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Ciclo del ácido Tricarboxílico

Ciclo de Krebs
Las tres etapas de la respiración: En la etapa 1,
el carbono de los combustibles metabólicos se
incorpora a la acetil–CoA. En la etapa 2, el ciclo
del ácido cítrico, la oxidación del carbono
produce CO2, transportadores electrónicos
reducidos y una pequeña cantidad de ATP. En la
etapa 3, los transportadores electrónicos
reducidos se reoxidan aportando energía para
la síntesis de más ATP
Mitocondrias
• Aspecto: Son orgánulos muy pequeños, difíciles de observar al microscopio
óptico, al que aparecen como palitos o bastoncitos alargados. Son orgánulos
permanentes de la célula y se forman a partir de otras mitocondrias
preexistentes.

• Forma y número: El número de mitocondrias en una célula puede llegar a


ser muy elevado (hasta 2000). Normalmente suelen tener forma elíptica,
aunque también pueden ser filamentosas u ovoides. Sus dimensiones son
muy pequeñas (1 a 7 μm de longitud por 0.5 μm de diámetro).
Ultraestructura:

• Se observa la presencia de una membrana externa y una membrana interna,


ambas similares a las demás membranas de la célula.
• La membrana interna se prolonga hacia el interior en una especie de láminas
llamadas crestas mitocondriales.
• Entre ambas membranas hay un espacio llamado espacio intermembrana
(de unos 100 Å). Dentro de la mitocondria, entre las crestas, está la matriz
mitocondrial.
Transformación del Piruvato en Acetil - CoA
• En condiciones aeróbicas el ácido pirúvico obtenido en la glucolisis y en
otros procesos catabólicos atraviesa la membrana de la mitocondria y en
la matriz mitocondrial va a sufrir un proceso químico que tiene dos
vertientes:
1. Descarboxilación. El ácido pirúvico va a perder el grupo CO2
correspondiente al primer carbono, el carbono que tiene la función ácido.
2. Oxidación. Al perderse el primer carbono, el segundo pasa de tener un
grupo cetona a tener un grupo aldehído. Este grupo se oxidará a grupo
ácido (ácido acético) por acción del NAD+ . En el proceso interviene una
sustancia, la coenzima-A (HS-CoA) que se unirá al ácido acético para dar
acetil-coenzima A (ACA).
La piruvato dehidrogenasa está regulada por dos
mecanismos superpuestos.

1.- Está inhibida alostericamente cuando las


proporciones de ATP/ADP y NADH/NAD+ son altas

2.- Se inhibe cuando la disponibilidad de


combustible para el ciclo, en forma de Acetil-CoA o
ácidos grasos, es alta. Y se activa cuando las
demandas energéticas crecen y por tanto el flujo
de Acetil-CoA aumenta.

Pyruvate Dehydrogenase
O O HSCoA O
H3 C C C O H3 C C S CoA + CO2
pyruvate NAD+ NADH
acetyl-CoA

Se forman 2 nuevas moléculas de NADH+ H+ por cada molécula de glucosa y, al mismo


tiempo, se originan las primeras 2 moléculas de CO2.
Regulada por un mecanismo de modificación covalente.

Enzima - Pi Inactiva

Piruvato Piruvato
deshidrogenasa + ATP deshidrogenasa
quinasa fosfatasa

Enzima Activa

La interconversión entre las formas fosforilada y defosforilada está catalizada por las
enzimas piruvato deshidrogenasa kinasa y la piruvato deshidrogenasa fosfatasa.

La kinasa es activada por ATP cuando la concentración de ATP es alta, mientras que la
piruvato deshidrogenasa se inactiva por fosforilación.
Ciclo de krebs

• Es la vía de oxidación de la mayor parte de carbohidratos, ácidos grasos y


aminoácidos y genera numerosos metabolitos intermediarios de otras rutas
metabólicas. Es un ciclo anfibólico, es decir, opera catabólica y anabólicamente.

• Las ocho enzimas del ciclo catalizan una serie de reacciones que, globalmente,
oxidan un grupo acetilo a dos moléculas de dióxido de carbono, con la
generación de tres moléculas de NADH, una de FADH2 y una de GTP
Es alimentado continuamente en substratos y continuamente genera productos. Las
sustancias intermediarias se recuperan para ser de nuevo integradas en él. Como una rueda
girando sin fin, sólo se detendrá si faltan los substratos o si, por exceso de productos, se
inhiben las enzimas que participan en él.
1.- Condensación de la acetil-CoA con el ácido oxalacético.

• La enzima que cataliza la entrada de la acetil CoA en el ciclo del acido cítrico
se conoce como Citrato sintetasa y se encuentra en la matriz mitocondrial.

• La reacción se efectúa por condensación de un carbanión en el grupo metilo


de la Acetil CoA con oxalacetato.
Regulación del
ciclo
• En este proceso se recupera la CoA-SH.
2.- Transformación del ácido cítrico en su isómero, el ácido isocítrico
(reordenamiento)

• La Aconitasa cataliza los equilibrios reversibles entre los ácidos cítrico, cis-
aconítico e isocítrico.

• Esta enzima cataliza la adición trans reversible del H2O al doble enlace del
acido cis-aconítico que es un intermediario ligado a la enzima en la
interconversión de los dos isómeros del ácido cítrico.
3.- Descarboxilación oxidativa del ácido isocítrico.

• La enzima Isocítrico deshidrogenasa cataliza la β-descarboxilación oxidativa


del ácido isocítrico en acido α-cetoglutarato y CO2 en presencia del catión
bivalente Mg+2 o Mn+2.

• El NAD+ funciona como agente oxidante y el β-cetoácido, ácido


oxalosuccínico, es un intermediario unido a la enzima.

