Apuntes TEMA 7. Degradacion de Hidratos de Carbono

Bioqumica.
Carmen Martnez URJC Degradacin de hidratos de carbono

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Tema 7. Degradacin de hidratos de carbono.

Panormica de las principales vas del metabolismo de hidratos de carbono.
Digestin y absorcin de carbohidratos (glucosidasas).

Gluclisis:

Caractersticas generales. Oxidacin aerobia y fermentacin anaerobia. Relacin
con otras rutas metablicas.
Reacciones enzimticas de la gluclisis. Estequiometra y balance energtico.
Destinos metablicos del piruvato en condiciones aerobias y anaerobias.
Fermentacin lctica y alcohlica.
Regulacin de la gluclisis. Perfil energtico. Enzimas reguladoras. Efecto
Pasteur.
Entrada de azcares distintos de la glucosa en la gluclisis.

Ruta alternativa de oxidacin de la glucosa: ruta de las pentosas fosfato.

Funcin anablica de la ruta de las pentosas fosfato: generacin de poder
reductor (NADPH) y ribosa-5-fosfato para la biosntesis.
Fase oxidativa y no oxidativa: enzimas implicadas y su regulacin.
El balance global de la ruta se ajusta a las necesidades especficas de la clula.

Bibliografa

Lehninger AL, Nelson DL y Cox MM (2001) Principios de Bioqumica. Cap 15.
Mathews CK y van Holde KE (1998) Bioqumica. Caps 13 y 14.
Stryer L (2008) Bioqumica. Caps 16 y 20.
Voet D., Voet J.G. y Pratt C.W. (2007) Fundamentos de Bioqumica. Cap 14.

Bioqumica. Carmen Martnez URJC Degradacin de hidratos de carbono
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TEMA 7. Degradacin de hidratos de carbono.

Aproximadamente el 50% de las caloras ingeridas por un individuo occidental
medio procede de hidratos de carbono: 150 g de almidn, 120 g de sacarosa, 30 g de
lactosa y 10 g de glucosa + fructosa al da. Como resultado de la digestin de todos
ellos aparecen mayoritariamente tres monosacridos: glucosa, fructosa y galactosa.
Las principales vas del metabolismo de hidratos de carbono comienzan o
terminan con glucosa (al menos en mamferos). La glucosa es la principal forma en que
se presentan los hidratos de carbono procedentes de la dieta (tracto intestinal).
Tambin es la nica fuente de energa para ciertas clulas especializadas, y es la
principal fuente de energa para el cerebro.

La utilizacin de glucosa comienza con la gluclisis, ruta que poseen todas las
clulas del organismo para obtener parte de la energa qumica de esta molcula,
convirtindola en piruvato, y preparando (en su caso) la oxidacin completa de la
glucosa a CO
2
y H
2
O en el ciclo de Krebs y cadena de transporte electrnico
mitocondrial.

Una ruta alternativa a la utilizacin de glucosa mediante la gluclisis es la va de
las pentosas fosfato, cuya finalidad es proveer de energa y poder reductor en forma
de NADPH para la biosntesis: ser importante en las clulas con una biosntesis muy
activa (lpidos en glndula mamaria, nucletidos para divisin celular, etc.)

Por otro lado existe una va de sntesis de novo de glucosa: gluconeognesis.
Esta sntesis de glucosa la lleva a cabo el hgado y rin fundamentalmente. Requiere
consumo energtico (ATP) y comparte alguno de los pasos enzimticos con la
gluclisis, pero no todos. Para que el proceso global de la gluconeognesis sea
exergnico (es decir, pueda ocurrir espontneamente) se necesita sustituir los pasos
irreversibles de la gluclisis por unos pasos adicionales, acoplndose la ruta a la
hidrlisis de ATP.

Algunas clulas almacenan glucgeno de forma que poseen glucosa disponible
en momentos en que no hay aporte exgeno. Msculo e hgado son los principales
rganos implicados en el almacenamiento de glucosa en forma de glucgeno.

Como los monosacridos son los nicos hidratos de carbono que pueden ser
absorbidos por el intestino, su digestin consiste esencialmente en la hidrlisis de los
enlaces glucosdicos, conseguida mediante enzimas conocidas como glucosidasas,
presentes tanto en la saliva como en las secreciones pancreticas en el intestino. Una
vez liberados, los monosacridos son transportados al interior de las clulas del epitelio
intestinal a travs de transportadores especficos. Estas clulas los envan a la
circulacin sangunea portal, de donde llegan directamente al hgado, rgano
encargado de regular el metabolismo glucdico en el organismo.
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GLUCLISIS

La va glucoltica es una ruta bioqumica que surgi temprano durante la
evolucin, por lo que prcticamente todos los organismos conocidos la poseen.
La gluclisis es una va catalizada por 10 enzimas secuencialmente (va lineal)
que convierte una molcula de glucosa, de 6 tomos de carbono, en 2 molculas de
piruvato, de 3 tomos de carbono cada una. Esta conversin est acompaada por la
produccin neta de 2 molculas de ATP. En animales, la gluclisis es la nica ruta
metablica que proporciona ATP en ausencia de O
2
.
La reaccin neta de la gluclisis incluye la reduccin de dos molculas de NAD
+

a NADH:

D-glucosa + 2 Pi + 2 ADP + 2 NAD
+
2 pyr + 2 NADH + 2 H
+
+ 2 ATP + 2 H
2
O

G = - 73.3 kJ / mol (conversin de glucosa en pyr)

Esto significa que la ruta es exergnica y, por ello, unidireccional. No puede
transcurrir en ambos sentidos, sino slo en el sentido de formacin de pyr a partir de
glucosa.

