BACTERIAS COLORACION GRAM

1. Objetivos Identificar bacterias Gram positivas y Negativas de inculos conocidos en medios selectivos. Utilizacin de tcnicas sencillas para la observacin de microorganismos.

2. Fundamentos Tericos De gran importancia en Microbiologa porque permite diferenciar dos grandes grupos de bacterias (Gram+ y Gram-), segn se comporten ante esta tincin. El fundamento radica en la diferente estructura de la pared celular de ambos grupos: las bacterias Gram+ tienen una gruesa capa de peptidoglicano en su pared, mientras que las bacterias Gram- tienen una capa de peptidoglicano ms fina y una capa lipopolisacardica externa. Tras la tincin con el primer colorante (Cristal violeta) se efecta un lavado con etanol que arrastrar al colorante slo en las Gram (-), mientras que en las Gram (+) el colorante queda retenido y las clulas permanecern azules. Las clulas Gram (-) se teirn despus con un colorante de contraste (safranina) para que puedan observarse. Fue desarrollado por el medico Dans Hans Christian Joachim Gram, es un procedimiento utilizado universalmente. En primer momento las bacterias se tien con violeta de genciana(derivado metilado anilinico) y despus se tratan con la solucin de Gram(una parte de iodo, 2 partes de yoduro potsico y 300 partes de agua); por ltimo se lava con alcohol etlico, y unas bacterias retienen el fuerte color azul de la violeta de genciana y otras se decoloran por completo. A veces se aade una contratincion con fucsina o eosina para teir las bacterias decoloradas de color rojo y hacerlas mas visibles.

Identificacin de bacterias Se denominan bacterias Gram positivas aquellas que retienen la tincin azul y bacterias Gram negativas a las que quedan decoloradas. Algunas bacterias presentan capacidas variable de tincin de Gram y se llaman Gram variables.

La respuesta de las clulas a la tincin se debe a diferencias en la complejidad y qumica de su pared celular, la cual contiene un polmero llamado peptidoglicano. La pared celular de las bacterias Gram negativas, contienen menor cantidad de peptidoglicano comparado con las bacterias Gram positivas. Bacterias Gram positivas tpicas son los estafilococos que producen fornculos: Gram negativas representativas son los Escherichia Coli de la flora intestinal o los bacilos de la tos ferina: Gram variables son los bacilos de Koch de la tuberculosis. 3. Materiales Cultivos bacterianos: Escherichia Coli, Staphylococcus aureus. Asa de siembra esterilizada Lamina cubre objetos esterilizadas Agua destilada Colorantes para realizar tincin de Gram (Cristal violeta) Mechero bunsen 4. Procedimiento experimental 4.1 Todos los materiales que utilicemos tienen que estar esterilizados para la practica 4.2 Preparar la muestra para identificar las bacterias gram positivas y negativas a) Esterilizar el asa de siembra en el mechero por unos dos minutos b) Coger una pinza de muestra (colonia bacteriana) con el asa siembra y colocar en la lamina porta objetos disolver sobre una gota de agua c) Extender la muestra como una capa fina sobre la lamina porta objetos, se deja secar la preparacin, se fija la colonia al calor suave(mechero). d) Paso1: Adicionar una gota del colorante cristal violeta, dejar reposar por un minuto y luego enjuagar con agua destilada. e) Paso 2: Fijacin con una solucin de lugol. Estabiliza el cristal violeta, todas las bacterias, en la preparacin permanecen de color purpura o azul.

f) Paso 3: Extraccin con alcohol u otro solvente (alcohol de 80 acetona 20). Decolorar algunas bacterias (Las Gram negativas) y no otras (las Gram positivas). g) Paso 4: Tincin de contraste con safanina. Las bacterias Gram positivas ya estn teidas con cristal violeta y permanecen de color purpura. Las bacterias Gram negativas se tien de color rosa. Por un minuto. Enjuagar con agua destilada.

A continuacin la apariencia de las bacterias se observa bajo el microscopio Responder 1. Se trata de bacterias Gram positivas o Gram negativas? En la primera muestra se observ una no descoloracin de la tincin observndose un color azul por lo que podemos inferir que se trata de bacterias gram positivas ya que poseen una pared celular gruesa con numerosas capas de peptidoglucano, las cuales retienen el colorante cristal violeta. De la muestra se puede decir que una de las bacterias seria el Staphylococcus aureus.

En la segunda muestra se observ una decoloracin pasando de un color azul a rosado, por lo tanto podemos afirmar que las bacterias identificadas son del tipo Gram negativas, un ejemplo de bacteria de este tipo seria la Escherichia Coli.

2. Cul es la morfologa (bastones cocos, espirales, pleomorficas (forma variable).etc) 3. Aparecen las clulas en su forma separada o formando cadenas, racimos, pares, etc? 4. De qu tamao son las clulas? 5. Dibuje las colonias que observe