no. 2, no. 3, no. 18, no. 19, no. 38, no. 39, y no. 50 estaban disponibles, y estas muestras CR fueron sometidos a anlisis de SNP chip. Como se muestra en la Figura 4 , trisoma 8 de caso no. 2 y CNN-LOH de caso no. 18 al momento del diagnstico no estaban presentes en las muestras obtenidas en CR. Otras modificaciones incluyen la trisoma 8 (casos no. 3, nm. 18, no. 38, nm. 39 y nm. 50), CNN-LOH en los cromosomas 10 (caso. N 39) y 11 (casos no. 3 y no . 39), y deleciones (casos no. 2, nm. 19 y nm. 50) tampoco estuvieron presentes en CR (Figura S4). Tomados en conjunto, estos resultados mostraron que las alteraciones cromosmicas detectadas por el anlisis de SNP chip se adquirieron cambios somticos. TABLA 2: Alteraciones cromosmicas en t (15; 17) APL muestras

Relacin entre alteraciones genmicas y mutaciones FLT3 Por ltimo, se compararon las anomalas genmicas y FLT3 estado. Veinticuatro muestras (51%) tenan de tipo salvaje FLT3 , mientras que 12 muestras (26%) tenan FLT3 mutacin TKD (cido asprtico en el codn 835, D835) y otras 11 muestras (23%) tenan FLT3 -ITD forma. Curiosamente, las 11 muestras con FLT3 -ITD se encuentran slo en el nmero de copia normal (NC) grupo ( Tablas 1 y y3). 3 ). Una de las muestras en el grupo de la trisoma 8 tena un FLT3 mutacin TKD. Las muestras de la "otras anomalas" grupo no tenan FLT3 -ITD, y 6 muestras en el grupo NC y 5 muestras en el grupo de "otras anomalas" tena un FLT3 mutacin TKD. Estos resultados sugieren que la va de desarrollo de APL difiere en cada grupo; de una manera mutuamente exclusiva, FLT3 -ITD, trisoma 8, y el factor desconocido (s) estaban involucrados en cada grupo

Discusin
Nuestro genoma en todo el anlisis SNP chip mostr que el 40% de t (15; 17) muestras APL tenan una o ms alteraciones genmicas incluyendo deleciones, duplicaciones, y / o CNN-LOH. Dado que la protena de fusin PML-RAR no es probablemente suficiente para

causar APL en sistemas de modelos murinos, los cambios genticos adicionales que hemos encontrado pueden ser necesarios para causar la leucemia. Nuestro anlisis revel que 6 muestras (13%) de t (15; 17) Ejemplos de APL tenan CNNLOH. Anteriormente, se analizaron muestras de LMA con cariotipo normales y encontr que 32% de los casos tena CNN-LOH (Akagi et al 28 ), y otros investigadores tambin demostramos CNN-LOH en AML muestras a una frecuencia de 15% a 20%. 22- 25 , 27 Es interesante sealar que aproximadamente el 40% de recada AML tena CNN-LOH. 26 CNN-LOH en t (15; 17) APL se trata de un medio tan frecuente como los otros AML. Dos regiones CNN-LOH ocurri en varias muestras: cromosomas 10q (58,2 Mb, 3 casos) y 11p (28,7 Mb, 3 casos). Es de destacar que el caso no. 39 tuvo tanto 10q y 11p CNN-Lohs, lo que sugiere que 10q y 11p podra contener nuevo gen APL-relacionado (s). CNN-LOH es una anormalidad genmico que normalmente no puede ser detectada por el anlisis citogentico convencional. Estas regiones generalmente contienen una mutacin de un gen clave. Por ejemplo, una forma constitutivamente activa de cualquiera de JAK2 V617F mutante, FLT3 -ITD, AML1/RUNX1 de desplazamiento de marco, y / o mutaciones de WT1 y NPM1 se encontraron en regiones CNN-LOH en la LMA. 22- 25 regiones CNN-LOH identificados en este estudio contienen genes que codifican para varias tirosina quinasa y / o supresores tumorales. Se necesitan ms estudios para identificar los genes dysregulated clave (s) en estas regiones. Adems de CNN-LOH, tambin encontramos varios cambios de nmero de copias que pueden ser sitios que contienen regiones genmicas novedosos relacionados con la enfermedad de t (15; 17) APL. Aunque no podemos variantes de nmero de copia (CNV) descartar de salida en varios sitios, consideramos que es poco probable. Tenamos 7 DNA genmico en las muestras de remisin completa y confirmada por cada que los cambios cromosmicos fueron slo en las clulas de la leucemia. Adems, para cada uno de estos sitios, que interrogados una biblioteca cotejada de CNV (Base de datos de variantes genmicas y UCSC genoma navegador) para asegurar que estas regiones no eran conocidos CNV. FLT3 es un receptor tirosina quinasa implicada en la hematopoyesis normal, y las mutaciones del gen a menudo se producen en la LMA. Incidencia de FLT3 -ITD y FLT3 -TKD fue del 23% y el 26% de nuestras muestras, respectivamente. Los experimentos han demostrado que FLT3 -ITD y FLT3 -TKD tienen diferencias en su sealizacin aguas abajo. 33- 35 Curiosamente, el trasplante de mdula sea en ratones demostr que FLT3 -ITD indujo una enfermedad mieloproliferativa oligoclonales, 33 mientras que FLT3 -TKD produce un trastorno linfoide oligoclonal con una larga latencia. 34 Por otra parte, slo el FLT3 -ITD causado la activacin de STAT5 y la represin de C / EBP y PU.1.