En los organismos aerobios, la gluclisis es el primer paso en la oxidacin
completa de la glucosa a CO
2
y H
2
O, proceso que requiere O
2
como aceptor final de
electrones.
Bajo condiciones anaerbicas (en ausencia de O
2
) los electrones son aceptados,
en lugar de por el O
2
, por una molcula orgnica. Tal proceso es el denominado
fermentacin. Cuando el piruvato se convierte en lactato se habla de fermentacin
lctica, en clulas animales y algunos microorganismos. Cuando a partir de piruvato se
obtiene etanol se habla de fermentacin alcohlica, caracterstica de muchas
levaduras.
El balance global de la fermentacin lctica sera:

Glucosa + 2 Pi + 2 ADP 2 lactato + 2 ATP + 2 H
2
O
(C
6
H
12
O
6
) (C
3
H
6
O
3
)

En las fermentaciones se consigue extraer energa de los hidratos de carbono
sin realizar una oxidacin neta de estos compuestos. (El estado de oxidacin de lactato
o etanol es el mismo que el de glucosa).
La conversin de piruvato a lactato (o etanol) conlleva la reoxidacin del NADH a
NAD
+
, para que la gluclisis pueda continuar en ausencia de O
2
(en condiciones
aerobias el NADH producido durante la gluclisis se oxida de nuevo mediante la
cadena de transporte mitocondrial y los electrones son transferidos al O
2
, el aceptor
final de electrones).
Una clula que lleve a cabo la fermentacin de glucosa a lactato tiene acceso
solamente a 7 % de la energa libre total contenida en la molcula de glucosa. Tan
slo se consiguen 2 ATP por molcula de glucosa fermentada. La mayora de la
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energa de la glucosa est contenida en la molcula de lactato, que es qumicamente
casi tan compleja como la de glucosa. El rendimiento energtico es mucho menor que
en la respiracin.

Combustin de glucosa a CO
2
y H
2
O G = - 2870 kJ/mol
Glucosa 2 lactato G = - 196 kJ/mol

Esta va en animales superiores tiene lugar cuando el aporte de O
2
es
insuficiente y permite mantener los niveles de ATP durante un corto perodo de tiempo.
Es el caso, por ejemplo, del msculo esqueltico sometido a un ejercicio intenso;
cuando la produccin de piruvato excede a la capacidad del ciclo de Krebs las clulas
del msculo esqueltico obtienen la mayor parte de su energa mediante la
fermentacin lctica.
En algunos microorganismos la fermentacin lctica es el modo habitual de
obtencin de energa a partir de carbohidratos: son las bacterias lcticas (Lactobacillus
lactis, L. Bulgaricus, etc.) utilizadas para la fabricacin del queso, yogur, etc.
La gluclisis desempea un papel metablico central en la generacin de
energa y tambin en la de intermediarios metablicos para otras rutas. Los
intermediarios producidos en las reacciones glucolticas son utilizados en diversos
procesos biosintticos, incluyendo la formacin de serina y de fosfolpidos de
membrana.
En las clulas eucariotas la gluclisis se lleva a cabo en el citosol, todas las
enzimas que participan son citoslicas. El producto final de la gluclisis, el piruvato,
pasar a la mitocondria, en presencia de O
2
, para ser oxidado.
Las 10 reacciones enzimticas de la gluclisis se pueden considerar divididas en
dos etapas diferentes:
Las 5 primeras reacciones constituyen una etapa de inversin de energa,
en la que se generan azcares-fosfato a costa de la conversin de ATP en
ADP, y el sustrato de 6C se desdobla en 2 azcares-fosfato de 3C.
Las 5 ltimas reacciones corresponden a una etapa de generacin de
energa. En esta fase, las triosas-fosfato se convierten en compuestos ricos
en energa, que transfieren fosfato al ADP, dando lugar a la sntesis de ATP.
Estos compuestos ricos en energa son el 1,3 bisfosfoglicerato y el
fosfoenolpiruvato. Cada uno de estos compuestos tiene un G de hidrlisis
superior al del ATP. Durante la segunda etapa de la gluclisis cada uno de
estos compuestos transfiere su fosfato de alta energa al ADP, dando ATP.
Este proceso se denomina fosforilacin a nivel de sustrato, es decir, la
generacin de un enlace fosfato de alta energa impulsada por la
degradacin de un sustrato con una energa ms alta. Es una de las 3 rutas
principales de sntesis de ATP, las otras dos son: la fosforilacin oxidativa, o
sea, la sntesis de ATP impulsada por el transporte electrnico, en la
mitocondria, y la fotofosforilacin, la utilizacin de la energa luminosa
fotosinttica para impulsar la sntesis de ATP, en el cloroplasto.

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El rendimiento neto, por mol de glucosa metabolizada es de 2 moles de ATP y
2 moles de piruvato. Obsrvese que se generan tambin equivalentes de reduccin, en
forma de NADH.
Consideremos ahora de manera secuencial las 10 reacciones que van de la
glucosa al piruvato:

Reaccin 1. Primera inversin de ATP.

La fosforilacin de la glucosa dependiente del ATP est catalizada por la
hexoquinasa. Esta reaccin no es exclusiva de la gluclisis.