Regulación del
ciclo
4.- Descarboxilación oxidativa del ácido α-cetoglutárico.

• Comprende la formación de succinil CoA por la Ácido α-cetoglutárico


deshidrogenasa.

• Esta enzima requiere TPP, Mg+2, NAD+, FAD+, ácido lipoico y CoA como
cofactores.

• Esta reacción es irreversible. La succinil CoA, producida en la reacción, es


un inhibidor competitivo e inhibe fuertemente su propia formación a
partir de α-cetoglutarato, a menos que se eliminen
5.- Fosforilación a nivel de sustrato.
• La enzima succinico tiocinasa cataliza la formación de una estructura de
fosfato de alta energía a expensas del succinil CoA.

• El GTP formado en la reacción puede reaccionar para formar ATP y GDP en


una reacción catalizada por una nucleósido difosfocinasa localizada en el
espacio intermembrana de la mitocondria
• En estos momentos ya se ha completado la degradación del CH3-CO-CoA con
la formación de 2 moléculas de CO2, cuatro por cada molécula de glucosa.
Tenemos ya las 6 moléculas de CO2 que puede originar la glucosa.

• Las reacciones que vienen a continuación van a servir para recuperar el ácido
oxalacético.
6.- Oxidación del acido succínico.
• Esta reacción esta a cargo de la succínico deshidrogenasa que cataliza la
eliminación de dos átomos de hidrógeno del ácido succínico para formar ácido
fúmarico.

• El aceptor intermediario (agente oxidante) de los electrones es el FAD que se


une covalentemente mediante un residuo de histidina a la enzima

• La succínico deshidrogenasa es inhibida competitivamente por el ácido


malónico, un homologo del acido succínico
7.- Hidratación.
• La adición de H2O al ácido fumárico para formar ácido L-málico es una
reacción catalizada por la enzima Fumarasa.
8.- Oxidorreducción del Malato.

• El ciclo de krebs concluye con la oxidación del acido L-málico en ácido


oxalacetico por la enzima Málico deshidrogenasa.

• Esta es la cuarta reacción de oxidorreducción presente en el ciclo; el agente


oxidante es el NAD.
• La oxidación completa de los grupos acetilo sigue entonces la siguiente
estequiometría:

3NAD+ + FAD + GDP + acetil-CoA + Pi  3NADH + FADH2 + GTP + CoA + 2CO2

• Catalíticamente, el ciclo funciona como consecuencia de la regeneración del


oxalacetato. Se pueden oxidar un número ilimitado de grupos acetilo con la
mediación de una sola molécula de oxalacetato, ya que ésta se regenera en
el ciclo.

• El NADH y el FADH2 son productos vitales del ciclo. Su reoxidación por el


oxígeno, a través de la cadena de transporte electrónico y la fosforilación
oxidativa, completa la degradación del combustible metabólico para la
síntesis de ATP.
• Hay dos aspectos importantes sobre el ciclo de Krebs que deben conocerse:
a) La regulación del ciclo
b) La naturaleza anfibólica del ciclo

a) Regulación del ciclo:

• El flujo de carbono desde el piruvato a través del ciclo del ácido cítrico está
finamente regulado mediante efectores alostéricos y/o modificación
covalente de ciertas enzimas regulatorias.

• Además de la regulación a nivel de la piruvato deshidrogenasa, este ciclo


está regulado a nivel de la entrada de acetil-CoA en el ciclo (citrato sintasa).

• Además, también juegan un importante papel en la regulación del ciclo la


Isocitrato deshidrogenasa y la α-cetoglutarato deshidrogenasa.
Estas enzimas, en la mayoría de los casos, parecen estar controladas de tres
maneras simples:
a) Disponibilidad de sustrato.
b) Inhibición por producto.
c) Inhibición competitiva por retroalimentación de los intermediarios que se
encuentran más adelante en el ciclo.

Por ejemplo, la citrato sintasa y la Isocitrato deshidrogenasa se inhiben por


ATP, y la α- cetoglutarato deshidrogenasa se inhibe por sus productos
succinil-CoA y NADH.
- Acetil CoA
+AMP - NADH
- ATP

- NADH

+ADP
- NADH

- Succinil CoA
- NADH
b) Naturaleza anfibólica del ciclo

• El ciclo de los ácidos tricarboxílicos es una ruta catabólica, pero sin embargo, varios de
sus intermediarios son moléculas iniciales de una serie de rutas biosintéticas
(anabólicas).

• Estas rutas precisan de energía y por lo tanto el ciclo de los ácidos tricarboxílicos debe
de funcionar para proporcionar esa energía. Las diferentes rutas que utilizan
intermediarios del ciclo de los ácidos tricarboxílicos son:

1. La biosíntesis de la glucosa o gluconeogénesis. Tiene lugar en el citosol y precisa de


OAA. Este pasa la membrana en forma de malato.
2. La biosíntesis de lípidos, incluyendo la síntesis de ácidos grasos y la síntesis del
colesterol. Ocurre en el citosol y necesita de acetil-CoA. El acetil-CoA que se forma en la
mitocondria no pasa la membrana y el acetil-CoA del citosol se origina a partir del
citrato, que pasa la membrana mediante un co-transporte con malato.
3. La biosíntesis de algunos aminoácidos. El a-CG y el OAA se utilizan para la síntesis de
glutamato y aspartato.
4. La biosíntesis de porfirinas, que utiliza succinil-CoA.
Principales funciones biosintéticas de algunos
de los intermediarios del ciclo del acido cítrico:
Las rutas anapleróticas para la reposición de
estos intermediarios se indican con fechas rojas
Balance Energético: