BAB III

METODE
3.1.Waktu dan Tempat
Praktikum pemeriksaan Salmonella ini bertempat di laboratorium Bakteriologi
Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Denpasar pada hari Rabu, 26 Maret 2014, pukul
11.30 Wita.

3.2. Alat, Bahan, dan Reagen
3.2.1 Alat
Neraca analitik
Gelas beaker
Spatel
Gelas ukur
Batang pengaduk
Tabung reaksi dengan
raknya
Pipet ukur
Petridish steril
Labu Erlenmeyer
Lampu spiritus
Pinset
Incubator
Koloni counter
Kompor listrik
Autoclave
Bola hisap
Benang pulung

3.2.2. Bahan
Cincau Hitam

3.2.3. Media / Reagensia
Aquades
Aquades steril
Media Mac Conkey Agar (MCA)
Media Salmonella dan Shigella Agar (SSA)
Media Selenite Cystine Broth (SCB)
Alkohol 70%
3.3. Cara Kerja
3.3.1. Pembuatan Media SCB
1. Media SCB dibuat sebanyak 200 ml, sehingga harus dihitung dahulu massa
media yang ditimbang , yaitu :

2. Ditimbang 3,8 gram bubuk SCB Oxoid CM0699 pada neraca analitik dengan
menggunakan gelas beaker.
3. Dilarutkan dengan aquades dan diaduk hingga homogeny.
4. Dimasukkan ke dalam Erlenmeyer dan ditambahkan aquades sampai volumenya
mencapai 200 ml.
5. Lalu ditutup dengan aluminium foil.
6. Dipanaskan hingga larut sempurna pada kompor listrik.
7. Dipipet dengan pipet ukur masing-masing sebanyak 10 ml ke dalam 20 buah
tabung reaksi yang telah diisi label sebelumnya.
8. Ditutup dengan kapas berlemak
9. Media siap digunakan.
3.3.2. Pembuatan Media SSA (63 g/L)
1. Media SSA dibuat sebanyak 300 ml, sehingga harus dihitung dahulu massa
media yang ditimbang , yaitu :

2. Ditimbang 18,9 gram bubuk SSA Oxoid CM0699 pada neraca analitik dengan
menggunakan gelas beaker.
3. Dilarutkan dengan aquades dan diaduk hingga homogen.
4. Dimasukkan ke dalam Erlenmeyer dan ditambahkan aquades sampai volumenya
mencapai 300 ml.
5. Lalu ditutup dengan aluminium foil.
6. Dipanaskan hingga larut sempurna pada kompor listrik.
7. Dituang ke dalam 20 plate sebanyak 15 20 mL (40 50
0
C)
8. Media siap digunakan.

3.3.3. Pembuatan Media MCA (51,5 g/L)
1. Media MCA dibuat sebanyak 300 ml, sehingga harus dihitung dahulu massa
media yang ditimbang , yaitu :

2. Ditimbang 15,3 gram bubuk MCA Oxoid CM0699 pada neraca analitik dengan
menggunakan gelas beaker.
3. Dilarutkan dengan aquades dan diaduk hingga homogen.
4. Dimasukkan ke dalam Erlenmeyer dan ditambahkan aquades sampai volumenya
mencapai 300 ml.
5. Lalu ditutup dengan aluminium foil.
6. Dipanaskan hingga larut sempurna pada kompor listrik.
7. Disterilisasi pada autoclave dengan suhu 121
0
C selama 15 menit.
8. Dituang ke dalam 20 plate sebanyak 15 20 mL (40 50
0
C)
9. Media siap digunakan.
3.3.4. Penanaman biakan (Cincau Hitam) pada media SCB
1. Sampel cincau hitam dituang ke gelas beaker
2. Dipipet sampel cincau hitam sebanyak 5 ml kemudian dimasukkan ke dalam
media SCB.
3. Dikocok hingga homogeny
4. Diinkubasi dalam incubator pada suhu 37
0
C selama 18 24 jam.
3.3.5. Penanaman biakan ke media MCA dan SSA
1. Disiapkan media MCA dan SSA yang telah diberi label.
2. Dari tabung media SCB, diinokulasikan / digoreskan dengan ose steril ke media
MCA dan SSA dengan metode gores kuadran (4 kuadran).
3. Media yang telah digoreskan tersebut diinkubasi pada suhu 37
0
C selama 18 24
jam.
3.3.6. Pengamatan pada Media MCA dan SSA
1. Diamati koloni yang tumbuh pada media MCA dan SSA secara makroskopis.
2. Dibandingkan cirri cirri koloni untuk bakteri Salmonella sp pada media MCA
dan SSA