Glucosa + ATP G6P + ADP

Se requiere in magnesio, ya que la forma reactiva del ATP es su complejo
quelado con Mg
2+
. Esto es as para casi todas las enzimas que requieren ATP.
Es la primera de las dos reacciones de cebado o activacin de la glucosa.
Adems de activar la glucosa, esta fosforilacin proporciona a la molcula un grupo
polar, cargado negativamente, que le impide pasar a travs de la membrana celular, la
cual, generalmente no permite el paso de molculas muy polares. De hecho, la mayor
parte de los intermediarios del metabolismo son compuestos inicos a pH 7, cosa que
les impide escapar fuera de las clulas por simple difusin. Se mantiene as baja la
concentracin de glucosa libre, la mayor parte de la glucosa intracelular se encuentra
fosforilada. As se favorece la difusin de la glucosa hacia dentro de la clula.
La hexoquinasa puede utilizar otros monosacridos como sustrato, adems de la
glucosa, entre ellos la fructosa y la manosa.
Un segundo enzima que puede catalizar esta reaccin en hgado es la
glucoquinasa. Difiere de la hexoquinasa en la afinidad por glucosa y en su regulacin.
As, la hexoquinasa tiene mayor afinidad por la glucosa (menor Km): 0.1 mM frente a
10 mM de la glucoquinasa. La hexoquinasa es un enzima regulador, se inhibe por su
propio producto de reaccin, la glucosa-6-P, siendo ste un mecanismo que controla la
entrada de sustratos en la ruta glucoltica. La glucoquinasa, sin embargo, presenta una
baja sensibilidad a la inhibicin por parte de la G-6-P.
La glucoquinasa acta normalmente cuando la concentracin de glucosa en
sangre es temporalmente elevada, como ocurre tras la digestin de una comida rica en
hidratos de carbono, de esta manera permite al hgado realizar una de sus funciones
principales que consiste en regular las concentraciones sanguneas de glucosa. La
concentracin de glucosa citoslica es generalmente muy superior a la Km de la
hexoquinasa, por lo que esta enzima est actuando en condiciones de saturacin
(Vmax); ante un aumento de la concentracin citoslica de glucosa tiene que ser otro
enzima el que lleve a cabo la reaccin con el exceso de sustrato: la glucoquinasa.
G de la reaccin es de 16.7 kJ/mol. Se trata de una reaccin, por tanto,
irreversible. En condiciones celulares es incluso ms favorable: G = -33.9 kJ/mol.
La glucosa-6-P no solamente es un intermediario glucoltico, sino que tambin
es sustrato utilizado para la sntesis de glucgeno y la va de las pentosas fosfato.
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Reaccin 2. Isomerizacin de la glucosa-6-P.

La isomerizacin de la aldosa, la glucosa-6-P, a su correspondiente cetosa, la
fructosa-6-P, est catalizada por la glucosa fosfato isomerasa.

G6P F6P

La presencia de un grupo carbonilo en el C2 es imprescindible para que, dos
pasos ms adelante, se produzca la escisin de la molcula. Adems, as el grupo
hidroxilo generado en el C1 puede fosforilarse con facilidad en la reaccin siguiente.
Se trata de una reaccin fcilmente reversible (G = + 1.7 kJ/mol). Tambin
participar en la gluconeognesis. Durante la reaccin la glucosa-6-P debe pasar a la
forma abierta, ciclndose una vez isomerizada.

Reaccin 3. Segunda inversin de ATP.

La tercera reaccin consiste en la fosforilacin, dependiente de ATP, de la
fructosa-6-P en posicin 1. Es la segunda reaccin de cebado.

F6P + ATP F1,6BP + ADP

Est catalizada por la enzima fosfofructoquinasa 1 (PFK-1), enzima que
cataliza el primer paso exclusivo de la gluclisis.
El producto de la reaccin es la fructosa 1,6 bisfosfato (FBP). Se denomina
bisfosfato en lugar de difosfato para indicar que los dos fosfatos estn separados en la
molcula, y no unidos como en el ADP.
Al igual que la fosforilacin de la glucosa, esta reaccin es lo suficientemente
exergnica (G = -14.2 kJ/mol) como para ser prcticamente irreversible en las
condiciones celulares. Esta caracterstica es importante, ya que la PFK-1 constituye el
lugar principal de regulacin de la gluclisis. La PFK-1 es una enzima alostrica cuya
actividad es muy sensible a la situacin energtica de la clula, as como a las
concentraciones de otros intermediarios, en especial el citrato y los cidos grasos.
Una carga energtica alta inhibe la PFK-1.
Los moduladores alostricos positivos, o activadores, de la PFK-1 son el AMP, el
ADP y la fructosa 2,6 bisfosfato (ste ltimo a concentraciones muy bajas, se le
considera el principal regulador que controla el flujo de carbono a travs de la gluclisis
y la gluconeognesis heptica, su efecto consiste en aumentar la afinidad de PFK-1 por
su sustrato F6P).
Los moduladores alostricos negativos, o inhibidores, ms significativos son el
ATP y el citrato. El citrato se acumula cuando la carga energtica es elevada. En
cuanto al ATP su efecto puede parecer anmalo, puesto que el ATP es un sustrato y,
por tanto, resulta esencial para la reaccin. Hay que indicar que, como inhibidor, el ATP
se fija en un lugar distinto de la enzima, con menor afinidad, de modo que a
concentraciones bajas de ATP el lugar regulador no est ocupado y la cintica es casi
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hiperblica. Slo a concentraciones elevadas el ATP funciona como inhibidor,
reduciendo la afinidad por la F6P.

Reaccin 4. Fragmentacin en dos triosas fosfato.

Una vez generada, la fructosa 1,6 bisfosfato se escinde para dar lugar a dos
intermediarios de 3C. La reaccin est catalizada por la aldolasa (que recibe este
nombre porque su reaccin es similar a la inversa de una condensacin aldlica).
La ruptura de la F1,6 BP se produce entre los carbonos 3 y 4, generando
gliceraldehdo-3-P (G3P) y dihidroxiacetona fosfato (DHAP).

F1,6BP G3P + DHAP

La reaccin es fuertemente endergnica en condiciones estndar:
G= + 23.9 kJ/mol. Sin embargo, a partir de las concentraciones intracelulares reales
del reactivo y de los productos se ha calculado un G de 1.3 kJ/mol, que concuerda
con la observacin de que, in vivo, la reaccin va hacia la derecha. Este ejemplo ilustra
la importancia de considerar las condiciones existentes en la clula, y no las
condiciones del estado estndar, para decidir cual es la direccin favorable de la
reaccin.
La reaccin catalizada por la aldolasa es muy importante porque se generan dos
principales intermediarios metablicos. La DHAP y el G3P estn implicados en la
gluconeognesis; en clulas vegetales son intermediarios de las reacciones de la fase
oscura de la fotosntesis. DHAP, adems, es precursor de glicerol-3-P, que participa en
la sntesis de fosfolpidos.

Reaccin 5. Isomerizacin de la DHAP.