FIGURA 2: Validacin del cambio del nmero de copias en el caso no. 65 . (A) Los datos SNP chip del cromosoma 8 en caso de que no. 65. Los mejores puntos son sitios de SNP como sondas e indican el nmero total de copias (CN). Lnea media es un promedio del nmero de copias y muestra la dosis gnica. Las barras son heterocigotos.

Aqu, t (15; 17) muestras de APL se dividieron en 3 grupos segn el estado de genmica detectada por anlisis de SNP chip: grupo de nmero de copia normal (grupo NC, 28 muestras), trisoma 8 grupo (grupo de 8, 8 muestras ), y otro grupo de anomalas (11 muestras). En particular, nuestros subclasificaciones s revelaron una interesante relacin entre el estado y la genmica FLT3 mutacin. Once muestras del grupo NC (39% de las muestras del grupo NC) tenan FLT3 -ITD, mientras que no FLT3 -ITD se produjo en las muestras de los otros 2 grupos. Por el contrario, un buen gen candidato en la cohorte 8 es el oncogen MYC . De hecho, el caso no. 65 tenan duplicaciones localizado en 8q24.13q24.22 que inclua el MYC gen. Anlisis del cariotipo anterior mostr que la lnea celular21 PL, que se establece a partir de un paciente con APL, tena un cariotipo masculino poliploide con 13q + cromosomas, pero una translocacin entre los cromosomas 15 y 17 no se identific. 36 clulas NB4 son citogenticamente muy complejo, con un cariotipo hypotetraploid y mltiples alteraciones cromosmicas.

Figura 3: Validacin de CNN-LOH en caso de no. 39.. (A) Los datos SNP chip del cromosoma 11 en caso de que no. 39. Las muestras tenan CNN-LOH en el cromosoma 11 (11pterminal-p14.1, 28,7 Mb). (B) Determinacin de la secuencia de SNP en la regin 11p CNNLOH en caso de que no. 39. 2 SNP sitios. Nuestro anlisis de SNP chip de clulas NB4 tambin mostraron ploida = 3,67, lo que indica que el cariotipo es hypotetraploid. De inters, las clulas NB4 tienen la amplificacin de la MYC gen. Es importante destacar que, la expresin de ARNm de c-Myc es estimulada por FLT3 -ITD 39 , 40 , y muestras de LMA con FLT3 -ITD han aumentado la expresin de c-myc mRNA en comparacin con la mdula sea normal. 41 Estos datos indican que la MYC gen puede ser mal regulada ya sea por cambio de nmero de copia o FLT3 -ITD como una alteracin secundaria para mejorar el desarrollo de APL. Por supuesto, nuestra poblacin de la muestra es pequeo, por lo tanto, se necesitan estudios adicionales para confirmar estos hallazgos.

Figura 4: Comparacin de los cambios cromosmicos entre el diagnstico y muestras de remisin completa . (A) La trisoma 8 en caso de que no. 2. Caso no. 2 tena trisoma 8 al momento del diagnstico, mientras que el cromosoma 8 fue 2n en remisin completa (CR). (B) CNN-LOH en caso de que no. 18. Caso no. 18 tenan

Nuestra cohorte APL "otras anomalas" grupo no tiene ni FLT3 -ITD ni trisoma 8, pero tiene varios otros cambios genmicos incluido el borrado de ETV6/TEL (case. n 19) y la duplicacin de ERG (case. n 43). ETV6/TEL es un represor transcripcional, y aproximadamente el 30% de los pacientes con AML tienen prdida de la expresin de la protena ETV6/TEL. 42 , 43 Adems, la mutacin de la ETV6/TEL gen se presenta en aproximadamente 2% de las muestras de AML, y estos mutantes se comport de una manera dominante-negativo. 43 ERG es un miembro de la familia ETS de factores de transcripcin y es un proto-oncogn. La sobreexpresin de ERG predice un peor pronstico en la LMA con cariotipo normal. 44 En conjunto, nuestros cambios observados en el nmero de copias en estas regiones pueden estar involucrados en el desarrollo de APL.

Tabla 3
Relacin entre la anormalidad cromosmica y FLT3 mutaciones

Nuestros resultados amplan los de Le Beau et al 13 , que inform recientemente elegantes modelos de APL con ratones transgnicos coexpressing PML-RAR y, o bien BCL2, IL3, activado IL3R, o activado murino FLT3 (FLT3 W51 ). PML-RAR / BCL2 ratones desarrollaron leucemia, y estas clulas tenan un cariotipo complejo que incluye la trisoma 15 (100% de estos ratones), donde el oncogn MYC se encuentra. En contraste, PML-RAR / FLT3 W51 ratones desarrollan leucemia, y estas clulas tenan cariotipo normal, excepto para la trisoma de los cromosomas ya sea 8 (29%), 10 (43%), o 15 (43%), y la monosoma X (86 %). Estos modelos sugieren que diferentes eventos cooperantes estn involucrados en el desarrollo de la APL murino. En conjunto, estos hallazgos sugieren que la va de desarrollo de APL se diferencia en cada una de nuestras cohortes; FLT3 -ITD, MYC y el factor desconocido (s) estn implicados en el desarrollo de APL, y estos hallazgos deberan facilitar la deteccin de la novela dianas teraputicas en cada caso. Otros estudios en una cohorte ms grande de pacientes comenzarn a estratificar el pronstico de los pacientes con APL en relacin con los cambios genmicos de sus clulas leucmicas, y nuevas dianas teraputicas, que estn implicados en el desarrollo de APL, deben ser descubierto.