Slo una de las triosas fosfato, el G3P, puede degradarse directamente en las
reacciones posteriores de la gluclisis. Por ello es necesaria la conversin de DHAP en
G3P. Este paso est catalizado por la enzima triosa fosfato isomerasa.

DHAP G3P

Esta reaccin es tambin un poco endergnica (G = + 7.6 kJ/mol) en
condiciones estndar, pero la concentracin intracelular de G3P es baja, lo cual hace
que la reaccin se desplace hacia la derecha. La razn es que el G3P es rpidamente
consumido por la accin de diversas enzimas.
Es de notar que los carbonos 1 y 6 de la glucosa se convierten en el C3 del
G3P.

En este punto la gluclisis ha gastado 2 molculas de ATP y ha convertido un
azcar hexosa en 2 molculas de G3P, cada una de las cuales ser metabolizada a
continuacin para producir compuestos de alta energa que puedan impulsar la sntesis
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de ATP. La fase de inversin de energa del ciclo se ha completado ya, y va a iniciarse
la fase de generacin de energa.
La segunda etapa de la gluclisis abarca desde el G3P hasta el piruvato,
formndose 2 ATP. Como cada glucosa genera 2 molculas de G3P, la segunda etapa
de la gluclisis genera 4 ATP, por lo que el balance neto es la sntesis de 2 ATP. En
esta segunda etapa, adems, se genera NADH, cuyo destino es variable segn el
organismo y las condiciones celulares: en condiciones anaerobias se recicla NAD
+
en
un paso reductor en las fermentaciones, y en condiciones aerobias ser oxidado por la
respiracin celular.

Reaccin 6. Generacin del primer compuesto de alta energa.

El primer paso de la segunda etapa es la nica reaccin de oxidacin de la
gluclisis. Est catalizado por la enzima gliceraldehdo-3-P deshidrogenasa,
dependiente de NAD
+
. Esta es una de las reacciones ms importantes de la gluclisis,
debido en parte a que genera el primer intermediario de alta energa y en parte porque
genera un par de equivalentes reductores:

G3P + NAD
+
+ Pi 1,3 bisfosfoglicerato + NADH + H
+

Esta reaccin comporta una oxidacin de 2 electrones del carbono carbonilo del
G3P al nivel de carboxilo, una reaccin que generalmente es bastante exergnica. Sin
embargo, la reaccin global es ligeramente endergnica (en condiciones estndar)
G = + 6.3 kJ/mol, ya que la enzima utiliza la mayor parte de la energa liberada para
impulsar la sntesis de un compuesto de sper-alta energa, el 1,3 bisfosfoglicerato
(BPG). Este compuesto contiene un anhdrido mixto de cido carboxlico-fosfrico (o
grupo acil-fosfato), en la posicin 1, un grupo funcional con un G de hidrlisis muy
alta, - 49.9 kJ/mol, superior a la del anhdrido fosfato del ATP, capaz por tanto de
impulsar la sntesis de ATP a partir de ADP, como de hecho lo hace en la siguiente
reaccin de la secuencia.
Esta enzima requiere tambin un coenzima, el NAD
+
, para aceptar los electrones
del sustrato que se est oxidando.
Es una protena tetramrica, con 4 subunidades idnticas. Se inhibe por metales
pesados, ya que posee grupos SH en su centro activo, grupos tioles que son
esenciales para la actividad cataltica.

Reaccin 7. Primera fosforilacin a nivel de sustrato.

El 1,3 bisfosfoglicerato, dado su elevado potencial de transferencia de fosfato,
tiene una clara tendencia a transferir su grupo acil-fosfato al ADP, con la consiguiente
formacin de ATP. Esta reaccin de fosforilacin a nivel de sustrato la cataliza la
fosfoglicerato quinasa.

1,3 BPG + ADP 3PG + ATP
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G de la reaccin es de - 18.8 kJ/mol. En condiciones celulares [3PG] BPG y
el G es ligeramente positivo.
El arseniato es una sustancia txica porque puede ser utilizado por la G3PDH,
pero entonces no se genera ATP en el paso catalizado por la fosfoglicerato quinasa.

Reaccin 8. Preparacin para la sntesis del siguiente compuesto de alta energa

El 3-fosfoglicerato (3PG) es transformado en 2-fosfoglicerato (2PG) por la accin
de la enzima fosfoglicerato mutasa, enzima que requiere Mg
2+
. (Las mutasas
catalizan la migracin de un grupo funcional dentro de una molcula).

3PG 2PG

Hasta este punto en la gluclisis el balance energtico sera cero: se ha
consumido tanto ATP como se ha generado. Para obtener energa hay que convertir un
enlace pobre en energa como el ster del 3PG en un enlace rico en energa. Para ello
se da este primer paso de cambio de posicin del enlace ster y, posteriormente, se
elimina una molcula de H
2
O para generar el PEP.
Esta reaccin tiene un G de + 4.4 kJ/mol, es ligeramente endergnica en
condiciones estndar. De nuevo, la concentracin intracelular de 3PG es alta con
respecto a la de 2PG, por lo que in vivo la reaccin se produce hacia la derecha sin
dificultad.
La enzima contiene una fosfohistidina en el lugar activo. En el primer paso de la
reaccin se transfiere el fosfato al sustrato para formar un intermediario: el 2,3 BPG,
2,3-bisfosfoglicerato.

Enzima-P + 3-P-glicerato [Enzima-2,3 bisfosfoglicerato] Enzima-P + 2-P-glicerato

Reaccin 9. Sntesis del segundo compuesto de alta energa.

La deshidratacin del 2PG para generar PEP est catalizada por la enolasa, que
tiene un requerimiento absoluto por Mg
2+
o Mn
2+
y se inhibe fuertemente por fluoruro.

2PG PEP + H
2
O G = + 1.7 kJ/mol

Aunque la reaccin catalizada por la enolasa es, formalmente, una eliminacin
de una molcula de H
2
O de los tomos de carbono 2 y 3 del 2PG, puede considerarse
tambin como una oxidorreduccin intramolecular, ya que la eliminacin de H
2
O
provoca que el tomo de C2 resulte ms oxidado y el tomo de C3 ms reducido.
El G de esta reaccin es pequeo. Sin embargo, su efecto consiste en
aumentar enormemente la variacin de energa libre de hidrlisis del enlace fosfato,
que pasa de -15.6 kJ/mol para el 2PG a - 61.9 kJ/mol para el PEP, debido a que el
producto de la hidrlisis del PEP, el piruvato, se estabiliza por resonancia.

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Reaccin 10. Segunda fosforilacin a nivel de sustrato.

En la ltima reaccin, catalizada por la piruvato quinasa, el PEP transfiere su Pi
al ADP en otra fosforilacin a nivel de sustrato. La reaccin es fuertemente exergnica
(G = - 31.4 kJ/mol) ya que la tautomerizacin espontnea del producto, el enol
piruvato, hacia la forma ceto altamente favorecida proporciona un fuerte impulso
termodinmico hacia delante.

PEP + ADP Pyr + ATP

La reaccin de la piruvato quinasa es otro lugar de regulacin metablica. En
hgado la enzima, un tetrmero de 250000 de peso molecular, se inhibe
alostricamente a concentraciones de ATP elevadas y se activa por la fructosa 1,6
bisfosfato.
La sntesis de la enzima heptica est bajo control de la dieta: se induce la
sntesis por dietas ricas en hidratos de carbono.
La actividad de la piruvato quinasa en el hgado se regula tambin por
fosforilacin/defosforilacin. La forma defosforilada es mucho ms activa. Este proceso
est bajo control hormonal (glucagon activa PKA que fosforila PK) y deriva el PEP
hacia la gluconeognesis cuando la oxidacin de los cidos grasos y el ciclo de Krebs
estn actuando ya en un grado suficiente para satisfacer las necesidades energticas
de la clula. Esto es aplicable al hgado solamente. En msculo prcticamente todo el
PEP producido se convierte en piruvato.

Existen dos defectos genticos relacionados con la gluclisis que afectan al
transporte de O
2
en la sangre y provocan patologas.
Cuando se habl de la hemoglobina se dijo que el 2,3-bisfosfoglicerato acta
como inhibidor alostrico de la unin del O
2
a la hemoglobina, se une especficamente
a la deoxihemoglobina y altera la afinidad de la hemoglobina por el O
2
.
Los eritrocitos sintetizan y degradan el 2,3-BPG mediante una va que es una
desviacin de la ruta principal de la gluclisis.
Una deficiencia de hexoquinasa provoca una disminucin de la concentracin de
2,3 BPG, al diminuir [1,3 BPG], y como consecuencia un aumento de la afinidad de la
hemoglobina por el O
2
, lo que conlleva un menor aporte de O
2
a los tejidos perifricos
al cederlo con mayor dificultad la hemoglobina.
Una deficiencia de piruvato quinasa provoca un aumento de la concentracin de
2,3 BPG, al aumentar [1,3 BPG], y como consecuencia una disminucin de la afinidad
de la hemoglobina por el O
2
, lo que conlleva un deterioro de la captacin de O
2
en los
pulmones.

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DESTINOS METABOLICOS DEL PIRUVATO

El piruvato est situado en una encrucijada metablica. Su destino va a
depender del estado de oxidacin de la clula en la que es producido y de la
dependencia de esa clula por el O
2
. En condiciones anaerbicas el piruvato es
reducido y se regenera as el NAD
+
; en condiciones aerbicas el piruvato es oxidado en
el ciclo de Krebs.

Fermentacin lctica.

En los organismos anaerobios o en las clulas aerobias que estn realizando
unas tasas de gluclisis muy elevadas, el NADH generado en la gluclisis no puede
reoxidarse en las mitocondrias. Cuando se produce esta situacin el NADH debe
utilizarse para impulsar la reduccin de un sustrato y as mantener la homeostasis.
Como ya se ha indicado, ese sustrato es el propio piruvato, y el producto es el lactato.
(En clulas eucariotas y en bacterias del cido lctico). La enzima que cataliza esta
reaccin es la lactato deshidrogenasa LDH.

Pyr + NADH + H
+
lactato + NAD
+
G = - 25.1 kJ/mol

La LDH se encuentra en los tejidos animales en mltiples formas moleculares.
Las distintas formas moleculares de una enzima que catalizan la misma reaccin se
denominan isoenzimas. La LDH tiene 5 isoenzimas.
La LDH es una protena tetramrica, formada por dos tipos de subunidades, M y
H, que presentan pequeas diferencias en su secuencia de aminocidos. Las
subunidades M predominan en el msculo esqueltico y las subunidades H predominan
en el corazn. Las subunidades M y H se combinan entre s, de manera que las 5
isoenzimas de la LDH tienen las siguientes composiciones: M
4
, M
3
H, M
2
H
2
, MH
3
y H
4
.
Las 5 isoenzimas difieren en la Km por el piruvato y en la regulacin. Se
encuentran en diferentes proporciones en los distintos tejidos.
M
4
Es abundante en msculo esqueltico, tejido que utiliza glucosa
anerbicamente.
H
4
Se inhibe por piruvato. Es abundante en corazn, tejido que oxida
aerbicamente la glucosa.
En msculo esqueltico una alta concentracin de piruvato se deriva en parte
hacia la formacin de lactato, que puede ser exportado al torrente sanguneo y llegar a
los tejidos gluconeognicos, dando as origen al ciclo de Cori.

Fermentacin alcohlica.

Las levaduras convierten el piruvato en etanol en una ruta de dos pasos. En el
primer paso se produce la descarboxilacin no oxidativa del piruvato a acetaldehdo,
reaccin catalizada por la piruvato descarboxilasa. Esta enzima requiere la presencia
como coenzima del pirofosfato de tiamina (TPP
+
). Este coenzima, procedente de la
___________________________________________________________________________
12
vitamina B
1
, interviene en varias reacciones de transferencia de grupos que implican
una porcin aldehdo activada.
A continuacin el acetaldehdo ser reducido a etanol por la enzima alcohol
deshidrogenasa, en una reaccin dependiente de NADH.
Pyr + H
+
acetaldehdo + CO
2

Acetaldehdo + NADH + H
+
etanol + NAD
+

Algunas de las consecuencias metablicas importantes de la intoxicacin por
etanol se deben a la oxidacin del etanol por la enzima alcohol deshidrogenasa en el
hgado. En primer lugar, se produce una reduccin masiva de NAD
+
a NADH, que
reduce el flujo que transcurre por la G3PDH, con la consiguiente inhibicin de la
generacin de energa. En segundo lugar, el acetaldehdo es bastante txico (forma
bases de Schiff con los grupos -amino de las protenas), y muchos de los efectos
desagradables de las resacas son consecuencia de las acciones del acetaldehdo y sus
ulteriores metabolitos (los animales carecen de la enzima piruvato descarboxilasa).

Ambas fermentaciones, lctica y alcohlica, tienen la misma funcin: la
regeneracin anaerbica de NAD
+
para que pueda continuar la gluclisis. Se
diferencian fundamentalmente en sus productos metablicos.

La fermentacin no es un proceso oxidativo ya que el estado de oxidacin de
sus productos (lactato o etanol) es el mismo que el de la glucosa. En cambio, el
piruvato s est ms oxidado que la glucosa.
La gluclisis, tanto si es aerobia como si es anaerobia, libera tan slo una
pequea fraccin de la energa potencial almacenada en la molcula de glucosa. La
mayor parte de la energa potencial que existe inicialmente en la glucosa contina an
a la espera de liberarse tras la gluclisis. El metabolismo aerbico de la glucosa
permite la extraccin de ms energa de la glucosa, aumentando as la eficiencia del
metabolismo celular. Por este motivo el metabolismo aerbico es mucho ms eficaz
que el anaerbico, y los organismos aerobios se adaptan mejor y estn ms extendidos
que los anaerobios. No obstante, los animales recurren al metabolismo anaerobio en
determinadas circunstancias fisiolgicas. As, por ejemplo, durante el parto en el recin
nacido se produce una interrupcin en el aporte de oxgeno (los pulmones an no son
funcionales y no hay aporte materno). Se recurre entonces al metabolismo anaerobio,
que constituye una forma rpida, aunque sea poco eficiente, de conseguir energa.

acetaldehdo
PYR
FERMENTACIN
LCTICA
Clulas animales y
bacterias lcticas.
LACTATO

FERMENTACIN
ALCOHLICA
Levadura
ETANOL

___________________________________________________________________________
13
REGULACIN DE LA GLUCLISIS

La gluclisis est estrechamente coordinada con otras rutas importantes de
generacin y utilizacin de energa, en especial la sntesis y degradacin del
glucgeno, la gluconeognesis, la ruta de las pentosas fosfato y el ciclo de Krebs. Es
importante sealar, pues, que los factores metablicos que controlan la gluclisis
tienden a regular otras rutas de una manera coordinada.
En general encontramos que las enzimas del metabolismo de los hidratos de
carbono que estn sujetas a regulacin son aquellas que catalizan reacciones
termodinmicamente irreversibles. Las tres reacciones de la gluclisis que transcurren
con una gran variacin negativa de la energa libre estn catalizadas por la
hexoquinasa, la PFK-1 y la piruvato quinasa. Cada una de ellas es una enzima
alostrica.
La aceptacin de que la gluclisis se controla fundamentalmente por la actividad
de la PFK se produjo en parte gracias a un descubrimiento realizado hace ms de un
siglo por Louis Pasteur. Cuando los cultivos anaerobios de levaduras que
metabolizaban glucosa se exponan al aire, la tasa de utilizacin de glucosa se reduca
drsticamente. Este fenmeno, denominado efecto Pasteur, se explica por la
inhibicin de la gluclisis por el oxgeno, lo cual tiene su lgica puesto que se obtiene
mucha ms energa a partir de la oxidacin completa de la glucosa que slo a partir de
la gluclisis. El mecanismo de este efecto se dedujo que deba ser la inhibicin de la
PFK-1 en presencia de oxgeno (probablemente por un aumento de [ATP]), puesto que
se observ la acumulacin de metabolitos previos a F1,6BP y la disminucin de todos
aquellos posteriores a F1,6BP.
Otras conclusiones importantes surgieron del descubrimiento de que las
concentraciones intracelulares de intermediarios glucolticos no son constantes en
muchas situaciones, sino que experimentan variaciones peridicas u oscilaciones.
Estas oscilaciones pueden ser medidas como variaciones en las concentraciones de
NADH, ATP, ADP y AMP. Las variaciones cclicas de las concentraciones de estos
intermediarios glucolticos proporcionan claves importantes sobre los mecanismos
reguladores que afectan a la gluclisis.
Las oscilaciones son una caracterstica comn en las rutas controladas mediante
retroinhibicin (inhibicin feed-back).
Adems, el patrn obtenido (las concentraciones de ADP y AMP aumentan y
disminuyen con la misma fase que el NADH, justo la opuesta a la del ATP) sugiere que
la actividad de la gluclisis depende de algn modo de la carga energtica: cuando la
carga es elevada la ruta est inactivada y cuando es baja la ruta se activa. Luego, el
principal punto de regulacin debe ser una enzima regulada por la carga energtica: la
PFK.
La PFK es una enzima alostrica. Sus activadores son AMP, ADP y F2,6BP;
ste ltimo es el ms importante, su sntesis est catalizada por la PFK-2, cuya
actividad se regula por fosforilacin/defosforilacin reversible, controlada en ltima
instancia por AMPc en respuesta a estmulos hormonales. Los inhibidores de PFK son
ATP y citrato. La inhibicin por citrato constituye otro sensor del nivel energtico. Con
___________________________________________________________________________
14
una carga energtica elevada, el flujo a travs del ciclo de Krebs se reduce. En estas
condiciones el citrato se acumula y se transporta fuera de las mitocondrias. Su
interaccin con la PFK en el citosol puede ser un indicador de que la generacin de
energa es suficiente y, por tanto, de que puede reducirse la produccin de precursores
del ciclo de Krebs a travs de la gluclisis.
La piruvato quinasa tambin se inhibe alostricamente por ATP.
Un segundo efecto alostrico es la activacin antergrada de la piruvato quinasa
por la F1,6BP. Este efecto, que es el inverso de la retroinhibicin, garantiza que el
carbono que supere el primer paso regulado de la gluclisis (PFK-1) podr completar
su paso por la ruta y que no se producir una acumulacin indeseable de
intermediarios.
Un tercer efecto, de control por retroinhibicin, es la inhibicin de la piruvato
quinasa por acetil-CoA (principal producto de la oxidacin de los cidos grasos). Esto
permite que la gluclisis se inhiba cuando los cidos grasos estn generando energa.
Otros niveles de regulacin de la piruvato quinasa son por fosforilacin
defosforilacin y por induccin de la sntesis de la enzima, como ya comentamos.
La gluclisis se regula tambin en los puntos de entrada de carbono a la ruta.
As, la hexoquinasa se inhibe por alta concentracin de glucosa-6-P.
Otro punto de control importante en el metabolismo de los animales es la
degradacin de glucgeno por la glucgeno fosforilasa, que controla la disponibilidad
de glucosa.

ENTRADA DE AZCARES DISTINTOS DE LA GLUCOSA EN LA GLUCLISIS

El ms abundante de los monosacridos es la glucosa, pero tambin son
importantes la galactosa (procedente de la hidrlisis del disacrido lactosa de la leche),
la fructosa (presente como azcar libre en muchas frutas, se obtiene tambin en la
hidrlisis de la sacarosa) y la manosa (procedente de la digestin de alimentos que
contienen determinados polisacridos o glucoprotenas).
Las rutas de utilizacin de estos sustratos se esquematizan en la figura (fig.
13.12 Mathews).
En cuanto a los disacridos los tres ms abundantes en los alimentos son la
maltosa, la lactosa y la sacarosa. En el metabolismo de los animales estas sustancias
se hidrolizan en las clulas que tapizan la pared intestinal, para dar lugar a las hexosas
que las forman que pueden ser absorbidas y utilizadas en la glucolisis:
Maltosa + H
2
O 2 D-glucosa
Lactosa + H
2
O D-galactosa + D-glucosa
Sacarosa + H
2
O D-fructosa + D-glucosa
En muchas personas, la enzima lactasa desaparece de las clulas de la mucosa
intestinal a partir de los 4 6 aos de edad, poca en que generalmente suele
reducirse el consumo de leche. Ello hace que se produzca una intolerancia a la lactosa,
en la que el consumo de leche o productos lcteos que contengan lactosa provoca
molestias intestinales, debida a la accin bacteriana sobre la lactosa que se acumula.

___________________________________________________________________________
15
RUTA DE LAS PENTOSAS FOSFATO

La ruta predominante del catabolismo de la glucosa es la gluclisis para dar
piruvato, seguida de la oxidacin a CO
2
en el ciclo de Krebs. La va de las pentosas
fosfato es un proceso alternativo, cuya funcin es fundamentalmente anablica ms
que catablica (aunque no hay que olvidar que conlleva la oxidacin de la glucosa y en
ciertos casos puede actuar para oxidar la glucosa por completo hasta CO
2
y H
2
O).

La ruta de las pentosas fosfato tiene dos funciones principales:
1) proporcionar NADPH para la biosntesis reductora y
2) proporcionar ribosa-5-P para la biosntesis de nucletidos y cidos nucleicos.

El NADP
+
es idntico al NAD
+
excepto por la presencia de un fosfato adicional
en posicin 2 de una de las ribosas del NADP
+
. Metablicamente, la diferencia entre
ambos coenzimas es que el NADPH participa en procesos biosintticos, en tanto que el
NADH es la forma predominante durante el catabolismo.
Dado que el NADPH se utiliza para la biosntesis de los cidos grasos y los
esteroides, los tejidos ms activos en la va de las pentosas fosfato sern aquellos
especializados en la sntesis de tales molculas, como el tejido adiposo, el hgado, la
glndula mamaria durante la lactancia y las glndulas suprarrenales. En otras clulas,
tales como las de msculo esqueltico, esta ruta es mucho menos activa.
Adems de producir NADPH, la ruta de las pentosas fosfato genera ribosa-5-P,
un precursor de la biosntesis de nucletidos y cidos nucleicos, por lo que las clulas
que proliferan rpidamente (clulas en divisin) tienen generalmente una actividad
elevada de las enzimas de esta ruta.
En las plantas existe una variante de la ruta de las pentosas fosfato que acta
en sentido inverso como parte del proceso de fijacin del carbono de la fotosntesis. La
va de las pentosas fosfato es, igual que la gluclisis, citoslica. El predominio de una u
otra ruta depender de las condiciones metablicas de la clula.
Se puede considerar a la ruta de las pentosas fosfato como una ruta alternativa
a la gluclisis para la oxidacin de la glucosa, acoplada a la formacin de NADPH.

Se distinguen dos fases:
- una fase oxidativa: en la que la G6P es transformada en ribulosa-5-P, con la
generacin paralela de 2 molculas de NADPH.
- una fase no oxidativa: en la que la ribulosa-5-P produce ribosa-5-P y xilulosa-
5-P, que pueden posteriormente ser convertidos en los intermediarios
glucolticos G3P y F6P.

En la fase oxidativa se genera poder reductor en forma de NADPH. Dos de las
tres reacciones de esta etapa son oxidativas, y cada una de ellas conlleva la reduccin
de un NADP
+
a NADPH.
___________________________________________________________________________
16
La primera reaccin, catalizada por la glucosa-6-P deshidrogenasa (G6PDH),
oxida la G6P a la correspondiente lactona (una lactona es un ster intramolecular).
Este es el enzima regulador principal, se inhibe alostricamente por NADPH.
A continuacin la lactona se hidroliza por una lactonasa especfica a
6-fosfogluconato, que experimenta una descarboxilacin oxidativa para dar CO
2
, otro
NADPH y una pentosa fosfato, la ribulosa-5-P (el carbono liberado es el
correspondiente a la posicin 1 de la glucosa).
La fase no oxidativa consiste principalmente en interconversiones entre
molculas. Parte de la ribulosa-5-P producida en la fase oxidativa se convierte en
ribosa-5-P, por accin de una isomerasa.

Llegados a este punto ya se han realizado las dos funciones principales de la
ruta, es decir, la generacin de NADPH y de ribosa-5-P.
G6P + 2NADP
+
+ H
2
O ribosa-5-P + CO
2
+ 2NADPH + 2H
+
Ahora bien, muchas clulas necesitan el NADPH para la biosntesis pero no
necesitan la ribosa-5-P en cantidades tan elevadas. Entonces la ribosa-5-P tiene que
catabolizarse. El proceso implica una serie de transformaciones del azcar-P que
pueden parecer complicadas, pero que tienen un resultado sencillo. La secuencia de
reacciones convierte 3 azcares-P de 5C en 2 azcares-P de 6C y 1 de 3C. El azcar-
P de 6C es la F6P y el de 3C es el G3P, ambos intermediarios glucolticos que pueden
catabolizarse por esta va.
Las enzimas que intervienen en el proceso son: ribulosa-5-P epimerasa,
transcetolasa y transaldolasa.
La ribulosa-5-P se convierte, por accin de la epimerasa, en su epmero, la
xilulosa-5-P.
A continuacin, la transcetolasa, una enzima dependiente de pirofosfato de
tiamina (TPP
+
=

grupo transportador de aldehdos), cataliza la transferencia de un
fragmento de dos tomos de carbono desde la xilulosa-5-P (cetosa) a la ribosa-5-P
(aldosa), formando G3P y sedoheptulosa-7-P.
A continuacin, la transaldolasa acta sobre los dos productos de la reaccin de
la transcetolasa, transfiriendo un fragmento de 3 tomos de carbono procedente del
sustrato de 7C al sustrato de 3C. Los productos son un azcar-P de 4C: la eritrosa-4-P
y un azcar-P de 6C, la fructosa-6-P.
En la reaccin final del catabolismo de las pentosas-P, la transcetolasa acta
sobre otra molcula de xilulosa-5-P, transfiriendo un fragmento de 2C a la eritrosa-4-P
y generando G3P y F6P.
Tanto las transcetolasas como las transaldolasas tienen poca especificidad de
sustrato, siendo especficas del grupo que transfieren.
Hasta el momento la ruta ha necesitado la entrada de tres molculas de pentosa
fosfato: dos para la primera reaccin de la transcetolasa y una para la segunda. As,
pues, para resumir la ruta hasta este punto, debemos considerar el paso de 3 G6P a
travs de la fase oxidativa:
3 G6P + 6NADP
+
+ 3 H
2
O 3 pentosa-5-P + 6NADPH + 6 H
+
+ 3 CO
2
___________________________________________________________________________
17
Ahora, los reordenamientos de la fase no oxidativa convierten 3 pentosas fosfato
en 2 azcares fosfato de 6C y 1 de 3C:
2 xilulosa-5-P + ribosa-5-P 2 F6P + G3P

La ecuacin equilibrada de la ruta sera:
3 G6P + 6 NADP
+
+ 3 H
2
O 2 F6P + G3P + 6NADPH + 6 H
+
+ 3 CO
2
Ahora bien, el balance global de la ruta es variable segn las necesidades de la
clula, porque los metabolitos generados pueden seguir varios caminos, segn su
consumo por otras vas.

Podemos distinguir 4 casos:

1) La clula necesita tanto ribosa-5-P como NADPH: la G6P se transforma en
ribosa-5-P va fase oxidativa de la ruta de las pentosas fosfato. La reaccin sera en
este caso:
G6P + 2NADP
+
+ H
2
O ribosa-5-P + CO
2
+ 2NADPH + 3H
+
Ambos productos finales: NADPH y ribosa-5-P salen de la ruta para cubrir las
necesidades de la clula.

2) La clula necesita principalmente ribosa-5-P (porque se est dividiendo
activamente y la sntesis de nucletidos se encuentra acelerada). No requiere NADPH.
En este caso la G6P se convierte en F6P y G3P va gluclisis, sobre los que actan la
transaldolasa y la transcetolasa (dado que catalizan reacciones reversibles). Sera el
proceso inverso al descrito anteriormente. El balance global es:
5 G6P + ATP 6 ribosa-5-P + ADP
3) La clula necesita principalmente NADPH. En este caso la G6P puede ser
oxidada totalmente a CO
2
. Para ello los compuestos generados en la fase no oxidativa,
F6P y G3P, se utilizan para resintetizar G6P mediante la gluconeognesis. Esta G6P
vuelve a entrar en la fase oxidativa de la va. En cada ciclo se pierde un carbono como
CO
2
, de modo que sera equivalente a oxidar completamente una molcula de glucosa
en 6 vueltas de este ciclo. El resultado neto sera:

G6P + 12 NADP
+
+ 7 H
2
O 6 CO
2
+ 12 NADPH + 12 H
+
+ Pi

4) La clula necesita tanto NADPH como ATP: el NADPH es producido entonces
por la fase oxidativa de la ruta de las pentosas fosfato. La F6P y el G3P generados a
travs de la fase no oxidativa de la ruta entran en la gluclisis para rendir piruvato, y
simultneamente ATP. La reaccin global sera:

3G6P + 6NADP
+
+ 5NAD
+
+ 5 Pi + 2ATP + 8ADP
5piruvato + 3CO
2
+ 6NADPH + 5NADH + 10ATP + 11H
+

Apuntes TEMA 7. Degradacion de Hidratos de Carbono

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Bioqumica.

Carmen Martnez URJC Degradacin de hidratos de carbono

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